专利名称：：7-氢氧基-星状孢子素在制备治疗病毒性肝炎的药物中的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及7-氢氧基-星状孢子素(UCN01)在制备治疗病毒性肝炎的药物中的用途，属于医药领域。
背景技术：
：乙肝病毒(HBV)本身不能直接引起肝细胞病变，而肝炎的发病(即肝组织的坏死和炎症)是由于HBV感染后启动人体免疫清除过程的结果。如果人体的免疫机制不能及时清除HBV在体内的持续存在和活跃复制，必将导致肝组织损伤的不断进展。因此，要想阻止肝脏的进行性损害，必须采取有效药物清除或抑制HBV的复制，也就是说，抗病毒治疗是控制慢性乙型肝炎关键措施。目前国内外抗HBV(乙型肝炎病毒)的主要药物为干扰素，它的免疫调节作用可导致感染的肝细胞破坏，从而达到清除病毒的目的。干扰素的有效率为30-60%，但对于重症肝炎等肝细胞很少的患者不推荐使用。另外一类抗病毒药物为核苷类似物，主要针对病毒逆转录酶，现在正在进行临床I、II期实验的拉美氟啶对于免疫耐受的HBV携带者有效，但停药后HBVDNA水平又升高，长期用药病毒易产生耐药变异。7-hydroxy-staurosporine(7-氢氧基-星状孢子素，UCN01)是国外近几年开发的抗肿瘤新药，目前美国已进入I期临床试验。它是细胞节点激酶1的抑制剂，能够去除G2期阻滞，导致细胞凋亡增加,降低细胞存活率，增加DNA杀伤药物的毒性。国内外未有UCNOl在乙型肝炎治疗中的报道。
发明内容本发明要解决的技术问题是提供UCN01用于制备治疗病毒性肝炎的药物的用途。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案UCN01用于制备治疗病毒性肝炎的药物的用途，所述病毒性肝炎包含但不限于乙型肝炎(即由HBV感染引起的肝炎)。UCN01用于制备抗乙型肝炎病毒的药物的用途。本研究意想不到地发现UCNOl可以显著的抑制细胞分泌乙肝表面抗原，这个结果目前国内外没有类似的报道，所以UCN-01可以开发制成抗肝炎类治疗药物。一种抗乙肝病毒的药物，含有活性组分UCNOl。所述药物是以UCN01为活性组分的制剂，既包括将UCN01作为唯一活性组分也包括将UCN01作为部分活性组分的情况。所述制剂为口服制剂或静脉给药制剂。所述口服制剂为片剂。所述静脉给药制剂为水针剂或粉针剂。该制剂可制成普通片剂、普通胶囊、颗粒剂、缓释片剂、舌下含片、口腔速崩片、分散片、肠溶片、肠溶胶囊、延迟释放片、定时/位释放片、缓释胶囊、控释胶囊、含有微丸或小片的胶囊、含有微丸或小片的pH依赖型胶囊、颗粒剂、口服液、等剂型。该制剂中还含有药剂学可接受的载体，可制成普通口服制剂，包括普通片剂、普通胶囊、颗粒剂等，制成片剂时所述药学上可接受的载体包括有助于将活性化合物配制成药用制剂的赋形剂和辅药，如淀粉、微晶纤维素、无机盐类、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠等的一种或几种物质的组合物，属于本领域常识。该制剂中还含有药剂学可接受的载体，可制成缓释片剂，包括赋形剂和辅料等。所述的赋形剂和辅料包括起缓释作用的辅料为羟丙甲纤维素和/或乙基纤维素和/或聚丙烯酸树脂类和/或聚羧乙烯类和/或海藻酸的可溶性/不溶性盐和/或其它起缓释作用的辅料，羟丙甲纤维素采用内含羟丙甲基纤维素(HPMC)的各种商品如各种规格的美多秀(Methocel)，乙基纤维素采用内含乙基纤维素(EC)的各种商品，聚丙烯酸树脂类采用内含聚丙烯酸树脂n、m类或类似物如各种规格的丙烯酸树脂(Eudragit)。上述的辅料为致孔剂、粘合剂、润滑剂、乳化剂、膜材料、溶剂或其它辅料，致孔剂可采用蔗糖、甘露醇、淀粉、滑石粉、二氧化硅等；粘合剂可采用聚乙烯吡咯烷酮、羟丙甲纤维素等；润湿剂可釆用水、无水乙醇、各种浓度的乙醇-水溶液；润滑剂可采用硬脂酸、硬脂酸镁、滑石粉、淀粉、石蜡等；增溶剂可采用酒石酸、柠檬酸等；乳化剂可采用span8(Aspan85等；膜材料可采用聚乙烯醇、羟甲纤维素、羟乙纤维素、羟乙甲纤维素、甲基纤维素等；发泡剂可采用碱式碳酸镁、碳酸氢钠等；助漂剂可采用十六醇、十八醇、蜂蜡等；溶剂可采用无水乙醇、乙醇、水等。该制剂中还含有药剂学可接受的载体，可制成控释片剂，包括活性药物及起控释作用的辅料。上述起控释作用的辅料为聚氧乙烯和/或羟丙甲纤维素和/或乙基纤维素和/或氯化钠和/或乳糖和/或甘露醇和/或果糖和/或葡萄糖和/或蔗糖/或低取代羟丙基纤维素和/或交联羧甲基纤维素钠和/或交联聚乙烯吡咯烷酮和/或醋酸纤维素。上述的辅料为药物载体、膨胀材料、助渗剂、增溶剂、粘合剂、润湿剂、润滑剂、着色剂、致孔剂、膜材料、抗粘剂、增塑剂、避光剂、溶剂。药物载体、膨胀材料可采用聚氧乙烯、羟丙甲纤维素、乙基纤维素、山嵛酸甘油酯类等；助渗剂可采用氯化钠、乳糖、甘露醇、果糖、葡萄糖、蔗糖等；增溶剂可采用十二垸基硫酸钠或泊洛沙姆等；粘合剂可采用聚乙烯吡咯烷酮、羟丙甲纤维素等；润湿剂可采用水、无水乙醇、各种浓度的乙醇-水溶液；润滑剂可采用硬脂酸、硬脂酸镁、滑石粉、淀粉、石蜡等；着色剂可采用氧化铁红、氧化铁黄等；致孔剂可采用蔗糖、甘露醇、聚乙二醇、二氧化钛、滑石粉、二氧化硅等；膜材料可采用醋酸纤维素、乙基纤维素等；溶剂可采用丙酮、无水乙醇、乙醇、水等。该制剂中还含有药剂学可接受的载体，可制成舌下含片、口腔速崩片或分散片等，包括赋形剂和辅料等。所述的赋形剂和辅料有低取代羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联羧甲纤维素钠、交联聚乙烯吡咯垸酮、处理琼脂以及甘露醇、乳糖等。该制剂中还含有药剂学可接受的载体，可制成肠溶片或肠溶胶囊等，包括赋形剂和辅料等，所述的赋形剂和辅料有淀粉、微晶纤维素、无机盐类、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚丙烯酸树脂类、聚羧乙烯类、海藻酸的可溶性/不溶性盐类、十八醇、十八酸、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠等的一种或几种物质的组合物，肠溶包衣材料包括虫胶、醋酸纤维素酞酸酯、丙烯酸树脂类(如EudragitL和S型等)、聚醋酸乙烯苯二甲酸酯、邻苯二甲酸羟丙甲纤维素酯、琥珀酸醋酸羟丙甲基纤维素，以及增塑剂(如邻苯二甲酸二乙酯、聚乙二醇、丙二醇、甘油三乙酸酯、邻苯二甲酸二甲酯、癸二酸二丁酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯、乙酰基柠檬酸三乙酯、蓖麻油和各种百分比的乙酰化单酸甘油酯等)与致孔剂(如PEG6000等)等多种药剂学辅料。该制剂中还含有药剂学可接受的载体，可制成延迟释放片或定时(位)释放片，包括赋形剂和辅料，所述的赋形剂和辅料有淀粉、微晶纤维素、无机盐类、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚丙烯酸树脂类、聚羧乙烯类、海藻酸的可溶性/不溶性盐类、十八醇、十八酸、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、半胱氨酸、拧檬酸和亚硫酸钠等的一种或几种物质的组合物，所述的起延迟释放或定时(位)释放的包衣材料包括虫胶、醋酸纤维素酞酸酯、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、丙烯酸树脂类(如EudragitL和S型等)、聚醋酸乙烯苯二甲酸酯、邻苯二甲酸羟丙甲纤维素酯、琥珀酸醋酸羟丙甲基纤维素、醋酸羟丙基甲基纤维素酞酸酯、以及增塑剂(如邻苯二甲酸二乙酯、聚乙二醇、丙二醇、甘油三乙酸酯、邻苯二甲酸二甲酯、癸二酸二丁酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯、乙酰基柠檬酸三乙酯、蓖麻油和各种百分比的乙酰化单酸甘油酯等等)与致孔剂(如PEG6000等)等多种药剂学辅料。该制剂中还含有药剂学可接受的载体，可制成缓释胶囊、控释胶囊，含有微丸或小片的胶囊，含有微丸或小片的pH依赖型胶囊等，包括赋形剂和辅料，所述的赋形剂和辅料有淀粉、微晶纤维素、无机盐类、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚丙烯酸树脂类、聚羧乙烯类、海藻酸的可溶性/不溶性盐类、十八醇、十八酸、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠等的一种或几种物质的组合物，包衣材料包括虫胶、醋酸纤维素、醋酸纤维素酞酸酯、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、丙烯酸树脂类(如Eudragit系列)、聚醋酸乙烯苯二甲酸酯、邻苯二甲酸羟丙甲纤维素酯、琥珀酸醋酸羟丙甲基纤维素、醋酸羟丙基甲基纤维素酞酸酯、单硬酯酸甘油脂、以及增塑剂(如邻苯二甲酸二乙酯、聚乙二醇、丙二醇、甘油三乙酸酯、邻苯二甲酸二甲酯、癸二酸二丁酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯、乙酰基柠檬酸三乙酯、蓖麻油和各种百分比的乙酰化单酸甘油酯等等)与致孔剂(如PEG6000等)等多种药剂学辅料。本发明的优点是本发明开发了一种专门针对乙肝病毒复制的新的药物靶点，这种药物可以抑制所有肝炎类病毒的复制，从体外抗病毒模型HepG22,2,15实验结果来看，与现有的抗病毒药物如干扰素和拉米夫定相比，本药物的抗病毒效果更好。下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步说明，并非对本发明的限制。凡是依照本发明公开内容所做的任何本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。图1为UCN01抑制乙肝病毒的复制结果。具体实施例方式实施例hUCN01抑制HBVDNA的复制一.材料细胞培养板等耗材均购自华美公司HL7702细胞购自中科院上海生化所细胞保存中心乙肝病毒阳性血清由武警总医院检验科提供，经荧光定量PCR检测血清的HBVDNA滴度为5X107UCN01购自SIGMA公司乙肝病毒DNA检测试剂盒购自北京东胜生物有限公司二.方法1.乙肝病毒感染HL7702细胞HL7702细胞转至6CM平板后24小时进行HBV感染试验，试验分为未加药物对照组以及药物处理组，对照组加入含30%乙肝病毒阳性血清的FCS/DMEM，药物处理组感染后加入50nM的UCN01，于9小时，24小时，48小时后用PBS清洗，共洗8次后收集细胞煮沸5分钟裂解后用于荧光定量PCR检测。2.荧光定量PCR:样品上样后准备SDS-PAGE电泳，电泳后转膜，用5%脱脂奶粉PBST封闭1小时，加入一抗在摇床上轻摇1小时过夜，PBST洗三次，每次5min，然后加入二抗在摇床上轻摇1小时，PBST洗三次，每次5min，加入ECL(WesternBlotECL超敏发光液)中的A液和B液，曝光后进行曝显影，定影。三.结果图1显示，UCN01处理后再进行乙肝病毒的感染，发现HBVDNA病毒的复制在UCN01药物处理组明显受到抑制。结论UCN01可以抑制HBV病毒的复制。实施例2:UCN01可以抑制HepG22,2,15细胞分泌乙肝表面抗原一.材料UCNOl，购自SIGMA公司FBS胎牛血清，购自杭州四季青DMEM培养基，购自GIBCOL公司HepG2-2,2,15，是由高肝癌细胞HepG2衍生而来的稳定支持HBV复制、组装和分泌的细胞系，是本领域研究HBV细胞内活动过程和HBV对宿主细胞作用的常规细胞模型(购于北京医科大学人民医院病毒室)Y-干扰素，购自三元基因拉咪呋叮，购自嘉事堂药店乙肝表面抗原与核心抗原诊断试剂盒，购自华美生物工程公司二.方法以HepG22,2,15为细胞模型，将细胞以3XloVcm2接种于24孔培养板，每孔加入含10。/。FBS的DMEMlml，次日移除上述培基，每孔加入含5。/。FBS的DMEM培养基lml;实验组分别加入不同浓度的阳性对照IFN-r以及不同浓度的UCNOl，阴性对照组不加药物。每组设3个复孔。每3d收集培养上清待测HBsAg定量检测。乙肝病毒表面(核心)抗原的检测各取50ul培养液加入表面抗原的96孔板中，再加入50iU相应的酶标结合物，37。C孵育lh。相应洗液洗板5次，再依次加入50ul显色液A及50ul显色液B，37。C避光显色15min，最后加入50iU终止液。在多标记酶联免疫检测仪(VIC2TORTMWallac1420MultilabelCounter,Wallac)上测定450nm处吸光值A。三.结果细胞加入50nM的UCN01后不同时间收样，进行荧光定量PCR的检测，见表l。细胞加入药物后不同时间收集上清利用表面抗原检测试剂盒检测表面抗原的分泌量，抑制率二(对照孔吸光值A—实验组吸光值A)/对照组吸光值A。表l:UCN01可以抑制细胞分泌乙肝表面抗原<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表1显示，UCN01可以抑制HepG22,2,15细胞分泌乙肝表面抗原，随着药物作用时间的推移，这种抑制作用逐渐增强，低浓度(20nM)至第12天后的抑制率超过15%以上。高低浓度(150nM)至第12天后的抑制率超过30%以上。150pM拉咪夫定的平均抑制作用为30%，500IUi干扰素的平均抑制作用为15%。结论UCN01在实验浓度下可抑制HepG22,2,15细胞表面抗原的表达。权利要求1.UCN01用于制备治疗病毒性肝炎的药物的用途。2.根据权利要求1所述的UCNOl用于制备治疗病毒性肝炎的药物的用途，其特征在于所述肝炎为乙型肝炎。3.UCNOl用于制备抗乙型肝炎病毒的药物的用途。4.一种抗乙型肝炎病毒的药物，其特征在于活性组分包含UCNOl。5.根据权利要求4所述的抗乙型肝炎病毒的药物，其特征在于所述UCNOl为唯一活性组分或部分活性组分。6.根据权利要求4或5所述的抗乙型肝炎病毒的药物，其特征在于所述制剂为口服制剂或静脉给药制剂。7.根据权利要求6所述的抗乙型肝炎病毒的药物，其特征在于所述口服制剂为片剂。8.根据权利要求6所述的抗乙型肝炎病毒的药物，其特征在于所述静脉给药制剂为水针剂或粉针剂。全文摘要本发明公开了7-氢氧基-星状孢子素在制备治疗病毒性肝炎的药物中的用途，属于医药领域。UCN01用于制备治疗病毒性肝炎的药物的用途。本发明的优点是本发明开发了一种专门针对乙肝病毒复制的新的药物靶点，这种药物可以抑制所有肝炎类病毒的复制，从体外抗病毒模型HepG22，2，15实验结果来看，与现有的抗病毒药物如干扰素和拉米夫定相比，本药物的抗病毒效果更好。文档编号A61P31/00GK101366718SQ200810056490公开日2009年2月18日申请日期2008年1月18日优先权日2008年1月18日发明者湘何,侯宁波,张艳红,帆赵,辉钟,马清钧申请人:中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所