专利名称：一种白藜芦醇纳米乳抗癌药物的制作方法
技术领域：
本发明属于医药领域，涉及一种抗癌药物白藜芦醇的新剂型，特别涉及 一种白藜芦醇纳米乳抗癌药物。
技术背景白藜芦醇(resveratrol， RES)是广泛存在于水果、中药和葡萄酒中的一 种植物抗毒素，具有多种生物学作用。是一种多酚类化合物，化学名为3， 4'， 5-三羟基-二苯乙烯(3， 4'， 5-trihydroxystlbene)，白色或灰白色粉末，易溶于 丙酮、乙酸乙酯、二甲基亚砜、乙醇，难溶于水。RES进入血液循环后首先 在肝脏中代谢，与糖苷相结合，在体内半衰期为4h。适用于肝癌、乳腺癌、 肺癌、胃癌、结肠癌、白血病和前列腺癌等癌症化学预防和化学治疗，近年 来对RES抗癌机理的研究越来越热。RES可作用于癌症发生的启动、促进和 进展3个阶段，能明显抑制体外培养的不同癌细胞系的增殖。在人类结肠癌细 (HT-29 、 COLO-201以及COLO-320)培养中，RES可降低环氧合酶-l和环 氧合酶-2的活性，这两种酶是结肠癌的生物标志物。进一步研究发现，RES能 通过抑制kB激酶来阻断kB基因的转录；并能明显抑制细胞S期DNA合成所必 需的核糖核酸还原酶活性。RES对癌细胞DNA合成的抑制作用是羟基脲(可清 除自由基，临床用于肿瘤的化疗)的25倍。在人类白血病HL-60细胞培养中， 可导致DNA链断裂、拓扑异构酶II活性及Bcl-2基因表达下降，因此具有抑 制癌细胞增殖和促进癌细胞凋亡的作用。在人类乳腺癌MCF-7细胞培养中， RES可作用于细胞K十通道，使K+外流，从而促进细胞凋亡的发生；RES还可以通过影响蛋白激酶来抑制生长因子介导的信号转导系统，亦可直接调节与细胞色素P450有关的酶活性来发挥其抗增殖作用。另有研究发现，RES可 抑制体外培养的肺癌A-427细胞、胃腺癌细胞以及人类口腔鳞癌细胞的增殖。 值得一提的是，RES对癌细胞的抑制作用或细胞毒性具有高度选择性，它在 抑制癌细胞增殖的同时，还对正常细胞的存活力具有促进作用。RES由于具 有强抑制癌细胞的作用，而对正常细胞的生活力具有促进作用，RES近年来 在抗肿瘤领域被受关注并迅速发展，白藜芦醇的研究和开发为临床提供了低 毒、高效、安全的抗癌药物。欧美各国已将白藜芦醇开发成保健食品上市，有片剂、胶囊、口服液等。 最近，国内也出现了一些白藜芦醇产品，也都是保健食品类。白藜芦醇作为 抗肿瘤药物还没有产品上市，是因为白藜芦醇药物本身还存在一系列的问题，如生物利用度低、半衰期较短，在体内只有4h;见光遇热易分解等。发明内容针对现有技术中存在的缺陷与不足，本发明的目的在于提供一种分布均 匀、透明、稳定性好的白藜戸醇纳米乳抗癌药物。实现上述发明目的的技术方案是 一种白藜芦醇纳米乳抗癌药物，其粒径在l 100nm之间，各原料及其质量百分比为白藜芦醇0.1% 2.0%，表 面活性剂33.3% 42.9%，油3.3% 10.0%，余量为蒸馏水，上述原料的质 量百分比之和为100%。所述的表面活性剂是非离子表面活性剂聚氧乙烯醚氢化蓖麻油、蓖麻油 聚氧乙烯醚的任一种。所述的油是橄榄油、异辛脂、蓖麻油、肉豆蔻酸异丙酯、乙酸乙酯中的任一种。为了达到更好的效果，本发明在上述表面活性剂中加入助表面活性剂乙 醇，1， 3-丁二醇，丙二醇中任一种，助表面活性剂占两者总和的0.1% 20%。本发明选用的表面活性剂是非离子表面活性剂聚氧乙烯醚(40)氢化蓖 麻油(RH40)、蓖麻油聚氧乙烯醚(EL40)，这些表面活性剂安全、无刺激。本发明选用的油是橄榄油、异辛脂、蓖麻油、乙酸乙酯、肉豆蔻酸异丙 酯(IPM)，安全无毒，对皮肤有滋润的作用。为了调整表面活性剂的亲水亲油平衡值(HLB)，能进一步降低界面张力， 增大膜的柔顺性和刚性，插到界面膜中，促进曲率半径很小的膜的形成，扩 大纳米乳形成区域，本发明在表面活性剂中加入刺激性小的助表面活性剂， 并且是很好的药物溶剂。 '本发明的白藜芦醇纳米乳通过口服给药，提高药物的溶解度，减少药物 在体内的酶解，促进药物的胃肠道吸收。白藜戸醇是在水溶液中很难溶解的 酚类药物，很容易氧化分解，对光热很敏感，纳米乳基质给它提供了良好的 溶解环境，并且可提高对光热的稳定性。口服可经淋巴吸收，克服首过效应 和分子通过胃肠道时的障碍。本发明的白藜芦醇抗癌纳米乳与现有技术相比，具有以下优点1. 本发明的白藜芦醇抗癌纳米乳粒径lnm 100nm，是将白藜声醇溶于 助乳化剂，再加入乳化剂和油相搅拌均匀，用水滴定直到均匀透明，白藜芦 醇的浓度可高达到2%。2. 本发明的白藜芦醇抗癌纳米乳分布均匀、透明、稳定性好，有较低的 表面张力，O/W的纳米乳具有良好的流动性，乳液能够保护白藜芦醇使其对光、热敏感性降低。3. 本发明的白藜芦醇抗癌纳米乳给药后迅速被网状内皮细胞吞噬，在维持 恒定的血药浓度或药理效应，减少副作用，能提高药物生物利用度延长作用 时间，减少药物的用量和用药次数。4. 本发明的白藜芦醇抗癌纳米乳制备方法简单、耗能低。
图1白藜芦醇纳米乳电镜图； 图2白藜芦醇纳米乳粒径分析曲线图； 图3细胞抑制率随白藜芦醇浓度的变化； 图4正常组HE染色图；图5白藜戸醇原料药8mg/L处理36h后HE染色图； 图6白藜芦醇纳米乳8mg/L处理36h后HE染色图。
具体实施方式
以下结合附图和发明人给出的具体制备方法实施例及使用药效试验例来 进一步阐述本发明药物有益效果。 实施例l精确称取聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油4.5g，乙醇1.0g(其中溶解白藜芦醇 0. lg)， IPM0.5g，在2(TC条件下，搅拌混匀，然后向其中缓慢加入蒸馏水，边 加边搅拌，开始时体系黏度较小，随着水量的增加，体系变黏稠，继续滴加 蒸馏水并不断搅拌，当体系突然变稀时，此时产生的即是o/w型无色透明白 藜芦醇纳米乳液，称其重量15.0g。实施例2精确称取蓖麻油聚氧乙烯醚4.5g，乙醇1.0g(其中溶解白藜芦醇0.015g)， 异辛脂0.5g，在22。C条件下，搅拌混匀，然后向其中缓慢加入蒸馏水，边加边 搅拌，开始时体系黏度较小，随着水量的增加，体系变黏稠，继续滴加蒸馏水并不断搅拌，当体系突然变稀时，此时产生的即是o/w型无色透明白藜芦醇纳米乳液，称其重量为15.0g。 实施例3精确称取聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油3.5g，乙醇1.0g(其中溶解白藜芦醇 O.lg)，乙酸乙酯1.5g(其中溶解白藜芦醇0.05g)，在24。C条件下，搅拌混匀，然 后向其中缓慢加入蒸馏水，边加边搅拌，开始时体系黏度较小，随着水量的 增加，体系变黏稠，继续滴加蒸馏水并不断搅拌，当体系突然变稀时，此时 产生的即是0/W型无色透明白藜芦醇纳米乳液，称其重量为15.0g。实施例4精确称取蓖麻油聚氧乙烯醚3.5g，乙醇1.0g(其中溶解白藜芦醇0.1g)，橄 榄油1.5g，在22。C条件下，搅拌混匀，然后向其中缓慢加入蒸馏水，边加边 搅拌，开始时体系黏度较小，随着水量的增加，体系变黏稠，继续滴加蒸馏水并不断搅拌，当体系突然变稀时，此时产生的即是o/w型无色透明白藜芦醇纳米乳液，称其重量15.0g。 实施例5精确称取蓖麻油聚氧乙烯醚4.5g，乙醇l.Og(其中溶解白藜芦醇O.lg)，蓖 麻油0.5g，在22。C条件下，搅拌混匀，然后向其中缓慢加入蒸馏水，边加边 搅拌，开始时体系黏度较小，随着水量的增加，体系变黏稠，继续滴加蒸馏水并不断搅拌，当体系突然变稀时，此时产生的即是o/w型无色透明白藜芦醇纳米乳液，称其重量15.0g。 实施例6精确称取蓖麻油聚氧乙烯醚3.5g，乙酸乙酯1.5 (其中溶解白藜芦醇0.5)， 在22'C条件下，搅拌混匀，然后向其中缓慢加入蒸馏水，边加边搅拌，开始 时体系黏度较小，随着水量的增加，体系变黏稠，继续滴加蒸馏水并不断搅拌，当体系突然变稀时，此时产生的即是o/w型无色透明白藜芦醇纳米乳液，称其重量10.0g。试验例l本发明白藜芦醇纳米乳抗癌药物粒径大小测定本发明经透射电子显微镜检测，如图1，液滴呈圆形、近圆形，分散性好， 没有彼此粘连。马尔文粒度分析仪检测，如图2，结果显示其直径分布在 10nm 100nm之间。试验例2本发明白藜戶醇纳米乳抗癌药物稳定性的测定以下通过离心试验、光稳定性试验、温度稳定性试验看其稳定性，看本 发明白藜芦醇纳米乳抗癌药物是否有分层、浑浊和晶体析出。1. 高速离心试验取适量制备好的白藜芦醇纳米乳抗癌药物于离心管中，封口，以10000 r/min的转速进行离心，经离心20min后，白藜芦醇纳米乳仍保持澄清透明， 未见到有白藜芦醇晶体的析出和分层现象。2. 光稳定性试验将适量制备好的白藜芦醇纳米乳抗癌药物装入玻璃瓶中，密封，置于光 照下，室温光照10d，于ld、 3d、 5d、 7d、 10d取样。结果表明，白藜芦 醇纳米乳抗癌药物仍保持澄清透明，无浑浊、分层现象。3.温度稳定性试验将适量制备好的白藜芦醇纳米乳抗癌药物装入玻璃瓶中，密封，置于4 °C冰箱、室温25 。C和37 。C三种温度条件下留样考察30 d，每隔5 d取样观察。 结果表明，该白藜芦醇纳米乳抗癌药物在此三种温度条件下均保持澄清透明， 未见分层、浑浊和结晶析出的现象，温度稳定性好。试验例3 MTT法测定白藜芦醇纳米乳对人肝癌细胞系HepG2细胞毒作用向96孔培养板内加入200uL lX104/mL单细胞悬液，37°C、 5。/oC02孵 箱中培养24h后，分别加入不同浓度的Res原料药、Res纳米乳20"L(浓度 为l.O、 2.0、 4.0、 8.0、 16.0、 32.0mg/L)，每个浓度重复3个孔，并且设 立空白纳米乳组和空白对照组。37°C、 5%C02孵箱中培养32 h后，每孔中 加入MTT20pL (5g/L)， 继续培养4h后小心吸去上清液，每孔加入二甲基 亚砜150 ii L ，室温置于微量振荡器上振荡10 min，自动酶标仪测量各孔 的吸光度值(A值)，检测波长为490 nm。按下列公式计算细胞抑制率细 胞抑制率=l一给药孔平均吸光度值/对照组平均吸光度值X 100%。细胞抑制率随浓度变化如图3所示，Res原料药和Res纳米乳(2.0mg/L、 4.0mg/L、 8.0mg/L、 16.0 mg/L、 32.0 mg/L)作用于肝癌细胞系HepG2 36 h 后，细胞抑制率分别为29.3%、 33.6%、 41.9%、 45.1%、 57.2%和19.8%、 44.2%、 54.5%、 59.8°/。、 79.1%，当Res白藜芦醇浓度〉4mg/L时，两组细胞抑制率有 显著差异(pO.05); IC50分别为:6.5mg/L、 24.2mg/L两组半数抑制浓度存 在显著差异(p〈0.01);空白纳米乳组与对照组之间无显著性差异。本实验说明白藜芦醇纳米乳比白藜芦醇醇原料药体外抗肿瘤效果好，两者之间存在显著性差异。实验例4HE染色观察细胞白藜卢醇纳米乳对细胞形态学影响将4 mLl X 105个/mL细胞悬液接种于含盖玻片的6孔培养板中，C02孵 箱中培养24h后，分别加入终浓度为8 mg/L Res原料药及Res纳米乳作用 细胞，36h后，取出长有细胞的盖玻片，用PBS洗3次，95%酒精固定；苏 木精、伊红着色后，梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树脂封片，光学显微 镜下观察。经HE染色后，空白对照组细胞核大、胞质丰富，能清楚的看见细胞核中 有3 5个核仁，可见正在分裂的细胞，细胞生长旺盛，见图4(箭头所标注的 为正在分裂的细胞)；经8mg/LRes纳米乳作用36h后，胞质浓縮，细胞核染 色加深，染色体凝集，明显可见新月型细胞核分布于细胞边缘，细胞处于凋 亡阶段，见图5 (箭头所标注的为凋亡的)；而白藜芦醇原料药组细胞凋亡特 征没有白藜芦醇纳米乳组明显，见图6 (箭头所标注的为凋亡的)。
权利要求
1、一种白藜芦醇纳米乳抗癌药物，其特征在于该药物的粒径在1～100nm之间，其原料及其质量百分比为白藜芦醇0.1％～2.0％，表面活性剂33.3％～42.9％，油3.3％～10.0％，余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％；所述的表面活性剂是非离子表面活性剂聚氧乙烯醚氢化蓖麻油、蓖麻油聚氧乙烯醚的任一种；所述的油是橄榄油、异辛脂、蓖麻油、肉豆蔻酸异丙酯、乙酸乙酯中的任一种。
2、 根据权利要求1所述的白藜芦醇纳米乳抗癌药物，其特征在于所 述的表面活性剂中还加入助表面活性剂乙醇，1， 3-丁二醇，丙二醇中任一种， 助表面活性剂占两者总和的0.1%~20。％。
全文摘要
本发明公开了一种白藜芦醇纳米乳抗癌药物，其特征在于该纳米乳抗癌药物的粒径在1～100nm之间，其原料及其质量百分比为白藜芦醇0.1％～2.0％，表面活性剂和助表面活性剂33.3％～42.9％，油3.3％～10.0％，余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。该纳米乳颗粒小、分布均匀、粘度小、流动性好。白藜芦醇制备成纳米乳剂型后，可明显增强其抗肿瘤效果，延长半衰期，减少给药次数；纳米乳能防止白藜芦醇被氧化，增加白藜芦醇的稳定性且制备方法简单、耗能低。
文档编号A61K9/107GK101214225SQ20071030651
公开日2008年7月9日 申请日期2007年12月29日 优先权日2007年12月29日
发明者杨宝平, 欧阳五庆 申请人:西北农林科技大学