专利名称：：NF-κB抑制剂在治疗逆转录病毒感染的应用的制作方法
技术领域：
：本发明属于化学合成物在治疗疾病中的应用领域，特别涉及利用抑制NF-kB的功能的化学合成物在治疗和防治哺乳动物的病毒性疾病，癌症，慢性炎症和自身免疫性疾病中的应用。
背景技术：
：NF-kB是一重要的转录因子，在调节免疫系统和其他非免疫系统的基因表达中起着重要的作用。激活的NF-kB可调节以下基因的表达，如cytokines,生长因子，T-细胞受体，B-细胞受体，肿瘤坏疽因子阿尔发受体，CD40,BAFF-BAFF受体，淋巴毒素-贝它受体(lymphotoxin-betarec印tor)，和Toll/白细胞介素(interleukin-l)受体。调节NF-kB的活性发生在几个层面，包括控制NF-kB细胞质-细胞核的穿梭及调控其转录活性。虽然NF-kB在维持细胞的许多功能中起着非常重要的作用。然而NF-kB能否作为有效的耙点来治疗疾病却未知。更无以NF-kB为靶点并应用其抑制剂来治疗目前尚无有效治疗方法的病毒性疾病，癌症，慢性炎症和自身免疫性疾病的先例。
发明内容本发明的目的是为多种疾病寻找新的有效药物，提出一种利用NF-kb抑制剂在治疗多种疾病上的应用，使用NF-kb抑制剂有效地抑制病毒感染和复制，尤其对人类免疫缺损病毒造成的艾滋病，和治疗人类癌症如乳腺癌，白血病，淋巴瘤，肺癌，皮肤癌，前列腺癌，肝癌，脑瘤，子宫颈癌，胰腺癌，以及消化道癌症包括胃癌和肠癌效果显著。本发明提出一种以NF-kB为耙点，使用NF-kB化合物抑制剂在治疗哺乳动物的病毒感染，癌症，慢性炎症和自身免疫性疾病的应用。所说的病毒感染为逆转录酶病毒造成的感染。所说的病毒感染为HIV(H画nImmunodeficiencyVirus)造成的艾滋病(AcquiredImmuneDeficiencySyndrome)。所说的癌症包括肺癌，乳腺癌，皮肤癌，肝癌，消化道癌(包括胃癌，肝癌，肠癌，和食道癌)，肾癌，前列腺癌，脑癌，子宫颈癌，胰腺癌，白血病，淋巴瘤，膀胱癌，鼻咽癌，骨癌，和内分泌肿瘤。所说的化合物抑制剂是喹唑啉衍生物。所说的化合物抑制剂是从由3-羟基-24-去甲基-2-酮-l(10)，3，5，7-木栓四烯-29-羧酸(南蛇藤醇)(Tripterin;Celastrol,Celastrusscandens),咖啡酸苯乙基酯(cape)(CaffeicAcidPhenethylEster),(E)3-[(4-甲基苯)磺酰]-2-丙烯腈(BAY说明书第2/6页11-7082)，7-甲氧基-5,11,12-三羟基-氧茚香豆素之中的任一种，或从它们组成的组群中选择的，及其衍生物或其可制药盐作为活性成分。本发明的特点及效果本发明首次以NF-kb为靶点，使用NF-kb抑制剂如喹唑啉衍生物，南蛇藤醇，咖啡酸苯乙基酯，通过对NF-kB转录因子的抑制来有效地抑制病毒感染和复制，尤其对人类免疫缺损病毒造成的艾滋病，和治疗人类癌症如乳腺癌，白血病，淋巴瘤，肺癌，皮肤癌，前列腺癌，肝癌，脑瘤，子宫颈癌，胰腺癌，以及消化道癌症包括胃癌和肠癌效果显著。本发明所述抑制NF-kB的功能的化学合成物及它们的衍生物可单独或联合现临床应用的疗法合并治疗多种疾病。其特点是高疗效和低毒性。图1为NF-icB抑制剂对逆转录酶病毒感染和复制的抑制。图2为NF-kB抑制剂对HIV病毒感染和复制的抑制。具体实施方式本发明结合附图及实施例详细说明如下本发明所述应用NF-kB抑制剂来治疗病毒性疾病，癌症，慢性炎症和自身免疫性疾病。所述的NF-kB抑制剤包括(一)6-氨基喹唑啉衍生物(quinazolinederitives),，.(二)3-羟基-24-去甲基-2-酮-1(10)，3，5，7-木栓四烯-29-羧酸(南蛇藤醇)(Tripterin;Celastrol,Celastrusscandens)(3-Hydroxy-24-nor-2-oxo-1(10),3,5，7-friedelatetraen-29-oicAcid)，(三)咖啡酸苯乙基酯(c邻e)(CaffeicAcidPhenethylEster)，(四)(E)3-[(4-甲基苯)磺酰]-2-丙烯腈(BAY11-7082)(7-Methoxy-5,11,12-trihydroxy-coumestan，(E)3-[(4-Methyiphenyl)sulfony1〗-2-propenenitrile)，(五)7—甲氧基-5,11,12-三羟基-氧茚香豆素(7-Methoxy-5,11，12-trihydroxy-coumestan)所述喹唑啉衍生物(quinazolinederitives)是具有以下结构式或在此基础上的衍生物及其可制药盐作为活性成分的化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>式中，R'代表OR2,取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂环芳基，取代或未取代的烃基，取代或未取代的链烯烃基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的苯氧基，取代或未取代的正-丁氧基，取代或未取代的正-戊氧基，取代或未取代的正-丙氧基，取代或未取代的异丙基，取代或未取代的正-己氧基同系物，取代或未取代的苄氧基，取代或未取代的吡啶甲氧基或喹啉甲氧基，取代或未取代的烯丙氧基，取代或未取代的炔丙氧基，或取代或未取代的乙氧基。R2是一个取代或未取代的具1-6碳的烷烃基，取代或未取代的2-6碳的烯烃基，取代或未取代的2-6碳的炔烃基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂环芳基，取代或未取代的芳烷基，或取代或未取代的杂环芳烷基。.上述代表性的喹唑啉衍生物是1、6-Amino-4-(4-phe^oxy)phe^ethyl^lmi^oqui^azoli^e-6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉2、6-Amino-4-(4-/rpentyloxy)phenethylaminoquinazoline.6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉3、6-Amino-4-(4-/Hiexyloxy)phenethylaminoquinazoline.6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉4、6-Amino-4-(4-/7~butoxy)phenethylaminoquinazoline.6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉5、6-Amino-4-(4-benzyioxy)phenethylaminoquinazoline.6-氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉6、6-Amino-4-[4-(2-pyridylmethyioxy)phenethy)aminoquinazoline.6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉7、4-(4-Allyloxy)phenethylamino-6-aminoquinazoline.4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉8、6-Amino-4-(4-p^opa^gyloxy)phenethylaminoqui^azoline6-氨基-4-(4-炔丙氧基)苯乙胺喹唑啉9、6-Amino-4-(4-ethoxy)phenethylaminoquinazoline.6-氨基-4-(4-乙氧基)苯乙胺喹唑啉10、6-Amino-4—(4-propoxy)phenethylaminoquinazoline.6-氨基-4-(4-丙氧基)苯乙胺喹唑啉11、6-Amino—4-(4-_z'5v7~propoxy)phenethylaminoquinazoline.6-氨基-4-(4-异丙氧基)苯乙胺喹唑啉该发明通过以下的应用实施例进行详细说明，所列举的实施例仅用于说明本发明的内容，不应被认为是本发明权利要求保护范围的限制。A、NF-kB抑制剤在病毒感染方面的用途及效果图1为NF-kB抑制剂对逆转录酶病毒感染和复制的抑制，图中，293T细胞在感染表达一绿萤光标记蛋白质(GFP)逆转录酶病毒前,用或不用1.5^M的6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹挫啉(如图中柱A)，6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉(如图中柱B),6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉(如图中柱C)，6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉(如图中柱D)，6-氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉(如图中柱E)，6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉(如图中柱F)，或4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6_氨基喹唑啉(如图中柱G)预处理30分钟。感染48小时后，用萤光显微镜对被感染显示绿萤光的细胞计数。根据3个独立的实验计算标准误差。图中，柱O为未经处理的情况。以下分别举例详细说明实施例1:用6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉抑制逆转录酶病毒感染和复制。293T细胞在感染表达一绿萤光标记蛋白质(GFP)逆转录酶病毒前，用或不用[1.5^M]]6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉处理30分钟。逆转录酶病毒按先前已知的方法(LuM.andShenkT.，JVirol.73(1):676-683,1999)制备。感染48小时后，用萤光显微镜观察细胞。只有被感染的细胞显示绿萤光。如图1柱A所示，与未处理的细胞相比，6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉抑制逆转录酶病毒对293T细胞的感染和病毒复制。定量数据说明6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉抑制了95%的病毒感染和复制。用6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉处理未导致明显的293T细胞死亡。实施例2:用6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉抑制逆转录酶病毒感染和复制293T细胞在感染逆转录酶病毒前用或不用[1.5pM]6-氮基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹挫啉预处理30分钟。48小时后，计数受感染细胞的数目。如图1柱B所示，与未处理的细胞相比，定量数据显示6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉抑制了98%的病毒感染和复制且无明显的细胞死亡。实施例3:用6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉抑制逆转录酶病毒感染和复制293T细胞在感染逆转录酶病毒用或不用[1.5^M]]6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉预处理30分钟。48小时后，计数受感染细胞的数,。如图1柱C所示，与未处理的细胞相比，定量数据显示6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯￡胺喹唑啉抑制了96%的病毒感染和复制且无明显的细胞死亡。实施例4:用6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉抑制逆转录酶病毒感染和复制293T细胞在感染逆转录酶病毒用或不用[1.5^M]]6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉预处理30分钟。48小时后，计数受感染细胞的数目。如图1柱D所示，与未处理的细胞相比，定量数据显示6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉抑制了93%的病毒感染和复制且无明显的细胞死亡。实施例5:用6-氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉抑制逆转录酶病毒感染和复制293T细胞在感染逆转录酶病毒前用或不用[1.5nM]]6-氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉预k理30分钟。48小时后，计数受感染细胞的数目。如图1柱E所示，与未处理的细胞相比，定量数据显示6-氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉抑制了90%的病毒感染和复制且无明显的细胞死亡。实施例6:用6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹哗啉抑制逆转录酶病毒感染和复制293T细胞在感染逆转录酶病毒用或不用[1.5pM]]6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉预处理30分钟。48小时后，计数受感染细胞的数目。如图1柱F所示，与未处理的细胞相比，定量数据显示6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉抑制了85%的病毒感染和复制且无明显的细胞死亡。实施例7:用4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉抑制逆转录酶病毒感染和复制293T细胞在感染逆转录酶病毒显示GFP前用或不用[1.5jaM]4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉预处理30分钟。48小时后，计数受感染细胞的数目。如图1柱G所示，与未处理的细胞相比，定量数据显示4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉抑制了88%的病毒感染和复制且无明显的细胞死亡。图2为NF-kB抑制剂对HIV病毒感染和复制的抑制，图中，293T细胞在感染表达一绿萤光标记蛋白质(GFP)HIV病毒前，用或不用6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉(柱A)，6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉(柱B)，6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉(柱C),6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉(柱D)，6-氨基_4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉(柱E)，6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉(柱F),或4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉(柱G)，南蛇藤醇(柱H)，或咖啡酸苯乙基酯(柱I)预处理30分钟。感染48小时后，用萤光显微镜对被感染显示绿萤光的细胞计数。根据3个独立的实验计算标准误差。图中，柱0是未经处理的情况。下面举例详细说明实施例8:用喹唑啉衍生物，南蛇藤醇和咖啡酸苯乙基酯抑制HIV感染和复制以VSV-G为包膜的表达荧光素酶的HIV病毒按先前描述的方法(Lietal.，2000;44:1019-25，Naldinietal.，93:11382-11388,1996)制备。293T细胞在感染HIV病毒前用6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉(1.5pM)(如图2中柱A),6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉(1.5nM)(如图2中柱B),6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉(1.5pM)(如图2中柱C)，6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉(1.5pM)(如图2中柱D),6_氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉(1.5pM)(如图2中柱E),6-氨基_4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉(1.5pM)(如图2中柱F),4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉(1.5^M)(如图2中柱G),南蛇藤醇(400nM)(如图2中柱H),..或咖啡酸苯乙基酯(5pg/ml)(如图2中柱I)预处理30分钟。如图2所示，所有试验的抑制剂抑制了HIV-l-引发荧光素酶活性。这意味着抑制了HIV-l病毒的感染和复制。实验用的剂量未发现明显的细胞死亡。B.NF-kB抑制剂在癌症治疗上的用途及效果实施例子9:喹唑啉衍生物在癌细胞生长和存活方面的作用。用5pM的6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉处理不同种类的4X1(T癌细胞并在第6天计数活细胞。不同种类的4X1(^癌细胞包括LNCAP人类前列腺癌细胞，MDA-MB-468人类乳腺癌细胞，H1299人类肺癌细胞，HT29人类肠癌细胞，AGS人类胃癌细胞，H印G2人类肝癌细胞，PANC-1人类胰腺癌细胞，Jurkat人类急性T-细胞白血病细胞，A431人类皮肤癌细胞，U251人类神经胶质瘤细胞，NBT-II人类膀胱癌细胞，和Hela海拉人类子宫颈癌细fe。如表1所示，未处理的癌细胞增生几倍，而用6-氨基_4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉处理的细胞生长被抑制了10-90%。根据3个独立的实验计算标准误差。表1:6~氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉对癌细胞生长和存活的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表1列出的细胞也用其他喹唑啉衍生物包括6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉，6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉，6-氨基-4-(4_正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉，6-氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉，6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉，4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉,6-氨基-4-(4-炔丙氧基)苯乙胺喹唑啉，6-氨基-4-(4-乙氧基)苯乙胺喹唑啉，6-氨基-4-(4-丙氧基)苯乙胺喹唑啉，6-氨基-4-(4-异丙氧基)苯乙胺喹唑啉的喹唑啉衍生物进行处理。这些化合物对癌细胞生长和存活的作用可与6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉相似。实施例10:7-甲氧基-5,11，12-三羟基-氧茚香豆素对癌细胞生长和存活的作用。7-甲氧基-5，11,12-三羟基-氧茚香豆素通过抑制lKB的磷酸化和降解抑制NF-KB-引发的基因转录。用5pM的7-甲氧基-5，11，12-三羟基-氧茚香豆素处理不同种类的4Xl(T癌细胞并在第6天计数活细胞。与未经处理的细胞比较，7-甲氧基-5,11,12-三羟基-氧茚香豆素对A431皮肤癌细胞的生长抑制率为51M，对H印G2人类肝癌细胞的生长抑制率为25呢，对H1299人类肺癌细胞的生长抑制率为31%，对海拉人类子宫颈癌细胞的生长抑制率为29%，对MDA-MB-468人类乳癌细胞的生长抑制率为10呢。实施例ll:南蛇藤醇对癌细胞生长和存活的作用。用5pM的南蛇藤醇处理不同种类的4X10癌细胞并在第6天计数活细胞。处理的LNCAP人类前列腺癌细胞，MDA-MB-468人类乳腺癌细胞，H1299人类肺癌细胞，HT29人类肠癌细胞，AGS人类胃癌细胞，H印G2人类肝癌细胞，PANC-1人类胰腺癌细胞，A431人类皮肤癌细胞，U251人类神经胶质瘤细胞，，NBT-II人类膀胱癌细胞和海拉人类子宫颈癌细胞的各种癌细胞的细胞全部死亡和90%Jurkat人类白血病细胞死亡。[使用台盼蓝着色方法(CYChen,等人在J.Biol.Chem.273:16700-16709)评估细胞的存活和死亡。]实施例12:(E)3_[(4-甲基苯)磺酰]-2-丙烯腈对癌细胞生长和存活的作用。用5pM的(E)3-[(4-甲基苯)磺酰]-2-丙烯腈处理不同种类的4X10'癌细胞并在第6天计数活细胞。处理的LNCAP人类前列腺癌细胞，H1299人类肺癌细胞，H印G2人类肝癌细胞，PANC-1人类胰腺癌细胞，A431人类皮肤癌细胞，和U251人类胶质瘤细胞的细胞全部死亡，其在AGS人类给癌细胞中抑制了90%的细胞生长，在MDA-MB-468人类乳腺癌细胞，在NBT-II人类膀胱癌细胞和海拉人类白血病细胞的各种癌细胞中抑制了9-12%的细胞生长。由于NF-kB在慢性炎症和自身免疫性疾病中的介入，因此以上化合物对治疗慢性炎症和自身免疫性疾病有作用。权利要求1、一种NF-κB抑制剂在治疗逆转录病毒感染的应用，其特征在于，所说的抑制剂是喹唑啉衍生物，所说的喹唑啉衍生物具有以下的结构式及其衍生物或其可制药盐作为活性成分id="icf0001"file="S2008100936406C00011.gif"wi="74"he="45"top="70"left="40"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>式中，R1代表OR2，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂环芳基，取代或未取代的烃基，取代或未取代的链烯烃基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的苯氧基，取代或未取代的正-丁氧基，取代或未取代的正-戊氧基，取代或未取代的正-丙氧基，取代或未取代的异丙基，取代或未取代的正-己氧基同系物，取代或未取代的苄氧基，取代或未取代的吡啶甲氧基或喹啉甲氧基，取代或未取代的烯丙氧基，取代或未取代的炔丙氧基，或取代或未取代的乙氧基；R2是一个取代或未取代的具1-6碳的烷烃基，取代或未取代的2-6碳的烯烃基，取代或未取代的2-6碳的炔烃基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂环芳基，取代或未取代的芳烷基，或取代或未取代的杂环芳烷基。2、如权利要求1所述的应用，其特征在于，所说的抑制剂是6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉、6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉、6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉、6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉、6-氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉、6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉、4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉、6_氨基-4-(4-炔丙氧基)苯乙胺喹唑啉、6-氨基-4-(4-乙氧基)苯乙胺喹唑啉、6-氨基-4-(4-丙氧基)苯乙胺喹唑啉或6-氨基-4-(4-异丙氧基)苯乙胺喹唑啉之中的任一种。3、如权利要求l所述的应用，其特征在于，所说的病毒感染为HIV造成的艾滋病。全文摘要本发明涉及利用NF-κB抑制剂在治疗逆转录病毒感染的应用，属于化学合成物在治疗疾病中的应用领域，本发明以NF-κB为靶点，使用NF-κB抑制剂在治疗哺乳动物的病毒感染，癌症，慢性炎症和自身免疫性疾病的应用。使用的抑制剂包括喹唑啉衍生物，南蛇藤醇，咖啡酸苯乙基酯，(E)3-[(4-甲基苯)磺酰]-2-丙烯腈，和7-甲氧基-5，11，12-三羟基-氧茚香豆素等抑制NF-κB的功能的化学合成物和它们的衍生物可单独或联合现临床应用的疗法合并治疗病毒性疾病，尤其是由逆转录酶病毒引发的病毒感染和HIV引发的艾滋病，癌症，慢性炎症和自身免疫性疾病。文档编号A61P31/12GK101269077SQ200810093640公开日2008年9月24日申请日期2005年6月17日优先权日2005年6月17日发明者吕志民申请人:吕志民