一种多蛋白肿瘤治疗药物的制作方法

文档序号:1230430阅读:238来源:国知局
专利名称:一种多蛋白肿瘤治疗药物的制作方法
技术领域
本发明属于生物技术领域,涉及一种治疗、预防肿瘤(癌症),抑制肿瘤转移的组合物。
背景技术
众所周知,恶性肿瘤(癌症)对人类健康的烕胁日益严重,己大量地消耗了人类的物质资源和严重危害人类的生命健康。据统计,全
世界每年新增癌症患者800万以上,死亡人数620万,我国每年新增癌症患者160万以上,死亡人数160万,到2020年以上数字将翻一番,过几年全世界癌症患者将达到8400万人,这是一个可怕的数字。
恶性肿瘤(癌症),它不同于良性肿瘤的最主要特征是能侵袭周围组织,疾病晚期癌细胞发生远端转移,破坏被侵袭的器官,最终耗尽人体的生命体能,导致机体衰亡。恶性肿瘤(癌症)几乎在所有类型的细胞中均可发生。如何更有效地攻克恶性肿瘤(癌症),是新世纪摆在我们面前的艰巨任务。对于恶性肿瘤,过去一直延用传统(手术疗法、化学疗法、放射疗法)的综合性方法,且已取很大的成功经验,但是,恶性肿瘤的病死率仍然非常高,主要是死于恶性肿瘤的转移。
人类对恶性肿瘤发生机理的认识经历了漫长曲折的过程,各类学说
众说纷纭。随着生命科学和各门学科迅速发展和交叉渗透,特别是人类
对肿瘤细胞的分子遗传学、肿瘤分子病理生理学和功能基因组学的研
究不断深入,肿瘤基因治疗已成为肿瘤生物治疗领域研究的热门话题,
已被广大学者所接受,在肿瘤综合治疗中崭露头角。特别是近些年来,世界各国将基因治疗的方法从实验室研究(基础研究)推进到临床试验
阶段,并已取得了一定成果。但是攻克恶性肿瘤转移率、病死率高的
3问题仍需付出不懈的努力。
2002年10月5日美国卫生研究院(NIH)、癌症研究院(NCI)、疾病控制和预防中心(CDC)美国癌症学会(ACS)和北美肿瘤登记中心联合会(NAACCR)共同完成了美国"癌症状况年度报告",美国财富杂志(Fortune)的专栏作家对(1975-2002)癌症的诊治作了总结性的回顾《人类在对抗癌症的战役中是失败者?》,提出恶性肿瘤转移率和病死率之所以高,与诸多因素有关1)肿瘤细胞异质性;2)肿瘤细胞多耐药性;3)抗癌药物设计思路不完善等。报告提出了应重新审视现有诊治癌症的措施,特别关注了恶性肿瘤转移机理的研究资助项目太少的问题。美国从1971年开展抗癌症大战以来(与星球大战计划同步起动),到2003年,美国癌症研究院和国立卫生研究院支持的癌症研究项目,不到0.5%的研究项目与癌症转移有关。2003年美国研究部门资助的癌症研究项目8900个,92%没有提及癌症转移。由于癌症是一种多基因改变的疾病,除了癌(致癌症)基因和抑制癌症基因外,近来的研究还发现,存在促使癌症转移的基因(metastasis genes)和抑制癌症转移的基因(metastasis suppressor genes)。关于肿瘤转移基因已有不少研究,但肿瘤转移抑制基因表达异常的分子机制不十分清楚。研究肿瘤转移的机制以及与肿瘤转移抑制基因之间的关系是攻克癌症的契机。我们在充分掌握癌症发病的分子病理生理学基础和回顾人类上个世纪的抗癌历经中,认识到癌症是一种多基因变化的疾病,人类在诊治的过程中应遵守这一科学逻辑和病理生理变化的客观规律。
实验研究表明癌症是一个多阶段、多因素参与的过程,同时大多数肿瘤又是单细胞起源,这就意味着在启动癌变的细胞克隆中,不断分裂的子代细胞多次发生了遗传学和表遗传学改变。由此产生的表型成为选择的对象,随之细胞的恶性程度逐步提高,最终成为转移性癌。这些对癌变过程有着原发和关键效应的基因改变,以一定的时间顺序发生,这就构成癌变或癌的遗传学途径。近来学者们大多认同癌症变化途径
4与癌基因的获能(激活、活化)和抑癌基因的失能,及癌症转移基因得 能和癌症转移抑制基因的失能(失活、表达下降甚至不表达)有关,到目 前为止,已发现癌基因超过100多种,肿瘤抑制基因和肿瘤转移抑制基 因已超过30多种。细胞的正常生长和分化的控制,是通过生长因子和 细胞因子与膜表面受体的相互作用,进而诱发一系列信号转导,最终在 核内引起相应基因的活化或抑制来实现。原癌基因的产物还是在这些 途径的关键步骤上发挥作用,如细胞外的生长因子、细胞因子、跨膜 的生长因子受体、从细胞质间向核内传递信号的各类蛋白,以及在核内
作为转录因子和调控DNA复制的蛋白质等。从实验研究的结果中分析, 癌基因粗略分成两种类型第一类癌基因能使细胞避免衰老和凋亡,起
到永生化基因的作用;第二类癌基因能降低对生长因子的要求,诱发细 胞形态的改变,使细胞增殖失调,持续生长并能转移。传统观点认为,恶 性肿瘤细胞侵入局部淋巴管、血管或其他腔道后,瘤细胞便沿这些管 腔种植到其他部位,继续繁殖增生。再近,康奈尔大学的大卫,林顿教 授及其同事发现,这种观点忽略了癌细胞扩散前身体的关键性变化。 某个器官因扩散而产生癌变以前,癌变原发部位派出的"信使"早己为 癌细胞侵入该器官创造了条件。具体步骤是,癌变细胞产生某种蛋白, 让身体特定部位的细胞发生异常,使原本健康的部位变成癌细胞生长 的温床。这个温床不仅令癌细胞聚集在一起,而且能让癌细胞数量激 增,最终造成健康器官癌变。第一次提出癌症"转移前环境"的新概念, 使癌症扩散的路径图更为清晰全面,有利于人们解决癌症扩散这一复 杂问题。如果能阻止癌症建立"转移前环境",那就能遏制恶性肿瘤扩 散,治愈就看到了曙光。癌变途径的失能遗传学的发生,是关系到肿瘤 抑制基因的功能失活(失能),20世纪60年代在体细胞杂交试验中发现, 癌细胞的恶性特征对正常细胞的表型为隐性。在小儿视网膜母细胞瘤 的流行病研究表明,这类肿瘤的发生有遗传和散发两种形式。根据诊断 年龄分布的特点,Knudson提出了"两次击中"的理论.接着Comings进一 步提出"两次击中"的是一个基因的等位基因,也就是说该突变基因是
5隐性的。后来的一系列研究证明,视网膜母细胞瘤的发生是位于13号
染色体上的一对RBI等位基因,由于基因突变,染色体丢失,体细胞染 色体重组或DNA甲基化等异常改变,引起RBI基因功能丢失(失能)的 结果,RBI基因是肿瘤抑制基因在癌变途径中失能遗传学事件的原型, 这一事件进一步促进了这一领域的研究。在家族性癌综合症应用连锁 分析和定位克隆技术,己发现30多种肿瘤抑制基因。总体上决定肿瘤 遗传易感性的失能遗传学事例远多于得能的遗传学事例,这可能是由 于肿瘤抑制基因的作用是隐性的,当一个肿瘤抑制基因失能后,剩下 的一个正常等位基因仍可能维持发育过程,这十年来对家族性癌症综 合治疗进行深入的研究,发现和鉴定了 30多种与癌相关基因,其中大多 数是肿瘤抑制基因。许多学者将肿瘤抑制基因分为两组把关基因 (Gate Keeper)和管护基因(Caretaker),把关基因关系到细胞周期,细胞 凋亡和DNA复制的调控,它们通过抑制增殖或促进细胞凋亡,直接控制 肿瘤的发生和演进,它们的失能是癌变遗传学途径的事件,是癌的限速 因子, 一旦把关基因失能将启动癌症演进。管护基因关系到DNA修复 和维护基因组的完整性,它们的失能并不直接作用于癌变遗传学途径, 而是导致遗传学的不稳定,使把关基因、原癌基因等癌相关基因的突变 增加,进而促进肿瘤的发生和演进。管护基因的产物具有识别、切除和 修复DNA错配和各类损伤等能力,以维护基因组的完整性。
此外,研究者发现除了上述两类基因的得失能异常导致癌症的发生 外,与另一类肿瘤转移抑制基因的失能密切相关,且这类基因的失能 是癌症导致死亡的关键所至,至今已有多种肿瘤转移抑制基因被发现。 如果说肿瘤抑制基因主要是抑制肿瘤细胞的恶性表型;而肿瘤转移抑 制基因主要是抑制肿瘤细胞的转移表型。近年来有一些肿瘤转移抑制 基因文献报道1988年美国国立癌症研究院(NCI) Steeg等发现,在7 株具有不同转移能力的鼠K-1735黑色素癌细胞中,有一段基因其 mRNA水平与肿瘤细胞的转移呈负相关,并且在低转移的癌细胞株中 mRNA水平高出高转移细胞10倍之多,他们把这一基因暂定为NM23,
6后来在啮齿类动物肿瘤转移模型细胞转染实验中,也证明了 NM23mRNA水平与转移抑制表型密切相关,进一步的研究发现,人类基因组中有两个亚型 NM23 基因,分别表示 NM23-H1,和NM23-H2,NM23-H1基因定位于17号染色体着丝点附近,约P " —Q "间,研究表明NM23-H1和NM23-H2不仅为两个完全不同的基因,而且分别受两个独立的调控系统调节,其中NM23-H1的mRNA水平似乎与肿瘤细胞转移关系更为密切。后来研究者相继发现了不同的肿瘤转移抑制基因,如Timp-l和Timp-2,在动物实验中,通过静脉输注重组Timp-l,发现实验动物体内恶性肿瘤转移受到抑制。1995年Dong等从前列腺癌杂交细胞AT6.1的第11号染色体中分离到特异性抑制前列腺癌转移基因,命名为Kail,后来第四军医大学西京医院妇产科医师宗晖等发现Kail基因的失能与恶性卵巢癌的发生和转移密切相关,他们采用脂质体介导Kail cDNA转染高转移性人卵巢癌细胞系HO-8910PM,发现蛋白的表达水平有显著差异。
近来,麻省理工学院怀德海研究所的Robert Weinbery用芯片技术来分析转移老鼠乳腺癌细胞的基因表现,从中找到一个重要的转录因子-TWIST,这个转录因子在胚胎发育过程中,背负着引发细胞移动,以及组织重组的任务,而类似的细胞移动和组织重组情况在肿瘤转移的时候也会发生。他们发现会使由钙粘附素E所调控的细胞粘附作用失效,以及产生上皮细胞上皮--间隙转化,而且被阻断了 Twist表现的癌细胞其转移程度会降低,在人类乳腺癌中侵润性小叶癌中,也观察到Twist抑制了钙粘附素E的表现。另外,其他科学家们也在不同的实验研究中发现诸多基因与肿瘤转移抑制功能密切相关,如PRL-3的酵素基因不在正常细胞表达,而在转移癌细胞中大量表达,以及发现WDNM1基因的mRNA表达是转移性乳腺癌细胞株DMBA-8的20倍,随后克隆出的第二株WDNM2基因其表达水平与肿瘤转移呈负相关。
Dr.Theodorecu D和同事们在膀胱癌细胞T24和T24T的实验中发现RhoGDI2基因与肿瘤细胞转移高度相关,恶性程度不同,膀胱癌中RhoGD12的mRNA和蛋白质的表达亦不相同,呈负相关。本公司在实验研究和对临床恶性肿瘤病人的检测中,发现了 RhoGDI2基因与肿瘤转移非常密切,经750例正常人群和各种不同临床恶性肿瘤转移的750多例病人的血液标本。经原位杂交方法测定RhoGDI2基因水平,发现正常人群RhoGDI2的表达大约在40-50%左右,与各种肿瘤体转移病人在10 %水平,大部分病人RhoGDI2基因不表达,充分说明大部分病人RhoGDI2基因失能,研究的结果表明,RhoGDI2表达水平不仅与膀胱癌有关,与其它各种恶性肿瘤也密切相关。同时,我们对二个癌症好发家族的直系亲属的血液标本进行检测,发现RhoGDI2基因的表达水平比正常人都低。因此,断定RhoGDI2在人类癌症的发生发展中扮演了一个重要的角色。此处之所以详细论述了肿瘤转移相关议题是因为癌症的最终死亡均由于肿瘤的转移造成,而且这一问题到目前为止仍无能为力.要攻克恶性肿瘤,一定要彻底解决肿瘤转移的迷团,才能使肿瘤的治疗上一新台阶。癌症的发生、演进导致最后转移,直至耗尽病人机体的能量而死亡,癌症的发病机理可以用上面论述的相关发病机制进行评述分析。由于多基因的协调失灵,加上机体的抗癌的免疫能力下降及其它因素改变,产生肿瘤细胞恶变,一旦细胞产生恶变,形成恶性肿瘤后,它就能突破由胶原等组成的基底膜的屏障,开始向血道,淋巴道以及周边组织进行侵润性发展,直至向远处转移,最后导致机体的生命终止。

发明内容
基于上述癌症发病的机制,本发明的目的是提供一种多蛋白肿瘤(癌症)综合治疗药物。
本发明提供的肿瘤治疗药物包含肿瘤转移抑制蛋白和肿瘤抑制蛋白以及药物学上可接受的载体或赋形剂。
本发明的肿瘤治疗药物中所包含的肿瘤转移抑制蛋白选自RhoGDI2蛋白。RhoGDI2蛋白能有效地抑制恶性肿瘤的转移。
8一个优选的实施方案中,肿瘤转移抑制蛋白是包含序列SEQ IDNO:l的同源蛋白RhoGDI2或其功能衍生物(功能片断、等价物或其它描述)。
一个优选的实施方案中,所述肿瘤转移抑制蛋白为童组人同源蛋白RhoGDI2。
本发明的肿瘤治疗药物中所包含的肿瘤抑制蛋白选自MUS81蛋白、MDA-7蛋白。MUS81蛋白是 一个强有力的杀癌基因蛋白,在细胞系和动物实验中表明,当它存在二个拷贝时,具有很大杀癌能力。MDA-7蛋白是有双重功能的治疗基因重组的蛋白,它的原型是白细胞介素24,能提高和增强免疫能力,能增加机体T细胞的杀伤能力,另外它亦有直接杀死肿瘤细胞的能力。
一个优选的实施方案中,所述肿瘤抑制蛋白为包含SEQ ID NO: 2所述的序列的同源蛋白MUS81或它的功能衍生物(功能片断、等价物或其它描述)。
一个优选的实施方案中,所述肿瘤抑制蛋白为重组MUS81蛋白。一个优选的实施方案中,所述肿瘤抑制蛋白为包含SEQIDNO: 3
所述的序列的同源蛋白MDA-7或它的功能衍生物(功能片断、等价物
或其它描述)。
一个优选的实施方案中,所述肿瘤抑制蛋白为重组MDA-7蛋白。
癌症的发生机制是多基因综合失调所致,而且肿瘤的类型及发生的部位不同,其发病过程和机理各不相同。从组织学角度来分析,肿瘤发生
的来源不同(内胚层和外胚层),肿瘤的分化演变,基因失调的机制不同。
因此,在本发明的不同实施方案中,各种不同的肿瘤在选择治疗蛋白时,
各种搭配组合也不相同。
本发明提出治疗蛋白的组合要依照病理学的基础,科学的、有目的进行治疗基因的搭配组合。由于肿瘤转移是生命终结的关键因素,在筛选治疗基因时不能忽略这方面的重要性,每个搭配组合应让肿瘤转移抑制基因参与。
9一个优选的实施方案中,所述肿瘤治疗药物包含重组人同源蛋白
RhoGDI2和重组MUS81蛋白。
一个优选的实施方案中,所述肿瘤治疗药物包含重组人同源蛋白 RhoGDI2和重组MDA-7蛋白。
一个优选的实施方案中,所述肿瘤治疗药物包含重组人同源蛋白 RhoGDI2、重组MUS81蛋白和重组MDA-7蛋白。
本发明的肿瘤治疗药物中所包含的肿瘤转移抑制蛋白、肿瘤抑制 蛋白由编码所述蛋白的基因插入重组表达载体后转染宿主细胞、在宿 主细胞中表达后经纯化获得。用于表达重组蛋白的三组基因均是人类 同源基因。RhoGDI2基因位于染色体12P.3上,基因序列全长为605bp, 用Ect)Rl,XhoI装在生产型的载体中;MDA-7基因位于染色体1Q32 位置上,基因序列全长620bp,用BamHI,XhoI装在生产型的载体 中;MUS81基因位于染色体11Q13位点上,基因序列全长工1656bp,用 EcoRl xBal装在生产型的载体中。本发明中将RhoGDI2、 MUS81、 MDA-7核苷酸序列插入到重组表达载体中,重组表达载体为本领域所 熟知的生产用表达质粒载体。上述表达载体中含启动子序列,其有利于 插入的遗传序列有效转录,表达载体通常含复制起点、启动子和允许作 转化细胞表型选择的特殊基因。本发明适用的载体,不局限于在细菌中 的表达,也包括哺乳动物细胞和其它细胞表达。本发明的载体亦负担 在实验性生产和工业化生产任务。重组的治疗基因按照GLP的要求进 行蛋白产品生产,将来临床用的治疗蛋白产品将严格按照GMP的生产 要求进行生产。
本发明的肿瘤治疗药物可以是单一产品的粉剂、水剂或胶囊形式, 或几组产品的粉剂、水剂或胶囊包装在一起的形式。分装或以冻千粉 形式于4 'C或-2(TC低温条件下储存。
本发明的基因导入方法因导入对象和具体病症而异。动物实验中, 我们有目的尝试过蛋白的导入方法(给药途径),观察经静脉和肌肉注射 的蛋白在动物体内表达内表达分布情况,静脉注射后,肝、脾、心、脑、肾等器官表达率不尽相同。实验结果的启发是,不同类型的肿瘤、不同 部位的肿瘤、不同系统的肿瘤,给药途径的选择不同。例如全身性肿 瘤,血液系统恶性肿瘤,采用静脉注射方法最佳;呼吸系统恶性肿瘤, 采用呼吸道吸入给药方法最优;表层肿瘤为局部注射直接注射到肿瘤 组织或表面皮肤给药。应当意识到优选的导入方法是为了治疗效果更 显著。
本发明的癌症多蛋白综合治疗是建立在恶性肿瘤发生、演进的病 理基础上的,这一创新性方法在动物实验研究中得到验证,多蛋白综合 治疗和单一蛋白治疗的技术进行比较,前者有明显治疗效果,不管在肿 瘤肿块消退、抑制肿瘤发生及抑制肿瘤转移方面和提高生存率等均有 明显统计学意义。


图1为实施例2中小鼠在治疗前肿瘤的示意图; 图2为实施例2中小鼠在经RhoGDI2和MDA-7蛋白治疗后肿瘤 的示意图3为实施例2中小鼠在经MUS81, RhoGDI2禾Q MDA-7蛋白治
疗后肿瘤的示意具体实施例方式
本发明的方法可从以下具体实施方式
了解得更清楚。然而应理解 以下具体实施例虽然表明了本发明的优选实施方式,但只是阐述性的, 因为本领域技术人员明白,依据这些实施例的详细描述所作出的各种 变化和修改都在本发明的构思和范围内。 实施例1
一种多蛋白肿瘤治疗药物的制备,包括以下步骤及其工艺条件 步骤一基因克隆,构建高表达质粒
1、在mRNA水平选定RhoGDI2、 MUS81和MDA-7基因插入的
11最佳位置;
2、 将上述基因构建表达质粒;
3、 质粒和细菌选好以后,将cDNA库或己合成的上述基因分别用 内切酶消化,放在一起用T4连接酶连接,所获得的重组质粒转化进大 肠杆菌,便可获得高表达RhoGDI2、 MUS81和MDA-7重组蛋白的重 组体;
步骤二重组菌的发酵
依次活化过夜,培养,诱导; 步骤三
1、 应用超声波粉碎法进行菌体破碎;
2、 破碎液在4摄氏度下20000rpm离心,获上清和沉淀上清进 入色谱分离纯化程序;
3、 上清经过交换柱层析,以平衡缓冲液进行阶段性洗脱,经过粗 纯阶段,可去除70%以上的杂蛋白;
4、 洗涤杂蛋白至吸收值为零,洗下目标蛋白,收集两个柱床体积
洗脱液即可获得目标蛋白
5、 最终产品纯化
经过色谱组合柱纯化,获得纯度为98%的RhoGDI2、 MUS81和 MDA-7重组蛋白。
实施例2
将纯化的RhoGDI2、 MUS81和MDA-7重组蛋白、RhoGDI2和 MDA-7重组蛋白分别处理小鼠皮下肿瘤,分析这两组重组蛋白组合诱 导肿瘤细胞凋亡的情况,两组重组蛋白的浓度都为30ng/ml,结果请见 图1、图2及图3所示,其中图1为处理前小鼠皮下肿瘤的大小的示 意图,图2是经RhoGDI2和MDA-7蛋白治疗后肿瘤的示意图,可见 肿瘤有縮小,图3是小鼠在经MUS81, RhoGDI2和MDA-7蛋白治疗 后肿瘤的示意图,可见肿瘤有明显的縮小。由上述附图可见,这两组重组蛋白组合具有较强的杀伤肿瘤细胞的作用,但RhoGDI2、 MUS81 和MDA-7重组蛋白处理的肿瘤细胞凋亡率要高于RhoGDI2和MDA-7
重组蛋白处理的肿瘤细胞凋亡率。这说明用多种蛋白综合治疗的效果 要高于两种蛋白的效果。序列表
SEQUENCE LISTING <110>芮屈生物技术(上海)有限公司 <120> —种多蛋白肿瘤治疗药物 <130> /
<150> 200710171743.5 <151〉 2007-11-30
<160> 3
<170>Patentln version 3.3
<210> 1
<211> 201
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Thr Glu Lys Ala Pro Glu Pro His Val Glu Glu Asp Asp Asp Asp 1 5 10
Glu Leu Asp Ser Lys Leu Asn Tyr Lys Pro Pro Pro Gin Lys Ser Leu
20 25 30
Lys Glu Leu Gin Glu Met Asp Lys Asp Asp Glu Ser Leu lie Lys Tyr 35 40 45
Lys Lys Thr Leu Leu Gly Asp Gly Pro Val Val Thr Asp Pro Lys Ala 50 55 60
Pro Asn Val Val Val Thr Arg Leu Thr Leu Val Cys Glu Ser Ala Pro
65 70
80
Gly Pro lie Thr Met Asp Leu Thr Gly Asp Leu Glu Ala Leu Lys Lys
85 90
15
75
95Glu Thr lie Val Leu Lys Glu Gly Ser Glu Tyr Arg Val Lys lie His
100 105 110
Phe Lys Val Asn Arg Asp lie Val Ser Gly Leu Lys Tyr Val Gin His
115 120 125
Thr Tyr Arg Thr Gly Val Lys Val Asp Lys Ala Thr Phe Met Val Gly 130 135 140
Ser Tyr Gly Pro Arg Pro Glu Glu Tyr Glu Phe Leu Thr Pro Val Glu
145 150
160
155
Glu Ala Pro Lys Gly Met Leu Ala Arg Gly Thr Tyr His Asn Lys Ser
165 170
175
Phe Phe Thr Asp Asp Asp Lys Gin Asp His Leu Ser Trp Glu Trp Asn 180 185
190
Leu Ser lie Lys Lys Glu Trp Thr Glu
195 200
<210> 2
<211> 551
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Met Ala Ala Pro Val Arg Leu Gly Arg Lys Arg Pro Leu Pro Ala Cys 1 5 10
15
Pro Asn Pro Leu Phe Val Arg Trp Leu Thr Glu Trp Arg Asp Glu Ala
20 25 30
Thr Arg Ser Arg His Arg Thr Arg Phe Val Phe Gin Lys Ala Leu Arg
15<formula>formula see original document page 16</formula>Leu Asn Val Gly lie Gly Pro Lys Glu Pro Pro Gly Glu Glu Thr Ala
225 230
240
235
Val Pro Gly Ala Ala Ser Ala Glu Leu Ala Ser Glu Ala Gly Val Gin
245 250
255
Gin Gin Pro Leu Glu Leu Arg Pro Gly Glu Tyr Arg Val Leu Leu Cys
260 265 270
Val Asp lie Gly Glu Thr Arg Gly Gly Gly His Arg Pro Glu Leu Leu
275 280 285
Arg Glu Leu Gin Arg Leu His Val Thr His Thr Val Arg Lys Leu His 290 295 300
Val Gly Asp Phe Val Trp Val Ala Gin Glu Thr Asn Pro Arg Asp Pro
305 310
320
315
Ala Asn Pro Gly Glu Leu Val Leu Asp His lie Val Glu Arg Lys Arg
325 330
335
Leu Asp Asp Leu Cys Ser Ser lie lie Asp Gly Arg Phe Arg Glu Gin 340 345
350
Lys Phe Arg Leu Lys Arg Cys Gly Leu Glu Arg Arg Val Tyr Leu Val 355 360 365
Glu Glu His Gly Ser Val His Asn Leu Ser Leu Pro Glu Ser Thr Leu 370 375 380
Leu Gin Ala Val Thr Asn Thr Gin Val lie Asp Gly Phe Phe Val Lys
385 390
400
395Arg Thr Ala Asp lie Lys Glu Ser Ala Ala Tyr Leu Ala Leu Leu Thr
405 410 415
Arg Gly Leu Gin Arg Leu Tyr Gin Gly His Thr Leu Arg Ser Arg Pro
420 425 430
Trp Gly Thr Pro Gly Asn Pro Glu Ser Gly Ala Met Thr Ser Pro Asn 435 440 445
Pro Leu Cys Ser Leu Leu Thr Phe Ser Asp Phe Asn Ala Gly Ala lie 450 455 460
Lys Asn Lys Ala Gin Ser Val Arg Glu Val Phe Ala Arg Gin Leu Met
465 470 475
480
Gin Val Arg Gly Val Ser Gly Glu Lys Ala Ala Ala Leu Val Asp Arg
485 490 495
Tyr Ser Thr Pro Ala Ser Leu Leu Ala Ala Tyr Asp Ala Cys Ala Thr
500 505 510
Pro Lys Glu Gin Glu Thr Leu Leu Ser Thr lie Lys Cys Gly Arg Leu
515 520 525
Gin Arg Asn Leu Gly Pro Ala Leu Ser Arg Thr Leu Ser Gin Leu Tyr 530 535 540
Cys Ser Tyr Gly Pro Leu Thr
545
<210> <211> <212> <213>
550
3
206 PRT
Homo sapiens<400> 3
Met Asn Phe Gin Gin Arg Leu Gin Ser Leu Trp Thr Leu Ala Arg Pro 1 5 10
15
Phe Cys Pro Pro Leu Leu Ala Thr Ala Ser Gin Met Gin Met Val Val
20 25 30
Leu Pro Cys Leu Gly Phe Thr Leu Leu Leu Trp Ser Gin Val Ser Gly 35 40 45
Ala Gin Gly Gin Glu Phe His Phe Gly Pro Cys Gin Val Lys Gly Val 50 55 60
Val Pro Gin Lys Leu Trp Glu Ala Phe Trp Ala Val Lys Asp Thr Met
65 70
80
75
Gin Ala Gin Asp Asn lie Thr Ser Ala Arg Leu Leu Gin Gin Glu Val
85 90
95
Leu Gin Asn Val Ser Asp Ala Glu Ser Cys Tyr Leu Val His Thr Leu
100 105 110
Leu Glu Phe Tyr Leu Lys Thr Val Phe Lys Asn Tyr His Asn Arg Thr 115 120 125
Val Glu Val Arg Thr Leu Lys Ser Phe Ser Thr Leu Ala Asn Asn Phe 130 135 140
Val Leu lie Val Ser Gin Leu Gin Pro Ser Gin Glu Asn Glu Met Phe
145 150
160
155
Ser lie Arg Asp Ser Ala His Arg Arg Phe Leu Leu Phe Arg Arg Ala
165 170
175Phe Lys Gin Leu Asp Val Glu Ala Ala Leu Thr Lys Ala Leu Gly Glu
180 185 190
Val Asp lie Leu Leu Thr Trp Met Gin Lys Phe Tyr Lys Leu
195 200 20权利要求
1、一种多蛋白肿瘤治疗药物,包含肿瘤转移抑制蛋白和肿瘤抑制蛋白,以及药物学上可接受的载体赋形剂。
2、 如权利要求l所述的肿瘤治疗药物,其特征在于,所述肿瘤转 移抑制蛋白选自RhoGDI2蛋白。
3、 如权利要求2所述的肿瘤治疗药物,其特征在于,所述肿瘤转 移抑制蛋白为包含序列SEQ ID NO:l的同源蛋白RhoGDI2或其功能衍生物。
4、 如权利要求3所述的肿瘤治疗药物,其特征在于,所述肿瘤转 移抑制蛋白为重组人同源蛋白RhoGDI2。
5、 如权利要求1所述的肿瘤治疗药物,其特征在于,所述肿瘤抑 制蛋白选自MUS81蛋白、MDA-7蛋白中的一种或两种。
6、 如权利要求5所述的肿瘤治疗药物,其特征在于,所述肿瘤抑 制蛋白为包含SEQ ID NO: 2所示序列的MUS81蛋白或它的功能衍生 物。
7、 如权利要求6所述的肿瘤治疗药物,其特征在于,所述MUS81 蛋白为重组MUS81蛋白。
8、 如权利要求5所述的肿瘤治疗药物,其特征在于,所述肿瘤抑 制蛋白为包含SEQ ID NO: 3所示序列的同源蛋白MDA-7蛋白或它的 功能衍生物。
9、 如权利要求8所述的肿瘤治疗药物,其特征在于,所述其特征 在于MDA-7蛋白为重组MDA-7蛋白。
10、 如权利要求1所述的肿瘤治疗药物,其特征在于,它是单一 产品的粉剂、水剂或胶囊形式,或几组产品的粉剂、水剂或胶囊包装 在一起的形式。 全文摘要
本发明提供一种多蛋白肿瘤综合治疗药物,包含肿瘤转移抑制蛋白和肿瘤抑制蛋白,以及药物学上可接受的载体或赋形剂。采用本发明的多蛋白肿瘤综合治疗药物,比采用单一蛋白治疗药物效果更为明显。
文档编号A61K38/17GK101485881SQ20081018199
公开日2009年7月22日 申请日期2008年11月27日 优先权日2007年11月30日
发明者张云福, 裘建英 申请人:芮屈生物技术(上海)有限公司
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1