专利名称：：免疫抑制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及免疫抑制剂，特别涉及化学类免疫抑制剂药物与黄酮类物质合用以降低免疫抑制剂的毒副作用。
背景技术：
：重要器官衰竭的危重病人在常规治疗无效时，采用器官移植是唯一行之有效的方法，近年来，由于医疗技术水平的提高，器官移植使许多危重病人重获生机。免疫抑制剂在器官移植的发展中起到了至关重要的作用，它对器官移植患者的长期存活以及移植物保持良好功能都起着重要作用。目前临床上用于器官移植的免疫抑制剂为国外研制成功的化学药物和一些基芮产品，其中化学药主要包括以下几类1.激素类药物，如甲基强的松龙和强的松，其主要不良反应骨质疏松、溃疡病、糖尿病、高JfiL压等。2.细胞毒类药物，如1)硫唑嘌呤，主要不良反应为抑制骨髓使血液白细胞、血小板减少，而且发生率可高达40%;肝功能受损的发生率约20%;感染，尤其是肺部感染。2)吗替麦考酚酉旨(mycophenolatemofetil)，主要不良反应发生率约为30%，主要为胃肠道反应包括腹泻、恶心及白细胞下降等。3)咪唑立宾(Mizoribine):主要不良反应是胃肠道反应、血液系统障碍和过敏症状，偶见骨髓功能抑制和急性肾功能衰竭。3.钙调素抑制剂，如1)环孢素(CsA):环孢素是目前器官移植后的基础药物。不良反应:肝脏毒性，主要为胆汁淤积，GPT升高，有肾脏毒性，尤其是肾小管毒性。2)他克莫司(fk506)不良反应与环孢素相似，但程度不--。环孢素和他克莫司由于其治疗剂量和中毒剂量很接近，有时甚至重叠。在临床应用中必须经常测定药物的血液浓度以调整剂量，既要避免毒性发作，又要防止剂量不足引起的排斥。4.其^，如西罗莫司(Sirolimus):不良反应高胆固醇血症、.高脂血症、高血压、皮疹、贫血、关节痛、腹泻、低钾血症、血小板减少等。这些免疫抑制剂的使用，明显降低了器官移植排斥反应的发生率，它们在器官移植方面起到了举足轻重的作用，然而，目前临床使用免疫抑制剂，由于其在肝、肾、神经等方面存在副作用，有些副作用甚至较大，影响患者的生命健康，-'直局限着它的广泛应用。如果患者不能耐受这些毒副作用，常常被迫停药，影响移植物长期存活。如下式结构的黄酮(以下简称黄酮类物质)，其中，R为氢原子或由l个或2个羟基取代的苯基，Rha为(i-L-鼠李糖残基，且点线表示具有或不具有双键。这--黄酮类物质可来源于天然植物，如黄杞叶、土伏苓中都有丰富的含量，也可以通过化学方法合成得到。此类物质具有多种药理功能，比如免疫抑制作用，但目前还只是处于理论研究状态，没有真正用于抗器官排斥的临床研究。更没有与其他化学免疫抑制剂合用的报导。发明人经急性毒性研究表明黄酮类物质中当成分A或B含量大于70%的混合物LD50大丁'4g/kg。这说明黄酮类物质的毒性很低，可以大剂量地服用。本发明为了克服目前临床上免疫抑制剂的毒副作用大的缺陷，提供--种能降低毒副作用，但药效肯定的方法，即黄酮类物质与免疫抑制剂合用治疗器官移植排斥反应。更具体地说黄酮类物质为如下式结构，其中，R为氢原子或由1个或2.个羟基取代的苯基，Rha为a-L-鼠李糖残基，且点线表示具有或不具有双键。
发明内容5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>优选的黄酮类物质为以下A、B、C三种成份以任意比例组成，即可以只含有其中某一个成份，或某两二个成份，或同时含有三个成份。成份C更优选的黄酮类物质为成份A或/和成份B，比如说含有含量(外标，以下同)大于40%的成份A或/和成份B。其中所述的免疫抑制剂为目前临床使用及正在研发中的免疫抑制剂，主要包括环孢素、西罗莫司、西罗莫司衍生物、他克莫司、麦考霉酚酸酯、胍立莫司或咪唑立宾中的一种或几种。其中西罗莫司衍生物是指依维莫司(Everolimus)、佐他莫司(zotarolimus)、替西罗莫司(Temsirolimus)等。根据动物的试验表明，当免疫抑制剂用量仅为原剂量的1/10—1/4时，P、要黄酮类物质的添加量为免疫抑制剂重量的25—1000倍，1/10—1/4的免疫抑制剂即可以维持原有的药效。因为免疫抑制剂服用量的大量减少，从而有效地;咸少了免疫抑制剂所引起的毒副作用，极大地改善了患者的耐受。黄酮类物质联合低剂量免疫抑制剂治疗后，可非常显著抑制移植排斥反应，诱导所有的心脏移植物长期存活，黄酮类物质可以有效联合目前临床使用的经典'线免疫抑制药物以增强免疫抑制剂的疗效、减少免疫抑制剂的使用剂量，降低毒副作用。'本发明公开了一种药物组合物，含有黄酮类物质和免疫抑制剂以降低原免疫抑制剂的毒副作用。其中黄酮类物质为如下式结构，其中，R为氢原子或由1个或2个羟基取代的苯基，Rha为a-L-鼠李糖残基，且点线表示具有或不具有双键。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>优选的黄酮类物质为以下A、B、C三种成份以任意比例组成，即可以只含有其中某一个成份，或某两二个成份，或同时含有三个成份。成份A<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>成份B<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>成份c更优选的黄酮类物质为成份A或/和成份B，比如说含有含量(外标，以下同)大于40c/()的成份A或/和成份B。其中所述的免疫抑制剂为目前临床使用及正在研发中的免疫抑制剂，主要包括环孢素、西罗莫司及其衍生物、他克莫司、麦考霉酚酸酯、胍立莫司或咪唑立宾中的--种或几种。其中西罗莫司衍生物是指依维莫司(Everolimus)、佐他莫司(zotaralimus)、.替西罗莫司(Temsirolimus)等。本发明所公开的药物组合物中，黄酮类物质与免疫抑制剂的重量比为20—1000:1，优选为50:1。在本发明中，免疫抑制剂可以縮减至原剂量的1/8-1/4，在此基础上添加20—1000倍的黄酮类物质，制成复方制剂。本发明所公开的药物组合物，可以制成口服制剂，具体地说可以是片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、口服液等。以常规的制剂方法制成成品。具体实施例方式实施例l:黄酮类物质的分取分离用常规的化学提取分离方法，得到黄杞叶总黄酮，其中以黄杞总苷提取物计，成份A的含量大于60Y。(外标法测定)。实施例2:黄酮类物质与环孢素(CsA)联合抗排斥实验选用成份A含量为95n/。左右的黄酮类物质。以健康BALB/c小鼠作为供体、C57BL/6小鼠为受体，将其随机分组，每组各8只，进行血管化的小鼠颈部同种心脏移植，移植后分为以下组进行不同的治疗I组为对照组，心脏移植后不作特殊处理；II组为CsA治疗组，心脏移植后每天腹腔注射治疗剂量的CsA(20mg/kg体m组为低剂量CsA治疗组，心脏移植后每天腹腔注射低剂量的CsA(5mg/kg体重)；IV组为低剂量CsA联合高剂量落新妇甙组，心脏移植后每天腹腔注射CsA(5mg/kg体重)和落新妇甙250mg/kg;V组为低剂量CsA联合中剂量黄酮类物质，心脏移植后每天腹腔注射CsA(5mg/kg体重)和黄酮类物质125mg/kg，观察移植心脏的存活期。结果如表l所示，正常剂量的CsA治疗组(II组)，即心脏移植后每天腹腔注射治疗剂量的CsA(20mg/kg体重)在60天用药期>70°/。的移植心脏长期存活；亚剂量CsA治疗组(III组)，即心脏移植后每天腹腔注射低剂量的CsA(5mg/kg体重)每天用药后移植心脏最长的存活时间为16天，而低剂量CsA联合高剂量黄酮类物质治疗后，>60°/。的移植心脏移植心脏均长期存活(如表l所示)。结果表明黄酮类物质可以联合临床…'线药物CsA,发挥联合抑制移植排斥的作用，^J有效减少CsA的使用剂量，降低毒副作用。表l.黄酮类物质联合亚剂量的CsA对同种异体心脏移植物存活期的影响组别给药存活时间(天)MSTI组对照组6,7，7，8，8，8，8，98II组CsA(20mg/kg)43，45,60，60，60,60,60，60，60III组CsA(5mg/kg)13，14，14，14，15，15,16，1614.5廳CsA(5mg/kg)+黄酮类物质(125mg/kg)21,22，22，23，23，23，23,2522.5v组CsA(5mg/kg)+黄酮类物质(250mg/kg)42，45，50，60，60,60,60，6060实施例3:黄酮类物质与他克莫(FK506)司联合抗排斥实验黄酮类物质由成份A、B、C组成，其中成份A的含量在45%左右。实验方法同实施例2，结果如表2所示表2.黄酮类物质联合亚剂量的他克莫司对同种异体心脏移植物存活期的影响组别给药存活时间(天)MSTI组对照组6，7，7，8,8，8，9，98ir组FK506(lmg/kg)47，47，60，60，60,60,60，60，60in组FK506(0.2mg/kg)14，15，15，15，16，16，16，1615.3蘭FK506(0.2mg/kg)+黄酮类物.质(100mg/kg)20，22，23，24,25，25,24，2523.5v组.FK506(0.2mg/kg)+黄酮类物质(200mg/kg)44,43，55,60，60，60，60，6060结果表明黄酮类物质可以联合药物FK506,发挥联合抑制移植排斥的作用，可有效减少FK506的使用剂量，降低毒副作用。实施例4:黄酮类物质、他克莫司、麦考霉酚酸酯(MMF)联合抗排斥实验黄酮类物质由成份A、B、C组成，其中，成份A与成份B的含量均在40%左右。实验方法同实施例2，结果如表3所示表3.黄酮类物质、他克莫司、麦考霉酚酸酯(MMF)联合抗排斥实验对同^>异体心脏移植物存活期的影响组别<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>将主药与辅料(除硬脂酸镁外)混匀，加入水、乙醇或不同比例的醇水溶液制粒，烘干，过20目筛，加入硬脂酸镁，混匀，异型冲压片，包装，即得。实施例6:胶囊剂处方<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>制备方法:将主药及辅料分别过80目筛备用。照处方称取实施例3中原料、他克莫司及辅料，以等量递增法混匀后，加入粘合剂制软材，软材过24目筛制粒，于60'C-65'C干燥后，过24目筛整粒，加入硬脂酸镁混匀。将上述颗粒直接分装，制成颗粒剂；将上述颗粒选择合适的胶囊壳分装，制成胶囊剂；将.l:述颗粒采用适宜冲模压制，制成片剂。权利要求1、下式结构代表的黄酮与免疫抑制剂合用在制备治疗器官移植排斥反应的药物中的应用，其中，R为氢原子或由1个或2个羟基取代的苯基，Rha为α-L-鼠李糖残基，且点线表示具有或不具有双键。2、如权利要求l所述的应用，其特征是所述的黄酮为以下三种成份以任意比例组成。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>成份C3、如权利要求2所述的应用，其特征是所述的黄酮中成份A或/和B的含量大于40%。4、如权利要求l所述的应用，其特征是所述的免疫抑制剂为环孢菌素、西罗莫司、西罗莫司衍生物、他克莫司、麦考霉酚酸酯、胍立莫司或咪唑立宾中的一种或几种。5、一种药物组合物，含有如权利要求1所述的黄酮和如权利要求4所述的免疫抑制剂。6、如权利要求5所述的药物组合物，其特征是黄酮为如权利要求3所述的黄酮。7、如权利要求5所述的药物组合物，其特征是黄酮与免疫抑制剂的重量比为20—1000:1。8、如权利要求5所述的药物组合物，其特征是提取物A与免疫抑制剂的重量比为50:1。9、如权利要求5所述的药物组合物，其剂型为口服制剂。全文摘要本发明公开了一种免疫抑制剂，由黄酮类物质联合低剂量的化学免疫抑制剂，可非常显著抑制移植排斥反应，并明显降低化学免疫抑制剂的毒副作用。同时本发明也公开了一种药物组合物，将黄酮类物质与目前临床使用的化学免疫抑制剂制成复方制剂，具有增强免疫抑制剂的疗效、减少免疫抑制剂的使用剂量，降低毒副作用。文档编号A61K45/00GK101675936SQ20081012102公开日2010年3月24日申请日期2008年9月16日优先权日2008年9月16日发明者潘福生,王园园,黄雪慧申请人:杭州华东医药集团生物工程研究所有限公司