(Rp)-8-取代的cAMPS的制备方法

专利名称：(Rp)-8-取代的cAMPS的制备方法
(Rp)-8-取代的cAMPS的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种(Rp) -8-取代的腺苷-3' ， 5'-环硫代磷酸或其衍生 物的制备方法。
天然产生的嘌呤环单磷酸、环腺苷单磷酸(cAMP)和环鸟苷单磷酸 (cGMP)是信使分子，在介导对激素的细胞功能的作用中是非常重要的。
有人提出，这些环核苷酸的类似物可用于治疗与降低或增强免疫 功能有关的疾病状态。 一种这样的类似物是环腺苷硫代单磷酸 (cAMPS)，或者更确切地说是3、 5'-环腺苷硫代单磷酸，其中从磷原 子连出的一个氧被硫取代。结果，磷成为手性中心，在Rp构型(在磷 原子上)时，cAMPS是cAMP的拮抗剂，而在Sp构型(在磷原子上)时， 它是cAMP的激动剂。
例如，在W098/48809中已经提出作为cAMP拮抗剂的(Rp)-cAMPS 作为HIV治疗的一部分的应用，在US-A-5843916中已经提出cAMPS 作为肿瘤生长抑制剂的应用。
本领域已知各种8-杂原子取代的(Rp)-cAMPS化合物，包括溴、氯 和碘化合物。同时已知的是8-取代的-0H衍生物；-SR衍生物，其中R 是甲基、乙基、异丙基、苯基或取代的苯基；-NHR衍生物，其中R是 己烷或环丙烷；和8-哌咬基cAMPS。
由特别是WO 2005/123755，制备8-取代的cAMPS的方法是已知的， 其描述了通过四种方法将8-二价碳基取代基引入cAMPS:在第一种方 法中，将8-卣代的3'，5'-环磷酰胺化物进行8-二价碳基化，然后在 保持手性磷构型的反应中用硫取代与砩连接的氮；在第二和第三种方 法中，将腺苷8-二价碳基化，然后引入环磷基；在第四种方法，将8-卣素-cAMPS进行8-二价碳基化。现在，我们惊奇地发现，通过选择特定的反应试剂和反应条件可
以显著减少或者甚至防止与本领域已知的制备8-取代的(Rp)-cAMPS 的方法有关的缺点，特别是在某些反应步骤中会发生例如氯与8位-溴的部分交换。下文所述的方法能够将磷酰胺化物中间体转化成它的 硫代磷酸类似物，同时在转化期间8-位没有显著不想要的其他取代， 由此制备出了基本上纯的产物，如果需要，该产物可以以可控的方式 在8-位上进一步取代。
因此，本发明的 一个方面提供了 一种制备(Rp) _8-取代的腺苷 -3'，5'-环硫代磷酸或其衍生物的方法，包括P-酰胺化8-溴腺苷 -3、5'-环磷酸，并将P-酰胺化物与碱和二硫化碳反应，以得到 (Rp)-8-溴腺普-3'， 5'-环硫代磷酸或者其盐或酯。优选P-酰胺化是通 过与任选取代的伯胺，例如芳基-、烷基-或芳烷基-胺、特别优选苄胺 反应而实现的。
将根据本发明的方法制备的或与本发明的制备方法有关的化合物 在酸形式与酯或盐衍生物形式之间转化是技术人员很容易理解的，在 该方法的任何阶段都是可以转化的。因此，当涉及磷酸或硫代磷酸时 也意欲包括其酯或盐衍生物。
可以通过本发明的方法产生的(Rp)-8-取代的-cAMPSs的例子包
括式I的化合物
(其中R表示F、 Br、 C1或I或R7，其中W表示
(1) d-「烷基，其可以是直链或支链的，或者Cw-环烷基，Ch-彿基或Ch-环烯基，其中上述任意基团可以具有插入的杂原子，即作 为氧杂衍生物的醚、或作为硫杂衍生物的硫醚(其中硫醚可以被氧化 成亚砜或砜)、或者作为氮杂衍生物的胺的一部分；
(2) Cw。-芳基或Cw。-杂芳基，其中芳基或杂芳基可以是在一个或多个碳原子或杂原子上被氧或氘还原，以得到部分还原的芳基或杂芳
基；或
(3) NHR2基，其中R2的定义如上述(l)和(2)中的R'所定义，但也 表示Cw-C0、 Cw-芳基-C0或CH-杂芳基-C0，其中芳基或杂芳基如上 述(2 )定义)
及其盐和酯。
在上式I中，任何杂芳基系统包括至少一个独立地选自氧、疏和 氮的杂原子。
上述定义的W基也可以独立地被一个或多个以下的基团所取代 囟素、羟基(包括烷基化、芳基化、杂芳基化或酰化的羟基衍生物和 它们的硫类似物)和/或如上述取代的氨基本身或者以酰胺或氨基曱酸 酯、其羧酸或酯或酰胺形式酰化的氨基，和/或在环或链上被氧代基取 代。
在本发明的一个实施方案中，在某些或所有的方法中通过保护基 保护(Rp) -8-取代的腺苷-3' ， 5'-环磷酸的-羟基。优选在P-酰胺化 之前通过保护基保护(Rp) -8-取代的腺苷-3' ， 5'-环磷酸的2'-羟基， 并随后与二硫化碳反应脱保护。优选保护基是甲硅烷基保护基，特别 优选叔丁基二甲基曱硅烷基(TBDMS)保护基。
在本发明的方法中使用的碱优选是强碱，尤其是N-金属化的胺， 其中金属是锂、镁、锌、钠、钾或铯。
特别优选由pKa值大于30，例如大于31，优选大于32,更优选 大于33,特别优选大于34,例如pKa值在30-35之间的仲胺产生的氨 基锂，例如由HNRW产生的氨基锂，其中Ri和R'可以相同或不同，选 自由任选取代的CH-烷基、Cw-环烷基、苯基和三(Cw-烷基)曱硅烷 基组成的组，或者其中N与W和R2—起形成任选取代的5-或6-元杂 芳单环基。作为强碱，特别优选金属氢化物(例如氢化锂、氢化钠或氢 化钾，特别优选氢化钠)，二甲胺、二乙胺、吡咯、二苯胺、二仲丁胺、二异丙胺、二环己胺、N-异丙基-N-环己胺、二-三甲基硅烷胺、2， 2， 6， 6-四甲基哌啶、N -异丙基-N-三甲基硅烷胺、N-新戊基-N-三甲基 硅烷胺和N-叔丁基-N-三曱基硅烷胺。
也可以使用由具有类似的pKa值的胺产生的其他N-金属化胺。因 此，也特别优选由上述仲胺产生的氨基镁的碱类。这些物质可以作为 单胺盐(例如溴(二异丙基氨基)镁)或作为二胺(例如二 (二异丙胺)镁) 或优选作为CH-烷基氨基镁类(例如二异丙胺丁基镁)使用。
也特别优选R^NMgCl.LiCl型的混合氨基锂/氨基镁，其中R'和 W如前述定义。特别优选的例子是上式的混合氨化物类，其中r和R2 是异丙基或者N， W和W—起形成2， 2， 6， 6-四甲基哌啶盐。
同时特别优选的是上述仲胺产生的氨基锌的碱类。锌酸锂(二叔丁 基-2， 2， 6， 6-四甲基哌啶基)是一个特别优选的例子。
同时特别优选的是所谓的"超级碱"，由有机锂衍生物和更重的 碱金属醇盐形成的复合碱，例如正丁基锂-叔丁醇钾。
本发明可以使用的强碱的其他例子包括叔丁醇钾或钠和立体位阻 的Cw-烷基锂衍生物，例如叔-或仲-丁基锂，在一些情况中可以使用 正丁基锂。作为金属也优选镁，例如卣化烷基镁的形式，优选氯化异 丙基镁。
优选在与所选择的碱相容的合适的溶剂中，用上述定义的强的、 非亲核性碱来进行磷酰胺化物中间体的去质子化，所述溶剂是例如二 曱基曱酰胺、二氯曱烷或醚型的溶剂例如四氢呋喃，所述去质子化是
在-ioox:到ioox:，例如在-80。c到室温，优选-78t:到o"c，更特别地
在-50X:到-l(TC的温度下进行的，时长为1分钟到3小时，优选10 分钟到2小时，特别优选30到90分钟。
然后可以在8-位取代由上述方法制备的(Rp)-8-溴腺普-3、5'-环硫代磷酸或者其盐或酯。在一个优选的实施方案中，前述的本发明 的方法还包含用可替代的取代基取代8-位的溴的步骤。该可替代的取 代基可以是例如硫醇、醇或酚或者伯或仲胺。可以用本领域已知的方 法，例如亲核取代来引入该可替代的取代基。在通过例如与保护基相连来保护硫原子而掩蔽硫代磷酸的官能性
后，可以方便地进行溴的杂原子亲核取代。S-保护基优选是烷基、特
别优选对硝基节基，其可以通过例如用爷基溴烷基化来引入。在已经
发生取代后，优选除去s-保护基。在保护基是对硝基节基的情况中，
可以在疏醇例如对曱硫酚存在下，在温和条件下，用稀的氢氧化钠或
更优选用1， 8-二氮杂双环[5. 4. 0]十一碳-7-烯(DBU)或其同源物来进 行脱保护。
可以将通过上述方法制备的8-取代的(Rp)-cAMPS配制成药物组 合物。因此本发明的另一个实施方案包括制备(Rp)-8-取代的腺苷 -3'，5'-环硫代磷酸或者其盐或酯的方法，还包括通过与一种或多种药 学上可接受的载体或赋形剂混合，将(Rp)-8-取代的腺苷-3、5'-环硫 代磷酸或者其盐或酯配制成药物组合物的步骤。优选(Rp)-8-取代的腺 苷-3' ， 5'-环硫代磷酸的盐或酯是其生理学上可耐受的盐或酯。
因此，根据另一个方面，本发明提供一种药物组合物，其包含由 本发明的方法制备的生理学上可耐受的8-取代的(Rp)- cAMPS或其衍 生物与药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明的组合物可以釆取任何适当的给药方式，例如片剂、胶嚢、 粉末、糖浆、喷雾剂、溶液、分散剂、栓剂等。将活性剂与一种或多 种药学上可接受的载体或赋形剂例如，溶剂(例如注射用水)、稀释剂、 稳定剂、粘度改进剂、pH调节剂、香料、芳香剂、抗氧化剂等混合， 可以以常规方式制备该組合物。
如果该化合物具有适当的碱性基团例如氨基官能团或与无机或有 机酸或碱的盐，在根据本发明制备的或在本发明的方法中使用的化合 物的术语"盐"是指内盐。优选的是与生理学上可耐受的无机酸例如 氢溴酸、磷酸、硝酸、盐酸、硫酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对曱 苯磺酸或者有机酸例如苹果酸、琥珀酸、乙酸、富马酸、马来酸、扁 桃酸、乳酸、酒石酸和柠檬酸的盐。同时，优选与生理学上可耐受的 碱例如碱金属或碱土金属的氢氧化物例如氢氧化钠或氢氧化钾、或碳 酸盐、氨、氢氧化锌或氢氧化铵、或者有机胺例如特别优选是二乙胺、流程图A NH, NH2 WTBOMS"O.味唑 NH2
丄 (l>Br2.NaOAC 人 N ,、、
三乙胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、环己胺和二环己胺的盐
现在将通过下面非限制性的实施例来进一 步阐述本发明
实施例1
起始原料的制备(流程图A):
60°C，20h
、，N n2w, " ，、 n (招)力-，i 'in
</ 1| "J* (ii)NaHSOjH Br~~^』J .{W NBu,, Br~^ J[ J
0|!| OH T8DMSO
起始原料是商业可购得的cAMP。如先前的WO 2005/123755所述， 大规模地进行溴化，提供8-溴衍生物。随后通过大体积的曱硅烷基来 保护核糖的2'-0H基，以提供中间体甲硅烷氧基衍生物。此外，甲硅 烷基会影响相对溶解度。使用各种氯化甲硅烷来进行甲硅烷基化，其 最好在低温下进行以避免氯离子取代溴取代基的卣素交换(氯离子来 自氯化甲硅烷试剂)。反应期间的低温和反应前反应介质的中和避免了 卤素交换。作为一种替代方案，可以使用各种三氟甲磺酸甲硅烷酯来 避免卤素交换。
实施例2
(Rp) -8-溴腺苷-3' ， 5'-环硫代磷酸的制备(流程图B):
8流程图B
《COC化DMF
0°C.2h
NH2
I，
」
R=Ar
R=Alk, AlkAr
THF -78 °C, 10 min
NH2
0.1 M NaOH
MeOH.rt Br ^ O
NHBUa O一
々N
NH4F
N
(Rp)抑％
HO 50%
T8DMSO
底物是来自流程图A(实施例l)的曱硅烷基-保护的溴。通过在低 温下用草酰氯和DMF在二氯甲烷和THF中进行磷酸的初始激活来进行 酰胺化。随后用胺处理提供了酰胺化物。仅分离出(Sp)-异构体。使用 芳胺例如苯胺或者烷基胺例如千胺来进行酰胺化。胺的选择取决于8-取代基的反应性。使用强碱来提取酰胺化物中的氨基氢。随后用二硫 化碳处理该金属氨化物，以形成加合物。随后的重排导致产生了硫代
可以通过氟化物离子，例如使用在DMF中的氟化铵(室温下3到5 天)或使用氟化铯(室温下数小时)，可以去除甲硅烷基保护。
可以将疏代磷酸纯化成铵盐，优选三丁基铵盐，如果需要，只需 通过加入金属氢氧化物例如氢氧化钠就可以将其转化成碱金属盐。
当使用苯胺用于酰胺化时，收率在40-60°/。的范围内；用千胺的话， 收率则在60-80%的范围内。叔丁醇钾是用于苯胺巯基化的碱，而对于 千基的酰胺化，则使用氨基锂的碱，通常是LDA。
实施例3-8-溴腺苷-3'，5'-环硫代磷酸的8-取代(流程图C):将立体化学纯的8-溴-或8-氯-cAMPS用作底物，以将杂原子取代 基引入硫代磷酸衍生物的8-位。大体而言，几个族的衍生物可以从一 种面素底物来获得，其中所述底物是通过相应酰胺化物立体选择性产 生的。由于硫代磷酸部分中的硫的反应性，在硫代磷酸阶段中，噪呤 环的8-位的溴的杂原子的亲核和位置选择性取代可以是一种攻击。在 多数情况下，正如流程图C所示，预先的S-保护是有利和必要的。此 时，甲硅烷基保护基一直保留至最后一步。如果在较早的步骤中除去 甲硅烷基以使它在用于根据流程图D的最后阶段时是无羟基的化合 物，那么可以改善总稳定度
流程图c<formula>formula see original document page 10</formula>实施例4
8-溴腺苷-3'，5'-环磷酸
在室温和搅拌下，在1小时中将溴(15. 4ml， 0. 30mol)加入到 cAMP(98. 8g， 0. 30mol)和三水合醋酸钠(81. 6g， 0. 60mol)的水(1. 5L) 溶液中。24小时后，緩慢加入亚硫酸钠直至暗红色消失。过滤收集沉 淀，在减压干燥前，用水、2-丙醇和乙醚洗涤该固体。将该产物分散 在水(500ml)中，并緩慢加入碳酸氢钠(l当量)使其溶解。当所有物质 均溶解时，加入少部分的亚硫酸钠以除去溶液的暗红色。通过在强烈 搅拌下滴加1. OM氢溴酸使产物沉淀。收集沉淀，用水、2-丙醇和乙醚 洗涤，高真空下干燥该淡黄色粉末。
收率92. Og (76%)。
^ NMR与文献一致。
实施例5
2' _0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-8-溴腺苷-3' ， 5'-环磷酸三丁基
铵盐
(a)使用TBDMS-C1
在室温下，将TBDMS-C1 (2. 72g， 18mmo1)加入到8-Br-cAMP三丁 基铵盐(实施例4)(7. 0g， 11.8mmo1)和咪唑(2. 45g， 36mmo1)的 DMF(30ml)溶液中。在氩气下将混合物在60。C下搅拌20小时。减压除 去溶剂，将残留物混悬于水(150ml)中，搅拌30分钟以使所有的甲硅 烷化的砩酸水解，向滤液中加入1M HBr(ca 12ml,直至pH 2-3)。滤 除沉淀，用水洗涤并真空干燥。将酸混悬在MeOH(80ml)中，加入 Bu3N(5ml)。室温下搅拌混合物，直至得到澄清溶液(30分钟)，滤除溶 剂，在P20s上真空干燥残留产物，然后将其用于随后的反应。
白色固体的收率为6. 60g(78%)。
HRMS(电喷射):测得的阴离子M 520. 0427。
Calc. 520.0422。
NMR(DMSO-d" 300MHz): 5 0. 01 (3H， s， Si-CH3) ， 0.03(3H， s， Si-CH3)， Q.83(9H， s， Si十Bu) ， 0. 87(9H， t) ， 1.28(6H， m,)，
ii1'53(6H， m， )， 2.79(6H， m， )， 3.90(2H， m， )， 4.11(1H, m )， 5.02(2H， m， )， 7.53(2H， s，冊2) ， 8. 15(1H， s， H-2)。
13C腿(DMS0-d6， 75MHz): 5-5.3, -4,7， 13.6， 18.0， 19.6， 25.6, 25.7, 51.9， 65.4， 72.3， 72.4, 76.2， 94.3， 119.2， 126.5， 150. 0， 153. 2， 155. 0。
31P-NMR(CDC13， 8擺z): 5-1.36。
(b)使用TBDMS-三氟曱磺酸酯
在室温下，将TBDMS-三氟甲磺酸酯(4. 75g， 4. 13ml， 18nnnol)加 入到8-Br-cAMP三丁基铵盐的(实施例4) (5. 3g， 8. 9mmol)和咪唑 (1.72g, 27mmol)的CH2Cl2(40ml)混悬液中。将该混合物在氩气下搅拌 20小时。除去溶剂，将残留物混悬于水(120ml)中，搅拌30分钟以使 所有的甲硅烷化的磷酸水解，向滤液中加入lMHBr (ca 10ml，直至pH 2-3)。滤除沉淀，用水洗涤并真空干燥。将酸混悬在MeOH(60ml)中， 加入Bia(4ml)。室温下搅拌混合物，直至得到澄清溶液(30分钟)， 滤除溶剂，在^05上真空干燥残留产物，然后将其用于随后的反应。
具有如上物理数据的白色固体的收率为4. 93g (78%)。
实施例6
(Sp) -8-溴腺苷-2' -0-(叔丁基二曱基甲硅烷基)-3' ，-环N-苄 基磷酰胺化物
将在干燥CH2Cl2(40ml)中的干燥DMF(O. 385ml, 5. OOmmol)置于氩 气气氛下，冷却至OX:,然后緩慢加入草酰氯(3ml， 2M，在CH2Cl2中， 6. Ommol)。移除冷却浴，将该混悬液在室温下搅拌30分钟，将反应混 合物冷却至-65t:，通过特氟隆管加入三丁基铵8-溴腺苷 -2'-0-TBDMS-3'，5'-环单磷酸盐(实施例5) (4. 750g， 6. 7mmol)的干燥 CH2Cl2(3ml)溶液。在该温度下搅拌该混合物1小时，然后緩慢加入干 燥(Caiy节胺a 84ml， 26. 8mmo1)。 1小时后移除冷却浴，将反应混 合物在室温下搅拌2小时，用CH2C12将浑浊的反应混合物稀释至 120ml，用冷的饱和碳酸氢钠(2x50ml)振荡。用MgS04干燥有机相， 减压除去溶剂，将残留物用于快速硅胶色谱，使用4y。甲醇的CH2Cl2溶液洗脱。
白色固体的收率是2. 0g (49%)。 T0F MS ES+: 611. 1/613. 1;
31P(CDC13， 121MHz): 5 8.29; ^NMR(CDCh， 200MHz): 5 0.03 至O. (H(6H， 2s， 2xS卜Me), 0.84(9H， s， Si-tBu) ， 3. 61-3. 68 (1H， m) ， 4. 13-4. 21 (3H， m， ) ， 4. 35-4. 56 (2H， m) ， 5. 0 (1H, d， J 5. 1 Hz，)， 5. 62-5. 70 (1H， m， ) ， 5. 85(2H， bs， NH2) ， 5. 91 (1H， s， ) ， 7. 25—7. 33 (5H， m， )， 8. 21(1H, s， H-2)。
实施例7
(Rp) -8-溴腺苷-2' -0-(叔丁基二甲基曱硅烷基)-3' ， 5'-环硫代磷
鹽
在-78。C下，将1.8M LDA的THF/庚烷/乙醚(2ml， 3.6mmol)溶液 加入到(Sp) -8-溴腺苷-2' -O-(叔丁基二曱基甲硅烷基)-3' ， -环N-节基磷酰胺化物(实施例6)(2.0g， 3. 27mmol)的干燥THF(30ml)溶液 中。将该混合物在该温度下搅拌20分钟，然后加入CS2(0. 6ml， 9. 81mmo1)。 10分钟后移除冷却浴。将反应混合物在该温度下搅拌3 小时，然后在旋转蒸发器上除去部分溶剂。随后加入己烷，直至完全 沉淀。将沉淀溶于水(50ml),在Q1C下加入lMHBr(3. 3ml)。过滤收集 (Rp) -8-溴腺普-3' ， 5'-环硫代磷酸，高真空下干燥过夜。
实施例8
(Rp) -8-溴腺苷-3', 5'-环硫代磷酸三丁基铵盐
在室温下，将干燥的硫代酸产物(实施例7) (1.70g， 3. 16mmol)的 DMF(15ml)溶液与N仏F(O. 750g)—起搅拌5天。过滤反应混合物，向该 澄清溶液中加入NBu3(1. llg， 6薩o1)，减压除去溶剂。用己烷洗涤残 留物以除去过量的NBii3，将残留物用于快速硅胶色镨，用CH2C12:CH30H: NBu3(100: 10: 1)洗脱。通过溶解于CH2C12、用己烷沉淀并过滤分 离，从而进一步纯化包含一些NBii3的该铵盐，。
白色固体的收率是1. 105g(实施例5的底物的50%)。
T0F MS ES画421. 9/423. 9;31P(CDC13， 121MHz): 5 57.28;
^NMR(CDCl3， 200MHz) : 5 0. 85-0. 97 (9H, m， ) ， 1. 23-1. 44 (6H， m， )， 1. 67-1. 76 (6H， m, )， 2. 97-3. 05 (6H， m, )， 4. 30-4. 42 (3H， m， )， 5. 05(3H， d， J 5 Hz， 1H) ， 5. 27-5. 45 (1H， m) ， 5.91(1H， bs， NH2), 5. 98(1H, s, )， 8. 18(1H， s， H-2)。
实施例9
(Rp) -8-溴腺苷-3' ， -环硫代磷酸钠盐
将(Rp)-8-溴腺苷-3'，5'-环硫代磷酸三丁基铵盐(实施例 8) (1. Og, 1. 64mmol)溶解于0. 1MNaOH的MeOH(17ml)溶液中。通过加 入乙醚来沉淀该钠盐并过滤收集。
白色固体的收率是0. 650g (89%)。
MS ES_: 421.9/423. 9;
"P(MeOD， 121MHz): 5 57.96;
!H NMR(MeOD， 200MHz): 5 4. 19-4. 35 (3H， m， )， 5. 02 (1H， d， J 5.4 Hz)， 5. 38-5.46 (1H, m), 5. 94 (1H, s), 8. 18(1H， s， H-2)。 实施例10
(Sp)-8-氯腺苷-2'-0-(叔丁基二曱基曱硅烷基)-3、5'-环N-爷基磷酰胺化物
将在干燥CH2Cl2(50ml)中的干燥DMF (0. 32ml， 4. 24mmol)置于氩 气气氛下，冷却至(TC，然后緩慢加入草酰氯(14. 2ml， 2M，在CH2C12 中，28.25mmol)。移除冷却浴，将该混悬液在室温下搅拌30分钟，将 反应混合物冷却至0'C,通过特氟隆管加入三丁基铵8-溴腺苷 -2' -0-TBDMS-3' ， -环单磷酸盐(4. 0g， 5. 65mmol)的干燥CH2C12 (10ml) 溶液。将该混合物在该温度下搅拌1小时，使其达到室温，在室温下 除去溶剂。将固体物质溶解于CH2Cl2(30ml)中，并在0。C和氩气下加入 干燥(Caiy节胺(3. 7ml， 33.9mmo1)。 10分钟后移除冷却浴，将反应 混合物在室温下搅拌2小时。将浑浊的反应混合物过滤，用CH2Cl2将 滤液稀释至80ml，用冷的饱和碳酸氢钠(2x25ml)洗涤。用MgS04干燥 有机相，减压除去溶剂，将残留物用于快速硅胶色镨，使用4%甲醇的CH2Ch溶液洗脱。
白色固体的收率是2. 2g(68%)。 T0F MS ES+: 567. 1/669. 1; 31P(CDC13， 121MHz): 5 8.29;
H NMR(CDC1" 200MHz): 5 0. 03至0. 04 (2s， 6H 2 x Si-Me)，
0. 84(s， 9H， Si-t-Bu)， 3. 61—3. 68(m, 1H) ， 4. 13-4.21(m, 3H)， 4. 35-4. 56 (m， 2H) ， 5. O(d， J 5. 1 Hz， 1H) ， 5. 62-5. 70 (m, 1H) , 5. 85(bs， 2H，冊2)， 5. 91(s， 1H)， 7. 25-7. 33 (m， 5H) ， 8. 23(s， 1H， H-2);
"CNMR(CDC1" 7週z): -5.1， -4.7， 18.1， 25.5， 45.3， 68.2， 71.3， 73.0, 76.3， 93.5， 118.3， 127.1， 127.5， 128.5， 137.4， 138. 7， 150. 0， 153. 5, 154. 6。
实施例11
(Rp) -8-氯腺苷-3/ ， -环硫代磷酸三丁基铵盐
在-78X:下，将LDA的THF/庚烷/乙苯(0. 17ml, 0.30mmol)溶液
1. 8M加入到(Sp)-8-氯腺苷-2'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-3'， 5'-环-N-节基磷酰胺化物(实施例 10) (0. 160g,0. 28mmol)的干燥THF(5ml) 溶液中。将该混合物在该温度下搅拌20分钟，然后加入CS2 (0. 05ml ，
0. 85mmol) ， 10分钟后移除冷却浴。将反应混合物在室温下搅拌3小 时，然后在旋转蒸发器上除去部分溶剂。随后加入己烷，直至完全沉 淀。将沉淀溶于水(10ml)，在Q。C下加入1M HBr(O. 35ml， pH 2-3)。 过滤收集得到的(Rp)-8-氯腺苷-3'， 5'-环硫代磷酸并干燥过夜。
在室温下，将千燥的硫代酸产物(O. 10g， 0. 2mmol)的DMF(3ml)溶 液与NH4F(0. 050g)—起搅拌5天(5d)。过滤反应混合物，向澄清溶 液中加入NBu3 (0. 090g, 0. 5mmo1),减压除去溶剂。用己烷洗涤残留物 以除去过量的NBu3,将残留物用于快速硅胶色镨，用CH2C12: CH30H: NBu3(100: 10: 1)洗脱。进一步纯化包含一些NBu3的该铵盐，包括 溶解于CH2Cl2，加入己烷再沉淀。
白色固体的收率是0. 070g(硫代酸的ca 50%)。
TOF MS ES+: 378. 1/380. 1;力腿(CDC1" 200MHz): 5 0. 90-0. 98 (m， 9H) ， 1.28-1. 44 (m， 6H)， 1.68-1. 76 (m， 6H) ， 2. 97-3. 07 (m， 6H) ， 4. 25-4.42 (m， 3H)， 5.03(d, J 5.2 Hz， 1H) ， 5. 28-5. 48 (m, 1H) ， 5. 81(bs， 2H， NH2)， 5. 99(s， 1H)， 8. 19(s， 1H, H-2)。
"CNMR(CDC1" 75MHz): 13.6， 20.1， 25.2， 51.9, 67.1, 71.7， 71.8， 76.2， 91.6， 118.5， 138.5， 150.3， 152.9， 154.1。
实施例12
(Rp) -8-氯腺苷-3' ， 5'-环硫代磷酸钠盐
将(Rp)-8-氯腺苷-3"5'-环硫代磷酸三丁基铵盐(实施例 11) (0. 050g， 0. 073mmol)溶解于0. 1M NaOH (0. 8ml)的MeOH溶液中。 加入乙醚;冗淀该钠盐。
白色固体的收率是O. 030g(85%)。
TOF MS ES—: 378.1/380.1;
'HNMR(MeOH—d4， 200MHz): 5 4. 25-4.45 (m, 3H) ， 5. 02(d, J 5. 2 Hz, IH)， 5. 28-5. 45 (m， 1H) ， 6. 02(s， 1H) ， 8. 2(s, 1H， H-2)。
13C NMR(MeOH-d4， 75MHz): 59. 1， 63. 6， 64. 25, 68. 3, 84. 5, 110. 2， 129. 8， 142. 4, 145. 3， 147. 3。
权利要求
1.(Rp)-8-取代的腺苷-3′，5′-环硫代磷酸或者其盐或酯的制备方法，包括P-酰胺化8-溴腺苷-3′，5′-环磷酸，并将P-酰胺化物与碱和二硫化碳反应，以得到(Rp)-8-溴腺苷-3′，5′-环硫代磷酸或者其盐或酯。
2. 权利要求1所要求保护的方法，其中通过与千胺反应来进行 P-酰胺化。
3. 权利要求1或2所要求保护的方法，其中(Rp)-8-取代的腺苷 -3', 5'-环磷酸的2'-羟基是在P-酰胺化前通过保护基保护的，并随后 与二硫化碳反应脱保护。
4. 权利要求3所要求保护的方法，其中该保护基是甲硅烷基保护基。
5. 权利要求1~4任一项所要求保护的方法，其中该碱是金属氨 化物。
6. 权利要求5所要求保护的方法，其中该碱是由pKa值大于30 的仲胺得到的。
7. 权利要求6所要求保护的方法，其中该碱是二异丙基氨基锂。
8. 权利要求1~7任一项所述的方法，还包括用可替代的取代基 替代8-位的溴的步骤。
9. 权利要求1~8任一项所述的方法，还包括通过与一种或多种 药学上可接受的载体或赋形剂混合，将(Rp)-8-取代的腺苷-3"5'-环 硫代磷酸或者其盐或酯配制成药物组合物的步骤。
10. —种药物组合物，包含由权利要求1 ~ 8任一项所述的方法制 备的生理学上可耐受的(Rp)-8-取代的腺苷-3'，5'-环硫代磷酸或者其 盐或酯与药学上可接受的栽体或赋形剂。
全文摘要
本发明涉及一种制备(Rp)-8-取代的腺苷-3′，5′-环硫代磷酸或者其盐或酯的方法，其包括P-酰胺化8-溴腺苷-3′，5′-环磷酸，并将P-酰胺化物与碱和二硫化碳反应，以得到(Rp)-8-溴腺苷-3′，5′-环硫代磷酸或者其盐或酯。
文档编号A61K31/7042GK101589055SQ200780034177
公开日2009年11月25日 申请日期2007年9月17日 优先权日2006年9月15日
发明者K·温海姆, M·安德雷 申请人:劳拉斯有限公司