专利名称：：苏木水提取液制备方法及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种以中药为原料制备水提取液的方法，具体为一种苏木水提取液制备方法及其应用。
背景技术：
：苏木(别名戈梅芳、苏枋、苏方、苏方木、棕木、赤木、红柴)为豆科云实属植物苏木CaesalpiniasappanL.的干燥心材。四季皆收，但以秋天为好。伐取树干或粗枝，削去外皮和边材白木，取中间紫红或红黄色心材，放通风处阴干即可。苏木分布于广西、广东、台湾、贵州、云南、四川等地。药用苏木含有巴西苏木素(brasilin)，巴西苏木红素(brasilein)等多种成分。我国古代对苏木的临床应用有许多论述。《唐本草》记载主破血，产后血胀闷欲死者。《海药本草》记载主虚劳血癖气壅滞；产后恶露不安，腹中搅痛；及经络不通，男女中风，口噤不语。宜细研乳头香细末方寸匕，酒煎苏方去滓调服，立吐恶物瘥。《日华子本草》记载治妇人血气心腹痛，月候不调及蓐劳。排脓止痛，消痈肿扑损瘀血，女人失音，血噤，赤白痢并后分急痛。《医林纂要》记载补心散瘀，除血分妄作之风热。《用药心法》记载苏木，去风与防风同用。《本草纲目》记载苏木具有"破血，排脓止痛"的功效。《本草求真》记载苏木，功用有类似红花，少用则能和血，多用则能破血。但红花性微温和，此则性微寒凉也。故凡病因表里风起，而致血滞不行，暨产后血晕胀满以(欲)死，及血痛血瘕、经闭气壅、痈肿、跌扑损伤等症，皆宜相症合以他药调治。目前对苏木的研究成果比较多，例如专利号为20041000047593公开的一种苏木提取物的新用途，该专利提供了一种苏木提取物的制备方法，主要特点是用乙醇回流提取，并指出该提取物能够治疗脑血流供应不足所引起的疾病。专利号2004100441119公开了一种苏木乙酸乙酯提取物及其作用的专利申请，并指出了该提取物能够显著消除器官移植产生的排异反应，该提取物也是利用了一些传统的提取方法，例如煎煮法、超声振荡提取法、渗漉法、超临界淬取法等。相关的对于苏木医疗作用研究的文章也很多。
发明内容本发明为为了解决中药苏木的开发利用的问题而提供了一种苏木水提取液制备方法及其应用。本发明是由以下技术方案实现的，一种苏木水提取液制备方法，包括以下步骤-(1)、称中药苏木加4-7倍水，煎煮30-60min，收集上清液；具有最佳效果的数据为加5倍水，煎煮40min,(2)、重复上述第(1)步，合并上清液，对上清液离心，再取离心后得到的上清液浓縮到浓度为l-2g/ml;最佳数据为lg/ml，(3)、对上步骤浓縮后得到的浓縮液离心，分二次进行超滤，孔径相对分子量分别为6k和3k，收集过滤液，合并。此法比水提醇沉，或醇提水沉等中药传统提取方法可较多地保留有效成分。(4)、在合并过的滤液中加入滤液质量0.1-0.5%的蛋白质(Albumin),在50-60°C,10-20min条件下充分反应。其主要目的是消除水提取液中残留的微量杂质。最佳数据为0.2%的蛋白质(Albumin),在56。C，15min条件下充分反应。(5)、超滤，孔径相对分子量分别为3k，收集过滤液。(6)、调pH值，灭菌，得到苏木水提取液。本发明所述方法得到的苏木水提取液对治疗腹水瘤和白血病效果显著，见表1和图1，以下为治疗效果统计，表l表1CAE提取液对H22肝癌腹水瘤的治疗作用<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>实验小鼠H22肝癌腹水瘤采用腹腔接种，1X10S个细胞/只，24h后分别经静脉和腹腔给药，每种途径以50，100mg'kg-l'd-l，剂量，连续给药7d。对照组注射相同体积的生理盐水，观察各组荷瘤小鼠生存时间，重复实验2次，观察60d，超过60d按60d计算。分别计算用药组的生命延长率。从表1可见腹腔治疗腹水瘤小鼠其生命延长率可达193.4%。将K562(人红髓白血病细胞株)悬液调整为lXl(^个细胞/ml，加入24孔培养板中，1000ul/L。再将不同浓度的苏木提取液加入到细胞悬液中，lOOul/孔。对照组每孔加lOOul生理盐水，混匀，放人37。C，5%<:02培养箱中培养36h。收集细胞，加人适量PBS离心洗1次。样本细胞中加入5ulrhAnnexinV-PE，混匀，在室温避光放置20min，再加人适量PRS离心洗1次，弃上清。沉淀中加入PBS液500ul，混匀。lh内流式细胞仪测定。如图l所示意的结果表明，苏木水提取液可在36小时内杀死99.6%的癌细胞。以上动物和细胞实验证实，本发明所述方法得到的苏木提取液能够应用于制备治疗腹水瘤和白血病的药物，具有开发前景。综上所述，与现有传统制备苏木提取液的方法相比，本发明的技术特点-1、采用超滤法制备中药提取液可以最大限度截留苏木中的有效成份和降低有效成分的损失。2、采用蛋白质纯化法可以除去溶液中微量杂质，是提取物的有效成分更为集中而且效果显著。图1表示不同浓度苏木液对K562细胞毒作用具体实施例方式实施例1一种苏木水提取液制备方法，包括以下步骤(1)、称中药苏木加5倍注射用水，煎煮40min，收集上清液；(2)、重复上述第(1)步，合并上清液，对上清液3500r离心30min，再取上清液浓縮到浓度为lg/ml;(3)、对上步骤浓縮后得到的浓縮液3500r离心30min，分二次进行超滤，孔径相对分子量分别为6k和3k，收集过滤液，合并。此法比水提醇沉，或醇提水沉等中药传统提取方法可较多地保留有效成分。(4)、在合并过的滤液中加入0.2%的蛋白质(Albumin),在56。C，15min条件下充分反应。其主要目的是消除水提取液中残留的微量杂质。(5)、超滤，孔径相对分子量分别为3k，收集过滤液。(6)、调pH6，IO(TC灭菌，得到苏木水提取液。实施例2，一种苏木水提取液制备方法，包括以下步骤(1)、称中药苏木加4倍注射用水，煎煮30min，收集上清液；(2)、重复上述第(1)步，合并上清液，对上清液3500r离心30min，再取上清液浓縮到浓度为2g/ml;(3)、对上步骤浓縮后得到的浓縮液3500r离心30min，分二次进行超滤，孔径相对分子量分别为6k和3k，收集过滤液，合并。此法比水提醇沉，或醇提水沉等中药传统提取方法可较多地保留有效成分。(4)、在合并过的滤液中加入0.5%的蛋白质(Albumin),在50'C,10min条件下充分反应。其主要目的是消除水提取液中残留的微量杂质。(5)、超滤，孔径相对分子量分别为3k，收集过滤液。(6)、调pH6，IO(TC灭菌，得到苏木水提取液。实施例3，一种苏木水提取液制备方法，包括以下步骤-(1)、称中药苏木加7倍注射用水，煎煮60min,收集上清液；(2)、重复上述第(1)步，合并上清液，对上清液3500r离心30min，再取上清液浓縮到浓度为1.5g/ml;(3)、对上步骤浓縮后得到的浓縮液3500r离心30min，分二次进行超滤，孔径相对分子量分别为6k和3k，收集过滤液，合并。此法比水提醇沉，或醇提水沉等中药传统提取方法可较多地保留有效成分。■(4)、在合并过的滤液中加入0.1%的蛋白质(Albumin),在60。C，20min条件下充分反应。其主要目的是消除水提取液中残留的微量杂质。(5)、超滤，孔径相对分子量分别为3k，收集过滤液。(6)、调pH6，IO(TC灭菌，得到苏木水提取液。权利要求1、一种苏木水提取液制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)、称中药苏木加4-7倍水，煎煮30-60min，收集上清液；(2)、重复上述第(1)步，合并上清液，对上清液离心，再取离心后得到的上清液浓缩到浓度为1-2g/ml；(3)、对上步骤浓缩后得到的浓缩液离心，分二次进行超滤，孔径相对分子量分别为6k和3k，收集过滤液，合并；(4)、在合并过的滤液中加入滤液质量0.1-0.5％的蛋白质(Albumin)，在50-60℃，10-20min条件下反应；(5)、超滤，孔径相对分子量分别为3k，收集过滤液；(6)、调pH值，灭菌，得到苏木水提取液。2、根据权利要求1所述的苏木水提取液制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)、称中药苏木加5倍水，煎煮40min，收集上清液；(2)、重复上述第(1)步，合并上清液，对上清液离心，再取离心后得到的上清液浓縮到浓度为lg/ml;(3)、对上步骤浓縮后得到的浓縮液离心，分二次进行超滤，孔径相对分子量分别为6k和3k，收集过滤液，合并；(4)、在合并过的滤液中加入滤液质量0.2%的蛋白质(Albumin)，在56'C，15min条件下反应；(5)、超滤，孔径相对分子量分别为3k，收集过滤液；(6)、调pH值，灭菌，得到苏木水提取液。3、根据权利要求1或2所述的苏木水提取液制备方法，其特征在于在步骤(2)中，对上清液3500r离心30min，在步骤(3)中对浓縮液3500r离心30min，在步骤(6)中调pH为6,IO(TC灭菌。4、根据权利要求1或2所述的苏木水提取液，其特征在于应用于制备治疗腹水瘤和白血病的药物。全文摘要本发明涉及一种以中药为原料制备水提取液的方法，具体为一种苏木水提取液制备方法及其应用。解决中药苏木的开发利用的问题。包括以下步骤称中药苏木加5倍水煎煮收集上清液；上清液浓缩到浓度为1-2g/ml；离心，超滤，收集过滤液，在滤液中加入蛋白质(Albumin)，充分反应，超滤，收集过滤液；调pH值灭菌，得到苏木水提取液。本发明的技术特点1.采用超滤法制备中药提取液可以最大限度截留苏木中的有效成分和降低有效成分的损失。2.采用蛋白质纯化法可以除去溶液中微量杂质，是提取物的有效成分更为集中而且效果显著。对治疗腹水瘤和白血病效果显著。文档编号A61K36/185GK101411739SQ20081007967公开日2009年4月22日申请日期2008年10月27日优先权日2008年10月27日发明者乔丽娟,史天良,张少云,徐建国,轲李,郭素堂申请人:山西省肿瘤医院