专利名称：一种从响铃草中提取的天然抗菌组合物及其提取方法
技术领域：
本发明涉及抗菌组合物，具体来说涉及一种从响铃草中提取的天然抗菌组合物，同时还涉及其提取方法。
背景技术：
抗菌药物是临床应用最广的一类药物，但是目前这类药物的应用存在着许多问题，如耐药性、毒副反应、抗菌药物造成的菌群失调、二重感染和院内感染以及变态反应等，尤其是细菌耐药性的迅速上升。使得对这类菌所致的严重感染没有有效的药物可供选用，对人类健康造成极大威胁。因此，目前人们从天然资源中发展新的抗菌药物作为抗菌药物研究的一个重点。
响铃草为豆科狗屎豆属植物假地蓝Crotalaria ferruginea Grah的全草或带根全草。响铃草为多年生草本，花期6～10月，生于山坡、荒地。在贵州，云南较为常见，为贵州侗族常用药之一。响铃草味苦、微酸.性寒。具有敛肺气.补脾肾.利小便.消肿毒.养肝滋肾.调经的功效。在贵州民间用于久咳痰血.耳鸣耳聋.头晕日眩.梦遗，慢性肾炎，膀炎，肾结石，扁桃体炎，淋巴腺炎，疗毒恶疮月经不调等。
发明内容
本发明的目的克服上述缺点而提供的一种对金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、粪链球菌(Staphylococcus faecalis)、黄曲霉(Aspergillus flavus)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)有抑制作用的从响铃草中提取的天然抗菌组合物。
本发明的另一目的是提供从响铃草中提取的天然抗菌组合物的提取方法。
本发明的从响铃草中提取的天然抗菌组合物，其特征在于将干燥的响铃草粉碎过40-200目筛，按1-5g/10ml的比例加入溶剂，浸泡1-5次后，每次12-24h，置于温度为30-40℃、转速为180-250r/min的恒温摇床上震荡12-24h，抽滤得到提取液；回收溶剂后干燥，即得。
其中溶剂为水、酒精或乙酸乙酯。
从响铃草中提取的天然抗菌组合物的提取方法，其特征在于将干燥的响铃草粉碎过40-200目筛，按1-5g/10ml的比例加入溶剂，浸泡1-5次后，每次12-24h，置于温度为30-40℃、转速为180-250r/min的恒温摇床上震荡12-24h，抽滤得到提取液；回收溶剂后干燥，即得。
上述的从响铃草中提取的天然抗菌组合物的提取方法，其中回收溶剂后干燥的方法为溶剂为水时，-80℃冷冻12-24h用真空冷冻干燥机干燥；溶剂为酒精时，酒精提取液40℃减压旋转浓缩除去酒精，-80℃冷冻12-24h用真空冷冻干燥机干燥；溶剂为乙酸乙酯时，乙酸乙酯提取液45℃减压浓缩除去乙酸乙酯。
本发明与现有技术技术相比，经过实验证明，水溶剂浸提物的总体抑菌活性较强，对藤黄微球菌，黄霉菌均有较好的效果，最低抑菌浓度均为12.5mg/ml；对金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，绿脓杆菌的最低抑菌浓度均为50mg/ml。乙醇溶剂浸提物的总体抑菌活性稍弱，对黄霉菌和绿脓杆菌的抑制作用较好，最低抑菌浓度均为25mg/ml；对其它的供试菌的抑制效果较差，对金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，藤黄微球菌的最低抑菌浓度均为50mg/ml。乙酸乙酯溶剂浸提物的抑菌活性显著，对金黄色葡萄球菌，大肠杆菌和绿脓杆菌均有较好的效果，最低抑菌浓度均为12.5mg/ml；对其它的供试菌的抑制效果稍弱，对藤黄微球菌和黄霉菌的最低抑菌浓度均为25mg/ml。说明响铃草的不同溶剂提取物都具有抑制细菌生长的活性。为响铃草的进一步开发利用和寻找新的天然抗菌药物提供了基础。
具体实施例方式
以下通过抑菌活性实验来进一步证明本发明的有益效果实施例1将干燥的响铃草粉碎过40目筛，称取150g，加入1000ml的水，浸泡2次后，每次12h，置于温度为37℃、转速为200r/min的恒温摇床上震荡12h，抽滤得到提取液，-80℃冷冻12h后用真空冷冻干燥机干燥24h，得到干燥品。
取响铃草水提取物的干燥品0.3g，分别溶于3mL DMF中作为原液，过细菌过滤器，分别以LB液体培养基倍比稀释成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256各8个浓度，即含原液浓度分别为50，25，2.5，6.25，3.1，1.5，0.75，0.375mg/mL，每管300ul。每个浓度设三个平行管，并分别设不含萃取液的LB液体培养基为对照管。然后在各管中加入事先制备好的菌悬液(600nm处OD值约为1.0)30uL，混匀后放于37℃的培养箱中培养24h。分别从每一试管取0.1ml液体涂布营养琼脂平板，每梯度涂布三个平板，整个过程重复两次，24h后确定是否有细菌生长。以药物抑制待测菌生长的最低浓度为最小抑菌浓度(MIC)。实验结果如下
实施例2将干燥的响铃草粉碎过120目筛，称取150g，加入1000ml，95％的酒精，浸泡3次后，每次18h，置于温度为30℃、转速为250r/min的恒温摇床上震荡18h，抽滤得到提取液，40℃减压旋转浓缩除去酒精，-80℃冷冻12h用真空冷冻干燥机干燥24h，得到干燥品。
取响铃草95％酒精的提取物干燥品0.3g，分别溶于3mL DMF中作为原液，过细菌过滤器，分别以LB液体培养基倍比稀释成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256各8个浓度，即含原液浓度分别为50，25，12.5，6.25，3.1，1.5，0.75，0.375mg/mL，每管300ul。每个浓度设三个平行管，并分别设不含萃取液的LB液体培养基为对照管。然后在各管中加入事先制备好的菌悬液(600nm处OD值约为1.0)30uL，混匀后放于37℃的培养箱中培养24h。分别从每一试管取0.1ml液体涂布营养琼脂平板，每梯度涂布三个平板，整个过程重复两次，24h后确定是否有细菌生长。以药物抑制待测菌生长的最低浓度为最小抑菌浓度(MIC)。实验结果如下
实施例3将干燥的响铃草粉碎过200目筛，称取150g，加入1000ml的乙酸乙脂，浸泡5次后，每次24h，置于温度为40℃、转速为180r/min的恒温摇床上震荡24h，抽滤得到提取液，45℃减压浓缩除去乙酸乙酯，得到干燥品。
取响铃草乙酸乙酯提取物的干燥品0.3g，分别溶于3mL DMF中作为原液，过细菌过滤器，分别以LB液体培养基倍比稀释成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256各8个浓度，即含原液浓度分别为50，25，2.5，6.25，3.1，1.5，0.75，0.375mg/mL，每管300ul。每个浓度设三个平行管，并分别设不含萃取液的LB液体培养基为对照管。然后在各管中加入事先制备好的菌悬液(600nm处OD值约为1.0)30uL，混匀后放于37℃的培养箱中培养24h。分别从每一试管取0.1ml液体涂布营养琼脂平板，每梯度涂布三个平板，整个过程重复两次，24h后确定是否有细菌生长。以药物抑制待测菌生长的最低浓度为最小抑菌浓度(MIC)。实验结果如下
权利要求
1.一种从响铃草中提取的天然抗菌组合物，其特征在于将干燥的响铃草粉碎过40-200目筛，按1-5g/10ml的比例加入溶剂，浸泡1-5次后，每次12-24h，置于温度为30-40℃、转速为180-250r/min的恒温摇床上震荡12-24h，抽滤得到提取液；回收溶剂后干燥，即得。
2.如权利要求1所述的从响铃草中提取的天然抗菌组合物，其特征在于溶剂为水、酒精或乙酸乙酯。
3.一种从响铃草中提取的天然抗菌组合物的提取方法，其特征在于将干燥的响铃草粉碎过40-200目筛，按1-5g/10ml的比例加入溶剂，浸泡1-5次后，每次12-24h，置于温度为30-40℃、转速为180-250r/min的恒温摇床上震荡12-24h，抽滤得到提取液；回收溶剂后干燥，即得。
4.如权利要求3所述的从响铃草中提取的天然抗菌组合物的提取方法，其特征在于溶剂为水时，回收溶剂后干燥的方法为-80℃冷冻12-24h用真空冷冻干燥机干燥。
5.如权利要求3所述的从响铃草中提取的天然抗菌组合物的提取方法，其特征在于溶剂为酒精时，回收溶剂后干燥的方法为酒精提取液40℃减压旋转浓缩除去酒精，-80℃冷冻12-24h用真空冷冻干燥机干燥。
6.如权利要求3所述的从响铃草中提取的天然抗菌组合物的提取方法，其特征在于溶剂为乙酸乙酯时，回收溶剂后干燥的方法为乙酸乙酯提取液45℃减压浓缩除去乙酸乙酯。
全文摘要
本发明公开了一种从响铃草中提取的天然抗菌组合物及其提取方法，将干燥的响铃草粉碎过40－200目筛，按1－5g/10ml的比例加入溶剂，浸泡1－5次后，每次12－24h，置于温度为30－40℃、转速为180－250r/min的恒温摇床上震荡12－24h，抽滤得到提取液；回收溶剂后干燥，即得。其中溶剂为水、95％的酒精或乙酸乙酯。本发明制得的产品对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、粪链球菌、黄曲霉、绿脓杆菌、藤黄微球菌均有抑制作用。
文档编号A61P31/00GK101019918SQ20071007767
公开日2007年8月22日 申请日期2007年3月8日 优先权日2007年3月8日
发明者周英, 段震 申请人:贵州大学