专利名称：：喜树果有效组分及其制备方法与用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种治疗肿瘤疾病的中药提取物，具体地说涉及从喜树果中提取的有效组分，制剂及其制备方法与用途。
背景技术：
：肿瘤是一种常见病、多发病，其中恶性肿瘤是目前危害人类健康最严重的一类疾病。目前业内对恶性肿瘤的治疗主要还是以手术、放疗、化疗为主，但许多化学抗癌药物在作用于靶细胞时往往累及正常细胞，造成严重的副反应。植物药的遗传毒性不明显，中草药在抗癌抗突变方面有独特的优势和广阔的应用前景，而且中药在对肿瘤的辅助治疗中也起到不容忽视的作用。紫杉醇即是典型的从植物中获得的具有良好抗癌活性的天然化合物，现已开发为抗肿瘤药物。目前我国危害性最为严重的肿瘤为肺癌、鼻咽癌、食管癌、胃癌、大肠癌、肝癌、乳腺癌、宫颈癌、白血病及淋巴瘤等。特别是肝癌的发生率近年来有所增加。值得重视，这些肿瘤的病因学、发病学及其防治，均为我国肿瘤研究的重点。寻找高效低毒的抗癌药物以及抗癌辅助药物是当前肿瘤研究的重要内容。我国药用生物资源十分丰富，其生理活性物质是研究和发现新药先导化学物，开发新药的天然宝库。目前，我国从天然产物中提取活性物质，用于开发成治疗肿瘤疾病、安全性好、毒性低的新药还很少，从天然产物中提取活性物质，开发成具有抗肿瘤疗效的新药，具有重要应用价值和广阔发展前景。喜树果，别名千丈树、水栗子、天梓树。其化学成分为含喜树碱(camptothecine)、喜树次碱(venoterpine)、10-羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecine)、10-甲氧基喜树碱(10-methoxycamptothecine)、白桦脂酸(betulicacid)、长春甙内酰胺(vincoside-lactam)等。其性味性寒，味苦、涩；有毒。其功能主治为抗癌，散结，破血化瘀用于多种肿瘤，如胃癌、肠癌、绒毛膜上皮癌、淋巴肉瘤等。
发明内容-本发明的目的在于提供喜树果的有效组分。本发明的另一目的在于提供上述喜树果有效组分的制备方法。本发明还提供含有上述喜树果有效组分的制剂及该组分的用途。本发明的喜树果有效组分，其制备过程包括以下步骤步骤1:用乙酸乙酯和乙醇混合物作为溶剂对喜树果进行提取，步骤2:药渣用乙醇提取，得到提取液，步骤3:提取液经过色谱柱层析得有效组分(或称为A08)。其中步骤1中所述乙酸乙酯和乙醇的混合物，两者的比例为乙酸乙酯乙醇=1-5:1-5，优选为乙酸乙酯乙醇=1-2:1-2，最优选为乙酸乙酯乙醇=1:1。所述步骤中，步骤1具体为取喜树果药材，以乙酸乙酯乙醇=1-5:卜5为溶剂，回流提取，将提取液与药渣分离，步骤2具体为药渣用50-90%的乙醇提取，得到提取液，步骤3具体为所述经过色谱柱层析是用5%甲醇溶解上样，过0DS-C18柱，首先，采用5%甲醇作为流动相，然后改换60%甲醇作为流动相，得洗脱液，溶液经浓縮干燥后得到有效组分。本发明优选的喜树果有效组分制备方法，包括下列步骤喜树果粉碎，加入6-10倍量乙酸乙酯:乙醇=1:1，加热回流l-2小时，提取1-3次,药渣加入6-10倍量50-90%乙醇，加热回流，滤液合并得提取液，将提取液浓缩后，用5%甲醇溶解上样，过ODS-C18柱，首先，采用5%甲醇作为流动相，然后改换60%甲醇作为流动相，得洗脱液，溶液经浓縮干燥后得到有效组分。本发明最优选的喜树果有效组分制备方法，包括下列步骤喜树果粉碎，加入8倍量乙酸乙酯:乙醇=1:1，加热回流l小时，提取2次,药渣加入8倍量70%乙醇，加热回流1小时，提取2次,滤液合并得提取液，将提取液浓縮后，用5%甲醇溶解上样，过ODS-C18柱，首先，采用1250ml，5X甲醇作为流动相，然后改换1250ml,60X甲醇作为流动相，得洗脱液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>本发明还提供用本发明的中药有效组分作为药物活性成分制备成的药物组合物，本发明的药物组合物'包括有效组分'根据需要该组合物还可以加入药物可接受的载体。本发明的组合物，是单位剂量的药物制剂形式，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂每袋等。本发明的组合物其中的有效组分，其在制剂中所占重量百分比可以是0.1-99.9%，其余为药物可接受的载体。本发明的组合物，通过将上述有效组分和药物可接受的载体混合制备得到。本发明的组合物，其药物制剂形式可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的制剂，优选的是口服剂型，如胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等。本发明的组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖桨剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。本发明的组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、e—环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。本发明的组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量，可每日服三次，每次l-20剂，如1-20袋或粒或片。本发明还提供本发明的中药有效组分和药物组合物在抗肿瘤方面的应用。以下为药理实验的数据活性筛选在细胞水平上检测有效组分对多种肿瘤细胞的生长抑制作用。细胞株HL-60肿瘤细胞样品配制根据所称量的药品的重量，加入相应体积的DMSO溶解，浓度为约50mg/mL。震荡溶解，若有大量液滴粘壁，可适当离心。可储存-20。C。细胞培养使用RPMI1640(Gibco)[添加2g/L碳酸氢钠]90%，胎牛血清(四季青)10。/。混合培养HL60细胞，密度需低于106个/mL。实验方法1种板(1)计算需要细胞总量NT:pcell'mL-lxVT(p-2xl04个/mL)，其中VT=0.1mLx孔数十细胞槽剩余量。(2)吹打培养瓶壁上的悬浮细胞，加入离心管中。取10mL，加10ML胎盘蓝稀释，计算计数板上活细胞数总数NL，则离心管中的细胞数N为NL/4xl04x2xV个，其中V为离心前离心管中的溶液体积。(3)离心(900rad/min，10min)，吸去上清液，加入培养液VImL，吹打，使细胞混匀，吸取V2mL加入到细胞槽中，使V2-NT/NxVl。(4)在细胞槽中再加入VT-V2mL的培养液，用排枪吹打、混匀，取该液，每孔加入150piL。(5)种板后选取4孔加入200ML培养液作为空白对照，剩余孔加入200mLPBS，以减少培养液的蒸发。2加药在新的96孔板中加入220/iL/孔的培养液，将吸取0.88ML药液加入混匀，稀释250倍，将上述稀释好的药物向种有细胞的孔每孔加入50/iL,此时药物稀释1000倍，即终浓度为50ng/mL。孵育48h。每个浓度设4个平行复孔，每板设阴性对照组(细胞中加入空白溶液，空白溶液配法——加入200/xL的培养液，将吸取0.88mLDMSO加入混匀)，及阳性对照组(顺铀终浓度4/xg/mL)。3SRB染色细胞培养结束后，取出培养板，每孔加入40%(质量/体积)的二氯乙酸(TCA)100uL固定细胞，室温放置5min，4'C冰箱中放置1h。培养板各孔用去离子水洗涤5遍，以去除TCA。在空气中干燥后，每孔加0.4。/。的SRB100uL(1%色谱纯乙酸溶解)，室温下放置20min，弃去各孔内液体后用1%乙酸洗涤5遍，去除未结合的染料，空气中干燥后用10mmol/LTrisl50uL/孔溶解，振荡5min，使用酶标仪(ELx800)测定，所用波长为490nm。4抑制率的计算抑制率按如下公式计算抑制率(％)=药物歸-空白歸。阴性对照组/I值一空白组^值药效结果见表3。根据HL-60肿瘤细胞抑制率结果，喜树果A08有效组分对抑制HL-60肿瘤细胞增殖有非常显著效果。表3,HL-60肿瘤细胞抑制率结果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>细胞株K562肿瘤细胞样品配制:根据所称量的药品的重量，加入相应体积的DMSO溶解，浓度为约50mg/mL。震荡溶解，若有大量液滴粘壁，可适当离心。可储存-2(TC。细胞培养使用RPMI1640(Gibco)[添加2g/L碳酸氢钠]90%，小牛血清(赛乐)10%,非必需氨基酸(Gibco)1。/。混合培养K562细胞。实验方法1种板(1)计算需要细胞总量NT-pcell'mL-lxVT(^8x103个/mL)，其中VT=0.1mLx孔数+细胞槽剩余量。(2)吹打培养瓶壁上的悬浮细胞，加入离心管中。取10mL，加10pL胎盘蓝稀释，计算计数板上活细胞数总数NL，则离心管中的细胞数N为NL/4xl04x2xV个，其中V为离心前离心管中的溶液体积。(3)离心(900rad/min，10min)，吸去上清液，加入培养液V1mL，吹打，使细胞混匀，吸取V2mL加入到细胞槽中，使V2二NT/NxVl。(4)在细胞槽中再加入VT-V2mL的培养液，用排枪吹打、混匀，取该液，每孔加入100/iL，孵育24h。(5)种板后选取4孔加入培养液作为空白对照，剩余孔加入100/iLPBS，以减少培养液的蒸发。2加药(1)96孔板换液，每孔加入新鲜培养液150pL。(2)在新的96孔板中加入220ML/孔的培养液，将吸取0.88/xL药液加入混匀，稀释250倍，将上述稀释好的药物向种有细胞的孔每孔加入50AiL，此时药物稀释1000倍，即终浓度为50pg/mL。孵育48h。每个浓度设4(2)个平行复孔，每板设阴性对照组(细胞中加入空白溶液，空白溶液配法——加入200pL的培养液，将吸取0.88/xLDMSO加入混匀)，阳性对照组(阿霉素终浓度4/xg/mL)。3SRB染色细胞培养结束后，取出培养板，每孔加入40%(质量/体积)的三氯乙酸(TCA)70uL固定细胞，4'C冰箱中放置1h。培养板各孔用去离子水洗涤5遍，以去除TCA。在空气中干燥后，每孔加0.4%的SRB100uL(1%色谱纯乙酸溶解)，室温下放置20min，弃去各孔内液体后用1%乙酸洗涤5遍，去除未结合的染料，空气中干燥后用10mmol/LTrisl50uL/孔溶解，振荡5min，使用酶标仪(ELx800)测定，所用波长为490nm。4抑制率的计算抑制率按如下公式计算抑制率(％)=药画-空白歸督.阴性对照组」值—空白组^值药效结果见表4。根据K562肿瘤细胞抑制率结果，喜树果A08有效组分对抑制K562肿瘤细胞增殖有非常显著效果。表4,K562肿瘤细胞抑制率结果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>细胞株KB肿瘤细胞样品配制根据所称量的药品的重量，加入相应体积的DMSO溶解，浓度为约50mg/mL。震荡溶解，若有大量液滴粘壁，可适当离心。可储存-20。C。细胞培养使用DMEM高糖型(Gibco)[添加3.7g/L碳酸氢钠]90y。，小牛血清(赛乐)10%,非必需氨基酸(Gibco)P/。混合培养KB细胞。实验方法1种板(1)计算需要细胞总量NT=pcell'mL-lxVT(/)=2xl03个/mL)，其中VT=0.1mLx孔数+细胞槽剩余量。(2)吹打培养瓶壁上的悬浮细胞，加入离心管中。取10/xL，加10ml胎盘蓝稀释，计算计数板上活细胞数总数NL，则离心管中的细胞数N为NL/4xl04x2xV个，其中V为离心前离心管中的溶液体积。(3)离心(900rad/min,10min),吸去上清液，加入培养液VImL，吹打，使细胞混匀，吸取V2mL加入到细胞槽中，使V2-NT/NxVl。(4)在细胞槽中再加入VT-V2mL的培养液，用排枪吹打、混匀，取该液，每孔加入脚L,孵育24h。(5)种板后选取4孔加入培养液作为空白对照，剩余孔加入100mLpbs,以减少培养液的蒸发。2加药(1)96孔板换液，每孔加入新鲜培养液150/iL。(2)在新的96孔板中加入220/iL/孔的培养液，将吸取0.88/iL药液加入混匀，稀释250倍，将上述稀释好的药物向种有细胞的孔每孔加入50/iL，此时药物稀释1000倍，即终浓度为50/ig/mL。孵育48h。每个浓度设4(2)个平行复孔，每板设阴性对照组(细胞中加入空白溶液，空白溶液配法——加入200ml的培养液，将吸取0.88mLDMSO加入混勾)，阳性对照组(阿霉素终浓度4/ig/mL)。3MTT比色法测定(1)取出培养板，去处每孔上清，加入培养液一MTT混合溶液(培养液MTT溶液=10:1)100mL，孵育4h。(2)吸弃培养液，每孔加入150/iL的DMSO,振荡10min，550nm酶标仪(Elx800)测定。4抑制率的计算抑制率按如下公式计算抑制率(％)=药物歸-空白歸。阴性对照组」值一空白组j值药效结果见表5。根据KB肿瘤细胞抑制率结果，喜树果A08有效组分对抑制KB肿瘤细胞增殖有非常显著效果。表5，KB肿瘤细胞抑制率结果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>细胞株HepG2肿瘤细胞样品配制:根据所称量的药品的重量,加入相应体积的DMSO溶解，浓度为约50mg/mL。震荡溶解，若有大量液滴粘壁，可适当离心。可储存-2(TC。细胞培养使用DMEM高糖型(Gibco)[添加3.7g/L碳酸氢钠]90%，胎牛血清(四季青)10%,非必需氨基酸(Gibco)1。/。混合培养HepG2细胞。实验方法1种板(1)计算需要细胞总量NT-pcellnnL-lxVTO(^2xl03个/mL)，其中VT=0.1mLx孔数+细胞槽剩余量。(2)吹打培养瓶壁上的悬浮细胞，加入离心管中。取10;iL，加10/iL胎盘蓝稀释，计算计数板上活细胞数总数NL,则离心管中的细胞数N为NL/4xl04x2xV个，其中V为离心前离心管中的溶液体积。(3)离心(900rad/min，10min)，吸去上清液，加入培养液VImL，吹打，使细胞混匀，吸取V2mL加入到细胞槽中，使V2二NT/NxVl。(4)在细胞槽中再加入VT-V2mL的培养液，用排枪吹打、混匀，取该液，每孔加入謂/iL，孵育24h。(5)种板后选取4孔加入培养液作为空白对照，乘U余孔加入100/iLPBS，以减少培养液的蒸发。2加药(1)96孔板换液，每孔加入新鲜培养液150/iL。(2)在新的96孔板中加入220/tL/孔的培养液，将吸取0.88/iL药液加入混匀，稀释250倍，将上述稀释好的药物向种有细胞的孔每孔加入50ML,此时药物稀释1000倍，即终浓度为50Mg/mL。孵育48h。每个浓度设4(2)个平行复孔，每板设阴性对照组(细胞中加入空白溶液，空白溶液配法——加入200/xL的培养液，将吸取0.88pLDMSO加入混匀)，阳性对照组(阿霉素终浓度4/ig/mL)。3MTT比色法测定(1)取出培养板，去处每孔上清，加入培养液一MTT混合溶液(培养液MTT溶液二10:1)100mL，孵育4h。(2)吸弃培养液，每孔加入150/iL的DMSO，振荡10min，550nm酶标仪(Elx800)4抑制率的计算抑制率按如下公式计算<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>药效结果见表6。根据HepG2肿瘤细胞抑制率结果，喜树果A08有效组分对抑制HepG2肿瘤细胞增殖有非常显著效果。表6，HepG2肿瘤细胞抑制率结果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>本发明的有益效果为:1.本发明的提取分离工艺中使用了反相硅胶柱，能有效地除去叶绿素等易在制备色谱柱上形成死吸附的杂质，提高有效成分的含量，能快速准确的得到有效成分。2.本发明提供的喜树果有效组分化学成分简单明确，在药理研究上更易于阐明其作用机制，在生产中更易于药物的质量控制。本发明提供的方法首次从喜树果药材中得到含有A08有效组分，并首次将其在多种肿瘤细胞株上进行药效筛选，由于成分确切，含量明确，制备工艺便捷，活性好，适宜开发成抗肿瘤中药新药。图1为本发明喜树果有效组分的HPLC分析图。具体实施例方式下面将结合本发明的实施例进一步详细说明本发明的实质内容，该实施例仅用于说明本发明而对本发明并没有限制。实施例1喜树果有效组分的制备喜树果粉碎，加入8倍量乙酸乙酯:乙醇=1:1，加热回流l小时，提取2次,药渣加入8倍量70%乙醇，加热回流1小时,提取2次，滤液合并得提取液，将提取液浓縮后，用5%甲醇溶解上样，过ODS-C18柱，首先，采用1250ml5%甲醇作为流动相，然后改换1250ml60X甲醇作为流动相，得洗脱液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分。实施例2喜树果有效组分的分析(1)实施例1的喜树果有效组分的HPLC-ELSD联用分析色谱条件色谱柱AgilentZorbaxSB-C18柱(4.6mmX150瞧，5um);采用梯度洗脱，流动相A相为0.2%冰醋酸水溶液，流动相B相为含0.2W冰醋酸的乙腈溶液；梯度洗脱程序如下O分钟时，流动相八为.90%的0.2%冰醋酸水溶液、流动相B为10%的0.2%冰醋酸的乙腈溶液；10分钟时，流动相A为50%的0.2%冰醋酸水溶液、流动相B为50%的0.2%冰醋酸的乙腈溶液；30分钟时，流动相A为5%的0.2%冰醋酸水溶液、流动相8为95%的0.2%冰醋酸的乙腈溶液；35分钟时，流动相A为5%的0.2%冰醋酸水溶液、流动相B为95%的0.2%冰醋酸的乙腈。溶液流速0.5mL'mirf、检测波长全波长；柱温3CTC;ELSD条件漂移管温度105°C;氮气流速2.OL/min供试品溶液的制备称取本发明有效组分，用甲醇溶液溶解在容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。测定方法精密吸取供试品溶液，注入液相色谱仪，测定。实施例3喜树果有效组分制剂取实施例1的喜树果有效组分，0.5g与10.5g聚乙二醇-6000混合均匀，加热熔融，化料后移至滴丸滴灌中，药液滴至6-8'C液体石蜡中，除油制得滴丸400粒。实施例4喜树果有效组分制剂取实施例1的喜树果有效组分，0.5g、葡萄糖4.5g、硫代硫酸钠0.9g和蒸馏水lml，上述组分混合均匀后，冷冻干燥，分装500支，即得。实施例5喜树果有效组分制剂取降香油1.5g，加入到13ml饱和的羟丙基e-环糊精中，搅拌溶解，滤过，滤叶低温干燥，的降香油和羟丙基e-环糊精的包合物粉末。除上述降香油合羟丙基P-环糊精的包合物粉末外，再取实施例1的喜树果有效组分，0.5g、甘露醇5.5g、依地酸钙钠0.9g和蒸馏水2ml，上述组分混匀后，冷冻干燥，分装300支，即得。权利要求1、一种喜树果有效组分，其制备过程包括以下步骤步骤1用乙酸乙酯和乙醇混合物作为溶剂对喜树果进行提取，步骤2药渣用乙醇提取，得到提取液，步骤3提取液经过色谱柱层析得有效组分。2、权利要求1的提取物，其特征在于，步骤1中所述乙酸乙酯和乙醇的混合物，两者的比例为乙酸乙酯乙醇=1-5:1-5。3、权利要求1的提取物，其特征在于，步骤1中所述乙酸乙酯和乙醇的混合物，两者的比例为乙酸乙酯乙醇=1-2:1-2。4、权利要求1的提取物，其特征在于，步骤1中所述乙酸乙酯和乙醇的混合物，两者的比例为乙酸乙酯乙醇=1:1。5、权利要求1的提取物，其特征在于，其制备过程包括以下步骤步骤2中所述药渣用乙醇提取，所述乙醇为50-90%的乙醇，步骤3中所述经过色谱柱层析是用5%甲醇溶解上样，过ODS-C18柱，首先，采用5%甲醇作为流动相，然后改换60%甲醇作为流动相，得洗脱液，经浓縮干燥后得到有效组分。6、含有权利要求l-5任何一项有效组分的药物组合物。7、权利要求1的有效组分的制备方法，其特征在于，其制备过程包括以下步骤步骤1:用乙酸乙酯和乙醇混合物作为溶剂对喜树果进行提取，步骤2:药渣用乙醇提取，得到提取液，步骤3:提取液经过色谱柱层析得到有效组分。8、权利要求7的有效组分的制备方法，其特征在于，所述步骤中，步骤l为取喜树果药材，以乙酸乙酯:乙醇=1-5:1-5为溶剂，回流提取，将提取液与药渣分离，步骤2为所述药渣用乙醇提取，所述乙醇为50-90%的乙醇，步骤3中所述经过色谱柱层析是用5%甲醇溶解上样，过ODS-C18柱，首先，采用5%甲醇作为流动相，然后改换60%甲醇作为流动相，得洗脱液，溶液经浓縮干燥后得到有效组分。9、权利要求8的有效组分的制备方法，其特征在于，步骤如下喜树果粉碎，加入8倍量乙酸乙酯:乙醇=1:1，加热回流l小时，提取2次,药渣加入8倍量70%乙醇，加热回流1小时，提取2次，滤液合并得提取液，将提取液浓縮后，用5%甲醇溶解上样，过ODS-C18柱，首先，采用1250ml5%甲醇作为流动相，然后改换1250ml60X甲醇作为流动相，得洗脱液，溶液经浓縮干燥后得到有效组分。全文摘要本发明涉及喜树果有效组分及其制备方法与用途，本发明的喜树果有效组分，其制备过程包括以下步骤步骤1用乙酸乙酯和乙醇混合物作为溶剂对喜树果进行提取，步骤2药渣用乙醇提取，得到提取液，步骤3提取液经过色谱柱层析得有效组分。文档编号A61K36/185GK101347468SQ200710123259公开日2009年1月21日申请日期2007年7月20日优先权日2007年7月20日发明者雳刘,强史,水文波,程翼宇,静窦,葛志伟,庆贺,阳霍申请人:天津天士力制药股份有限公司