一种中药组合物在制备治疗血管微栓塞的药物中的应用的制作方法

专利名称：：一种中药组合物在制备治疗血管微栓塞的药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药组合物的新用途，具体地，本发明涉及一种中药组合物在制备治疗血管微栓塞的药物中的应用，属中药应用领域。
背景技术：
：血管微栓塞是指微血管栓塞，微血管是指血管直径小于200nm的血管，主要是指动脉血管。血管微栓与多种心脑血管病密切向关，严重影响心脑血管病患者的预后。常见的血管微栓塞主要发生在冠状动脉和颅内，发生在冠状动脉的血管微栓塞称为冠脉微栓塞(CME)，发生在颅内的血管微栓塞称为颅内微栓子(CMS)。病理资料证实无心脏病而死于交通事故者、高血压病者、糖尿病患者及心原性猝死者均可见不同程度的冠脉微栓塞(CME)。临床资料显示约15-43%不稳定型心绞痛患者发生CME或微小心梗。溶栓治疗中血栓溶解不全及溶栓后的致栓环境是CME的重要原因。各种冠状动脉介入治疗(PCI)在疏通冠状动脉达到血运重建的同时，由于机械作用使血管壁损伤，几乎都伴有斑块破裂及微小栓子或微血栓的形成，并由此导致CME及围手术期微小心梗。临床上，我们经常发现许多有明显胸痛、ECG或/和活动平板负荷试验具有典型心肌缺血表现的患者，但冠脉造影无或无显著导血冠脉狭窄而仅表现为TIMI血流降低，推测这些患者可能为心肌微血管病变或微栓塞。长期以来人们更多关注的是心脏表面较大的导血冠脉狭窄或闭塞对心肌灌注的影响。近年来，通过对溶栓后冠脉造影的TIMI血流观察及无再流现象的研究发现CME—旦发生，解决办法有限、对预后的影响甚至超过导血冠脉狭窄或闭塞。更深入的研究发现在急性心梗溶栓治疗及各种PCI包括急性心肌梗死直接PCI后，如果发生TIMI血流减少，其原因多为CME;若发生CME则患者预后较差，随后发生缺血性心肌病可能性显著增加，生存率明显降低。因此，CME严重影响患者的预后。栓塞是弓I起缺血性卒中的主要原因之一，而脑动脉中发现微栓子往往是脑栓塞的前兆。颅内血管狭窄是微栓子产生的主要原因，提示微栓子的来源之一是动脉粥样硬化斑块。颅内外动脉同时伴有病变时微栓子检出率增高,这也即脑卒中动脉-动脉栓塞的机制。目前临床对于血管微栓的治疗并无特效药，主要采用阿司匹林、低分子肝素钠等治疗，使用这些药物治疗存在出血倾向等严重不良反应。本发明是在第01131203.3号和第200410048292.2号专利的基础上进行的改进发明，在此全文引用该两专利文件记载的内容。上述两项专利未公开该中药组合物在治疗血管微栓塞中的应用。
发明内容本发明目的是提供一种中药组合物在制备治疗血管微栓塞的药物中的应用，所述中药组合物由如下重量份的原料药制成-人参3-10水蛭3-11土鳖虫5-10乳香(制)1-5赤芍3-9降香l-5檀香l-5全蝎3-9蝉蜕3-12蜈蚣l-3冰片l-7酸枣仁(炒)3-10;优选地，该中药组合物由如下重量份的原料药制成人参6水蛭10土鳖虫7乳香(制)2赤芍5檀香2全蝎7蝉蜕7蜈蚣l冰片5酸枣t降香2人参10水蛭8土鳖虫7乳香(制)2赤芍5檀香2全蝎9蝉蜕7蜈蛇1冰片5酸枣t降香2粉；人参6水蛭11土鳖虫7乳香(制)2赤芍5降香2檀香2全蝎3蝉蜕7蜈蚣1冰片5酸枣仁(炒)5;上述中药组合物的活性成分由下列成分组成a平均粒径小于100pm的全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫、蝉蜕及制乳香药b冰片药粉；c由降香和檀香提取的挥发油；d人参用乙醇提取后的醇提液经浓縮后的醇提浸膏；e提取成分c后的降香和檀香药渣的水提液、赤芍和炒酸枣仁加水煎煮后的水提液以及提取成分d后的人参药渣的水提液过滤、混匀后浓縮成的水提浸膏。本发明还公开了含有上述中药组合物作为活性组分的药物制剂为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂。本发明提供了该中药组合物制备治疗血管微栓塞药物中的应用，优选为该中药组合物制备治疗冠脉微栓塞药物中的应用或者该中药组合物制备治疗颅内微栓子药物中的应用。本发明中药组合物中，作为活性组分的原料药的拉丁名及其加工方法来自《中药大辞典》(1977年7月，第一版，上海科学技术出版社)和《中国药典》(2005年版，化学工业出版社)。本发明中药组合物还可以按常规的提取和制剂工艺，例如，范碧亭《中药药剂学》(上海科学出版社1997年12月第1版)记载的制备工艺，制成药剂学可接受的任意常规剂型，例如胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂等。本发明的应用中，所述中药组合物为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂，为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯垸酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括聚乙烯吡咯垸酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括甜味剂及各种香精；防腐剂包括尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括PEG6000，PEG4000，虫蜡等。本发明胶囊剂优选通过以下制备方法制成将上述配比的水蛭、全蝎、蝉蜕、土鳖虫、蜈蚣等五味药洗净，低温烘干，备用；檀香、降香提取挥发油，药渣及水溶液备用；人参用70%乙醇加热回流提取二次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味；人参药渣与檀香、降香的药渣以水溶液合并，加入赤芍、酸枣仁(炒)，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度为1.20-1.25(60°C)的清膏，加入上述人参醇提液，混匀，低温干燥，粉碎成细粉；乳香(制)与水蛭等五味共粉碎成细粉；冰片研细，分别与上述细粉配研，混匀，喷入挥发油，混匀，装入胶囊，即得。或者，本发明胶囊剂优选通过以下制备方法制成a)原料药的重量比为人参3-10份、水蛭3-ll份、土鳖虫5-10份、制乳香l-5份、赤芍3-9份、降香l-5份、檀香l-5份、全蝎3-9份、蝉蜕3-12份、蜈蚣l-3份、冰片l-7份、炒酸枣仁3-10份；b)药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈峻、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上;粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于ioo^m;待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c)提取浓縮和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加水煎煮，水提液过滤后，待浓縮成浸膏；人参用乙醇提取后，再用水提取，醇提液回收乙醇后，浓縮成醇提浸膏，水提液过滤与所有的水提液混匀后浓縮成水提浸膏；d)制剂工艺在沸腾制粒干燥机中加入超微粉碎粉，再将步骤c)所得提取浸膏喷入制粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发油，混匀后由胶囊充填机充填，制成胶囊。或者，本发明胶囊剂优选通过以下制备方法制成a)原料药的重量比为人参3-10份、水蛭3-ll份、土鳖虫5-10份、乳香(制)l-5份、赤芍3-9份、降香l-5份、檀香l-5份、全蝎3-9份、蝉蜕3-12份、蜈蚣l-3份、冰片l-7份、炒酸枣仁3-10份；b)药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上;粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于IOOHm;待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c)提取浓縮和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加水煎煮，水提液过滤后，待浓縮成浸膏；人参用乙醇提取后，再用水提取，醇提液回收乙醇后，浓縮成醇提浸膏，水提液过滤与所有的水提液混匀后浓縮成水提浸膏，将浸膏直接喷雾干燥成喷雾粉；d)制剂工艺将超微粉碎粉与步骤c)所得喷雾干燥粉一起加到沸腾制粒干燥机中，再喷溶媒制成颗粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发油，混匀后由胶囊充填机充填，制成胶囊。本发明药物组合物的用量，折算成原料药材的重量，为每次0.8-3克，每日服用2-4次，优选为每次l.ll-2.22克，每日服用三次。具体实施例方式实施例l:a)原料药配方为人参39.6g水蛭72.6g土鳖虫46.2g乳香(制)13.2g赤芍33g降香13.2g檀香13.2g全蝎19.8g蝉蜕46.2g蜈蚣6.6g冰片33g酸枣仁(炒)33g;b)药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上;粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于30-40pm;待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；C)提取浓縮和千燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加适量水煎煮二次，每次3小时，合并水提液，过滤后，浓縮成浸膏；人参用适量70%的乙醇提取二次，每次3小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味，再用水提取，醇提液浓縮成6(TC测定相对密度为0.91.1醇提浸膏，水提液过滤与上述所有水提液混匀后浓縮至6(TC测定相对密度为0.91.1的清膏，备用；d)制剂工艺在沸腾制粒干燥机中加入超微粉碎粉，再将步骤c)所得提取浸膏喷入制粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发油，混匀后由胶囊充填机充填，制成1000粒胶囊。本发明药物的用量，为每次2-4粒，每日服用三次。实施例2a)原料药配方为人参66g水蛭52.8g土鳖虫46.2g乳香(制)13.2g赤芍33g降香13.2g檀香13.2g全蝎59.4g蝉蜕46.2g蜈蚣6.6g冰片33g酸枣仁(炒)33gb)药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈蛇、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上;粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于70-90pm;待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c)提取浓縮和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加适量水煎煮二次，每次3小时，合并水提液，过滤后，待浓縮成浸膏；人参用适量70%的乙醇提取二次，每次3小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味，再用水提取，醇提液浓縮成相对密度在6(TC测定为1.01.05醇提浸膏，水提液过滤与上述所有水提液混匀后浓縮至60。C测定相对密度为1.01.1的清膏，备用；d)制剂工艺在沸腾制粒干燥机中加入超微粉碎粉，再将步骤C)所得提取浸膏喷入制粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发油，按常规制剂工艺压制成1ooo片。本发明药物的用量，为每次2-4片，每日服用三次。实施例3:丸剂的制备a)原料药配方为人参39.6g水蛭66g土鳖虫46.2g乳香(制)13.2g赤芍33g降香13.2g檀香13.2g全蝎46.2g蝉蜕46.2g蜈蚣6.6g冰片33g酸枣仁(炒)33gb)药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上;粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径10-20nm;待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c)提取浓縮和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加适量水煎煮二次，每次3小时，合并水提液，过滤后，待浓縮成浸膏；人参用适量70%的乙醇提取二次，每次3小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味，再用水提取，醇提液浓縮成60。C测定相对密度为0.91.0醇提浸膏，水提液过滤与上述所有水提液混匀后浓縮至6(TC测定相对密度为1.01.1的清膏，备用；d)制剂工艺按常规制剂工艺，制成1000粒丸剂。本发明药物的用量，为每次2-4粒，每日服用三次。为阐明本发明中药组合物对血管微栓塞的治疗活性，用按上述实施例l方法制得的胶囊剂(以下称本发明药物)进行了下列药理和临床试验以证明其疗效，但其不能对本发明的范围构成任何限制。实验例l:1材料1.1实验动物SPF级SD雄性大鼠64只，体重280320g。由河北医科大学实验动物中心提供，实验动物及实验步骤符合国家实验动物管理条例。1.2实验试剂Timd试剂盒由Roche公司提供，免疫组织化学配套试剂如胃蛋白酶、柠檬酸抗原修复缓冲液、核快红复染液、显色液、PBS缓冲液、多聚赖胺酸等由福州迈新生物有限公司提供，本发明药物由河北以岭医药研究院提供。2.实验方法2.1冠脉微栓塞模型制备体重约300克的SPF级大鼠，每只取尾静脉血lml加肾上腺素2ml促凝固成血栓，在60。C的烤温箱烘干，玻璃研磨器研磨5min，经50100um大小的过滤网过滤后使之成为直径为10100"m较均匀的微栓子颗粒。腹腔注射氯胺酮(66.7mg/Kg)和安定(6.67mg/Kg)复合麻醉后，取仰卧位，术区备皮消毒，气管插管，呼吸机辅助通气(300ml/min)。取第2肋间水平横切口，剪断胸骨，切开心包，暴露主动脉根部，钳夹升主动脉暂时阻断血流，以细针向心尖部注射微栓子lmg，10s后松开钳夹的升主动脉，压迫穿刺口止血，关胸复苏。为防止术后感染，每天肌注青霉素40万U/只，连续3天。2.2动物分组与给药64只大鼠随机分成4组，即对照组(CL组)、假手术组(SO组)、冠脉微栓塞组(ME组)和本发明药物治疗组(TL组)，每组16只。(1)TL组冠脉微栓塞模型制备后，以本发明药物内容物每天450mg生药/Kg，用生理盐水稀释到5ml灌胃，每日一次，词养28天后处死；(2)ME组冠脉微栓塞模型制备后，予生理盐水灌胃，每日一次，一次5ml，饲养28天后处死；(3)SO组手术方法同ME组，自主动脉根部注入生理盐水替代血栓微粒，术后予生理盐水灌胃，每日一次，一次5ml，饲养28天后处死；(4)CL组未进行手术的大鼠做为正常CL组，术后予生理盐水灌胃，每日一次，一次5ml，饲养28天后处死。3.观察指标与方法3.1HE染色法及微小心肌梗死灶计数、所占观察面积百分比测定CL组、SO组、ME组及TL组大鼠，术后28天氯胺酮和安定腹腔注射麻醉，切开股静脉，静脉注射10%KC12ml使心脏停搏于舒张末期，迅速开胸取出心脏，肝素生理盐水冲洗后，10n/。中性甲醛恒压(90mmHg)灌注冠脉15min。去除大血管及心房组织，平行房室间沟方向将心室横切为2mm厚的组织块，10%中性甲醛固定24}1，埋蜡、切片、HE染色。指标及观察方法如下微梗死定义为显微镜下为散在、局灶性分布的小梗死灶；显微图象微机分析系统(IMAGINGPRO4)随机观察100个X100视野，计算每百视野微小心肌梗死灶数量(Nmmi，个)，每视野微小心肌梗死灶所占百分比，取其平均值(Ammi，％)。3.2心肌组织胶原纤维占观察面积百分比测量CL组、SO组、ME组和TL组，术后28天心室组织石蜡切片常规脱蜡至水，天青石蓝液染核3分钟，蒸馏水洗3次，天狼星红饱和苦味酸液染色15分钟，无水乙醇分化和脱水，二甲苯透明和中性树胶封固。指标及观察方法胶原纤维蛋白染成红色，心肌细胞黄色。显微图象微机分析系统(IMAGINGPR04)观察100个X100视野，计算每个视野下胶原纤维所占面积的百分比，取其平均值(Fcf，％)。3.3超声心动图及心功能指标测量CL组、SO组、ME组和TL组大鼠，超声心动图扇扫角度15度，幀频>360/Min。术前、术后第l、2、4周各观察1次，获得左室短轴系列切面图象。观察指标及方法室间隔及左室后壁收縮期和舒张期厚度(IVSS、IVSD、LVPWS、LVPWD)、左心室收縮期和舒张期内径(LVEESD、LVEED)、左室短轴縮短率(LVFS)及左室射血分数(LVEF)。3.4心肌细胞凋亡检测方法与指标3.4.1免疫组化检测CL组、SO组、ME组及TL组大鼠，术后28天心室组织石蜡切片常规脱蜡至水，微波抗原修复(柠檬酸缓冲液，PH6.0)，1%过氧化水阻断内源性过氧化酶IO分钟，并按SP免疫组化试剂盒加入活化型caspase-3(l:50稀释)，4t:孵育过夜,加二抗、三抗，DAB显色，苏木素复染。不加一抗代以PBS为阴性对照。观察指标及方法正常心肌细胞染成淡绿色，染成棕黄色的为凋亡心肌细胞。计算机显微图像分析系统随机观察100个X200高倍视野活化型caspase-3免疫组化阳性心肌细胞数，计算每个视野下凋亡心肌细胞数占总心肌细胞数的百分比(Rapol，％)，取平均值。3.4.2原位末端标记(TUNEL)检测CL组、SO组、ME组及TL组大鼠,术后1天及28天心室组织石蜡切片常规脱蜡、水化，0.5%胃蛋白酶室温孵育30min透膜，PBS冲洗，TUNEL反应液37t:孵育1小时，PBS冲洗，碱性磷酸酶抗体37'C孵育30min，PBS冲洗，BCIP/NBT显色，核快红复染，封片镜检。步骤中不加TdT酶者为阴性对照，正常心肌组织片经DNA聚合酶I(lU/ml，37。C孵育30min)消化产生DNA链断裂作为阳性对照。观察指标及方法正常心肌细胞核染成淡红色，凋亡的心肌细胞核呈蓝黑色。显微镜结合计算机显微图像分析系统随机观察100个X400视野TUNEL阳性心肌细胞数，计算每个视野下凋亡心肌细胞数占总心肌细胞数的百分比(Rapo2，％)，取平均值。3.5VDI因子染色观察心肌细胞内小冠脉密度CL组、SO组、ME组及TL组大鼠，术后l、28天心室组织石蜡切片常规脱蜡，胃蛋白酶抗原修复(柠檬酸缓冲液，PH6.0)，P/。过氧化水阻断内源性过氧化酶10分钟，并根据SP免疫组化试剂盒说明书依次加入兔抗鼠W因子相关抗原多克隆抗体(l:100稀释),4。C孵育过夜，加二抗、三抗，DAB显色，苏木素复染。步骤中不加一抗代以PBS为阴性对照。观察指标及方法冠脉血管内皮细胞染成黄棕色。微机显微图像分析系统随机观察100个X200倍视野，计算单位面积10100pm微小冠状动脉数量(Nmv,个/mm2)。3.6统计分析方法应用SPSS12.0软件包进行统计分析。计量资料以？士S表示，组间比较采用e-WayANNOVA分析，方差齐者用LSD检验，方差不齐者用Game-Howell检验，组均数间比较采用成组t检验。PO.05差异具有显著性。4实验结果4.1HE染色与微小心肌梗死灶定量分析术后28天，CL组、SO组、ME组和TL组每百视野微小心肌梗死灶数量Nmmi分别是0.04±0.01个、0.03±0.01个、4.76±1,28个和U3±0.65个；每视野微小心肌梗死灶所占百分比Ammi分别是(1.55±0.09)%、(1.67±0.07)%、(37.02±13.11)%和(6.77±2.49)%。与CL组比，ME组Nmmi和Ammi明显增多(P〈0.01);与ME组比，TL组Nmmi和Ammi显著减少(PO.01);CL组与SO组比，Nmmi无明显差异(P〉0.05)。结果表明，本研究所制作的大鼠CME模型是成功的，形成了微小心肌梗死灶；本发明药物治疗28天后显著减少微小心肌梗死结果见表1。表1CME后Nmmi、Ammi及本发明药物的治疗效果(i±S)组别NNmmi(个)Ammi(%)CL组160.04±0.011.55±0.09SO组160.03±0.011.67±0.07廳组164.76±1.28*37.02±13.11*TL组161.13±0.65#6.77±2.49#注承与SO组比较，PO.01;存与ME组比较，PO.014.2心肌间质胶原纤维定量分析结果术后28天，CL组、SO组、ME组和TL组Fcf分别是(0.55士0.43)0/0、(0.57±0.41)%、(27.99±5.37)%和(2.44±0.77)%。与CL组比，ME组Fcf明显增多(PO.01);与ME组相比，TL组Fcf显著减少(P〈0.01);CL组与SO组比，Fcf无明显差异(PX).05)。术后28天，各组心肌外膜区Fcf分别是(0.27±0.12)%、(0.22±0.10)%、(0.30±0.15)%和(0.28±0.09)%，差异无显著性(P>0.05)。内膜区Fcf分别是(0.25士0.11)0/0、(0.28±0.13)0/0、(28.06±8.03)%和(10.47±2.01)%;与CL或SO组比，ME组Fcf明显增多(PO.01);与ME组相比，TL组Fcf显著减少(PO.Ol)。结果表明，CME后死亡的心肌细胞被胶原纤维取代，形成微纤维化灶，14多分布于心内膜下层心肌；本发明药物干预28天明显抑制胶原纤维增生，结果见表2。表2CME后各组及其内外膜区Fcf变化及本发明药物治疗效果(^±S)组别N28天Fcf(%)28天内膜区Fcf(。/。)28天外膜区Fcf(%)CL组160.55±0.430.25±0.110.27±0.12SO组160.57±0.410.28±0.130.22±0.10廳组1627.99±5.37*28.06±8.03*0.30±0.15TL组162.44±0.77#10.47±2.01#0.28±0.09注承与SO组比较，PO.01;弁与ME组比较，PO.014.3超声心动图心功能变化及指标测量术前，CL组、SO组、ME组和TL组LVEDD、LVESD、IVSS、IVSD、LVPWS、LVPWD、LVFS、LVEF各指标的差异无显著性(P均>0.05)。术后1周、2周和4周，ME组与CL组比，LVEDD、LVESD、IVSS、IVSD、LVPWS、LVPWD、LVFS、LVEF差异显著(PO.01);TL与ME组比，LVEDD、LVESD、IVSS、IVSD、LVPWS、LVPWD、LVFS、LVEF差异显著(PO.01);CL组与SO组无明显差异(PX).05);ME组内比较显示术后1周、2周、4周LVEDD、LVESD、IVSS、IVSD、LVPWS、LVPWD、LVFS、LVEF进行性改变(P〈0.01)。结果表明，CME后左室功能进行性的降低，本发明药物治疗4周后明显减少左室功能恶化结果见表3。表3CME后超声心动图心功能指标改变及本发明药物治疗效果(i±S)时间组别LVEDD(mm)LVESD(mm)LVPWD(mm)LVPWS(mm)IVSD(mirOIVSS(mm)LVEF(0/0)LVFS(%)CL组4.8±0.52.1±0.43.5±0.24.3±0.42.1±0.34.4±0.591.1±7.662.9±5.6术SO组4.2±0.31.7±0.33.8±0.74.3±0.92.1±0.54.5±0.892.9±8.163.9±4.7前ME组4.2±0.61.7±0.63.8±0.94.1±0.62.0±0.24.5±0.793.7±7.361.0±4.5TL组4.6±0.82.0±0.44.0±0.74.2±0.72.4±0.34.6±0.594.3±6.959.2±5.1CL组4.1±0.42.0±0.23.4±0.64.2±0.52.3±0.64.3土0.692.0±6.160.5±4.94SO组4.5±0.62.2±0.83.9±0.54.2±0.82.3±0.74.3±0.490.4±7.660.3±5.7周ME组7.0±1.1*4.3±1.0*2.3±0.2*1.7±0.3*1.6±0.2*2.5±0.3*49.5±3.1*22.6±2.7*TL组4.6±0.8#2.1±0.2#4.0±1.1#3.5±0.9#2,1±0.2#4.1±0.9#82.1±7.2#48.6士4.1#注承与SO组比较，PO.01;弁与ME组比较，PO.01154.4心肌细胞凋亡检测方法与指标4.4.1免疫组化检测术后28天，CL组、SO组、ME组和TL组心肌细胞Rapol分别是(1.33±0.31)%、(1.48±0.41)%、(5.17±0.44)%和(3.02±0.25)%;与CL组比，ME组Rapol显著增高(PO.01);CL组与SO组比，Rapol无明显差异(PX).05);TL组与ME组比，TL组Rapol显著降低(PO.Ol)。说明本发明药物治疗28天可显著减少心肌细胞凋亡。术后28天，CL组、SO组、ME组和TL组外膜区心肌细胞Rapol分别是(1.59±0.42)%、(1.46±0.38)%、(1.61±0.32)%和(1.53±0.09)%;各组外膜区Rapol无明显差异(PX).05)。CL组、SO组、ME组和TL组心内膜区Rapol分别是(1.45±0.37)%、(1.57±0.43)°/o、(6.43±0.31)%和(3.61±0.27)%;与CL组比，ME组心内膜区心肌细胞Rapol显著升高(PO.01);与ME组比，TL组心内膜区心肌细胞Rapol显著低于ME组(PO.Ol)。总结果表明，CME后心内膜区caspase-3表达及心肌细胞凋亡明显高于外膜区；本发明药物治疗28天显著减少caspase-3表达及心肌细胞凋亡，结果见表4。表4各组及各组外膜和内膜区Rapol和本发明药物治疗效果(7士S)组别28天Rapol(%)内膜区Rapo1(。/。)外膜区Rapol(%)CL组1.33±0.311.45±0.371.59±0.42SO组1.48±0.411.57±0.431.46±0.38ME组5.17±0.44*6.43±0.31*1.61±0.32TL组3.02±0.25#3.61±0.27#_1.53±0.09注承与SO组比较，PO.01;存与ME组比较，PO.014.4.2原位末端标记(TUNEL)检测结果术后28天，CL组、SO组、ME组和TL组Rapo2分别是(1.51±0.27)%、(1.56±0.37)%、(4.88±0.29)%和(2.15±0.18)%;与CL组比，ME组Rapo2明显升高(PO.01);CL组与SO组比，Rapo2无明显差异(PX).05);与ME组比，TL组Rapo2明显降低(PO.Ol)。说明本发明药物治疗28天显著减少心肌细胞凋亡。组外膜区Rapo2分别是(1.58±0.26)%、(1.51±0.24)%、(1.53±0.16)%和(1.47±0.10)%;各组外膜区Rapo2无明显差异(PX).05)。CL组、SO组、ME组和TL组心内膜区Rapo2分别是(1.59±0.22)%、(1.55±0.21)%、(10.21±0.51)%和(3.37±0.15)0/0;与CL组比，ME组心内膜区Rapo2明显升高(PO.01);与ME组比，TL组心内膜区Rapo2显著降低(PO.Ol)。总结果表明，CME后心内膜区心肌细胞凋亡明显高于外膜区，本发明药物治疗28天显著减少心肌细胞凋亡，结果见表5。表5各组及各组外膜和内膜区Rapo2和本发明药物治疗效果(i±S)组别28天Rapo2(。/。)内膜区Rapo2(。/。)外膜区Rapo2(%)CL组1.51±0.271.59士0.221.58±0.26SO组1.56±0.371.55±0.211.51±0.24ME纟且4.88±0.29*10.21±0.51*1.53±0.16TL组2.15±0.18#3.37±0.15#_1.47±0.10注承与SO组比较，PO.01;存与ME组比较，PO.014.5VDI因子染色观察心肌细胞内小冠脉密度术后28天，CL组、SO组、ME组和TL组Nmv分别是4.47±1.37根/mm2、4.21±1.29根/mm2、1.18±0.36根/mm2、2.88±0.56根/mm2。与CL组比，ME组心肌Nmv显著减少(PO.01);与ME组比，TL组心肌Nmv显著增高(PO.01);CL组与SO组比Nmv无明显差异(PX).05)。结果表明，大鼠CME后慢性过程中心肌内微血管床密度的减少；本发明药物治疗28天可显著增加心肌内微小冠脉数量，结果见表6。表6CME后心肌内微小冠脉密度变化及本发明药物治疗效果(7±S)组别28天Nmv(根/mm2)CL组4.47±1.37SO组4.21±1.29廳组1.18±0,36*TL组2.88±0.56#:承与SO组比较，PO.01;存与ME组比较，PO.015结论冠脉微栓塞后，因心肌细胞凋亡、间质微血管丢失及胶原纤维增殖产生心肌和心功能的损害，本发明药物降低心肌细胞凋亡、减少心肌微小血管丢失及抑制间质胶原纤维增生，减少心肌损害，进而可改善心功能，可有效治疗冠脉微栓。实验例2:1资料与方法1.1一般资料共观察60例，随机分为治疗组和对照组。治疗组30例，男18例，女12例，年龄46-72岁，平均年龄59.6士5.3岁；对照组30例，男11例，女19例；年龄45-73岁，平均年龄58.5±5.1岁。1.2诊断及排除标准经颅彩色多谱勒(TCD)检测颅内微栓子(MES)阳性患者；缺血性脑卒中诊断符合全国脑血管病学术会议修订的诊断标准[全国脑血管病学术会议.各类脑血管疾病诊断要点.中华神经科杂志，1996，29(6):379.]，并经头颅CT(和/或)MRI证实,排除心源性脑栓塞、脑动脉炎、血液系统疾病等其他原因引起的脑梗死。2方法2.1治疗方法对照组急性期给予低分子肝素钠，每次4250-6400IUaXa，皮下给药，每天两次，急性期过后给予阿司匹林肠溶片，每次50mg，口服，每日一次，同时给予对症治疗，治疗组在对照组给药的基础上加用本发明药物，每次3粒，每日3次，两组疗程均为4周。2.2观察指标及方法60例患者治疗前进行均常规做TCD检测。方法如下用2MHz探头和spencer监护头架固定两侧颞窗，同步探测左、右MCA，显示左右4个不同深度位点频谱，选择频谱清晰的两个位点，相邻两位点距离相差4mm以上，打开栓子自动记录及4个位点的血流速度曲线开关，关掉伪迹开关，栓子记录可靠度定为75%，每个患者监测3060min，一般为40min。栓子监测系统将自动记录下栓子总数及每一个栓子的可靠度、强度、速度、持续时间、位置等并在离线状态下加以人工识别真伪栓子，标准采用第九届国际脑血液动力学会议制订的MES识别标准[ConsensusCommitteeofthe9thInternationalCerbralHemodynamicSymposium.BasicidentificationcriteriaofDopplermicroembolicsignals[J].Stroke,1995,26(6):923-925.]。在治疗2周后和4周后再做同样的TCD检测，观察MES阳性率的变化。所有患者随访l年，记录脑梗死的复发率。2.3统计分析采用SPCS10.0统计软件，计数资料用f检验，P<0.05差异具有显著性。3治疗结果3.1MES阳性率的变化治疗组和对照组的MES阳性率在治疗2周后出现显著性差异，治疗组在治疗两周后MES阳性率显著低于对照组，结果见表7表7两组治疗后MES阳性数结果N(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注*与对照组比较？<0.053.2两组随访结果对照组1年内复发脑梗死为6例，治疗组无一例复发，可见本发明药物可有效治疗颅内微栓子。3.3不良反应检测治疗组发现出血倾向3例，胃肠道反应2例，对照组发现出血倾向2例，胃肠道反应2例，经统计两组不良反应无显著性差异。4.结论本发明药物对于颅内微栓子疗效确切，可有效清除颅内微栓子，降低脑梗死的复发率，并且不会增加出血倾向等不良反应发生率。权利要求1.一种中药组合物在制备治疗血管微栓塞的药物中的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制成人参3-10水蛭3-11土鳖虫5-10乳香(制)1-5赤芍3-9降香1-5檀香1-5全蝎3-9蝉蜕3-12蜈蚣1-3冰片1-7酸枣仁(炒)3-10。2.如权利要求l所述的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制成人参6水蛭10土鳖虫7乳香(制)2赤芍5降香2檀香2全蝎7蝉蜕7蜈蚣1冰片5酸枣仁(炒)5。3.如权利要求l所述的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制成人参10水蛭8土鳖虫7乳香(制)2赤芍5降香2檀香2全蝎9蝉蜕7蜈蚣1冰片5酸枣仁(炒)5。4.如权利要求l所述的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制成人参6水蛭11土鳖虫7乳香(制)2赤芍5降香2檀香2全蝎3蝉蜕7蜈蚣1冰片5酸枣仁(炒)5。5.如权利要求l-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的活性成分由下列成分组成a平均粒径小于100pm的全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫、蝉蜕及乳香(制)药粉；b冰片药粉；c由降香和檀香提取的挥发油；d人参用乙醇提取后的醇提液经浓縮后的醇提浸膏；e提取成分c后的降香和檀香药渣的水提液、赤芍和酸枣仁(炒)加水煎煮后的水提液以及提取成分d后的人参药渣的水提液过滤、混匀后浓縮成的水提浸膏。6.如权利要求l-4中任一项所述的应用，其特征在于，该中药组合物作为活性成分的药物制剂为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂。7、如权利要求l-4中任一项所述的应用，其特征在于，该中药组合物在制备治疗冠脉微栓塞的药物中的应用。8、如权利要求l-4中任一项所述的应用，其特征在于，该中药组合物在制备治疗颅内微栓子的药物中的应用。全文摘要本发明公开了一种中药组合物在制备治疗血管微栓塞的药物中的应用。本发明中药组合物由人参、水蛭、蜈蚣、全蝎、土鳖虫、蝉蜕、赤芍、冰片等组成，具有益气活血、化瘀通络的功效。本发明中药组合物对于治疗血管微栓塞有显著疗效，通过临床试验证明该药物组合物治疗血管微栓塞安全有效，且未发现不良反应。文档编号A61K36/725GK101632726SQ20081005543公开日2010年1月27日申请日期2008年7月21日优先权日2008年7月21日发明者安军永,李向军,超王,郑立发申请人:河北以岭医药研究院有限公司