专利名称：：氧化苦参碱在制备治疗急性、慢性心功能不全疾病药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种药物的临床新用途，特别是氧化苦参碱在制备治疗急性、慢性心功能不全疾病的药物中的应用，属于药品的
技术领域：
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背景技术：
：氧化苦参碱(Oxymatrine)是从中药苦豆子中提取的或化学合成等途径获得的一种生物碱，其分子式为C15H24N202.H20，分子量为282。为无色骨子状结晶(丙酮)，熔点2080。C，易溶于水。心功能不全(心衰)是由不同病因引起的心脏舒縮功能异常，以致在循环血量和血管舒縮功能正常时，心脏泵出的血液达不到组织的需求，或仅能在心室充盈压增高时满足代谢需要。此时神经体液因子被激活参与代偿，形成具有血液动力功能导演和神经体液激活多方面特征的临床综合征。简单地说，心功能不全就是由于心脏功能异常，不能满足身体各组织器官对于心脏泵血的需求而引起的一系列临床症状。心功能不全按其发展进程可分为急性心功能不全和慢性心功能不全。心功能不全是一种症候群，疲劳、气短、心悸、体重减轻、肌肉松弛萎縮、整日卧床是临床常见的综合征，其发病率较高，死亡率亦高。慢性心功能不全基本病因是各种慢性心肌病损和长期心室负荷过重。在我国，引起慢性心功能不全包括原发性和继发性两类，病因包括不明原因和瓣膜疾病为主，其次为高血压和冠状动脉粥样硬化性心脏病(慢性心功能不全)，其诱因主要是感染、心律失常、水电解质紊乱、过度疲劳、精神压力过重、环境气候急剧变化及妊娠、分娩并发其他疾病等。临床上，慢性心功能不全以左心功能不全最常见，它主要影响患者的肺循环，可表现为呼吸困难、咳嗽、咳痰、咯血、夜尿增多、疲乏无力。氧化苦参碱临床主要用于过敏性皮肤病及白细胞减少的治疗。1994年上海市传染病医院实验发现氧化苦参碱有抗麻鸭乙型肝炎病毒作用，并在上海市多家综合医院采用氧化苦参碱治疗慢性乙型肝炎均取得良好疗效。1998年2月24日氧化苦参碱被卫生部批准为国家治疗慢性乙型肝炎五类新药。目前未见有将氧化苦参碱用于治疗急性、慢性心功能不全疾病的报道。本发明的目的在于，提供氧化苦参碱在制备治疗急性、慢性心功能不全疾病药物中的应用。本发明的技术方案是，将氧化苦参碱用在制备治疗急性、慢性心功能不全疾病的药物中。氧化苦参碱应用于制备治疗急性、慢性心功能不全疾病的药物，可采用任何一种适合于临床上使用的口服或非口服制剂。可以是散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、微囊剂、丸剂、滴丸、软胶囊、口服液、糖浆剂、分散片、喷雾剂或气雾剂，也可以是静脉注射剂、肌肉注射剂、吸入剂或凝胶剂等。本发明将氧化苦参碱应用于制备治疗急性、慢性心功能不全疾病的药物，是以氧化苦参碱为原料，采用常规制备工艺，加入适当辅料制备成任何一种适合于临床上使用的口服或非口服制剂，如散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、微囊剂、丸剂、滴丸、软胶囊、口服液、糖浆剂、分散片、喷雾剂或气雾剂、静脉注射剂、肌肉注射剂、吸入剂、凝胶剂等；所用的辅料包括常规的溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、润滑剂、湿润剂、增稠剂、增溶剂、基质等药物辅料。与现有技术比较，本发明为氧化苦参碱提供了临床新用途，扩大了其应用范围。本发明将氧化苦参碱用于制备治疗急性、慢性心功能不全疾病的药物，其对急性心功能不全疾病的药物疗效可通过氧化苦参碱对实验性大鼠与犬急性心肌梗死模型的影响来表现；对慢性心功能不全疾病的药物疗效可通过长期给予去甲肾上腺素诱导大鼠高交感活性慢性心功能不全、狭窄大鼠腹主动脉复制慢性心功能不全模型的影响来表现。以下是本发明的实验例实验例l:氧化苦参碱对实验性大鼠急性心肌梗死的影响1.实验方法1.1模型制备与给药取SD大鼠50只，雌雄各半，体重200250g，随机分为5组，g卩正常组(给予等容积生理盐水)、模型组(给予等容积生理盐水)、药物组分为三个剂量组7.5mg/kg、15mg/kg、30mg/kg，给药容积为10ml/kg;各组与手术前20min腹腔注射给药l次；结扎后60min在给药1次。在大鼠胸骨左侧，与胸骨平行作长约2cm的纵开口，切开皮肤，钝性分离胸大肌，暴露肋骨。用棉线将皮肤与肌肉做荷包缝合，打一松结。套上呼吸机，用止血钳在距胸骨2mm处插入第5，6肋骨之间，扩大切口，小心用镊子破心包膜，挤压腹部，暴露心脏于体外，用无损伤缝线结扎左心耳下的冠状动脉，将心脏小心的放回胸腔，挤压空气，迅速抽紧已备用的松结，紧闭胸腔，待动物恢复自主呼吸后，关闭呼吸机。观察心电图的改变，并可以通过心电图的改变确定是否结扎到冠状动脉，以J点高抬O.lmv作为模型成功的标准；于6h记完心电图后，颈总动脉插管取血，血清用于检测乳酸脱氢酶(LDH)，肌酸激酶(CK)，观察生化指标的改变。手术后6h记录完ECG，剪开胸腔，取出心脏，放于预先放有磷酸缓冲液的平皿中，挤去心脏中的剩余血液，剪去附着肌肉的脂肪组织，并剪去心房，只留下心室部分。用吸水纸将液体吸干，然后用手术刀将心脏切成5-6片，称重，作为染色前心脏总重量，放于P/。TTC中，37。C水浴染色5min后取出，吸干水，把染色的正常心肌(红色)与不被染色的梗死区切开，梗死区称重，计算心肌梗死面积百分率。心肌梗死面积％=未染色心肌重量/全心重量X100%。1.2数据分析与统计方法所有数据以x士s表示，统计学分析采用student-T检验。2.结果2.l氧化苦参碱对大鼠急性心肌梗死模型的影响模型组结扎20min分钟后，J点位移显著增加，而氧化苦参碱注射给药后三个剂量组心电图J点位移未见明显增加，与模型组比较差异显著。梗死面积测定的结果提示，氧化苦参碱注射给药后高、中2个剂量组明显降低急性心肌梗死的梗死率，与模型组比较差异显著(p〈0.05)，高、中2剂量组明显降低血清中LDH、CK的活力。实验结果见表1与表2。该实验结果提示氧化苦参碱对急性心肌梗死动物模型具有一定的保护作用。表l氧化苦参碱对大鼠冠脉结扎所致心肌梗死的梗死百分率值影响(x士s)(n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>与假手术组比较##P〈0.01;与模型组比较*p<0.05，**p<0.01,表2氧化苦参碱对大鼠冠脉结扎所致心肌梗死CK、LDH的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>与模型组比较#P<0.05，##P<0.01;与正常对照组比较伞P〈0.05，**P<0.01。实验例2:氧化苦参碱对离体兔心脏缺血再灌注损伤的保护作用l.方法1.l实验方法新西兰家兔，体重2.0-2.4kg，随机分为4组，每组8只，g卩模型组、氧化苦参碱三剂量组2mg/kg、4mg/kg、8mg/kg。动物耳缘静脉注射肝素，15min后击毙处死，开胸，将心脏迅速取出，移至贮有冷Locke灌流液的培养皿中，尽量洗出心脏血液，修剪后，在液面下迅速把主动脉接于灌流的套管上，并以线结扎固定。立即以通入95。/。的02和5。/。C02的Locke液进行灌流。灌流瓶高距心脏5060cm，灌流液温度保持38士0.5。C。三根电极分别插于左右心耳和心尖部，连于二道生理记录仪，持续心电监测。心脏复跳及ECG显示正常后，稳定15min，再进行实验，该期间出现心律失常者弃去。造模采用停灌缺血再复灌损伤关闭主动脉套管，使心脏停灌而致心肌缺血，45min后松开套夹，恢复自然灌流。药物加入到灌流液中，于复灌的开始5min内灌完。1.2冠脉灌注量的测定在心脏下用漏斗和量筒收集流出液，记录流出液量，即为冠脉流量。停灌前，连续3次测量每分钟灌流液的流出量，以其平均值作为给药前的正常灌注量。复灌后，于5、10、15、30、45、60min时记录冠脉灌注量。1.3灌出液生化测定生化仪测定灌出液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的活力。1.4组织形态学检査实验结束后，取心脏，于10%福尔马林溶液中固定，常规取材、染色、切片，在光学显微镜下作病理组织学检査。1.5统计方法所有资料采用student-t检验；P〈0.05为差异具有显著性，P〈0.Ol差异具有极显著性。2.实验结果2.l氧化苦参碱对离体兔心缺血再灌注冠脉灌注量的影响缺血再灌注后冠脉灌注量在15min时显著下降，给予氧化苦参碱后，氧化苦参碱中、高剂量组在15min后的冠脉灌注量明显高于模型组(P〈0.05，P〈0.01)，表明氧化苦参碱能显著对抗缺血损伤所引起的冠脉灌注量的下降，增加急性心功能不全的供血且随着剂量的增高作用增强，呈较好的量效关系。结果见表3。表3氧化苦参碱对离体兔心缺血再灌注冠脉流量的影响(X士S)(n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>与模型组组比较P<0.05，**P<0.01。2.2氧化苦参碱对离体兔心缺血再灌注心肌灌流液中LDH的影响给予氧化苦参碱后低、高剂量组于30min、中剂量组于45min后灌出液中LDH活力显著低于模型组(P〈0.05;P〈0.01)，中、小剂量组45min后、高剂量组30min后灌出液中LDH活力的变化率均明显小于模型组(P〈0.05;P〈0.01)，表明氧化苦参碱可对抗缺血再灌注心肌中的LDH的外漏。结果见表4。表4对离体兔心缺血再灌注心肌灌出液中LDH的影响(X士S)(n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>与模型组组比较P<0.05，**P<0.01。2.3氧化苦参碱对离体兔心缺血再灌注心肌灌出液中CK的影响给予氧化苦参碱后，中剂量组心脏灌出液中CK活力于再灌注45min后、高剂量组心脏灌出液中CK活力于再灌注30min后均显著低于模型组(P〈0.05;P〈0.01)，表明氧化苦参碱对缺血再灌注所引起的心肌CK外漏具有拮抗作用，且随着剂量的增高作用增强，呈一定的量效关系。结果见表5。表5氧化苦参碱对离体兔心缺血再灌注心肌灌出液中CK的影响(X士S)(n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>实验例3:氧化苦参碱对压力超负荷所致心功能不全动物模型的影响l.方法1.l腹主动脉狭窄所致大鼠心肌肥厚模型的建立参考Doering等的方法行腹主动脉狭窄并稍加改良。大鼠用50mg.kg—工戊巴比妥钠麻醉后，于剑突下35cm处打开腹腔，在左肾动脉上方游离腹主动脉，沿其长轴置7号针头(直径约为0.7mm)，以3-0丝线绕腹主动脉与7号针头一起结扎，随后抽出针头，使腹主动脉残留管腔的直径约为0.7mm。假手术组动物除不行腹主动脉狭窄术外，其他操作相同。大鼠均在25'C左右动物房(空调控制)内喂养，每笼5只，自由饮水饮食。1.2实验分组及给药实验共分为5组，每组10只，即假手术组(给予等容积的溶剂)、模型组(给予0.5%CMC-Na)、氧化苦参碱5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg。各组均于每日上午给药1次，灌胃容积为10ml/kg。各组大鼠于末次给药后45min处死。1.3体重变化的测定大鼠手术前测体重，手术后每周测l次体重，观察大鼠体重变化规律了解手术和药物对大鼠体重的影响。1.4心肌重量参数的测定大鼠处死后，迅速开胸取出心脏，表面吸干后，分别称心脏和左心室重量，测定全心重(HW)/体重(BW)和左心室重(LVW)/体重(BW)，将左心室迅速置液氮中备用。1.5心肌组织^+-K+ATPase，Ca2+-Mg2+ATPase测定取出大鼠心脏，以10倍量Tris-HCl(pH7.4)缓冲液在冰浴下制成10%的心脏匀浆，于4。C，1000g离心10min弃去沉淀后，取上清按试剂盒说明书检测^+-K+ATPase，Ca2+-Mg2+ATPaSe。蛋白定量用考马斯亮兰法，以牛血清白蛋白为标准。2.实验结果2.l氧化苦参碱对大鼠体重的影响动物行腹主动脉狭窄手术后，体重增长缓慢，整个实验过程中模型组各周次动物体重与假手术组比较明显减轻(P〈0.01)。而给药组均具有不同程度的改善作用，结果见表6。表6氧化苦参碱对压力超负荷诱导心功能不全大鼠体重的影响(；士s).<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>#P〈0.05，抑P〈0.01vs假手术组，*P〈0.05，**P〈0.01vs模型组。2.2氧化苦参碱对心脏指数和左心室指数的影响30d后，模型组心脏指数和左心室指数较假手术显著增加(p〈0.01)。给予氧化苦参碱均具有明显的防治作用，氧化苦参碱三剂量组5、10、20mg/kg心脏指数分别降低27.2。/0(p〈0.05)、21.9%(p〈0.05)和32.3%(p〈0.01);左心室指数分别降低25.7%(p〈0.05)、22.0%(p〈0.05)和33.2%(p〈0.01)。结果见表7。表7氧化苦参碱对对压力超负荷诱导心功能不全大鼠心指数与左室指数的影响(z±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2.3氧化苦参碱对左心室匀浆Na，K-ATPase、Ca，Mg-ATPase、hydroxyproline的影响ATPase酶活力是反应心肌能量利用的指标之一。心功能不全的大鼠ATPase活力降低，腹主动脉狭窄30d后，模型组^+-1(11￡136及(]￡12+-]^211￡136活力明显降低与假手术组比较差异显著(P〈0.01)。氧化苦参碱三个剂量组^+-1(11&36及0&2+-]^211&36活力明显增加。结果提示氧化苦参碱对心功能不全过程中ATPase活力的降低具有明显改善作用。结果见表8。心肌胶原蛋白水解成为羟脯氨酸，以羟脯氨酸表示心肌胶原蛋白的含量。模型组羟脯氨酸的含量比假手术组增加。而各给药组羟脯氨酸的含量均明显降低，提示心肌纤维化程度降低。结果见表8。表8.氧化苦参碱对压力超负荷诱导心功能不全大鼠Na+，K+-ATPase、Ca2+，Mgz+-ATPaSe和羟脯氨酸的影响(z±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>实验例4:氧化苦参碱对去甲肾上腺素诱导心功能不全动物模型的影响l.方法1.l去甲肾上腺素诱导实验性大鼠心功能不全模型的复制大鼠ip去甲肾上腺素1.5mg'kg—、d—、2次/d，连续ipl5d，空白对照组大鼠ip生理盐水给予，其余操作均同于模型组。大鼠均自由引水饮食，环境温度为22士5'C，每笼5只。1.2实验分组及给药实验共分为5组，每组10只，即空白对照组(ig给予等容积溶剂+ip生理盐水)、模型组(给予等容积溶剂+ip3.0mg/kg)、氧化苦参碱组(ig20mg/kg+ip3.Omg/kg)、氧化苦参碱组(igl0mg/kg+ip3.0mg/kg)、氧化苦参碱组(ig5mg/kg+ip3.Omg/kg)。各组均于每日上午igl次，ig容积为10ml.kg—、自造模之日ig给予研究药物。各组大鼠与末次给药后45min处死。1.3体重变化的测定大鼠造模前测体重，注射NE后第7d、14d、15d各测l次体重，观察大鼠体重变化规律，研究NE和药物对大鼠体重的影响。1.4心肌重量参数的测定大鼠处死后，迅速开胸取出心脏，表面吸干后，在冰冷的环境下剪去心房及右心室，分别称心脏和左心室重量(左心室+室间隔)，测定全心重(HW)/体重(BW)和左心室重(LVW)/体重(BW)，将左心室用迅速置液氮中备用。1.5左心室组织NatK+ATPase，Ca2+-Mg2+ATPase取出大鼠左心室，以10倍量Tris-HCl(pH7.4)缓冲液在冰浴下制成10%的心脏匀浆，于4。C，1000g离心10min弃去沉淀后，取上清进行Na+-K+ATPase，Ca2+-Mg2+ATPase。蛋白定量用考马斯亮兰法，以牛血清白蛋白为标准。检测原理利用Pi与酸性钼酸铵反应生成磷钼酸复合物，该复合物呈蓝色，其颜色深浅与无机磷的生成量呈正比例关系，ATPase可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATPase活力的高低。1.6左心室羟脯氨酸的测定心肌匀浆方法同上。首先以组织消化液水解胶原为羟脯氨酸。检测原理利用羟脯氨酸在氧化剂的作用下所产生的氧化产物与二甲氨基苯甲醛作用呈现紫红色，在550nm处比色，测定吸光度，判断羟脯氨酸含量。2.结果2.l氧化苦参碱对去甲肾上腺素诱导心功能不全大鼠体重的影响连续ip去甲肾上腺素，模型组动物体重增长缓慢。各给药组动物体重与模型组比较未见明显变化。结果见表9。表9氧化苦参碱对去甲肾上腺素诱导心功能不全大鼠体重的影响(z±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>2.2氧化苦参碱对去甲肾上腺素诱导心脏指数和左心室指数的影响去甲肾上腺素3.Omg.kg—1,d—工连续ip给药15d复制大鼠心功能不全，其心指数和左室指数较空白对照组显著增加。给予氧化苦参碱，均具有明显的防治作用，与模型组比较，差异显著，结果见表IO。表10氧化苦参碱对去甲肾上腺素诱导心功能不全大鼠心指数和左室指数的影响(z±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>#P〈0.05，抑P〈0.01vs假手术组，*P〈0.05，**P〈0.01vs模型组。2.3氧化苦参碱对去甲肾上腺素诱导心功能不全大鼠左心室均浆Na+，K+-ATPaSe、Ca2+，Mg2+-ATPase、hydroxyproline、SOD、MDA的景，向本实验中3.Omg.kg—\d—E连续ip给予15d，模型组Na+-K+ATPase及Ca2+-Mg2+ATPase活力明显降低，与空白对照组比较差异显著。氧化苦参碱各剂量组NatK+ATPase及Ca2+-Mg^ATPase活力明显增加。细胞外基质病变是心肌肥厚病变过程中的重要病理组成部分之一，细胞外基质的主要成分是胶原纤维蛋白，胶原水解成为羟脯氨酸，因此可以通过检测羟脯氨酸的量表示心肌胶原的含量。模型组羟脯氨酸的含量比对照组增加。氧化苦参碱高中剂量组明显降低羟脯氨酸的含量(P〈0.05)。结果见表ll。表ll氧化苦参碱对去甲肾上腺素诱导心功能不全大鼠ATPase和羟脯氨酸含量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>#P〈0.05，抑P〈0.01vs假手术组，*P〈0.05，**P〈0.01vs模型组。3.结论本试验结果显示，氧化苦参碱对多种因素诱导的急、慢性心功能不全具有一定的改善作用。具体实施方式实施例l取氧化苦参碱20g，加入制备胶囊的相应辅料，混匀，装入1号或2号、或3号胶囊，制成IOOO粒。用于治疗急性和慢性心功能不全疾病，每粒装氧化苦参碱520mg，每次13粒，一日13次。实施例2:注射剂取氧化苦参碱20g，加入制备注射剂的相应辅料，制成1000支注射剂，用于治疗急性和慢性心功能不全疾病，每支O.5ml5ml。成人静脉注射，每次13支，一日13次。实施例3:口崩片取氧化苦参碱20g，按常规制备工艺制成口崩片1000片，用于治疗急性和慢性心功能不全疾病。每次13片，一日13次。实施例4:颗粒剂取氧化苦参碱20g，按常规制备工艺制成1000袋，用于治疗急性和慢性心功能不全疾病。每袋12.5克，每次O.52袋，一日13次。实施例5:片剂取氧化苦参碱20g，按常规制备工艺制成片剂1000片，用于治疗急性和慢性心功能不全疾病。每次13片，一日13次。实施例6:滴丸取氧化苦参碱20g，按常规制备工艺制成滴丸1000粒，用于治疗急性和慢性心功能不全疾病。每次13粒，一日13次。权利要求1.氧化苦参碱在制备治疗急性、慢性心功能不全疾病药物中的应用。全文摘要本发明公开的是氧化苦参碱在制备治疗急性、慢性心功能不全疾病的药物中的应用。本发明以氧化苦参碱为原料，按常规制备工艺制成任何一种适合于临床上使用的口服或非口服制剂，如散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、微囊剂、丸剂、滴丸、软胶囊、口服液、糖浆剂、分散片、喷雾剂或气雾剂、静脉注射剂、肌肉注射剂、吸入剂、凝胶剂，用于治疗急、慢性心功能不全疾病。文档编号A61K31/4375GK101185647SQ20071020181公开日2008年5月28日申请日期2007年9月21日优先权日2007年9月21日发明者沈祥春,玲陶申请人:沈祥春