抗病毒剂在治疗医学病症中的用途的制作方法

专利名称：抗病毒剂在治疗医学病症中的用途的制作方法
抗病毒剂在治疗医学病症中的用途
该申请涉及医学病症的治疗或免疫反应的改善。更具体而言，它涉及抗病毒化合
物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗多种医学病症或改善免疫反应。 用于具体病症的现有医学治疗典型地应该试图通过物理和/或化学方法除去所 述病症的原因。例如，治疗由细菌感染引起的脓肿可能涉及脓肿排液(draining)连同抗生 素的使用。通常，医学治疗限于特定的医学病症，并且可以被诸如病原体的药物耐受性削 弱。因此，将许多研究努力花费在开发关于以前认为的不治之症的新式治疗，以提高恢复速 度，或克服药物耐受性或需求中的其它改变。 身体的天然免疫系统能够处理一定范围的否则将导致医学病症的病原体，异物， 等。 一般地，被免疫系统采用的方法分成先天反应(其包括发炎，补体蛋白质与外来细胞的 结合，和吞噬细胞对细胞的攻击，并且能够对新类型的感染迅速地反应)和靶定特定的抗 原的适应反应(包括抗体和T细胞)。虽然对于新的感染反应相对缓慢，但适应系统具有 巨大特异性并且还能建立免疫记忆，从而允许对随后的由相同病原体引起的再感染迅速反 应。 认为某些医学病症包括免疫反应的部分或完全失活。例如，免疫反应有时可以被 有意抑制，诸如在移植患者情况下以防止移植排斥。这样的抑制通常通过施用糖皮质激素， 细胞抑制剂，或其它免疫抑制药物实现。许多病症诸如AIDS (由HIV感染所引起)，某些恶 性疾病，药物滥用和营养不良也引起有害的免疫机能缺陷。在两种情况下，失去免疫功能可 以导致严重的疾病，因此必须采用另外的行为防止这个。在免疫反应已经受到有意抑制的 情况下，则必须直接靶定潜在的感染源，诸如通过抗生素的预防性施用。在免疫机能缺陷不 是医学程序的先决条件的情况下，例如在严重的饮食缺陷或晚期HIV感染中，则适合于试 图通过使用试剂诸如热增加或抗反转录病毒处理而增加免疫功能。 然而，还需要在患者(或貌似健康个体)中最优化免疫反应的活性，并且因此改善 其它疾病的症状，在所述患者(或貌似健康个体)中，免疫功能不是显著抑制的，但是免疫 系统没有在最佳水平运转。这些病症在常规意义上不被认为是免疫缺陷的，并且患有该病 症的患者不易受到与充分免疫抑制有关的典型机会感染的影响。因而这些个体一般被认为 是免疫活性的，并且最优化它们的免疫功能的潜在优点没有被预先重视。本发明已经被构 思成至少部分地解决该问题。为了本发明的目的，因此将这样的个体在下文称为免疫活性 的。 根据本发明的第一方面，提供有效针对巨细胞病毒(CMV)的化合物在制备药物中 的用途，所述药物用于改善CMV-血清反应阳性的免疫活性个体的免疫反应。
用于本文中时，术语"有效针对CMV"意欲指的是针对CMV的化合物的ID5。小于 1000 iiM。 用于本文中时，"改善免疫反应"意欲指的是减少特异于巨细胞病毒的效应子和/
或记忆T细胞的数目，和/或增加幼稚(naiVe)T细胞数目。在一个实施方案中，所述减少 (CMV-特异性效应子和/或记忆T细胞)和增加(幼稚T细胞)的至少之一至少是20% 。 在另一个实施方案中，所述减少和增加的至少之一至少是40% 。在又一个实施方案中，所述减少和增加的至少之一至少是60%。据信，在血流和淋巴系统中，通过吸收过量的淋巴系统 资源，通过抑制幼稚T细胞数目和通过分泌可溶性因子，这些特异性于CMV的效应子和记忆 T细胞有助于免疫功能的减少。 用于本文中时，"血清反应阳性的"具有指示血液中特异于CMV的抗体的可检测存 在的普通含义，并且指示过去感染的历史。 在一个实施方案中，将CMV特异性记忆或效应子T细胞数目取成由CD4+T细胞数 目表示，所述CD4+T细胞在其表面上已经失去了 CD28分子的表达。根据van Leeuwen等的 出版物，免疫学杂志(J. Immunology) ， 2004，这些CD4+CD28-T细胞是CMV-特异性CD4+T细 胞反应的特有特性。因而，将这些细胞在外周血中的比例或数量取成表示用于确定CMV-特 异性免疫反应的有价值方式。该值可以用于确定这样的个体，在所述个体中CMV-特异性免 疫反应的大小指示它们特别有可能受益于所述治疗。另外，该测量可以用于监测对于治疗 的反应，并且因此可以用于指导反应功效和潜在的需要以修正治疗剂量。
在一个实施方案中，将CMV特异性记忆或效应子T细胞数目取成由CD4+T细胞数 目表示，所述CD4+T细胞在其表面上已经失去了 CD27分子的表达。根据Pourgheysari等 的出版物，J. Virology (病毒学杂志)，2007， CD4+CD27-T细胞是CMV-特异性CD4+T细胞反 应的特有特性。因而，将这些细胞在外周血中的比例或数量取成表示用于确定CMV-特异性 免疫反应的有价值方式。该值可以用于确定这样的个体，在所述个体中CMV-特异性免疫反 应大小指示它们特别有可能受益于所述治疗。另外，该测量可以用于监测对于治疗的反应， 并且因此可以用于指导反应功效和潜在的需要以修正治疗剂量。 在一个实施方案中，将CMV特异性记忆或效应子T细胞数目取成由CD4+T细胞数 目表示，所述CD4+T细胞在其表面上已经获得了 CD57分子的表达。根据Pourgheysari等 的出版物，J. Virology (病毒学杂志)，2007， CD4+CD57+T细胞是CMV-特异性CD4+T细胞反 应的特有特性。因而，将这些细胞在外周血中的比例或数量取成表示用于确定CMV-特异性 免疫反应的有价值方式。该值可以用于确定这样的个体，在所述个体中CMV-特异性免疫反 应大小指示它们特别有可能受益于所述治疗。另外，该测量可以用于监测对于治疗的反应， 并且因此可以用于指导反应功效和潜在的需要以修正治疗剂量。 应当理解，CMV-特异性记忆或效应子T细胞数目可以通过CD4+T细胞表面上的 CD27、CD28或CD57的任何组合的表达模式测量。备选地或另外地，CMV-特异性记忆或效应 子T细胞数目可以通过CD8+T细胞表面上的CD27、 CD28或CD57的任何组合的表达模式测 量。已经失去CD27或CD28表达的CD8+细胞在外周血中的比例或数目在CMV血清反应阳 性的个体中增加。表达CD57分子的CD8+T细胞数目在CMV血清反应阳性的个体中增加。
用 于本文 中 时，如Crumpacker等，Growth inhibition by acylogimnosineofherpesviruses isolated from human infections (由从人感染分离的 疱疹病毒的酰基鸟苷引起的生长抑制)，Antimicrobial Agents and Chemother即y (抗微 生物剂和化学治疗)，1979， 15巻，第5号，642-645页的测定中所限定，测量ID5。值。
在一个实施方案中，所述药物用于改善患有本发明第二方面中列出的至少一种病 症的CMV血清反应阳性的免疫活性个体的免疫反应。 在一个实施方案中，改善免疫反应包括减少CMV-特异性免疫反应，和因此改善总 的免疫反应。
根据本发明的第二方面，提供有效针对CMV的化合物在制备药物中的用途，所述 药物用于治疗免疫活性个体中的CMV。 用于本文中时，"CMV的治疗"意欲表示更多CMV感染效果之一的改善，并且不应该 被认为需要从感染个体完全除去CMV。在一个实施方案中，CMV的治疗可以通过特异于巨细 胞病毒的效应子和/或记忆T细胞的比例减少来表示。如上，CMV-特异性记忆或效应子T 细胞的数目可以由CD4+T细胞或CD8+T细胞数目表示，所述CD4+T细胞或CD8+T细胞已经 失去了 CD28或CD27的表达，或获得了 CD57表达，或这些的任何组合。
根据本发明的第三方面，提供有效针对CMV的化合物在制备药物中的用途，所述 药物用于改善选自下列病症的症状HIV感染；情绪失调，包括抑郁，疲劳或焦虑；精神分裂 症；慢性疲劳综合征；炎性病症诸如类风湿性关节炎，全身性红斑狼疮，结节病，关节强直 性脊柱炎，牛皮癣关节病，Wegener肉芽肿病，及其它血管炎；自身免疫病症诸如多发性硬 化，Sjorgen综合征，糖尿病，原发性胆硬化，和全身硬化；恶性疾病；结节病或淀粉样变；慢 性细菌、病毒或寄生物感染，包括病毒性肝炎和Chagas病；疟疾；慢性肺病诸如支气管扩张 症或囊性纤维变性；急性冠状综合征诸如不稳定性心绞痛；动脉(例如主动脉的)动脉瘤； 动脉粥样硬化；和脑血管闭塞("中风")。 根据本发明的第四方面，提供具有针对CMV的ID5。大于20 ii M(如在Crumpacker 等的测定中所限定)的核苷类似物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗免疫活性患者 中CMV-介导的病症。 在一个实施方案中，核苷类似物具有至少50iiM的针对CMV的ID5。。在另一个实
施方案中，核苷类似物具有至少100 ii M的针对CMV的ID5。。 在一个实施方案中，核苷类似物具有小于1000 ii M的针对CMV的ID5。。 根据本发明的第五方面，提供一种医学治疗方法，所述方法包括将有效针对CMV
的化合物施用到CMV-血清反应阳性的免疫活性患者以减少针对CMV的免疫反应。 下列要点适用于本发明的全部方面。 在优选实施方案中，所述化合物或核苷类似物选自阿昔洛韦，泛昔洛韦和伐昔洛 韦。 巨细胞病毒(CMV)是人疱疹病毒，疱疹病毒科(Herpesviridae)家族中的一种。其 它人疱疹病毒导致疾病诸如口部的和/或生殖器疱疹(单纯性疱疹病毒)，水痘和带状疱疹 (水痘带状疱疹病毒)，和Burkitt淋巴瘤(Epstein-Barr病毒)。 CMV感染在免疫活性个体中是非常普遍的并且一般认为是无症状的。感染率(基 于身体中抗体的可检测的存在)根据地理区域改变在非洲，非常大多数的人群在五岁年 龄以前感染；在日本，大部分人群在二十岁的年龄以前感染；而在欧洲和北美，大约70%的 人在六十岁的年龄以前感染。 在可能发生在任何年龄的原发感染以后，CMV典型地在免疫活性的人中保持潜伏； 这被认为是CMV-特异性免疫反应作用的结果，其一般能限制溶胞病毒的复制。虽然目前准 确的细节是不清楚的，但是相信病毒可以在原发感染以后进入"潜伏"状态，但是经历再激 活的事件，其间免疫反应对于控制广泛的病毒传播很关键。 该再激活可以频繁发生的事实是由下列事实揭示的，即接受强烈免疫抑制治疗的 患者经常在数周之内遭受临床CMV病毒再激活。CMV再激活，和由此引起的组织损伤，是重免疫抑制患者诸如已经接受异源移植或具有晚期HIV感染的那些患者中充分公认的问题。 在这样的情况下，已知CMV导致疾病诸如肺炎、结肠炎、和视网膜炎。 在CMV感染潜伏期间，被感染的人保持血清反应阳性，并且这里所描述的治疗药 物和方法保持可适用。 本发明由这样的发现而产生，即与像以前认为的无症状不同，免疫活性的人中的 CMV感染事实上对某些医学病症的严重性有贡献。这些可以广泛分成两个类别(在本文中 共同称为CMV-介导的病症)
1)继发于CMV感染的免疫功能损伤 被CMV感染可以产生天然免疫功能的改变和损伤，这是由于发展CMV-特异性免疫 反应的缘故。这可以采取多种形式，包括-减少的免疫功能，特别是在生理学或心理应激的时期；-增加的免疫衰老发展，如例如通过记忆T细胞的积累或幼稚T细胞的加速损失所 示；-减小的针对其它免疫原的疫苗反应。 这对于其中免疫系统已经被损害或处于损害风险的那些是特别相关的，诸如-已过中年的个体；-经历肾渗析的患者；-处于疟疾感染风险中的患者； _已经接受同种异源移植的患者；-已经经历冠状动脉放支架或外科代管的患者；-具有可识别的危险因素的患者中脑血管闭塞("中风")的预防；-经历太空探险的个体，诸如宇航员。 2)其它医学病症症状严重性的增加 这些可以发生在许多医学病症中，包括-在疾病任何阶段的HIV感染；-情绪失调，包括抑郁，疲劳或焦虑；-精神分裂症；-慢性疲劳综合征； _炎性病症诸如类风湿性关节炎，全身性红斑狼疮，结节病，关节强直性脊柱炎，牛 皮癣关节病，Wegener肉芽肿病，及其它血管炎；-自身免疫病症诸如多发性硬化，Sjorgen综合征，糖尿病(包括并发症诸如勃起
功能障碍)，原发性胆硬化，和全身硬化；-恶性疾病；-结节病或淀粉样变；-慢性细菌、病毒或寄生物感染，包括病毒性肝炎和Chagas病；
-症疾；-慢性肺病诸如支气管扩张症或囊性纤维变性；
-急性冠状综合征诸如不稳定性心绞痛； _动脉(例如主动脉的)动脉瘤；
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-动脉粥样硬化；-脑血管闭塞("中风")；-阿尔茨海默病；-大粒性淋巴细胞增多； _Guillan_Barre综合征；-炎性肠病诸如局限性回肠炎或溃疡性结肠炎；
-醇摄取继发的临床病症。 不希望受限于理论，相信上面列出的医学病症在CMV-感染患者中是加重的。这被 认为与临床后遗症的发展有关，所述临床后遗症由CMV感染产生的不成比例地大免疫反应 的免疫调制效应产生。因此可能在不需要根除感染的条件下，通过使用抗病毒药物，减少该 免疫反应来改善医学病症的治疗。 巨细胞病毒感染可以加重这些疾病的临诊症状的证据来自两个观察。上面列出的 病症与增加的CMV血清阳性流行程度(和对照组对比)有关或经常与升高的CD28-T细胞 水平有关，可以用其表示升高的CMV-特异性免疫反应。因此，针对CMV的免疫反应在患有 这些病症的患者中放大，并且可能反映和/或促进轻微的免疫抑制或免疫失调状态，所述 免疫抑制或免疫失调状态可以通过本发明的方面至少部分逆转。 已知某些抗病毒药物用于治疗疱疹病毒感染。具体地，已知核苷类似物诸如阿昔 洛韦(也称为aciclovir(9-(2-羟基乙氧基甲基)鸟嘌呤-GB 1 523865)用于治疗人疱疹 病毒，其最有效针对单纯性疱疹病毒(HSV-1和HSV-2)和水痘带状疱疹病毒(VZV)。阿昔洛 韦在体外具有针对CMV复制的最小活性，其ID5。(药物将病毒蚀斑形成减少50%或以上的 浓度)大于100 iiM，分别与针对HSV-1 、HSV-2和VZV的值0. 15 ii M、 1. 62 ii M和3. 75 ii M相 比(根据Crumpacker等的测定)。伐昔洛韦是阿昔洛韦的L_缬氨酸酯并且起阿昔洛韦前 药的作用，并且因此具有相同作用机理。这两种药物都在通常剂量产生许多副作用，包括恶 心、呕吐、腹泻和/或头痛。 更昔洛韦和缬更昔洛韦分别是阿昔洛韦和伐昔洛韦的同源物，其已经由于它们针 对CMV显著改善的活性而被开发。这些药物广泛用于在免疫抑制患者中处理CMV疾病。然 而，更昔洛韦被认为是潜在的人类致癌剂，致畸剂，和诱变剂，并且被认为可能导致精子发 生的抑制。已知的副作用包括粒性白细胞减少，中性白细胞减少，贫血，血小板减少，发烧， 恶心，呕吐，消化不良，腹泻，腹痛，胀气，食欲缺乏，升高的肝酶类，头痛，意识混乱，幻觉，癫 痫发作，在注射位点的疼痛和静脉炎(由于高pH)，出汗，皮疹，痒病和增加的血清肌酸酐和 血脲浓度。 喷昔洛韦是阿昔洛韦的类似物，其能够在较少副作用情况下治疗疱疹病毒感染。 喷昔洛韦的抗病毒谱类似于阿昔洛韦的抗病毒谱，并且它因此具有最小的针对CMV的活 性。泛昔洛韦是喷昔洛韦的前药，具有改善的生物利用率。 因此在本领域中存在针对免疫活性患者中的CMV治疗的偏见，其基于下列看法
-大多数抗病毒药物不能有效治疗CMV ;-能治疗CMV的那些药物具有不可接受的高毒性和副作用水平； -CMV感染是近于普遍存在的，并且已经被认为是在免疫活性患者中无症状的。 然而，发明人已经发现，CMV感染不是完全无症状的，而且意外地是，事实上在用抗病毒药物治疗CMV感染患者中存在益处，所述抗病毒药物具有针对巨细胞病毒的低活性，如通过体外测定所估算。当对患者给药时，这些药物导致对于巨细胞病毒免疫反应的大量减少，最可能通过它们减少CMV再激活的亚临床事件，并且由此限制CMV-特异性免疫反应的周期性剌激的能力。 施用到患者的剂量正常应该由处方医师确定并且通常应该根据个体患者的年龄、体重和反应，以及患者症状的严重性而变化。然而，在大多数情况下，有效的治疗剂每日剂量应该在200-2000mg范围内，且优选地，在400-1000mg范围内(例如对于伐昔洛韦或阿昔洛韦)，其以单剂量或分剂量施用。然而，在一些情况下，可能必需使用这些限度以外的剂 虽然有效成分可以作为原始的化学药品单独施用，但是优选地，其以药物制剂的形式存在。本发明的制剂包含有效成分及其药用载体，和任意其它治疗成分。所述载体在与制剂的其它成分可相容和对其受体无害的意义上必须是"可接受的"。
为了避免疑问，本发明有效成分的活性可以受药物制剂的其它成分的影响。有效成分可以与药物制剂的任何其它成分形成"联合治疗"。例如，一种可能的这样的联合治疗涉及在本发明任何方面的制剂的一种中使用锌。备选的联合治疗可以包括在本发明制剂的一种中使用"抑制素"药物诸如辛伐他汀，或在用于处理肌骨胳疾病的制剂中包含抗肿瘤坏死因子(TNF)药物诸如英夫利昔单抗。 便利地，制剂的单位剂量含有200mg和800mg之间的有效成分。优选地，所述制剂
适于每天施用一至六次，诸如二至四次。适于鼻部或口腔施用的制剂，诸如在下文中描述的
自推进粉末分配制剂，可以包含0. 1至20重量％，例如约2重量％的有效成分。 所述制剂包括采用适于口服、眼部、直肠的、肠胃外的(包括皮下的，阴道的，腹膜
内的，肌肉内的和静脉内的)，关节内的，鼻部的或口腔施用形式的那些。 适于口服施用的本发明制剂可以采用离散单元的形式，诸如胶囊、扁囊剂、片剂或
锭剂，各自含有预定量的有效成分；采用粉末剂或颗粒剂的形式；采用水性液体或非性水
液体中的溶液或悬浮液的形式；或采用水包油乳剂或油包水乳剂的形式。有效成分也可以
采用丸剂(bolus)、药糖剂或糊剂的形式。对于这样的制剂，载体中有效成分的一定范围的
稀释是适合的，诸如1%至99%，优选5%至50%和更优选10%至25%稀释。根据稀释水
平，制剂应该是室温下在约2(TC的区域)的液体(或低熔化的固体。 直肠施用的制剂可以采用结合有效成分和载体诸如可可油的栓剂形式，或采用灌肠剂的形式。 适于肠胃外施用的制剂包括溶液，混悬剂或乳剂，如上所述，便利地包括，优选与受体血液等渗压的有效成分的无菌水制剂。 适于关节内施用的制剂可以采用有效成分的无菌水制剂的形式，其可以采用微晶
形式，例如，采用水性微晶混悬剂形式或作为微团分散剂或混悬剂。还可以使用脂质体制剂
或可生物降解的聚合物系统提供有效成分，特别是用于关节内的和眼部施用。 根据本发明的滴剂可以包括无菌的水性或油性溶液。适于包含在滴剂中的
防腐剂，杀细菌剂和杀真菌剂是苯汞盐(0.002% )，苯扎氯铵(0.01% )和醋酸氯己定
(0.01% )。用于制备油质溶液的适合溶剂包括甘油，稀释的醇和丙二醇。 适于施用到鼻腔和口腔的制剂包括适于吸入或吹入的那些，并且包括粉末制剂，自推进制剂和喷雾制剂诸如气溶胶和雾化器。所述制剂在分散时，优选具有在10至200 m范围内的粒子尺寸。 这样的制剂可以采用来自粉末吸入装置或自推进粉末分配制剂的用于肺部施用的精细粉碎粉末形式，其中作为精细粉碎粉末的有效成分可以构成制剂的高达99. 9重 自推进粉末分配制剂优选包括固体有效成分的分散颗粒，和在大气压力下具有18°C以下沸点的液体推进剂。 一般地，推进剂构成制剂的50至99. 9重量％，而有效成分构成制剂的0. 1至20重量％，例如约2重量％。 本发明制剂还可以采用自推进制剂的形式，其中有效成分存在于溶液中。
这样的自推进制剂可以包括有效成分，推进剂和助溶剂(co-solvent)，并且有利地包括抗氧化稳定剂。适合的助溶剂是低级烷基醇及其混合物。助溶剂可以构成制剂的5至40重量％，虽然优选小于制剂的20重量％。抗氧化稳定剂可以结合在这样的溶液制剂中以抑制有效成分的生物致劣并且方便地是碱金属抗坏血酸盐或亚硫酸氢盐(bisulphites)。它们优选以所述制剂的高达0. 25重量％的量存在。 本发明的制剂也可以采用用于喷雾器或雾化器中的有效成分的水性的或稀释的醇溶液，任选是无菌溶液，其中使用加速空气流产生由溶液的小微滴组成的细雾。这样的制剂通常含有调味剂诸如糖精钠和挥发性油。缓冲剂诸如偏亚硫酸氢钠(sodiummetabisulphite)和表面活性剂也可以包括在这样的制剂中，其应当也含有防腐剂诸如羟基苯甲酸甲酯。 适于鼻部施用的其它制剂包括具有20至500微米粒子尺寸的粉末，将其以采取鼻吸的方式施用，即通过从保持接近鼻子的粉末容器中经由鼻部通道迅速吸入。
除上述成分外，本发明的制剂可以包括一种或多种另外的成分诸如稀释剂，缓冲剂，调味剂，粘合剂，表面活性剂，增稠剂，润滑剂，防腐剂例如羟基苯甲酸甲酯(包括抗氧化剂)，乳化剂等。在本发明制剂中使用的特别优选的载体或稀释剂是C18至C24单-不饱和脂肪酸诸如油酸的低级烷基酯，例如油酸乙酯。其它适合的载体或稀释剂包括癸酯或辛酯或甘油三酯，或其混合物，诸如以商品名Miglyol销售的那些辛/癸甘油三酯，例如Miglyol 810。 现在将仅参考附图来举例描述本发明，其中

图1显示CMV感染对于外周血中T细胞计数的影响； 图2显示CMV感染对于外周血中CD8+T细胞计数的影响； 图3显示CMV感染对于外周血中记忆和效应子CD8+T细胞计数的影响； 图4显示CMV感染对于外周血中幼稚CD8+T细胞计数的影响； 图5显示CMV感染对于脱氢表雄酮(DHEA)和相应的硫酸酯(DHEAS)的血液比例
的影响； 图6显示通过用CMV-感染细胞的溶胞产物剌激来自八个健康供体的外周血显示的CMV-特异性CD4+T细胞表型； 图7显示通过用含有来自CMV的免疫显性肽的HLA-肽四聚体染色来自健康供体的外周血而产生的CMV-特异性CD8+T细胞的表型； 图8显示CMV血清反应阳性的健康供体和血清反应阴性的那些之间的CD4+T细胞特性的比较； 图9显示给药阿昔洛韦(ACV)或伐昔洛韦(VCV)的患者和对照组之间的CMV-特异性T细胞计数的比较； 图10显示使用阿昔洛韦或伐昔洛韦的治疗对CD4+T细胞针对CMV反应的时间依赖性影响； 图11显示通过Elispot分析测量的给药阿昔洛韦或伐昔洛韦的患者和对照组之间抗原特异性T细胞数目的比较； 图12显示给药阿昔洛韦或伐昔洛韦的患者和对照组之间的CD27-， CD28-，或CD57+CD4+T细胞比例的比较； 图13显示在给药阿昔洛韦或伐昔洛韦的患者和对照组之间的CD27-CD4+T细胞比例的比较； 图14显示在给药阿昔洛韦或伐昔洛韦的患者和对照组之间的CD28-CD4+T细胞比例的比较； 图15显示在给药阿昔洛韦或伐昔洛韦的患者和对照组之间的CD57+CD4+T细胞比例的比较； 图16显示在给药阿昔洛韦或伐昔洛韦的患者和对照组之间的CD57+CD8+T细胞比例的比较； 图17显示在用阿昔洛韦治疗以后的一名患者中，如通过用CMV溶胞产物剌激所测量的CMV-特异性CD4+T细胞的比例； 图18显示在用阿昔洛韦治疗以后的一名患者中，如通过Elispot分析所测量的CMV-特异性CD4+T细胞比例的测量值；禾口 参考图l，可以看到，被CMV感染在全部年龄中导致增加的T细胞计数。通过利用自动细胞("Coulter")计数器和荧光细胞(FACS)分析，测定外周血样品中的绝对淋巴细胞计数进行T细胞计数，以确定T细胞在淋巴亚型中的百分比。 参考图2，可以看出，T细胞的增加主要体现在具有CD8共受体的T细胞增加上，其是造成细胞毒素活性的原因。类似地，从图3可以看出，存在"抗原经历的"记忆和效应子CD8T细胞的相应大量增加。最后，由图4可以看出，CMV感染也与外周血中幼稚T细胞数目减少有关。 而且，从这些与CMV血清反应阳性的个体有关的细胞计数的绝对值可以看出，与
和其它病毒感染有关的免疫反应相比，CMV-特异性免疫反应异乎寻常地高。 图5显示对于CMV测试血清反应阳性的或血清反应阴性的个体测量的类固醇特性
(采用DHEA/DHEAS比例的形式)。可以看出，当和对照(CMV血清反应阴性的)组对比时，
CMV感染产生更大差距的比例，和平均比例的增加。增加的DHEA/DHEAS比例是炎性病症特
有的并且与轻微的免疫抑制有关。 参考图6， CMV-特异性的T细胞是通过响应于用CMV抗原(溶胞产物)剌激而表达干扰素-Y检测的，并且这些细胞的表型是通过用针对CD45RA， CD45R0， CD28， CD27或CD57的抗体染色来评估。可以看出，CMV-特异性CD4+T细胞的特征在于CD27和/或CD28表达的失去，和/或CD57表达的获得。这些观察提供关于CMV感染对总CD4+T细胞池上的CD27， CD28和CD57表达的影响的解释，如图8和12-15中所记载。
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参考图7， CMV-特异性的CD8+T细胞是通过用含有来自CMV的免疫显性肽的HLA-肽四聚体染色外周血T细胞而检测的。使用四聚体的阳性染色显示在y-轴上，并且这些细胞的表型进一步通过用针对CD27， CD28， CD57， CD45RA或CD45R0的抗体染色来表征，如x-轴上所示。可以再次看出，CMV-特异性CD8+T细胞主要显示CD27-， CD28-和CD57+表型。这些观察提供关于CMV感染对总CD8+T细胞池上的CD27， CD28和CD57表达的影响的解释，如图16中所记载。 参考图8，用针对CD27， CD28或CD57的抗体染色来自35位健康供体的外周血的CD4+T细胞。可以看出，表达这些标记物的CD4+T细胞的百分比在CMV-血清反应阳性(n =24)和血清反应阴性(n = 11)个体中是不同的。与血清反应阴性的个体相比，血清反应阳性的个体在CD4+群中具有更大的CD27-，CD28-和CD57+细胞的比例。CD4+CD28-T细胞增加到总的CD4+T细胞群的大约2%以上实际上仅在CMV-血清反应阳性的个体中看到。
实施例1 在服用阿昔洛韦或伐昔洛韦的CMV血清反应阳性或血清反应阴性供体的组中测量CMV-特异性免疫反应。将其与年龄-匹配的对照组比较。给药于这些供体的剂量典型地是400mg b. d.的阿昔洛韦或500mg o. d.或b. d.的伐昔洛韦。进行了 (1)这些供体的总T细胞特性，和(2)它们的CMV-特异性反应的综合分析。将结果与CMV血清反应阳性或血清反应阴性供体的年龄相配的对照组对比。结果显示在图9至16中。
参考图9，血液从健康对照CMV血清反应阳性的供体(n = 14)或服用阿昔洛韦(ACV 400mg b.d.)或伐昔洛韦(VCV 500mg o. d.或b. d.)的CMV血清反应阳性的患者(n=15)获得，并且用葡萄球菌肠毒素B(作为阳性对照)或来自卯65和IE-1的CMV溶胞产物或CMV肽池温育。抗原-特异性T细胞通过干扰素_ Y的表达检测。可以看出，CMV-特异性T细胞的数目在服用ACV或VCV的患者中是减少的。 参考图10 ，血液从服用阿昔洛韦(ACV 400mg b. d.)或伐昔洛韦(VCV500mgo.d.或b.d.)的患者获得并且用CMV溶胞产物温育。抗原-特异性T细胞通过干扰素-Y的表达检测。可以再次看出，CMV-特异性T细胞的数目在服用ACV或VCV的患者中是减少的。 参考图ll，用CMV溶胞产物剌激来自健康CMV血清反应阳性供体或服用阿昔洛韦或伐昔洛韦的患者的血液并且通过Elispot分析测量抗原-特异性的T细胞的数目。在服用ACV或VCV的患者中观察到减少的针对CMV的Elispot反应。 在图12中，用针对CD27， CD28或CD57的抗体染色35位CMV-血清反应阳性或血清反应阴性健康供体的外周血中的CD4+T细胞。将这些显示在左栏上。对服用阿昔洛韦或伐昔洛韦的患者进行类似的分析(右手栏)。可以看出，与健康供体相比，已经失去CD27或CD28表达或已经获得CD57表达的CD4+T细胞的百分比在服用ACV或VCV的CMV-血清反应阳性的患者中较低。 参考图13，用针对CD27的抗体染色25位健康供体或服用ACV或VCV的患者的外周血中的CD4+T细胞。可以看出，已经失去CD27表达的CD4+T细胞的百分比在服用阿昔洛韦或伐昔洛韦的CMV-血清反应阳性的患者中是减少的。 参考图14，用针对CD28的抗体染色25位健康供体或服用ACV或VCV的患者的外周血中的CD4+T细胞。可以看出，已经失去CD28表达的CD4+T细胞的百分比在服用阿昔洛
11韦或伐昔洛韦的CMV-血清反应阳性的患者中是减少的。 参考图15，用针对CD57的抗体染色25位健康供体或服用ACV或VCV的患者的外 周血中的CD4+T细胞。可以看出，已经获得CD57表达的CD4+T细胞的百分比在服用阿昔洛 韦或伐昔洛韦的CMV-血清反应阳性的患者中是减少的。 在图16中，用针对CD57的抗体染色健康供体或服用阿昔洛韦或伐昔洛韦的患者 的外周血中的CD8+T细胞。与健康的对照相比，在CMV血清反应阳性供体中表达CD57的 CD8+T细胞的百分比在服用阿昔洛韦或伐昔洛韦的患者中是减少的。
实施例2 在用阿昔洛韦40mg b. d.治疗以前，和在3和14个月以后，从单一个体取外周血， 并且分析其CMV-特异性免疫反应。结果显示在图17和18中。 参考图17，用CMV溶胞产物剌激血液，并且测量响应于抗原而产生干扰素-Y的 CD4+T细胞的百分比。可以看出，该百分比在处理时是减少的。 最后，参考图18，用CMV溶胞产物或来自CMV卯65或IE_1的肽池剌激血液，并且利 用干扰素-Y的Elispot分析检测CMV-特异性T细胞的数目。可以看出，该反应的量级通 过处理减小。
1权利要求
有效针对巨细胞病毒(CMV)的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于改善CMV-血清反应阳性的免疫活性个体的免疫反应。
2. 权利要求l的用途，其中改善所述免疫反应包括减少作为CD4+T细胞总数比例的 CD4+CD28-T细胞数目。
3. 权利要求l的用途，其中改善所述免疫反应包括减少作为CD4+T细胞总数比例的 CD4+CD27-T细胞数目。
4. 权利要求l的用途，其中改善所述免疫反应包括减少作为CD4+T细胞总数比例的 CD4+CD57+T细胞数目。
5. 权利要求l的用途，其中改善所述免疫反应包括减少作为CD8+T细胞总数比例的 CD8+CD28-T细胞数目。
6. 权利要求l的用途，其中改善所述免疫反应包括减少作为CD8+T细胞总数比例的 CD8+CD27-T细胞数目。
7. 权利要求l的用途，其中改善所述免疫反应包括减少作为CD8+T细胞总数比例的 CD8+CD57+T细胞数目。
8. 权利要求2至7任一项的用途，其中所述减少至少是20%。
9. 有效针对CMV的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗免疫活性个体中的CMV。
10. 有效针对CMV的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于改善选自下列病症的症状HIV感染；情绪失调，包括抑郁，疲劳或焦虑；精神分裂症；慢性疲劳综合征；炎性 病症诸如类风湿性关节炎，全身性红斑狼疮，结节病，关节强直性脊柱炎，牛皮癣关节病， Wegener肉芽肿病，及其它血管炎；自身免疫病症诸如多发性硬化，Sjorgen综合征，糖尿 病，原发性胆硬化，和全身硬化；恶性疾病；结节病或淀粉样变；慢性细菌、病毒或寄生物感 染，包括病毒性肝炎和Chagas病；症疾；慢性肺病诸如支气管扩张症或囊性纤维变性；急性 冠状综合征诸如不稳定性心绞痛；动脉(例如主动脉的)动脉瘤；动脉粥样硬化；和脑血管 闭塞("中风")。
11. 一种医学治疗方法，所述方法包括将有效针对CMV的化合物施用到CMV血清反应阳 性的免疫活性患者以减少针对CMV的免疫反应。
12. 权利要求1至IO任一项的用途，或权利要求11的方法，其中所述化合物选自阿昔 洛韦、泛昔洛韦和伐昔洛韦。
13. 具有大于20iiM的针对CMV的ID5。的核苷类似物在制备药物中的用途，所述药物 用于治疗免疫活性患者中CMV-介导的病症。
14. 权利要求13的用途，其中所述核苷类似物具有至少50 ii M的针对CMV的ID5。。
15. 权利要求13或14的用途，其中所述核苷类似物选自阿昔洛韦、泛昔洛韦和伐昔洛韦。
全文摘要
本发明提供有效针对巨细胞病毒(CMV)的化合物在制备药物中的应用，所述药物用于改善CMV-血清反应阳性的、免疫活性的个体的免疫反应，或用于改善某些其它的医学病症。适合的化合物包括核苷类似物阿昔洛韦，泛昔洛韦，和伐昔洛韦。被巨细胞病毒感染是普遍的并且通常被认为在免疫活性个体中是无症状的并且在不使用高细胞毒性药物的情况下是不可治疗的。本文中提出，事实上，CMV感染产生不成比例地大免疫反应，因此削弱免疫系统响应其它感染的能力(并且由此不是无症状的)。另外，用相对小剂量的具有低细胞毒性(并且因此类似低功效)的药物治疗可以减少该CMV-特异性免疫反应的量级，从而增加总免疫反应，并且改善其它医学病症的症状。
文档编号A61P31/00GK101765424SQ200880100844
公开日2010年6月30日 申请日期2008年5月30日 优先权日2007年5月30日
发明者保罗·奥斯汀·亨利·默斯 申请人:伯明翰大学