专利名称：牡荆素鼠李糖苷在制备扩血管药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及牡荆素鼠李糖苷的应用，更具体涉及牡荆素鼠李糖苷在制备扩血管药物中的应用及其在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。
背景技术：
牡荆素鼠李糖苷(rhamnosylvitexin，RHV)是从蔷薇科山楂属植物山里红(Crataegus pinnatifida Bge.Var Major N.E.Br)或山楂(Crataeguspinnatifida Bge.)的干燥叶中提取的主要活性成分之一。目前临床应用的山楂叶提取物制剂较多，如益心酮片等。对于山楂叶总黄酮的研究也较多，但对其中各单一成分的研究较少，这对于解释清楚山楂叶提取物的药理作用还是感到比较缺憾。
众所周知，山楂叶总黄酮对心血管疾病有较好的治疗作用，作为其中含量最大的成分牡荆素鼠李糖苷在其中的贡献有多大，又是通过什么样的机制在起作用的，都需要作进一步的研究。
朱晓新等.牡荆素鼠李糖苷对血管内皮细胞血管活性物质的影响.中国实验方剂学杂志.2006，12(1)为观察牡荆素鼠李糖苷对缺氧再给氧损伤内皮细胞产生血管活性物质的影响.采用脐静脉内皮细胞培养的方法，以缺氧再给氧造成内皮细胞损伤，分别以放射免疫、Griess法测定细胞培养上清中6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)、血栓素B2(TXB2)、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)含量.结果不同浓度的牡荆素鼠李糖苷均可使血管舒张因子NO、6-Keto-PGF1α产量明显增加；缩血管因子ET-1、TXB2明显减少.结论认为牡荆素鼠李糖甙对缺氧再给氧损伤血管内皮细胞产生的血管活性物质具有一定的调节作用.该文从一个侧面揭示了牡荆素鼠李糖甙对血管作用机制之一，但失之未见牡荆素鼠李糖甙对血管的直接作用研究。
王建农等.调变山楂叶有效组分比例对犬血流动力学的影响.中国新药杂志.2004，13(7)探讨改变山楂叶心血管活性有效部位中2类主要有效组分原花青素和总黄酮的比例对实验犬心脏血流动力学的影响。结果表明牡荆素鼠李糖苷与牡荆素葡萄糖苷为2∶1、总黄酮与原花青素含量为3∶1时显著增加心排血量和每搏输出量并且显著降低总外周阻力。结论改变山楂叶中原花青素和总黄酮的比例对实验犬血流动力学有显著影响。该文反应了山楂叶总黄酮与原花青素对血管的总体作用，其中各成分对血管的作用未见研究。
马国.山楂叶总黄酮吸收机理与吸收调控研究.(博士论文)四川大学.2007；许英爱.山楂叶总黄酮的肠吸收机理与药动学及其缓释微丸的研究.(博士论文)第二军医大学.2007。两位博士同时进行了山楂叶总黄酮吸收机理的研究，从肠道吸收的角度探讨了山楂叶总黄酮的药动学机制，未见对牡荆素鼠李糖苷对血管的作用机制和对心脑血管的作用做进一步探讨。
文献检索未见单独采用牡荆素鼠李糖苷在制备治疗心脑血管疾病的药物中的应用。
检索涉及牡荆素鼠李糖苷的中国专利，有公开专利4件，其中山楂叶总黄酮或山楂叶制剂的2件，从山楂叶中提取有效部位的专利2件。
检索美国专利、欧洲专利、世界专利和日本专利，均未见有涉及牡荆素鼠李糖苷的公开专利。
发明内容
本发明的目的是提供牡荆素鼠李糖苷在制备扩血管药物中的应用和在制备治疗心脑血管疾病的药物中的应用。
为观察牡荆素鼠李糖苷直接对动脉的调节作用，本发明采用改进的血管阻力与血管张力试验测定方法，采用血管离体灌流技术，以排除活体实验中各种神经、体液因素对牡荆素鼠李糖苷扩张动脉作用的影响。
结果发现，牡荆素鼠李糖苷对离体动脉环具有浓度依赖性舒张作用，该作用通过内皮依赖性和内皮非依赖的方式产生，前者可能通过对血管内皮细胞血管活性物质的影响，拮抗α-肾上腺素受体激动剂，及阻断血管平滑肌细胞内质网上的三磷酸肌醇敏感的钙离子通道有关，并具有部分钙拮抗剂的药理作用特点。因此，发现牡荆素鼠李糖苷对血管内皮细胞血管活性物质及对无血管内皮的血管的影响，具有直接扩张动脉的新的药理作用，提示牡荆素鼠李糖苷可单独用于心脑血管疾病的治疗药物。
本发明所述的牡荆素鼠李糖苷可与药效学允许的药用赋形剂组合制备成制剂。
本发明所述的牡荆素鼠李糖苷与药用赋形剂制备的制剂形式主要为注射制剂，包括水针，输液和冻干粉针剂。
所述制剂的给药形式选静脉给药。
根据我们研究发现，牡荆素鼠李糖苷能应用于制备治疗心脑血管疾病的药物，其作用机制是其直接对血管的调节作用和对血管内皮细胞产生的血管活性物质的调节作用。
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
具体实施例方式 实施例1大鼠离体主动脉环的制备 1.实验药物 牡荆素鼠李糖苷由市场购得的纯度≥98％的牡荆素鼠李糖苷。分子式C26H30O14，分子量566.5，mp210℃-212℃，淡黄色结晶。甲醇重结晶，经HPLC测定纯度为99.3％.用Krebs-Henseleit(K-H)液溶解(包含5μl/ml乙酸)，配制成10-2mol/L溶液，临用前配成250mmol/L溶液。
2.实验步骤 清洁级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，体重240-260g。
迅速游离SD大鼠胸主动脉，置于4℃含95％O2和5％CO2混合气体预饱和的K-H液中，剔除周围结缔组织，剪成3-4mm的血管环，期间注意保护血管环内膜不受破坏。据实验需要，采用棉签磨擦血管环内表面的方法，将部分血管环制备成去除内皮的模型。而后将血管环悬挂于预置10mL K-H液的浴槽内，一端固定，一端通过张力换能器连接Medlab生物信号采集系统。在持续通95％O2和5％CO2的混合气体的状态下，调节其基础张力至2.0g，并在37℃下稳定60min，期间每15min换液1次。用KCI(60mmol·L-1)重复刺激3次，以诱发血管的最大收缩幅度。待血管环重新稳定后，用苯氧肾上腺素(phenylephrine，PE)(1μmol·L-1)收缩血管环达峰值，加入乙酰胆碱(acetylcholine，Ach)(10μmol·L-1)检验血管内皮完整性。若加Ach后使PE预收缩的血管环舒张80％以上，可认为内皮完整；反之，则认为内皮去除。以PE(1μmol·L-1)或KCI(60mmol·L-1)诱发最大收缩幅度为100％，以加入药物后的血管张力幅度与PE或KCI诱发最大收缩幅度之间的比率反映血管张力的变化。
实施例2牡荆素鼠李糖苷对离体主动脉环舒缩功能的作用 (1)观察牡荆素鼠李糖苷对基础状态血管环张力的影响 试验方法与实施例1实验步骤相同 牡荆素鼠李糖苷来源同实施例1。采用累积加药法，每10min加入牡荆素鼠李糖苷1次，观察累积给予牡荆素鼠李糖苷4×10-5-128×10-5mol/L，对内皮完整和内皮去除血管环的作用；对照组以K-H液代替牡荆素鼠李糖苷等容加入。结果表明累积给予牡荆素鼠李糖苷4×10-5-128×10-5mol/L，对内皮完整或去除的血管环的基础张力均无显著影响，见表1、表2。
表1牡荆素鼠李糖苷对内皮完整的基础状态主动脉环张力的影响(单位g)
表1牡荆素鼠李糖苷对内皮去除的基础状态主动脉环张力的影响(单位g)
(2)牡荆素鼠李糖苷对PE或KCI预收缩血管环张力的影响 以60mmol·L-1KCl或0.3μmol·L-1PE预收缩内皮完整的血管环，每10min1次累积加入牡荆素鼠李糖苷4×10-5-128×10-5mol/L观察其对预收缩内皮完整和内皮去除血管环张力的作用；对照组以K-H液代替牡荆素鼠李糖苷等容加入。结果表明牡荆素鼠李糖苷对PE预收缩的内皮完整和去除的血管环表现为浓度依赖性舒张作用，且对去除内皮的血管环的舒张作用较内皮完整时的作用更弱，参见表3、表4；各浓度牡荆素鼠李糖苷均不能使KCl诱导收缩的内皮完整或去除的血管环显著舒张，且对去除内皮的血管环的舒张作用较内皮完整时的作用更弱，见表5、表6。
表3牡荆素鼠李糖苷对苯氧肾上腺素预收缩的内皮完整的基础状态主动脉环张力的影响(单位％)
注+P＜0.05，++P＜0.01。
表4牡荆素鼠李糖苷对苯氧肾上腺素预收缩的内皮去除的基础状态主动脉环张力的影响(单位％)
注+P＜0.05，++P＜0.01。
表5牡荆素鼠李糖苷对KCl预收缩的内皮完整的基础状态主动脉环张力的影响(单位％)
注+P＜0.05，++P＜0.01。
表6牡荆素鼠李糖苷对KCl预收缩的内皮去除的基础状态主动脉环张力的影响(单位％)
注+P＜0.05，++P＜0.01。
实施例3牡荆素鼠李糖苷对不同预处理主动脉环舒缩功能的作用 (1)牡荆素鼠李糖苷对内皮完整血管环的作用 以一氧化氮合酶(NOS)抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)(0.1mmol·L-1)或前列腺素合成酶抑制剂消炎痛(10μmol·L-1)预处理内皮完整的血管环15min，而后用80mmol·L-1KCI预收缩血管，累积法加入牡荆素鼠李糖苷4×10-5-128×10-5mol/L，观察收缩血管环张力的作用；对照组以K-H液代替牡荆素鼠李糖苷等容加入。
内皮完整的血管环用L-NAME 100μmol·L-1或消炎痛10μmol·L-1预孵后，能显著抑制牡荆素鼠李糖苷4×10-5-128×10-5mol/L的血管舒张作用，结果见表7。
表7牡荆素鼠李糖苷对KCl预收缩的内皮完整的基础状态主动脉环张力的影响(单位％)
注+P＜0.05，++P＜0.01。
实施例4牡荆素鼠李糖苷对内皮去除血管环PE所致的两种收缩反应的作用 动脉稳定后，换无钙K-H液冲洗4次，再在无钙K-H液中浸泡平衡20min，加入PE1.0μmol·L-1收缩血管，收缩后5min加入CaCl2 1.25mmol·L-1以恢复K-H液正常Ca2+浓度，血管环即再次出现收缩；待收缩稳定后先用K-H液冲洗4次，平衡后再换无钙K-H液冲洗、浸泡平衡，待反应回到基线加入牡荆素鼠李糖苷40×10-5mol/L，孵育20min，重复以上步骤。比较给药前后肌张力变化。牡荆素鼠李糖苷40×10-5mol/L，使PE 1.0μmol·L-1诱导细胞内钙释放引起的收缩显著下降；牡荆素鼠李糖苷使PE引起细胞外钙内流产生的收缩也显著下降，结果见表8。
表8牡荆素鼠李糖苷对PE所致的大鼠胸主动脉两种收缩反应的影响(单位g) 注+P＜0.05，++P＜0.01。
从上述试验可以看出，牡荆素鼠李糖苷具有血管扩张作用，根据实验中牡荆素鼠李糖苷对PE预收缩的内皮完整和去除的血管环表现不同，提示牡荆素鼠李糖苷更主要是通过血管内皮依赖性和内皮非依赖的方式产生作用；同时实验结果还表明牡荆素鼠李糖苷对血管内皮平滑肌细胞的内钙释放和外钙内流有一定阻抑作用。这些研究结果可以扩大牡荆素鼠李糖苷新的应用领域，也进一步提示牡荆素鼠李糖苷可以应用于心脑血管疾病治疗药物。
权利要求
1.牡荆素鼠李糖苷在制备扩血管药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的牡荆素鼠李糖苷在制备扩血管药物中的应用，其特征是在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。
3.根据权利要求1所述的牡荆素鼠李糖苷在制备扩血管药物中的应用，其特征是所述的牡荆素鼠李糖苷可与药效学允许的药用赋形剂组合制备成制剂。
4.根据权利要求3所述的牡荆素鼠李糖苷在制备扩血管药物中的应用，其特征是所述的制剂形式为注射剂。
5.根据权利要求3所述的牡荆素鼠李糖苷在制备扩血管药物中的应用，其特征是所述制剂的给药形式为静脉给药。
全文摘要
本发明公开了牡荆素鼠李糖苷在制备扩血管药物中的应用，通过改进的血管阻力与血管张力试验测定方法，采用血管离体灌流技术，研究了牡荆素鼠李糖苷对扩张血管作用的影响。结果发现，牡荆素鼠李糖苷对离体动脉环具有浓度依赖性舒张作用，该作用通过内皮依赖性和内皮非依赖的方式产生，并具有部分钙拮抗剂的药理作用特点。因此，发现牡荆素鼠李糖苷具有直接扩张动脉血管的新的药理作用，可用于心脑血管疾病治疗药物的制备。
文档编号A61K31/7042GK101606944SQ20081012704
公开日2009年12月23日 申请日期2008年6月19日 优先权日2008年6月19日
发明者张晓芳 申请人:张晓芳