专利名称：：中药有效部位复方处方组成、制备工艺及其抗糖尿病用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种由黄连总生物碱、黄芪总皂苷和金银花总糖醇组成的中药复方有效部位，黄连总生物碱、黄芪总皂苷、金银花总糖醇的制备方法，含有这种中药复方有效部位的药物组合物，以及中药复方有效部位在制备改善胰岛素抵抗和抗糖尿病药物中的应用，属于中药
技术领域：
。
背景技术：
：近年来，抗糖尿病的西药研究有了长足的进展，打破了多年来磺酰脲和双胍类两大类口服降血糖药的格局，先后有oc葡萄糖苷酶抑制剂、噻唑垸二酮类胰岛素增敏剂、非磺酰脲类促胰岛素分泌剂上巿，为糖尿病的治疗立下汗马功劳。同时也存在一些与其作用机理相关的副作用和原因不明的潜在不利影响。针对这些问题，国内外研究人员除研发作用于新靶点的新型抗糖尿病药物外，也采用类似我国中药复方多成分多靶点的理念，以现有作用于不同环节的抗糖尿病药物组成新的抗糖尿病复方新药，如二甲双胍与优降糖复方、二甲双胍与罗格列酮复方等。祖国医药学在诊治糖尿病方面有着完整的理论体系和丰富的实践经验，历代医书中均有记载。千金黄连丸原载于唐朝孙思邈的"千金方"中，备受古今名医的推崇，如冉雪峰、郭士魁等老中医都以此方为主辨证施治。中国医学科学院药物所药理学家谢明智教授运用现代医药学关于糖尿病的知识和方法技术，结合中医药对消渴病的理论和治则，经过筛选和综合比较评价，以千金黄连丸为基础，组成中药复方-金芪降糖片(已申请专利，申请号为200410018739)。经中法国际合作项目的200例双盲临床研究试验及十多年的临床应用，表明金芪降糖片抗糖尿病疗效确切，未见毒副作用发生。在此工作基础上，经多学科密切合作，去粗取精，确定了三味中药的增敏降糖有效部位，通过药效学正交试验和验证，确定了由有效部位组成新复方的合适配比，发现该药具有类似噻唑烷二酮类胰岛素增敏剂的作用特点和二甲双胍对糖代谢的外周作用，但未见瘗唑烷二酮类增加体重等副作用。可用于2型糖尿病和代谢综合症的治疗。该有效部位新复方的处方组成、改善胰岛素抵抗和治疗2型糖尿病的药理作用未见报道。本发明将为广大2型糖尿病患者带来福音，对我国抗糖尿病中医药与现代医药学的接轨具有重要意义。
发明内容处方组成本发明的中药复方的有效部位来自3味中药黄连、黄芪和金银花。有效部位分别为黄连总生物碱、黄芪总皂苷、金银花总糖醇。各自有效组分含量均超过50%。复方中各有效部位的用量为(重量份)黄连总生物碱5~10份，黄芪总皂苷2~10份，金银花总糖醇5~15份。所述的有效部位的优选组成和比例黄连总生物碱5~6重量份，黄芪总皂苷3.5~5.5重量份，金银花总糖醇6~8重量份。所述的有效部位的更优选的组成和比例黄连总生物碱5重量份，黄芪总皂苷4.5重量份，金银花总糖醇7重量份。制备工艺1.黄连总生物硷中药黄连粗粉加10~20倍量50~80%乙醇回流l小时，共提取2次，合并提取液，6(TC下浓缩至干，浓缩物用26L水溶解，水溶液加入0.10.5。/。(v/v)浓盐酸，摇匀，放置过夜；过滤，滤得固体粉末用两倍量水洗涤两次，抽干；固体物608(TC干燥35小时，既得黄连总生物硷(总硷含量70%以上)，收率为6~10%。2.黄丧总皂苷中药黄芪粗粉加5~15倍量50~80%乙醇回流2小时，共提取3次，合并提取液，60'C下浓缩至稠膏，加510倍量水溶解，过滤，滤液通过一预先备用的大孔吸附树脂柱，水洗至无色后，用乙醇洗脱，直至洗脱液无皂苷反应为止，洗脱液合并，60'C下浓缩至小体积后；冷冻干燥成粉，既为黄芪总皂苷(总皂苷含量50~60%)，收率为1~3%。3.金银花总糖(醇)中药金银花粗粉加15~30倍量水煎煮0.5~1小时，共提3次，合并提取液，60'C下浓缩至原体积1/5~1/10，搅拌下加入1~2倍量95%乙醇，放置过夜；过滤，沉淀用稀醇洗涤，洗液与滤液合并，60'C下浓缩至无乙醇味后，通过一预先备用的大孔吸附树脂柱，水洗至洗脱液蒸干无残渣为止，洗脱液合并，60'C下浓缩至小体积；然后冷冻干燥成粉，既为总糖醇；总糖醇含量50-65%,收率为15-20%。图1~3为上述3个有效部位高压液相分析图谱。图4.复方对四氧嘧啶高血糖小鼠血糖下降百分率的影响。以各时间点对照组血糖为参照，计算不同剂量给药组血糖下降百分率，Met为二甲双胍，FF为复方。图5.复方对NISG小鼠胰岛素耐量的影响。n=9，Nor为正常小鼠，Con为MSG模型对照组，Ros为阳性对照药为罗格列酮。图6.复方对NISG小鼠胰岛素敏感指数的影响。Nor为正常小鼠，Con为MSG模型对照组，Ros为阳性对照药为罗格列酮，FF为复方，ISI为胰岛素敏感指数；Vs.Con,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。图7.复方对MSG小鼠口服葡萄糖耐量的影响。Nor为正常小鼠，Con为MSG模型对照组，Ros为阳性对照药为罗格列酮，FF为复方。图8.复方对MSG小鼠葡萄糖异生的影响Nor为正常小鼠，Con为MSG模型对照组，Ros为阳性对照药为罗格列酮，FF为复方；丙氨酸2.0g/kg(ip);vs.Con,*P<0.05,**P<0.01,***P<0,001。图9.复方对肥胖性胰岛素抵抗MSG小鼠体重变化的影响。图10.复方对NISG模型小鼠胰腺病理形态(胰岛)的影响。胰岛素特异性免疫组化染色，x400。具体实施例方式实施例1.黄连总生物硷黄连粗粉1.25kg，加20L70。/。乙醇回流1小时，共提取2次，合并提取液，60'C下浓缩至浓缩至干，浓缩物用3L水溶解，水溶液滴加浓盐酸至无沉淀产生为止(约需浓盐酸65ml),摇匀，放置过夜；过滤，滤得固体粉末用两倍量水洗涤两次，抽干；得固体粉末于60'C下干燥5小时，既得黄连总生物硷98g,收率为7.84%。黄连总生物硷为亮黄色结晶性粉末，具有典型的生物碱显色反应，薄层层析法检查发现，除盐酸小檗硷外，还含有多种生物硷；高压液相色谱法测定其盐酸小檗硷含量为65.89%,紫外分光光度法测定总生物硷含量为77.59%。实施例2.黄芪总皂苷黄芪粗粉3.0kg，加30L70。/。乙醇回流2小时，共提取3次，合并提取液，60'C下浓缩至稠膏，加5倍量水溶解，过滤，滤液通过一预先备用的D4020型大孔吸附树脂柱，水洗至无色后，用80%乙醇洗脱，直至洗脱液无皂苷反应为止，洗脱液合并，于6(TC下浓缩至小体积后；冷冻干燥成粉，既得黄芪总皂苷43.5g，收率为1.45%。黄芪总皂苷为黄色固体粉末，除有典型的皂苷显色反应外，薄层层析法检查发现，除黄芪甲苷(AstragalosideIV)还含有多种成分；高压液相色谱法测定黄芪甲苷含量为2.08%，紫外分光光度法测定其总皂苷含量为53.30°/。。实施例3.金银花总糖(醇)金银花粗粉1.5kg,加30L水煎煮0.5小时，共提取2次，合并提取液，60'C下浓缩至原体积1/7,搅拌下加入等体积95%乙醇，放置过夜；过滤，沉淀用稀醇洗涤，洗液与滤液合并，60'C下浓缩至无乙醇味后，通过一预先备用的AB-8型大孔吸附树脂柱，水洗至洗脱液蒸干无残渣为止，洗脱液合并，60'C下浓缩成浸膏；然后冷冻干燥成粉，既得总糖醇372.3g;收率为24.82%。金银花总糖醇为淡黄色固体粉末，除有典型的糖醇显色反应外，薄层层析法检查发现，除肌醇(meso-Inositol)外还含有多种成分；高压液相色谱法测定肌醇含量为12.09%,紫外分光光度法测定其总糖醇含量为54.14°/。。图1-3为上述3个有效部位高压液相分析图谱。制剂1.丸剂将以上制备的有效部位按处方量加入适量的黏合剂或其他辅料制成丸形或类丸形制剂，包括蜜丸、水蜜丸、水丸、糊丸、蜡丸、浓縮丸等类型。2.颗粒剂将以上制备的有效部位按处方量加入适量的辅料制成具有一定粒度的颗粒状制剂。3.片剂将以上制备的有效部位按处方量加入适量辅料混匀压制成圆片状或异性片状的制剂，包括素片、糖衣片、薄膜衣片等。4.糖浆剂将以上制备的有效部位按处方量加入适量浓蔗糖水溶液制成的制剂。5.合剂将以上制备的有效部位按处方量加入溶剂制成口服液体制剂。6.滴丸剂将以上制备的有效部位按处方量与适宜的基质加热熔融混匀后，滴入不相混溶的冷凝液中，收縮冷凝而制成的球形或类球形制剂。7.胶囊剂将以上制备的有效部位按处方量加入适宜辅料填充于空心胶囊或密封于软质囊材中的制剂，可分为硬胶囊、软胶囊或肠溶胶囊。8.耵剂将以上制备的有效部位按处方量溶解而制成的澄清液体制剂。9.茶剂将以上制备的有效部位按处方量加入茶叶或其他辅料混合制成的内服制剂。10.注射剂将以上制备的有效部位按处方量纯化后制成供注入人体内的溶液、乳状液即供临用前配制成溶液的粉末或溶液的无菌制剂。药理实验中药复方(比例是5:4.5:7)改善胰岛素抵抗及抗糖尿病的药理作用1.中药复方对四氧嘧啶高血糖小鼠血糖的影响四氧嘧啶糖尿病小鼠按血糖分为5组(n=10)，一组灌胃等体积水作为对照组，一组灌胃盐酸二甲双胍(200mg/kg)作为阳性对照药组，其余三组分别灌胃不同剂量的中药复方作为给药组。每天一次，连续给药30天，于不同时间用葡萄糖氧化酶法动态检测空腹血糖水平变化。结果(表1、图4)表明，该复方在100-450mg/kg剂量范围内，能使四氧嘧^^糖尿病小鼠血糖明显降低，且呈一定量效关系。表l.复方对四氧嘧啶高血糖小鼠的降血糖作用及量效关系<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>数据以平均值土标准差表示，n=10。*PS0.05，**P<0.01，***P<0.0012.中药复方对肥胖性MSG小鼠胰岛素抗性的改善作用肥胖性胰岛素抵抗MSG小鼠，根据空腹血糖、对胰岛素的敏感性、血脂及体重分组，共5组，给药前所有指标间无统计学差异。一组灌胃等体积水作为对照组，一组灌胃马来酸盐罗格列酮(rosiglitazone，2.5mg/kg)水溶液作为阳性对照药组，剩余三组分别灌胃不同剂量的中药复方作为给药组。同时设一组正常小鼠作为正常对照。每天一次，连续给药，于给药2周进行胰岛素耐量测定，并测定空腹血糖及血胰岛素水平，计算血糖曲线下面积和胰岛素敏感指数。以评价对胰岛素抗性的改善作用。结果(图5、6,表2)表明，与模型对照组比较，该复方能使胰岛素耐量血糖曲线下面积减少，胰岛素敏感指数升高。说明该复方能明显改善该动物模型的胰岛素抵抗状态，提高机体对胰岛素的敏感性。表2.复方对MSG小鼠胰岛素耐量血糖曲线下面积影响的比较<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>与对照组比较，**P<0.01，***P<0.001;AUC为血糖曲线下面积；AUC变化百分数以对照组为参照；Ros为阳性对照药为罗格列酮。3.中药复方对MSG小鼠葡萄糖耐量、糖异生及体重的影响动物分组及实验设计同(二)。在给药两周后，分别进行口服葡萄糖耐量实验、糖异生实验。实验结東时记录动物体重。结果(图7-9、表3)表明，该复方能明显改善肥胖性胰岛素抵抗MSG小鼠的葡萄糖耐量异常，使血糖曲线下面积明显减少，并呈一定量效关系；也能明显抑制机体葡萄糖自丙氨酸的异生能力；与阳性对照药罗格列酮比较，对体重没有增加作用，反而具有一定减少体重的作用。表3.复方对MSG小鼠葡萄糖耐量血糖曲线下面积(AUC)的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>__360.4±83.5***_丄45.3与对照组比较，**P<0.01，***P<0.001;AUC变化百分数以对照继为参照4.复方对自发性2型糖尿病KKAy小鼠胰岛素抗性、血糖及血脂的影响自发性2型糖尿病KKAy小鼠根据血糖、胰岛素耐量预测结果、血脂及体重分组，共3组，给药前组间所有指标无统计学差异。一组作为模型对照以等体积水灌胃，一组作为阳性对照药组以罗格列酮(5mg/kg)灌胃，一组作为给药组以该复方(200mg/kg)灌胃。同时设一组正常动物组(KM小鼠)。每天一次，连续3周。动态观察空腹血糖和对胰岛素的反应性，并测定血脂水平。表5~7结果表明，该复方能明显降低自发性2型糖尿病KKAy小鼠空腹血糖水平，使胰岛素血糖曲线下面积明显减少，血甘油三酯水平降低，但对血胆固醇水平无影响。表4.复方对自发性2型糖尿病KKAy小鼠血糖的影响组别/」f、_血糖(mg/dl)_(mg/kg)-^^正常-146.5±10.8***145.0±17.3*对照组-307.1±103.5250.6±106.9复方200218.6±103.9(29%)148.8±57.6*(40.6%)Ros_^_168.3±32.9**(45%)_134.4±32.9**(46.4%)Vs.对照组apO.05,"PO.01^"PO.001;()内数值为血糖降低百分数(以对照组为参照)表5.复方对自发性2型糖尿病KKAy小鼠胰岛<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表6.复方对自发性2型糖尿病KKAy小鼠血脂的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>5.复方对肥胖性胰岛素抵抗MSG小鼠胰岛P细胞的保护作用动物分组及实验设计同(二)。连续给药4周后，断头处死动物，取胰腺组织进行病理形态检测(给药组为450mg/kg剂量组)。结果表明，复方使MSG小鼠胰岛增生、肥大及脂肪沉积的病理改变基本恢复正常，提示复方对胰岛e细胞有一定保护作用(图IO)。综上所述，由有效部位黄连总生物碱、黄芪总皂苷和金银花总糖醇组成的新型中药复方，不仅能使四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖明显降低，也能使肥胖性胰岛素抵抗MSG小鼠异常的胰岛素耐量和葡萄糖耐量改善，其血糖曲线下面积明显减少，胰岛素敏感指数升髙，葡萄糖异生明显抑制，胰岛增生、肥大及脂肪沉积的病理改变基本恢复正常，且无噻唑烷二酮类胰岛素增敏剂使体重增加的副作用；能使自发性2型糖尿病KKAy小鼠血糖降低，胰岛素耐量曲线下面积明显减少、也使甘油三酯水平下降。可用于临床2型糖尿病、胰岛素抵抗和代谢综合征的治疗。其用量200500mg/次，一曰三次，口服。权利要求1、一种中药复方有效部位，其特征在于，所述的有效部位的组成和比例黄连总生物碱5～10重量份，黄芪总皂苷2～10重量份，金银花总糖醇5～15重量份，并且黄连总生物碱、黄芪总皂苷、金银花总糖醇的各自有效组分含量均超过50％。2、根据权利要求l的中药复方有效部位，其特征在于，所述的有效部位的组成和比例黄连总生物碱5-6重量份，黄芪总皂苷3.5~5.5重量份，金银花总糖醇6~8重量份。3、根据权利要求2的中药复方有效部位，其特征在于，所述的有效部位的组成和比例黄连总生物碱5重量份，黄芪总皂苷4.5重量份，金银花总糖醇7重量份。4、制备权利1-3中所述黄连总生物碱的方法，其特征在于，包括如下步骤中药黄连粗粉加10~20倍量50~80%乙醇回流1小时，共提取2次，合并提取液，60'C下浓缩至干，浓缩物用26L水溶解，水溶液加入0.10.5。/。(v/v)浓盐酸，摇勾，放置过夜；过滤，滤得固体粉末用两倍量水洗涤两次，抽干；固体物6080'C干燥35小时，既得黄连总生物碱(总碱含量70%以上)，收率为6~10%。5、制备权利1-3中所述黄芪总皂苷的方法，其特征在于，包括如下步骤中药黄芪粗粉加5~15倍量50~80%乙醇回流2小时，共提取3次，合并提取液，60'C下浓缩至稠膏，加510倍量水溶解，过滤，滤液通过一预先备用的大孔吸附树脂柱，水洗至无色后，用乙醇洗脱，直至洗脱液无皂苷反应为止，洗脱液合并，60'C下浓縮至小体积后；冷冻干燥成粉，既为黄芪总皂苷(总皂苷含量5060%)，收率为1~3%。6、制备权利1-3中所述金银花总糖醇的方法，其特征在于，包括如下步骤中药金银花粗粉加15~30倍量水煎煮0.5~1小时，共提3次，合并提取液，60'C下浓缩至原体积1/5~1/10，搅拌下加入1~2倍量95%乙醇，放置过夜；过滤，沉淀用稀醇洗涤，洗液与滤液合并，6(TC下浓缩至无乙醇味后，通过一预先备用的大孔吸附树脂柱，水洗至洗脱液蒸干无残渣为止，洗脱液合并，60'C下浓缩至小体积；然后冷冻干燥成粉，既为总糖醇；总糖醇含量50~65%，收率为15.~20%。7、一种药物组合物，含有权利要求l-3中任一中药复方有效部位和药效学上可接受的载体。8、根据权利要求7的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物是丸剂、颗粒剂、片剂、糖浆剂、合剂、滴丸剂、胶囊剂、酊剂、茶剂、注射剂。9、权利要求1-3的中药复方有效部位在制备改善胰岛素抵抗药物中的应用。10、权利要求1-3的中药复方有效部位在制备抗糖尿病药物中的应用。全文摘要本发明公开了一种中药复方有效部位，其组成和比例黄连总生物碱5～10重量份，黄芪总皂苷2～10重量份，金银花总糖醇5～15重量份，黄连总生物碱、黄芪总皂苷、金银花总糖醇的制备方法，含有这种中药复方有效部位的药物组合物，以及中药复方有效部位在制备改善胰岛素抵抗和抗糖尿病药物中的应用。文档编号A61P3/10GK101390966SQ20071012203公开日2009年3月25日申请日期2007年9月20日优先权日2007年9月20日发明者冯孝章,伟刘,泉刘,刘文伟,孙素娟,尹宝莲,欣王,王爱国,申竹芳,苏亚伦,谢明智,陈跃腾申请人:中国医学科学院药物研究所;天津中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂