专利名称：：一种环孢菌素a眼用乳剂制剂及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及药品及其制备领域，尤其是一种环孢菌素A的眼用乳剂制剂和复合乳剂制剂及其制备方法。
背景技术：
：环孢菌素A是一种具有免疫抑制活性的非极性环状低聚肽，主要用于自身免疫性疾病和器官抑制的抗排异治疗。环孢素可以选择性抑制免疫活性细胞，尤其是T淋巴细胞。具有抑制淋巴因子、Y—干扰素的产生、白介素一2、T细胞生长因子的释放的作用；如美国专利US4，839，342所述；环孢菌素在治疗患有免疫调节性原因的干性角膜结膜炎(KCS或干眼病)患者的这一病症有效。环孢素A是环孢素一组环状地聚肽类的主要成分，一般说来市售的环孢菌素可能含有多个环孢素的混合成分，他们全部具有l1个氨基酸残基组成的环状肽结构，总分子量l200;应该说明环孢素一词，用以指明本发明组合物种的环孢素组分，但是这个特定的称呼是用来包括环孢素组的各个成员以及多个环孢素的混合物的总称。总之，环孢素的活性是作为免疫抑制剂在临床试用，并有增强或者恢复泪腺功能作用。环孢素A作为一种局部免疫调节剂应用于眼部，抑制泪腺内T淋巴细胞的活性，从而增强或恢复泪腺功能(PCT专利申请WO8901772)。另外，将环孢菌素A制成眼用制剂，可避免其全身给药后引起的毒副作用。遗憾的是环孢素在水中溶解度极低，几乎不溶于水。至今，市售的环孢菌素A制剂多为含乙醇的油溶性制剂，而且多为口服制剂；为了提高环孢菌素A在水中的溶解度，注射制剂中需添加表面活性剂(聚氧乙烯蓖麻油)增溶，静脉注射给药时容易引起安全性问题；如果以注射用水稀释，导致药物析出，不适合作静脉注射用途。此外，油溶液中环孢菌素A容易发生构型变化，在油质制剂中常呈现物理不稳定性，如结晶析出(美国专利USP5474979)，从而严重影响其制剂质量的稳定及其疗效。环孢素A油制剂不适合临床直接应用于眼部疾病的治疗，将环孢菌素A的含油制剂直接滴入眼部，会对眼部产生刺激作用并引起眼视觉模糊和粘稠不适感，还会加重某些眼表面疾病，例如干眼病。此外，眼制剂内添加过多表面活性剂也被认为是不合适的，例如聚氧乙烯蓖麻油(聚氧乙烯蓖麻油由环氧乙垸和蓖麻油反应制得)不适于眼用用途。另外，中药菊花其性味甘、苦、微寒，入肺、肝经，能疏风除热、清肝明目、解毒；金银花则具有抑菌、抗病毒、解热、抗炎、止血、抗氧化、免疫调节等作用。菊花和金银花有效成份的提取方法已经成熟。目前，国外报道的用于眼部给药的环孢菌素A制剂主要为水溶性乳剂(US243279),已有商品上市，ALLEGAN公司开发成功，该普通乳剂解决了长期放置药物稳定性问题，进行了工业化生产，通过了各期临床试验；该专利使用蓖麻油为油相溶剂，Tween80(即聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯)为增溶剂乳化剂，基本解决了眼部舒适度和剌激性药物组合的问题。证明了乳液作为眼用溶液剂性的可行性。申请号为20510024644.5的中国专利"一种环孢菌素A眼用乳剂剂及其制备方法"公开了一种由环孢素A、油相、乳化剂、增粘剂、甘油、抑菌剂、氢氧化钠、纯化水配制，经剪切-高压均质工艺制备而成的环孢菌素A眼用乳剂剂。该制备方法是剪切-高压均质工艺，工艺要求比较高，无附加效果。
发明内容为了解决现有技术中的不足，本发明的目的是提供一种新的环孢菌素A眼用乳剂制剂及其制备方法，包括增加效果，提高应用的舒适性等。本发明的技术方案是环孢菌素A眼用乳剂制剂，以100ml乳剂制剂中的含量计，其组分为环孢素A:0.05~0.5%;纤维素增稠剂(羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素等):0.3~2%;菊花或/与金银花提取液0.3~6%;油相0.25~7.0%;增溶剂乳化剂0.1~5.0%;甘油1~4%;pH调节剂适量；余量是纯化水，以上比例是重量比。该纯化水可以是注射用水。可以同时添加菊花和金银花提取液添加达到0.3~6%，两种提取液可以大到等量或不等量。所述增溶剂乳化剂是Tween80，即聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯。油相是高级脂肪酸甘油酯。高级脂肪酸甘油酯与聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯的重量比为0.2~40。高级脂肪酸甘油酯是大豆油，芝麻油，棉籽油，橄榄油，花生油，核桃油，葵花籽油或玉米油。环孢素A与油相重量比为0.055.0。环孢素A与羟丙基甲基纤维素重量比为0.05-2.0。pH调节剂是氢氧化钠。所述的环孢菌素A眼用乳剂制剂的制备方法，采用超声剪切常压均质工艺制备，根据上述配比，其操作步骤为1)将纤维素增稠剂放入适量水中，加热至80-90°C，搅拌，分散后冷却至室温；3)将菊花或/与金银花的提取物加入到纤维素溶液中，混匀备用；4)将环孢菌素A溶解于油相中；5)与乳化剂和甘油混合均匀；6)在所得环孢菌素A混合液中缓慢加入步骤3)中所得混合液，超声剪切乳化，15分钟；7)用pH调节剂调节？11值至7.27.8;8)加入处方量的纯化水补至足量，得到制品。作为改进，步骤8)后还可以包括步骤所得产品用IO(TC流通蒸汽灭菌，时间15-45分钟，再充分超声剪切乳化1-5分钟；步骤8)后也可以是歩骤所得产品使用Co60灭菌，时间15-60分钟。一种环孢菌素A眼用乳剂制剂，特征是组分与上述环孢菌素A眼用乳剂制剂相同，乳滴平均粒径小于300nm。所述环孢菌素A眼用乳剂制剂的制备方法，是把经上述环孢菌素A眼用乳剂制剂的制备方法得到产品，再用0.45um灭菌微孔滤膜过滤后制得。乳滴平均粒径小于300nm，乳剂粒径均匀，形成稳定的乳液体系。16000rpm，20min离心无沉淀产生。室温放置12个月体系稳定，未观察到环孢素A结晶的析出。此外环孢素A乳液具有较高的热力学稳定性，可以反复加热，保持稳定状态。重要的是，本发明的组合物可以提高环孢素A在眼睛泪腺内的吸收。环孢素A在恢复泪腺功能活性方面作用得以保持和增强。本发明的有益效果下面通过实验来说明本发明环孢菌素A眼用乳剂制剂的眼用安全性和稳定性一、本发明环孢菌素A眼用乳剂制剂对家兔眼部的刺激性试验1、试验材料与条件试验药物按照实施例2所述的处方和方法制备的环孢菌素A眼用乳剂制剂，该乳液制剂的环孢素浓度为0.05%，每次给药量，每只实验眼每曰两次，每次50ul;对照组生理盐水。试验动物清洁级新西兰白兔4只，雌雄各半，体重2-3kg/只(购自东南大学动物实验中心)；动物词养环境恒温20-25摄氏度，家兔饲料来源未记录；室温20-250C;相对湿度(RH。/。30-70%);照明人工光线，12小时日光，12小时黑暗；实验动物设施合格证号SYXK(苏)2002-0012。2、试验方法-轻轻拉开家兔眼结膜囊，将50ul试验药物滴入右侧眼结膜囊内，左侧给予注射用水作为对照。给药后使眼睛被动闭合5秒(动作轻)，使药液与局部有充分接触。每曰给药2次，连续给药一周。记录给药后6、24、48、72、96、120、144、168小时内眼的损伤情况，以Draize眼部刺激试验评分表示(依据《新药(西药)临床前研究指导原则汇编(药理药理学毒理学)》眼刺激试验第208页)。观察时用荧光素钠检査角膜损害，用裂隙灯检査角膜透明度和虹膜纹理改变。3、试验结果各试验时间点家兔眼刺激分值见表1表i各试验时间点家兔眼剌激分值<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>结果综合值位于0-3.0之间，最终判断为无刺激性。根据Dmiz眼刺激性评价标准，0-3分为无刺激性，从表l可以看出，在各试验时间点的眼刺激分值均没有超过值，因此本发明环孢菌素A眼用乳剂制剂对家兔眼睛在各试验时间点均无刺激性。同时经裂隙灯和荧光素钠检査，角膜和虹膜均正常。由于该试验系统比人眼刺激反应敏感，因此刺激反应阴性可确定对人眼无刺激性。此外通过眼内药动学试验考察本发明环孢菌素A眼用乳剂制剂在兔眼组织中的分布结果，证实该眼部给药体系中的环孢菌素可以用于治疗干眼病。二、本发明环孢菌素A眼用乳剂制剂的稳定性试验(一)按照实施例1所述的处方和方法制备环孢菌素A眼用乳剂制剂，包装10ml安瓿，丁基橡胶胶塞，铝盖封口；温度400C士20C;时间6个月。定时抽样检查外观、药物含量、有关物质、pH值和乳滴粒径等指标。其试验结果见表3:表3含量领<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>澄明半透明黄绿色乳液，有乳光。从表3可以看出，在拟上市包装条件下，温度4(TC的加速试验条件下放置6个月，本发明环孢菌素A眼用乳剂液制剂的外观性状、药物含量、pH值及粒径等各项指标均未发生明显改变，质量稳定。本发明有益效果还包括-1、本发明环孢菌素A眼用乳剂制剂采用安全、无剌激性的非离子表面活性剂聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯(Tween80)为乳化剂，适合应用到眼部敏感部位，具有舒适度高、无刺激性的优点，体现了环孢素A的作用与菊花和金银花提取液的协同作用明显。且制剂内添加表面活性剂的量少。2、本发明采用普通剪切和超声剪切工艺制备得到的环孢菌素A眼用乳剂制剂乳滴平均粒径小于300nm，制备工艺简单，重复性良好；配料比例得当，可获得粒径均一范围在100nm粒径微粒；该体系具有相当好的热力学稳定性，可以反复灭菌；既适合于实验研究，又适合于大工业生产。3、经过其他药物实验表明该体系适合于作为难溶性药物的传递体及载体应用(紫杉醇、尼莫地平、曲尼斯特等)，从而解决上述药物的难溶性难题。图1:0.05%环孢素A眼用乳液粒径测试图图2:0.10%环孢素A眼用乳液粒径测试图图3:0.15M环孢素A眼用乳液粒径测试图图4:0.20%环孢素A眼用乳液粒径测试图图5:0.25%环孢素A眼用乳液粒径测试图具体实施方式以下实施例进一步说明本发明，其中所有的份数和百分数均指重量。实例中使用的环孢素A，为华北制药有限公司产品。纯化水采用注射用水。实施例1<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>制备方法按处方组成称取各组分，按照操作步骤为1)将菊花100g或金银花60g水蒸气蒸馏，收集馏出液1000ml，分离上部油状液后，将剩余液体浓縮至400ml，与油状液混合均匀，；2)将羟丙基甲基纤维素(HPMC)放入适量水中，加热至80-90°C，搅拌，分散后冷却至室温；3)将菊花、金银花浓縮液适量加入到HPMC溶液中，混匀备用；4)将环孢菌素A溶解于油相中；5)与乳化剂和甘油混合均匀；6)在所得环孢菌素A混合液中缓慢加入3)中所得混合液，超声剪切乳化，15分钟；7)用pH调节剂调节pH值至7,27.8;8)加入处方量的纯化水补至足量，再用0.45um灭菌微孔滤膜过滤后制得产品。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>制备方法按处方组成称取各组分，按照步骤l)将菊花50g、金银花20g水蒸气蒸馏，收集馏出液1000ml，分离上部油状液后，将剩余液体浓縮至400ml，与油状液混合均匀，；2)将羟丙基甲基纤维素(HPMC)放入适量水中，加热至80-90°C，搅拌，分散后冷却至室温；3)将菊花、金银花浓縮液适量加入到HPMC溶液中，混匀备用；4)将环孢菌素A溶解于油相中；5)与乳化剂和甘油混合均匀；6)在所得环孢菌素A混合液中缓慢加入3)中所得混合液，超声剪切乳化，15分钟；7)用pH调节剂调节？11值至7.27.8;8)加入处方量的纯化水补至足量，再用0.45um灭菌微孔滤膜过滤后制得产品。实施例3<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>PH7.2-7.87.2-7.87.2-7.87.2-7.8制备方法按处方组成称取各组分，按照步骤l)将菊花50g、金银花20g水蒸气蒸馏，收集馏出液1000ml，分离上部油状液后，将剩余液体浓縮至400ml，与油状液混合均匀，；2)将羟丙基甲基纤维素(HPMC)放入适量水中，加热至80-90°C，搅拌，分散后冷却至室温；3)将菊花、金银花浓縮液适量加入到HPMC溶液中，混匀备用；4)将环孢菌素A溶解于油相中；5)与乳化剂和甘油混合均匀；6)在所得环孢菌素A混合液中缓慢加入3)中所得混合液，超声剪切乳化，15分钟；7)用pH调节剂调节pH值至7.27.8;8)加入处方量的纯化水补至足量，再用0.45um灭菌微孔滤膜过滤后制得产品。实施例4<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>制备方法按处方组成称取各组分，按照步骤l)将菊花50g、金银花20g水蒸气蒸馏，收集馏出液1000ml，分离上部油状液后，将剩余液体浓缩至400ml，与油状液混合均匀，；2)将羟丙基甲基纤维素(HPMC)放入适量水中，加热至80-90°C，搅拌，分散后冷却至室温；3)将菊花、金银花浓縮液适量加入到HPMC溶液中，混匀备用；4)将环孢菌素A溶解于油相中；5)与乳化剂和甘油混合均匀；6)在所得环孢菌素A混合液中缓慢加入3)中所得混合液，超声剪切乳化，15分钟；7)用pH调节剂调节pH值至7.27.8;8)加入处方量的纯化水补至足量，再用0.45um灭菌微孔滤膜过滤后制得产品。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>pH7.2-7.87.2-7.87.2-7.87.2-7.8制备方法按处方组成称取各组分，按照步骤l)将菊花50g、金银花20g水蒸气蒸馏，收集馏出液1000ml，分离上部油状液后，将剩余液体浓缩至400ml，与油状液混合均匀，；2)将羟丙基甲基纤维素(HPMC)放入适量水中，加热至80-90°C，搅拌，分散后冷却至室温；3)将菊花、金银花浓縮液适量加入到HPMC溶液中，混匀备用；4)将环孢菌素A溶解于油相中；5)与乳化剂和甘油混合均匀；6)在所得环孢菌素A混合液中缓慢加入3)中所得混合液，超声剪切乳化，15分钟；7)用pH调节剂调节pH值至7.27.8;8)加入处方量的纯化水补至足量，再用0.45um灭菌微孔滤膜过滤后制得产品。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>制备方法按处方组成称取各组分，按照步骤l)将菊花50g、金银花20g水蒸气蒸馏，收集馏出液1000ml，分离上部油状液后，将剩余液体浓缩至400ml，与油状液混合均匀，；2)将羟丙基甲基纤维素(HPMC)放入适量水中(纤维素增稠剂还可用羟甲基纤维素等)，加热至80-90'C，搅拌，分散后冷却至室温；3)将菊花、金银花浓縮液适量加入到HPMC溶液中，混匀备用；4)将环孢菌素A溶解于油相中；5)与乳化剂和甘油混合均匀；6)在所得环孢菌素A混合液中缓慢加入3)中所得混合液，超声剪切乳化，15分钟；7)用？11调节剂调节？11值至7.27.8;8)加入处方量的纯化水补至足量，再用0.45um灭菌微孔滤膜过滤后制得产品。如图1一图6所示，环孢素A眼用乳液粒径测试结果。测试仪器型号为MalvernNanoZS90;90度角，激光波长532nm;介质水；折光系数1.33;粘度0.8872。权利要求1、一种环孢菌素A眼用乳剂制剂，其特征是组分及含量重量比为环孢素A0.05～0.5％；纤维素增稠剂0.3～2％；菊花或/与金银花的提取物0.3～6％；油相0.25～7.0％；增溶剂乳化剂0.1～5.0％；甘油1～4％；pH调节剂适量；余量是纯化水。2、根据权利要求1所述环孢菌素A眼用乳剂制剂，其特征是增溶剂乳化剂是聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯。3、根据权利要求1所述环孢菌素A眼用乳剂制剂，其特征是油相是高级脂肪酸甘油酯，高级脂肪是大豆油，芝麻油，棉籽油，橄榄油，花生油，核桃油，葵花籽油或玉米油。4、根据权利要求1所述环孢菌素A眼用乳剂制剂，其特征是环孢素A与油相重量比为0.05-5.0。5、根据权利要求1所述环孢菌素A眼用乳剂制剂，其特征是环孢素A与纤维素增稠剂的重量比为0.05-2.0。6、根据权利要求1所述环孢菌素A眼用乳剂制剂，其特征是pH调节剂是氢氧化钠或碳酸钠。7、环孢菌素A用于眼用乳剂制剂的制备方法，其特征是以下述配比环孢素A:0.050.5%;纤维素增稠剂0.3~2%;菊花或/与金银花的提取物0.3~6%;油相0.257线增溶剂乳化剂0.15线甘油14%;pH调节剂适量；采用超声剪切常压均质工艺制备，其操作步骤为l)将纤维素增稠剂放入适量水中，加热至80-90°C，搅拌，分散后冷却至室温；3)将菊花或/与金银花的提取物加入到纤维素溶液中，混匀备用；4)将环孢菌素A溶解于油相中；5)与乳化剂和甘油混合均匀；6)在所得环孢菌素A混合液中缓慢加入步骤3)中所得混合液，超声剪切乳化，15分钟；7)用？11调节剂调节？11值至7.27.8;8)加入处方量的纯化水补至足量，得到制品。8、根据权利要求7所述的环孢菌素A用于眼用乳剂制剂的制备方法，其特征是所得制品用IO(TC流通蒸汽灭菌，时间1545分钟，再充分超声剪切乳化15分钟；乳滴平均粒径小于300nm。9、根据权利要求7所述的环孢菌素A用于眼用乳剂制剂的制备方法，其特征是所得制品用Co60灭菌，时间1560分钟。10、根据权利要求7所述的环孢菌素A用于眼用乳剂制剂的制备方法，其特征是得到的制品再用0.45um灭菌微孔滤膜过滤。全文摘要一种环孢菌素A眼用乳剂制剂，组分及含量重量比为，环孢素A0.05～0.5％；纤维素增稠剂0.3～2％；菊花或/与金银花的提取物0.3～6％；油相0.25～7.0％；增溶剂乳化剂0.1～5.0％；甘油1～4％；pH调节剂适量；余量是纯化水。制备方法是，将纤维素增稠剂放入适量水中，加热至80-90℃，搅拌，分散后冷却至室温；将菊花或/与金银花的提取物加入到纤维素溶液中，混匀备用；将环孢菌素A溶解于油相中；在所得环孢菌素A混合液中缓慢加入混合液，超声剪切乳化，1～5分钟；用pH调节剂调节pH值至7.2～7.8；加入处方量的纯化水补至足量，得到制品。文档编号A61K38/12GK101244035SQ20081002067公开日2008年8月20日申请日期2008年2月21日优先权日2008年2月21日发明者肖大伟,薇钱申请人:南京医科大学附属南京第一医院