专利名称：抗猪蓝耳病卵黄抗体饲料添加剂和注射剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于饲料添加剂和医药领域，特别涉及一种抗猪蓝耳病卵黄抗体 飼料添加剂和注射剂及其制备方法。
背景技术：
目前，猪病毒性疾病仍是当前严重制约养猪业健康发展的主要传染病。 全国每年均有上亿头猪在不同季节发生病毒性传染病。猪一旦感染发病，则 有起病急，临床症状严重，极易传播扩散，以及病死率和死亡率均较高的特 点，对养殖业危害极大。蓝耳病由猪群被蓝耳病病毒感染引起的，猪蓝耳病比较普遍，且非常严 重。但从当前蓝耳病发病特点来看，发病已由过去母猪繁殖障碍为主转为以 保育猪的呼吸道病综合征为主。在临床上见有初产母猪常发生流产、早产及产死胎等；经产母猪常出现滞后产、不发情或屡配不孕，而流产与死胎的大 为减少，亚临床感染增多；断奶后的仔猪发病率上升，病情严重，死亡率增 高。临床上常见蓝耳病与圆环病毒II型、或与猪蓝耳病毒或与伪狂犬病毒混 合感染，同时继发多种细菌感染，如肺炎支原体、放线杆菌、链球菌及巴氏 杆菌等。使病情复杂化，出现发热、腹式呼吸、腹泻、后躯麻痹、共济失调、 眼睑水肿、皮下水肿、消瘦等症状，造成死亡率增高。猪蓝耳病至今尚无有效的治疗药物和治疗方法。近年来曾经有人ii行过 用中草药制剂预防和治疗猪病毒性疾病的试验，但治愈率较低。抗生素及磺胺类药物基本无效。在兽医临床上，卵黄抗体已广泛用于鸡(传染性法氏嚢、新城疫、鸡白 痢等)、鸭(肝炎)、鹅(小鵝瘟)、犊牛(腹泻)、仔猪(黄白瘌、猪轮状病 毒腹泻)、羔羊(轮状病毒腹泻)等疫病的紧急治疗和预防。卵黄抗体制备筒 单，而且具有性质均一、易提取、可有效避免非特异性免疫反应发生等特性， 在免疫技术、免疫监测、人畜治疗等方面有很大的发展潜力。国内的研制工3作主要集中在对禽类疾病的防治，江苏省农业科学研究院畜牧兽医研究所已 获得防治鸡传染性法氏嚢、新城疫、鸡白痢、鸭肝炎、小鹅瘟等多联高免卵黄抗体注射液；华西医科大学一项防治禽病的卵黄抗体针剂已取得生物兽药 证书；四川省养猪研究所研制了大肠杆菌卵黄抗体注射液。抗鸡法氏嚢病、 鸡新城疫、鸭病毒性肝炎高免卵黄广泛用于治疗鸡法氏嚢病、鸡新城疫、鸭 病毒性肝炎，均取得满意结果。03128310.1提供一种预防仔猪腹泻的特异性卵黄抗体及其制备方法与应用；200410084558.9提供一种抗仔猪病毒性疫病复合卵黄抗体制剂的制备方法；200410084559.3提供一种抗仔猪细菌性疫病复合卵黄抗体制剂的制备方法；200510027330.0提供一种抗猪伪狂犬病卵黄抗体的制备方法；03117507.4提供一种抗仔猪黄痢、白痢病原菌卵黄抗体及其制备和应用；02103667.5提供一种猪传染性胃肠炎病毒卵黄抗体和抗原及其制备。目前，有关用猪蓝耳病卵黄抗体的制备方法还未见报道。因此，提供一种抗猪蓝耳病卵黄抗体饲料添加剂和注射剂及其制备方法，有效预防和治疗猪蓝耳病，是该技术领域科研人员急需开发的新课题之一。发明内容本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种抗猪蓝耳病卵黄抗体饲 料添加剂和注射剂及其制备方法。为实现上述目的本发明所采用的实施方式如下 一种抗猪蓝耳病卵黄抗 体饲料添加剂，其特征在于以猪蓝耳病疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，再收集免 疫产蛋母鸡卵黄并提取、制备。抗猪蓝耳病卵黄抗体饲料添加剂方便预防喂 食，非常适宜猪使用。一种抗猪蓝耳病卵黄抗体铜料添加剂的制备方法，其特征在于包括制备 猪蓝耳病病毒免疫原；将免疫原对健康产蛋母鸡进行免疫，免疫原注射剂量 为0.5-3.0ml/只鸡；收集免疫8-10天后的鸡下的蛋，留取含有抗猪蓝耳病的卵 黄抗体的效价不小于l :64的鸡蛋备用；用0.01M无菌磷酸盐緩沖液液稀释、0.5%羟丙曱基纤维素、邻苯二曱酸盐处理，取上述液体进行巴氏杀菌消毒法， 在常规喷雾干燥器中进行喷雾干燥得到饲料添加剂；该飼料添加剂内含有效 价>1 : 64的抗猪蓝耳病的卵黄抗体。该饲料添加剂制备用于防治猪蓝耳病。一种抗猪蓝耳病卵黄抗体注射剂，其特征在于以猪蓝耳病疫苗免疫非免 疫产蛋母鸡，再收集免疫产蛋母鸡卵黄抗体并提取、制备。抗猪蓝耳病卵黄 抗体注射剂在抗猪蓝耳病发病后使用，药效更快。一种抗猪蓝耳病卵黄抗体注射剂的制备方法，其特征在于将猪蓝耳病疫 苗免疫非免疫产蛋母鸡，通过基础免疫和强化免疫后用血凝抑制试验测定免 疫卵ffl效价，达标(效价>1 : 64)后收获卵黄用无菌蒸馏水对倍稀释，用乳 酸液进行酸处理去除杂蛋白、抽滤液进行盐析，除盐后调整IgY的浓度分装， 即成抗猪蓝耳病卵黄抗体注射剂；该注射剂内含有效价>1 : 64的抗猪蓝耳病 的卵黄抗体；其lgY的得率达95。/。以上， 一个免疫卵一般可得IgY80-110mg。 该注射剂制备用于治疗猪蓝耳病。本发明的有益效果是抗猪蓝耳病卵黄抗体是治疗猪蓝耳的特异性生物 制品，是一种被动免疫制剂，同时还有鉴别诊断和紧急预防接种等作用，具 有较高的推广应用价值。卵黄抗体的使用，在免疫学理论中可成为被动免疫。 当免疫缺陷、疫苗缺乏及免疫失败时，可利用卵黄抗体注射、口服替代主动 免疫接种，发挥抗病作用。抗猪蓝耳病卵黄抗体都是通过提高猪机体对抗猪 蓝耳病卵黄抗体的抗体水平来防治抗猪蓝耳病的。抗猪蓝耳病卵黄抗体饲料 添加剂喂食猪，既使用简便，又特适宜猪使用。由猪蓝耳病病毒引起的猪蓝 耳病，可直接给猪饲喂本发明产品，有效率可达85.2%以上。也可添加于饲料 中用于预防猪蓝耳病。抗猪蓝耳病卵黄抗体注射剂治疗猪蓝耳病，l-2天见效， 临床治愈率可达90 %以上。使用本发明的卵黄抗体注射治疗患蓝耳病的猪， 试验组临床症状比对照组明显减轻，且试验组的死亡率显著低于对照组，具 有明显的防治猪蓝耳病作用。本发明的抗猪蓝耳病卵黄抗体饲料添加剂和注 射剂防治猪蓝耳病效果显著。该方法成本低，见效快，无副作用，不会产生 耐药性菌林，制备工艺简单，原料来源广泛，使用方便，易于在基层推广。
具体实施方式
以下结合实施例，对依据本发明提供的具体实施方式
详述如下实施例l抗猪蓝耳病卯黄抗体制剂的制备方法利用猪蓝耳病市售疫苗通过基础免疫和强化免疫，第一轮次以猪蓝耳病 疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，免疫剂量呈2M梯度增加，每个轮次间间隔10天， 第三轮次免疫结束后10天，经卯黄抗体效价测定后收集免疫卵，无菌获取卵黄，用0.01M无菌磷酸盐緩沖液液稀释、0.5%羟丙曱基纤维素、邻苯二曱酸盐 处理，抽滤液喷雾干燥，将粉剂封装保存。 实施例2抗猪蓝耳病卵黄抗体注射剂的制备方法将猪蓝耳病疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，通过基础免疫和强化免疫后用血凝抑制试验测定免疫卵m效价，达标后收获卵黄用无菌蒸馏水对倍稀释，用乳酸液进行酸处理去除杂蛋白、抽滤液进行盐析，除盐后调整IgY的浓度分装，即成抗猪蓝耳病卵黄抗体注射剂。该注射剂内含有效<介>1 : 64的抗猪蓝耳病的卵黄抗体。该注射剂可制备用于治疗猪蓝耳病。其lgY的得率达95。/。以上， 一个免疫卵一般可得IgY 80-110mg。 实施例3抗猪蓝耳病卵黄抗体的飼料添加剂的制备方法其制备方法包括制备猪蓝耳病病毒免疫原；将免疫原对健康产蛋母鸡进 行免疫，免疫原注射剂量为0.5-3.0ml/只鸡；收集免疫8-10天后的鸡下的蛋， 留取含有抗猪蓝耳病的卵黄抗体的效价不小于l :64的鸡卵备用；用0.01M无 菌磷酸盐緩冲液液稀释、0.5%羟丙曱基纤维素、邻苯二甲酸盐处理，取上述 液体进行巴氏杀菌消毒法、在常规喷雾干燥器中进行喷雾干燥得到饲料添加 剂。该饲料添加剂内含有效价>1 : 64的抗猪蓝耳病的卵黄抗体。该饲料添加 剂可制备用于防治猪蓝耳病。实施例4186曰龄健康商品蛋鸡，对蛋鸡进行免疫，第一次每羽肌注猪蓝耳病疫苗 5头份，7天后，第二次每羽肌注猪蓝耳病疫苗10头份。基础免疫后10天，进 行加强免疫，每次间隔10天，共进行3次。第一次每羽肌注猪痘血毒2mL,第 二次注2.5mL,第三次注3mL。6在最后一次免疫后15天，随机取5枚高免蛋，无菌抽取蛋黄各3mL,分别 用等量pH7.2 PBS混匀，然后各加入6 mL的氯仿，室温下作用30 min, 3000 r/min 离心20min，分成三层取上清液分别作猪蓝耳病正向间接血凝实验，检测猪蓝 耳病抗体效价。收集效价在1:32以上的蛋作高免蛋。用1%新洁尔灭消毒蛋壳，在无菌条件下收集卵黄，置组织捣碎机中用3000 r/min匀浆l min，加等量灭菌生理盐水搅匀后分装于灭菌玻璃瓶中，加青霉素、 链霉素各2000 IU/mL进行常规安全性和无菌4企验。初诊为猪蓝耳病的猪，按 每千克体重0.5-l mL的剂量确定用量，选择肌肉丰满的部位进行多点肌肉注 射，严重者间隔3-4日可再次注射。同时要饮用白糖水、维生素或葡萄糖水溶 液，辅助给予青饲料等含维生素丰富的食物。应用实例l:抗猪蓝耳病卵黄抗体治疗猪蓝耳病的临床报告2007年10月10日天津郊区某猪场在外地购进仔猪416头，10月13日部分猪 出现食欲减少、嗜睡、体温升高、大便干燥等症状，遂请当地兽医进行治疗 无效，已死亡9头。通过对病较严重的32头猪进行临床检查，体温41-41.2。C, 80%的猪出现嗜睡、停食、干球便、粪表面有白色肠粘膜，少数猪出现拉稀、 皮肤发红、数头猪出现兰耳、四肢内侧、腹部呈紫色血斑、眼结膜发炎、眼 睑水肿，公猪包皮肿大、积尿，有的站立不稳，有共济失调等精神症状，后 期四3支无法站立，衰竭而死亡。解剖病变心脏有出血点，肝胂大有灰色块状病变，脾不肿大，但边缘 有梗死，腹股沟淋巴、肠系膜淋巴肿大充血、膀胱出血、胃大面积有出血斑， 回盲瓣有糠麸样螯状物，肺萎缩，肺尖叶与胸膜粘连等。临床诊断疑似猪痘或蓝耳病。实验实诊断经天津市动物疫病预防控制中心实验室"^断为蓝耳病。使用自制抗猪蓝耳病卵黄抗体，配合抗生素治疗防继发疾病，同时坚持 天天消毒，加强护理等综合措施。10月21日使用抗猪蓝耳病卯黄抗体，每头1.0ml治疗。连续2天使用抗猪蓝 耳病卵黄抗体，每头1.0ml治疗，并配合使用抗生素进行治疗。10月29日观察，拉稀的症状减少，精神症状消失，便秘有所好转。10月31日，对全场随机^r查35头猪，体温均在38-39。C之间，当天停药观察。11月2日猪场病情日趋稳定，部分猪食欲提高。 10月26日除少数猪体温升高，90%的猪已恢复正常。 C区2栋l号寧中发病时间短的猪10头，于10月22日-25日注射抗猪蓝耳病 卵黄抗体至今无l头死亡。C区2栋10号圈中发病时间长且病情比较重猪IO头，于10月22日-25日注射 抗猪蓝耳病卵黄抗体已死亡3头，存活4头。结论抗猪蓝耳病卵黄抗体用于治疗猪蓝耳病效果较好，特别是在病发 早期、前期效果更为理想。当前治疗动物病毒性疾病，抗病毒药品种太少， 抗猪蓝耳病卵黄抗体是防治猪蓝耳病的有效药物。猪蓝耳病病毒的感染，严 重威胁猪的健康，造成了重大经济损失。当猪发生猪蓝耳病病时，可立即口 服或皮下注射卵黄抗体，能阻止猪蓝耳病病毒进入细胞，中和病毒数量，经 2-10小时就可发现猪精神好转，食欲增加。目前，抗猪蓝耳病卵黄抗体是治疗 猪蓝耳病的有效药物之一。本试验结果表明，抗猪蓝耳病卵黄抗体注射剂对 于抗猪蓝耳病具有良好的治疗效果。应用实例2:河北沧州某猪场累计购入仔猪449头，购入后结果相继发病，死亡12头， 经临床症状和实验室诊断诊断为猪蓝耳病。对剩下的437余头猪进行了猪蓝 耳病卵黄抗体治疗。按每千克体重l mL的剂量确定用量，选择肌肉丰满的部 位进行多点肌肉注射，严重者间隔2日可再次注射猪蓝耳病卵黄抗体。同时要 饮用白糖水、维生素或葡萄糖水溶液，辅助给予青菜、水果等含维生素丰富 的食物，结果康复359头，有效率为82.2%。临床试用表明，患蓝耳病猪经猪蓝 耳病卵黄抗体治疗后的有效率高达93.5%。制成的猪蓝耳病卵黄抗体，注入动 物机体后，具有疗效好、安全可靠、无毒副作用和成本低等优点。上述参照实施例对该抗猪蓝耳病卵黄抗体饲料添加剂和注射剂及其制备 方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举 出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发 明的保护范围之内。
权利要求
1、一种抗猪蓝耳病卵黄抗体饲料添加剂，其特征在于以猪蓝耳病疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，再收集免疫产蛋母鸡卵黄并提取、制备。
2、 一种根据权利要求1所述的抗猪蓝耳病卵黄抗体飼料添加剂的制备方 法，其特征在于包括制备猪蓝耳病病毒免疫原；将免疫原对健康产蛋母鸡进 行免疫，免疫原注射剂量为0.5-3.0ml/只鸡；收集免疫8-10天后的鸡下的蛋， 留取含有抗猪蓝耳病的卵黄抗体的效价不小于l :64的鸡蛋备用；用0.01M无 菌磷酸盐緩冲液液稀释、0.5%羟丙曱基纤维素、邻苯二曱酸盐处理，取上述 液体进行巴氏杀菌消毒方法，在常规喷雾干燥器中进行喷雾千燥得到饲料添 加剂；该饲料添加剂'内含有效价> 1 : 64的抗猪蓝耳病的卵黄抗体。
3、 一种抗猪蓝耳病卵黄抗体注射剂，其特征在于以猪蓝耳病疫苗免疫非 免疫产蛋母鸡，再收集免疫产蛋母鸡卵黄抗体并提取、制备。
4、 一种根据权利要求3所述的抗猪蓝耳病卵黄抗体注射剂的制备方法， 其特征在于将猪蓝耳病疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，通过基础免疫和强化免疫 后用血凝抑制试验测定免疫卵HI效价，达标后收获卯黄用无菌蒸馏水对倍稀 释，用乳酸液进行酸处理去除杂蛋白、抽滤液进行盐析，除盐后调整IgY的浓 度分装，即成抗猪蓝耳病卵黄抗体注射剂；该注射剂内含有效价>1 : 64的抗 猪蓝耳病的卵黄抗体。
全文摘要
本发明公开了一种抗猪蓝耳病卵黄抗体饲料添加剂和注射剂及其制备方法。所述抗猪蓝耳病卵黄抗体饲料添加剂，以猪蓝耳病疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，再收集免疫产蛋母鸡卵黄并提取、制备。所述抗猪蓝耳病卵黄抗体注射剂，以猪蓝耳病疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，再收集免疫产蛋母鸡卵黄抗体并提取、制备。所述抗猪蓝耳病卵黄抗体都是通过提高猪机体对抗猪蓝耳病的抗体水平来防治抗猪蓝耳病的。本发明的有益效益是抗猪蓝耳病卵黄抗体饲料添加剂方便预防喂食，非常适宜猪使用。抗猪蓝耳病卵黄抗体注射剂在抗猪蓝耳病发病后使用，药效更快。本发明疗效显著，成本低、见效快，无毒副作用，不会产生耐药性菌株；制备简单，原料来源广泛，使用方便，易于推广。
文档编号A61P31/00GK101259272SQ20081005280
公开日2008年9月10日 申请日期2008年4月18日 优先权日2008年4月18日
发明者古长庆 申请人:天津生机集团股份有限公司