用于治疗cmt和相关疾病的新治疗方法

专利名称：：用于治疗cmt和相关疾病的新治疗方法
技术领域：
：本发明涉及用于治疗沙-马-图病(Charcot-Marie-Toothdisease)和相关疾病的组合物和方法。
背景技术：
：沙-马-图病(“CMT”)是一种遗传性外周多发性孤儿神经病。大约在2500人中有1人患病，这种疾病是外周神经系统最常见的遗传性疾病。它的发作典型情况下在生命的第一个或第二个十年中出现，尽管在婴儿期也可以检测到它。疾病过程是慢性的，具有逐渐的神经肌肉变性。在伴随有神经痛和极度肌无力的病例中，疾病可造成残废。CMT是研究得最深入的遗传病之一，在法国使用了大约30，000个病例。尽管大多数CMT患者带有含有髓磷脂基因PMP22的17号染色体片段的重复(CMT1A形式)，但有两打以上的基因与不同形式的CMT相关。因此，尽管起源是单基因的，但由于可能的调节基因，该疾病表现出临床异质性。CMT患者中突变的基因，簇集在紧密关联的影响施旺细胞(Schwanncells)或神经元的分化、或在外周神经中改变这些细胞的相互作用的分子途径周围。PMP22是表达在外周神经系统中基本上所有有髓纤维的致密部分中的髓磷脂的主要成分，主要由施旺细胞产生。在CMT患者中，在对于重复片段来说杂合的施旺细胞中也观察到正常PMP22蛋白的中毒1.5倍的过表达(在某些罕见病例中，CMTlA样表型也可能与PMP22蛋白中的结构突变相关)(Lupski等，1992；Suter等，1992；Roa等，1993；Thomas等，1997;Suter&Scherer，2003;Nave&Sereda，2007)。异常的PMP22基因剂量引起CMTlA样表型的直接证据，由在具有PMP22蛋白过表达的啮齿动物模型中进行的转基因实验提供(Niemann等，1999；Perea等，2001；Robaglia-Schlupp等，2002；Meyer等，2006；Sereda&Nave，2006)。此外，使用孕酮受体特异性抑制剂奥那司酮(onapristone)(Sereda等，2003;MeyerzuHorste等，2007)和抗坏血酸(Passage等，2004)进行的治疗性干预，在转基因动物中降低了这种表达，缓解或减慢了疾病表型的发展。现有的实验数据表明，PMP22蛋白不仅是髓鞘的结构成分，而且作为重要的调控蛋白，影响了施旺细胞中的多种表型性状。将蛋白的异常水平与它在突变的CMTlA神经胶质细胞中功能的改变相关联的准确机制还未完全了解，但某些可能解释它对施旺细胞生物学的有害效应的细胞机制正开始浮现。挖掘公用数据，描述CMTlA疾病的分子机制和病理表现，允许我们对几个功能性细胞模块——PMP22基因的转录调控，PMP22蛋白的折叠/降解，施旺细胞的增殖和凋亡，细胞外基质的沉积和重塑，免疫应答——作为CMT相关治疗性干预的潜在合理的靶，按优先顺序进行排列。这些失调控的功能性模块对沙-马-图病的病理表现的发生和发展的组合影响，为组合CMT疗法的潜在效能提供了证明。在最初建立了CMT病理的动态模型后，对以功能性调控CMTlA疾病相关细胞途径为目标的市销一般药物进行了筛选。发明概述本发明的目的是提供用于治疗CMT和相关疾病的新的治疗方法。本发明还涉及用于调节PMP22在对象中的表达的组合物和方法。本发明人在对象中鉴定了各种不同的可以被调控以缓解CMT和相关疾病的途径。本发明人还鉴定到几种药物，当组合或单独使用时，可以有效地影响这些引起CMT和相关疾病的途径，它们代表了治疗这些疾病的新疗法。因此，本发明提供了用于治疗CMT疾病和相关疾病的新的组合物和方法。更具体来说，本发明的目标涉及化合物的组合在治疗CMT或相关疾病(的药物制造)中的应用，其中所述化合物选自GABA-B受体激动剂，毒蕈碱受体激动剂，留体激素受体拮抗剂，影响D-山梨糖醇信号传导途径的药物，阿片样受体拮抗剂或部分激动剂，甲状腺激素信号传导抑制剂，ERK(细胞外信号调控的激酶)激活剂和pAkt激酶抑制剂，COX抑制剂，及其任何组合。化合物可以是药物或抗体(或其片段或衍生物)，蛋白或肽。本发明的另一个目标涉及选自下列化合物的组合或其单个化合物在治疗CMT或相关疾病(的药物制造)中的应用化合物A:D-山梨糖醇(CAS50-70-4)及其可能的盐、前体药物和衍生物；化合物B:巴氯芬(CAS1134-47-0，和巴氯芬盐酸盐为CAS63701-56-4)及其可能的盐、前体药物和衍生物；化合物C毛果芸香碱(CAS92_13_7，和毛果芸香碱盐酸盐为CAS54-71-7)及其可能的盐、前体药物和衍生物；化合物D纳曲酮(CAS16590-41-3，纳曲酮盐酸盐为CAS16676-29-2)及其可能的盐、前体药物和衍生物；化合物E甲巯咪唑(CAS60-56-0)及其可能的盐前体药物和衍生物；化合物F米非司酮(CAS84371-65-3)及其可能的盐、前体药物和衍生物；孟鲁司特(CAS158966-92-8)及其可能的盐前体药物和衍生物；酮洛芬(CAS22071-15-4，和酮洛芬钠CAS57495-14-4)及其可能的盐前体药物和衍生物；化合物G。本发明的另一个目标涉及选自下列的化合物或其组合在治疗CMT或相关疾病(的药物制造)中的应用乙酰唑胺(CAS59-66-5，钠盐形式为CAS1424-27-7)及其可能的盐和衍生物；氨鲁米特(CAS125-84-8)及其可能的盐和衍生物；氨曲南(CAS78110-38-0,氨曲南二钠盐为CAS80581-86-8)及其可能的盐和衍生物；巴氯芬(CAS1134-47-0，巴氯芬盐酸盐为CAS63701-56-4)及其可能的盐、前体药物和衍生物；巴柳氮(CAS80573-04-2，150399-21-6(二钠盐形式)，213594-60-6(二钠盐形式)，和82101-18-6)及其可能的盐和衍生物；比卡鲁胺(CAS90357-06-5)及其可能的盐和衍生物；溴隐亭(CAS25614-03-3，甲磺酸盐形式为CAS22260-51-1)及其可能的盐和衍生物；布美他尼(CAS28395-03-1)及其可能的盐和衍生物；丁螺环酮(CAS36505-84-7，盐酸盐形式为CAS33386-08-2)及其可能的盐和衍生物；环丙沙星(CAS85721-33-1，盐酸盐形式为CAS86393-32-0)及其可能的盐和衍生物；可乐定(CAS4205-90-7，盐酸盐形式为CAS4205-91-8)及其可能的盐和衍生物；环孢菌素A(CAS59865-13-3)及其可能的盐和衍生物；双硫仑(CAS97-77-8)及其可能的盐、前体药物和衍生物；依西美坦(CAS107868-30-4)及其可能的盐和衍生物；非氨酯(CAS25451-15-4)及其可能的盐和衍生物；非诺贝特(CAS49562-28-9)及其可能的盐和衍生物；非那利得(CAS98319-26-7)及其可能的盐和衍生物；氟吗西尼(CAS78755-81-4)及其可能的盐和衍生物；氟硝西泮(CAS1622-62-4)及其可能的盐和衍生物；呋塞米(CAS54-31-9)及其可能的盐和衍生物；加巴喷丁(CAS60142-96-3)及其可能的盐和衍生物；加兰他敏(CAS357-70-0，氢溴酸盐形式为CAS1953-04-4)及其可能的盐和衍生物；氟哌啶醇(CAS52-86-8)及其可能的盐和衍生物；布洛芬(CAS15687_27_1，钠盐为CAS31121-93-4)及其可能的盐和衍生物；异丙肾上腺素(CAS7683_59_2，盐酸盐形式为CAS51-30-9，CAS5984_95_2(异丙肾上腺素(_)_盐酸盐))及其可能的盐和衍生物；L-肉毒碱(CAS541-15-1，盐酸盐形式为CAS6645-46-1)及其可能的盐和衍生物；三碘甲状腺素(T3)(CAS6893-02-3，钠盐形式为CAS55-06-1)及其可能的盐和衍生物；氯沙坦(CAS114798-26-4，钾盐形式为CAS124750-99-8)及其可能的盐和衍生物；洛沙平(CAS1977-10-2，琥珀酸盐和盐酸盐形式分别为CAS27833-64-3和CAS54810-23-0)及其可能的盐和衍生物；奥西那林(CAS586-06-1，硫酸盐形式为CAS5874-97-5)及其可能的盐和衍生物；间羟胺(CAS54-49-9，酒石酸氢盐形式为CAS33402-03-8)及其可能的盐和衍生物；甲福明(CAS657-24-9，盐酸盐形式为CAS1115-70-4)及其可能的盐和衍生物；甲巯咪唑(CAS60-56-0)及其可能的盐和衍生物；甲基麦角新碱(CAS113_42_8，对应的马来酸盐为CAS57432-61-8)及其可能的盐和衍生物；美替拉酮(CAS54-36-4)及其可能的盐和衍生物；美托洛尔(CAS37350-58-6,CAS51384-51-1和CAS56392-17-7(酒石酸盐形式))及其可能的盐和衍生物；米非司酮(CAS84371-65-3)及其可能的盐、前体药物和衍生物；纳多洛尔(CAS42200-33-9)及其可能的盐和衍生物；纳洛酮(CAS465_65_6，二水盐酸盐形式为CAS51481-60-8)及其可能的盐和衍生物；纳曲酮(CAS16590-41-3，纳曲酮盐酸盐为CAS16676-29-2)及其可能的盐、前体药物和衍生物；氟诺沙星(CAS70458-96-7)及其可能的盐和衍生物；戊唑星(CAS359-83-1，戊唑星(+)形式为CAS7361-76-4，乳酸盐形式为CAS17146-95-1，盐酸盐形式为CAS64024-15-3)及其可能的盐和衍生物；酚苄明(CAS59-96-1，盐酸盐形式为CAS63-92-3)及其可能的盐和衍生物；苯丁酸酯(CAS1716-12-7，对应于钠盐形式；CAS1821-12-1，对应于4-苯基丁酸)及其可能的盐和衍生物；毛果芸香碱(CAS92-13-7，毛果芸香碱盐酸盐为CAS54-71-7)及其可能的盐、前体药物和衍生物；吡格列酮(CAS111025-46-8，盐酸盐形式为CAS112529-15-4)及其可能的盐和衍生物；哌唑嗪(CAS19216-56-9，盐酸盐形式为CAS19237-84-4)及其可能的盐和衍生物；雷洛昔芬(CAS84449-90-1，盐酸盐形式为CAS82640-04-8)及其可能的盐和衍生物；利福平(CAS13292-46-1)及其可能的盐和衍生物；辛伐他汀(CAS79902-63-9)及其可能的盐和衍生物；D-山梨糖醇(CAS50-70-4)及其可能的盐、前体药物和衍生物；化合物螺内酯(CAS52-01-7)及其可能的盐和衍生物；他莫昔芬(CAS10540_29_1，柠檬酸盐形式为CAS54965-24-1)及其可能的盐和衍生物；曲洛司坦(CAS13647-35-3)及其可能的盐和衍生物；丙戊酸(CAS99-66-1，钠盐和双丙戊酸钠形式分别为CAS1069-66-5和CAS76584-70-8)及其可能的盐和衍生物；卡马西平(CAS298_46_4，二水形式为CAS85756-57-6)及其可能的盐和衍生物；酮洛芬(CAS22071_15_4，酮洛芬钠为CAS57495-14-4)及其可能的盐和衍生物；氟比洛芬(CAS5104-49-4,S和R对映异构体对应于CAS51543-39-6和CAS51543-40-9；钠盐形式对应于CAS56767-76-1)及其可能的盐和衍生物；双氯芬酸(CAS15307-86-5，钠盐形式为CAS15307-79-6；钾盐形式为CAS15307-81-0)及其可能的盐和衍生物；美洛昔康(CAS71125-38-7)及其可能的盐和衍生物；他克莫司(CAS104987-11-3，单水固体形式为CAS109581-93-3)及其可能的盐和衍生物；地西泮(CAS439-14-5)及其可能的盐和衍生物；度他雄胺(CAS164656-23-9)及其可能的盐和衍生物；吲哚美辛(CAS53-86-1，两种钠盐形式为CAS74252-25-8和7681-54-1)及其可能的盐和衍生物；地诺前列酮(CAS363-24-6)及其可能的盐和衍生物；卡巴可(CAS51-83-2，对应的胆碱碳酸酯为CAS462_58_8)及其可能的盐和衍生物；雌二醇(β和α形式分别为CAS50-28-2和57-91-0)及其可能的盐和衍生物；姜黄素(CAS458-37-7)及其可能的盐和衍生物；锂(CAS7439_93_2，无水碳酸盐和柠檬酸盐形式为CAS554-13-2和919-16-4；氯化物形式为CAS7447-41-8)及其可能的盐和衍生物；雷帕霉素(CAS53123-88-9)及其可能的盐和衍生物；甜菜碱(氯醛甜菜碱为CAS2218-68-0；CAS107-43-7,17146-86-0,590-46-5，590-47-6对应于甜菜碱，单水甜菜碱，盐酸甜菜碱和单水甜菜碱形式)及其可能的盐和衍生物；海藻糖(CAS4484-88-2)及其可能的盐和衍生物；阿米洛利(CAS2016-88-8对应于无水盐酸盐；CAS2609-46-3对应于阿米洛利(在IPA中鉴定))及其可能的盐和衍生物；沙丁胺醇(CAS18559-94-9，硫酸盐形式为CAS51022-70-9)及其可能的盐和衍生物。本发明的另一个目标涉及选自下列的至少两种化合物或其盐或前体药物的组合在治疗CMT或相关疾病(的药物制造)中的应用D-山梨糖醇(化合物A)；巴氯芬(化合物B)；毛果芸香碱(化合物C)；纳曲酮(化合物D)；甲巯咪唑(化合物E)；米非司酮(化合物F)和酮洛芬(化合物G)。本发明的另一个目标涉及选自下列的化合物或其盐、前体药物或激动剂在治疗CMT或相关疾病(的药物制造)中的应用D-山梨糖醇(化合物A)，巴氯芬(化合物B)，毛果芸香碱(化合物C)，纳曲酮(化合物D)，甲巯咪唑(化合物E)，米非司酮(化合物F)和酮洛芬(化合物G)。本发明的另一个目标涉及选自下列至少两种化合物或其盐、前体药物或激动剂的组合在治疗CMT或相关疾病(的药物制造)中的应用乙酰唑胺，氨鲁米特，氨曲南，巴氯芬，巴柳氮，比卡鲁胺，溴隐亭，布美他尼，丁螺环酮，环丙沙星，可乐定，环孢菌素A，双硫仓，依西美坦，非氨酯，非诺贝特，非那利得，氟吗西尼，氟硝西泮，呋塞米，加巴喷丁，加兰他敏，氟哌啶醇，布洛芬，异丙肾上腺素，L-肉毒碱，三碘甲状腺素(T3)，氯沙坦，洛沙平，奥西那林，间羟胺，甲福明，甲巯咪唑，甲基麦角新碱，美替拉酮，美托洛尔，米非司酮，孟鲁司特，纳多洛尔，纳曲酮，纳洛酮，氟诺沙星，戊唑星，酚苄明，苯丁酸酯，毛果芸香碱，吡格列酮，哌唑嗪，雷洛昔芬，利福平，辛伐他汀，螺内酯，他莫昔芬，曲洛司坦，丙戊酸，卡马西平，酮洛芬，氟比洛芬，双氯芬酸，美洛昔康，D-山梨糖醇，他克莫司，地西泮，度他雄胺，吲哚美辛，地诺前列酮，卡巴可，雌二醇，姜黄素，锂，雷帕霉素，甜菜碱，海藻糖，阿米洛利，沙丁胺醇。本发明的另一个目标涉及选自下列至少两种化合物或其盐、前体药物或激动剂的组合在患有CMT或相关疾病的对象中降低PMP22表达(的药物制造)中的应用D-山梨糖醇(化合物A)，巴氯芬(化合物B)，毛果芸香碱(化合物C)，纳曲酮(化合物D)，甲巯咪唑(化合物E)，米非司酮(化合物F)，酮洛芬(化合物G)。本发明的另一个目标涉及选自下列至少两种化合物或其盐、前体药物或激动剂的组合在患有CMT或相关疾病的对象中降低PMP22表达(的药物制造)中的应用乙酰唑胺，氨鲁米特，氨曲南，巴氯芬巴柳氮，比卡鲁胺，溴隐亭，布美他尼，丁螺环酮，环丙沙星，可乐定，环孢菌素A，双硫仑，依西美坦，非氨酯，非诺贝特，非那利得，氟吗西尼，氟硝西泮，呋塞米，加巴喷丁，加兰他敏，氟哌啶醇，布洛芬，异丙肾上腺素，L-肉毒碱，三碘甲状腺素(T3)，氯沙坦，洛沙平，奥西那林，间羟胺，甲福明，甲巯咪唑，甲基麦角新碱，美替拉酮，美托洛尔，米非司酮，孟鲁司特，纳多洛尔，纳曲酮，纳洛酮，氟诺沙星，戊唑星，酚苄明，苯丁酸酯，毛果芸香碱，吡格列酮，哌唑嗪，雷洛昔芬，利福平，辛伐他汀，螺内酯，他莫昔芬，曲洛司坦，丙戊酸，卡马西平，酮洛芬，氟比洛芬，双氯芬酸，美洛昔康，D-山梨糖醇，他克莫司，地西泮，度他雄胺，吲哚美辛，地诺前列酮，卡巴可，雌二醇，姜黄素，锂，雷帕霉素，甜菜碱，海藻糖，阿米洛利，沙丁胺醇。本发明的另一个目标是药物组合物，含有选自D-山梨糖醇，巴氯芬，毛果芸香碱，纳曲酮，甲巯咪唑，米非司酮和酮洛芬的至少两种化合物或其盐或前体药物的组合，以及药学上适当的赋形剂。在优选实施方案中，上述药物组合使用以提供最有效的效果。就此而言，本发明的另一个目标在于药物组合在治疗CMT或相关疾病中的应用，其中所述组合选自-留体激素受体拮抗剂和选自下列的化合物毒蕈碱受体激动剂，GABA-B受体激动剂，ERK激活剂，pAkt激酶抑制剂，影响甲状腺激素信号传导的药物；影响D-山梨糖醇信号传导途径的药物，阿片样受体拮抗剂，COX抑制剂；-毒蕈碱受体激动剂和选自下列的化合物=GABA-B受体激动剂，ERK激活剂，pAkt激酶抑制剂，影响甲状腺激素信号传导的药物；影响山梨糖醇信号传导途径的药物，阿片样受体拮抗剂，Cox抑制剂；-GABA-B受体激动剂和选自下列的化合物ERK激活剂，pAkt激酶抑制剂，影响甲状腺激素信号传导的药物；影响山梨糖醇信号传导途径的药物，阿片样受体拮抗剂，Cox抑制剂；-ERK激活剂和选自下列的化合物pAkt激酶抑制剂，影响甲状腺激素信号传导的药物；影响山梨糖醇信号传导途径的药物，阿片样受体拮抗剂，Cox抑制剂；-pAkt激酶抑制剂和影响甲状腺激素信号传导的药物；选自下列的化合物影响山梨糖醇信号传导途径的药物，阿片样受体拮抗剂，Cox抑制剂；-影响甲状腺激素信号传导的药物；和影响山梨糖醇信号传导途径的药物和阿片样受体拮抗剂或Cox抑制剂；-影响山梨糖醇信号传导途径的药物和阿片样受体拮抗剂或Cox抑制剂；-阿片样受体拮抗剂和Cox抑制剂。在具体情况下，本发明涉及在上述化合物或组合物或组合在治疗CMT中的应用。本发明还提供了用于治疗CMT或相关疾病、特别是CMT的方法，包括向需要的对象施用有效量的上面公开的任何化合物或化合物组合或组合物。优选的方法包括施用选自化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E、化合物F和化合物G的至少两种化合物或其盐或前体药物的组合。就此而言，本发明的具体目标是在对象中治疗CMTla的方法，包括向对象施用有效量的如上所公开的化合物或化合物组合。任何本文公开的各种治疗应用或方法，还可以包含诊断患者为患有CMT或相关疾病、特别是CMT1A，或鉴定个体为处于发生CMT或相关疾病、特别是CMTlA的风险的任选步马聚ο就此而言，本发明的另一个目标是治疗CMT、特别是CMTla的方法，方法包括(1)评估对象是否患有CMT、特别是CMTla，以及(2)使用有效量的上述化合物的组合治疗患有CMT、特别是CMTla的对象。确定对象是否患有CMT、特别是CMTla，可以通过本
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中本身已知的各种测试，例如DNA分析测定来进行。这样的诊断可以通过，例如，评价在治疗之前和期间患者(样品)中的PMP22表达或功能来作出。本发明的另一个目标是包含PMP22或PMP22片段作为患者接种的免疫原的组合物。本发明的另一个目标是包含抗PMP22抗体或该抗体的片段或衍生物的疫苗。本发明可用于在任何哺乳动物对象、特别是人类对象中治疗CMT或相关疾病，更优选治疗CMTla。图1、选择的药物对PMP22mRNA表达水平的影响。图2、选择的药物对PMP22mRNA表达水平的影响。图3、选择的药物在不同剂量下对PMP22mRNA表达水平的影响。图4、选择的药物对PMP22蛋白表达水平的影响。图5、毛果芸香碱和纳曲酮的组合对PMP22蛋白表达水平的影响。图6、以趋势形式表现的在整个杆试验(Bar-test)治疗研究过程中雌性大鼠的运动评估结果。A甲巯咪唑；B:毛果芸香碱。图7、治疗16周后在该试验中记录的平均杆试验表现。A甲巯咪唑；B毛果芸香碱。图8、在20周期间，用药物治疗的CMT大鼠中灵敏性神经电位幅度的电生理评估。A甲巯咪唑；B毛果芸香碱。发明详述本发明提供了用于治疗CMT或相关疾病的新的治疗方法。本发明公开了允许对这些疾病进行有效纠正的药物或药物组合的新应用，并可用于任何哺乳动物对象。在本发明的背景内，术语“CMT相关疾病”是指其他与髓磷脂蛋白、包括PMP22的异常表达相关的疾病。这些疾病的多样性是由于PMP22功能的多样性所致。首先，PMP22是在外周神经系统中基本上所有有髓纤维的致密部分中表达的髓磷脂的主要成分。PMP22蛋白与另一种结构髓磷脂蛋白PO相互作用，因此，PMP22/P0蛋白比例的变化可能影响髓鞘的紧密(Vallat等，1996；D，Urso等，1999)。正如通过体外研究所证实的，PMP22蛋白也以P因子依赖性方式参与细胞伸展的调控，因此可以影响轴突入鞘(Brancolini等，1999)。此外，PMP22与α6β4整合蛋白形成复合物，可以介导施旺细胞与细胞外基质的相互作用(Amici等，2006；Amici等，2007)。此外，ΡΜΡ22蛋白水平增加可以改变Arf6调控的质膜内体再循环途径，导致PMP22在晚期内体中的积累(Chies等，2003)。也已证明，过表达的PMP22蛋白扰乱了细胞内蛋白分选，导致施旺细胞中蛋白降解机制的过载(Notterpek等，1997；Tobler等，2002；Fortun等，2003；Fortun等，2006；Fortun等，2007；Khajavi等，2007)。最后，PMP22直接参与细胞增殖和程序化细胞死亡的控制(Sancho等，2001；Atanasoski等，2002)，突变的PMP22蛋白显示出引起轴突离子通道的深度重新组织和异常表达(Ulzheimer等，2004；Devaux&Scherer，2005)。PMP22也在人类脑的某些部分中表达(OhsawaY等，2006)。有证据显示它牵涉情绪障碍(Le-NiculescuH等，2008)和精神分裂症(DrachevaS等，2006)。PMP22在建立脑/血液屏障中发挥作用(RouxKJ等，2004)，脑/血液屏障在多发性硬化症和神经变性疾病中通常是有缺陷的。因此，术语“CMT相关疾病”是指阿茨海默氏(Alzheimer’s)病(AD)，AD型老年痴呆症(SDAT)，帕金森氏(Parkinson's)症，路易体(Lewisbody)痴呆，血管性痴呆，孤独症，轻度认知障碍(MCI)，增龄性记忆障碍(AAMI)以及与衰老相关的问题，脑炎后帕金森氏症，精神分裂症，抑郁症，双相障碍和其他情绪障碍，亨廷顿氏(Huntington’s)病，运动神经元疾病包括肌萎缩侧索硬化(ALS)，多发性硬化症，特发性神经病，糖尿病性神经病，中毒性神经病包括由药物治疗诱导的神经病，由HIV、辐射、重金属和维生素缺乏状态引起的神经病，基于朊病毒的神经变性，包括克-雅(Creutzfeld-Jakob)病(CJD)，牛海绵状脑病(BSE)，GSS，FFI，库鲁(Kuru)病和Alper，s综合征。在优选实施方案中，CMT相关疾病是指神经病，例如脱髓鞘性神经病，包括HNPP(遗传性压力易感性神经病)，CMT1B，CMT1C,CMTID,CMT1X,CMT2A,CMT2B,CMT2D,CMT2E，CMT2-P0，严重脱髓鞘神经病DSS(德热里纳-索塔斯(Dejerine-Sottas)综合征)，CHN(先天性髓鞘发育不良神经病)，CMT4A,CMT4B1，CMT4B2，CMT4D,CMT4F,CMT4,AR-CMT2A,HSNl。在本文中使用时，疾病的“治疗”包括治疗、防止、预防、阻滞或减轻由疾病引起的疼痛。术语治疗特别包括控制疾病的发展和相关症状。此外，术语化合物是指在本申请中具体命名的化学化合物，以及任何带有其可接受的盐、水合物、酯、醚、异构体、消旋体、结合物和前体药物的药物组合物。术语抗体是指单克隆或多克隆抗体。术语片段非限制性地指示免疫球蛋白链，Fab或Fab’片段，或CDR区域。抗体的衍生物包括单链抗体，人源化抗体，嵌合抗体等。抗体片段或衍生物应保持抗体的表位特异性。此外，术语“组合”是指将至少两种药物共同施用于对象以引起生物学效应的处理方法。在组合疗法中，所述至少两种药物可以一起或分开、同时或相继给药。此外，所述至少两种药物也可以通过不同的途径或方案给药。本发明显示，外周髓磷脂蛋白的功能性可以受到影响毒蕈碱受体、GABA-B受体、甾体激素受体、阿片样受体、山梨糖醇信号传导途径，或激活ERK(细胞外信号调控的激酶)、COX抑制剂、甲状腺激素信号传导抑制剂，和/或抑制pAkt激酶的药物的调节，从而允许设计CMT及相关疾病的新的治疗方法。此外，本发明公开了以组合或独自调节上述途径、并可用于治疗所述疾病的具体药物的鉴定和活性。更具体来说，本发明显示，化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E、化合物F和化合物G，或以组合或独自、优选组合，可用于治疗CMT或相关疾病。D-山梨糖醇(化合物A)该药物，C6H14O6，是膀胱冲洗、轻泻和高渗类别的成员。它已被批准用于治疗i)膀胱(成人)的冲洗，用于在前列腺外科手术或其他尿道外科手术过程中防止感染，)中毒(成人)，当与活性炭混合时，以及iii)便秘(成人)，用作高渗轻泻剂它通过将流体保留在结肠中起作用，帮助增加肠内的肌肉运动在CMTIA疾病中的目标代谢途径细胞外信号调控的激酶(ERK)和Akt途径以相反的方式控制PMP22基因的表达PMP22基因的转录通过活化的PI3K/pAkt/GSK-3β信号传导途径而增加，并受到Ras/MEK/ERK激酶级联的抑制。化合物A能够活化ERK/JNK/p38激酶，并可能通过调节ERK激酶活性降低PMP22基因的表达(Bogoyevitch等，1995；Galvez等，2003)。由PMP22基因过表达引起的错误折叠的PMP22蛋白聚集物，是CMTlA施旺细胞的整体表型特征，并可能影响细胞内膜的动力学、蛋白分类和降解。因此，D-山梨糖醇作为具有分子伴侣活性的细胞渗压剂，可以通过增加细胞内参与蛋白折叠和清除的机制的能力，更加抑制过表达的PMP22基因的有害效应(Fortun等，2005；Fortun等，2006；Welch&Brown,1996)。化合物A还可以通过刺激与化合物A特异性结合的2型毒蕈碱受体来执行增强的效应。这导致PMP22表达的降低。最后，化合物A通过反馈抑制醛糖还原酶代谢途径来抑制凋亡和氧化应激。在醛糖还原酶代谢途径中产生D-山梨糖醇。弱化醛糖还原酶基因在大鼠细胞中抑制了凋亡和氧化应激(NambuH等，2008)。巴氯芬(化合物B)该药物，C10H12ClNO2,已被批准用于缓解由多发性硬化症引起的可逆性痉挛状态的体症和症状，特别是用于减轻屈肌痉挛和伴随的疼痛，阵挛和肌肉强直，以及用于在对口服疗法无响应或不能耐受的患者中，鞘内治疗脊髓源性的严重痉挛状态。化合物B是GABA-B受体的直接激活剂。其作用的准确机制还未完全了解。它能够在脊椎水平上抑制单突触和多突触反射，这可能是通过传入末端的超极化，尽管在脊椎上位点处也可能发生作用并有助于其临床效应。在CMTIA疾病中的目标代谢途径已显示，GABA(B)受体通过GPCR相互作用支架蛋白(GISP)活化ERKV2激酶，因此能够对PI3K-Akt-GSK-3β信号传导途径和参与施旺细胞中ΡΜΡ22基因的正转录调控的甾体激素受体的活性进行负调控(Kantamneni等，2007；Lange等，2007；Miller等，2007；Tu等，2007)。此外，GABAB受体能够以发育背景依赖性的方式，降低GABAA受体的活性，后者也被识别为PMP22表达的正调控剂(Obrietan&vandenPol，1998)。毛果芸香碱(化合物C)该药物，C11H16N2O2，已被批准用于治疗i)由头颈部癌症的放射疗法引起的唾液腺机能减退导致的口干的症状；以及ii)在患有舍格伦氏(Sjogren's)综合征的患者中治疗口干的症状。作为毒蕈碱受体激动剂，它引起平滑肌纤维收缩(消化道，眼，支气管)，刺激汗液、唾液、支气管和胃分泌。此外，它表现出复杂的心血管作用，刺激拟副交感神经(血管舒张)神经节兴奋(excitoganglionary)途径。在CMTIA疾病中的目标代谢途径我们证明了毛果芸香碱，一种毒蕈碱受体激动剂，在体外降低了施旺细胞中PMP22蛋白的表达。毒蕈碱受体能够在不同的细胞背景中调节Akt和Erk途径二者，因此能够参与这两种信号传导途径的精细开关控制，分别参与PMP22蛋白的正和负转录调控。我们提出，通过毛果芸香碱刺激毒蕈碱受体——可能是通过分子机制的复杂设置——导致细胞内Erk/Akt活性的平衡移向更显著的Erk信号传导，抑制了PMP22基因的表达。例如，毒蕈碱受体能够通过促进IRS-I酪氨酸去磷酸化作用，选择性阻断由pAkt/GSK-3i3功能性模块介导的IGF-I引起的信号传导，其中去磷酸化作用将IRS-I与被刺激的IGF-I受体解偶联(Batty等，2004；Stirnweiss等，2006)。纳曲酮(化合物D)该药物，C20H23NO4,已被批准用于治疗乙醇依赖性和用于阻断外源给药的阿片样物质的效应。该药物与阿片样μ受体拮抗性结合，从而阻止了常规的含鸦片药物(海洛因，吗啡)结合和诱导阿片样神经反应。它可逆地显著弱化或完全阻断了静脉内给药的阿片类物质的主体性效应。当在长期基础上与吗啡共同给药时，它阻断了对吗啡、海洛因和其他阿片样物质放入生理依赖性。在对阿片样物质生理依赖的对象中，它将使戒断症状加速下降。在酗酒中的作用机制还未被了解；但是，临床前数据表明内源阿片样系统参与其中。它与这样的受体竞争性结合，可以阻断内源性阿片样物质的效应。在CMTIA疾病中的目标代谢途径细胞外信号调控的激酶(ERK)和Akt途径以相反的方式控制ΡΜΡ22基因的表达ΡΜΡ22基因的转录通过活化PI3K/pAkt/GSK-3β信号传导途径而升高，并受到Ras/MEK/ERK激酶级联的抑制。化合物C通过负调控σ阿片样受体，可以阻断pAkt激酶的活性，因此降低了PMP22基因的转录。尽管表达水平低，但施旺细胞表达所有类型的阿片样物质和ο受体以及它们的天然配体强啡肽原和脑啡肽原，该观察结果表明自分泌阿片样物质信号传导可能在这些神经胶质细胞的生物学中发挥重要作用。通过阿片样受体的信号传导是极其复杂的，并且在急性和慢性激动剂应用模式之间变化。我们建议，纳曲酮可能弱化PAkt激酶的活化并下调Erk激酶介导的信号传导，正如对某些神经元细胞所证明的，是由急性吗啡使用所引起的(Muller&Unterwald，2004)。细胞外信号调控的激酶(ERK)和Akt途径以相反的方式控制PMP22基因的表达PMP22基因的转录通过活化的PI3K/pAkt/GSK-3β信号传导途径而升高，并受到Ras/MEK/ERK激酶级联的抑制。化合物C通过负调控σ阿片样受体，可以阻断pAkt激酶的活性并增加通过Erk激酶的信号传导，因此降低了PMP22基因的转录。甲巯咪哔(化合物E)该药物已被批准用于治疗甲状腺机能亢进、甲状腺肿、格雷夫斯(Graves)病和牛皮癣。甲巯咪唑结合并阻断甲状腺过氧化物酶的活性，该酶是甲状腺激素合成中的限速酶，将碘化物转变成碘。因此，甲巯咪唑有效抑制新的甲状腺激素的产生。在CMTIA疾病中的目标代谢途径尽管施旺细胞在完整的成年坐骨神经中不表达甲状腺激素受体，但在受损的外周神经中破坏正常的轴突-神经胶质相互作用，这快速诱导了这些受体在施旺细胞中的表达，表明甲状腺激素信号传导对于PNS损伤的可诱导修复的重要性(Walter，1993)。该意见得到了下述观察的进一步支持，即受伤的坐骨神经不仅表达甲状腺受体，而且表达参与甲状腺激素代谢的酶——将甲状腺素(T4)转化成三碘甲状腺氨酸(T3)的2型脱碘酶，以及负责甲状腺激素降解的3型脱碘酶(Walter等，1995;Li等，2001)。因为PMP22基因在施旺细胞中的过表达，在CMT患者的损伤的外周神经中破坏了正常的轴突-神经胶质相互作用，因此甲状腺受体信号传导在沙-马-图病的发展中也发挥重要作用。在施旺细胞中，三碘甲状腺氨酸T3是EGR2表达的强激活剂；因为EGR2转录因子被识别为施旺细胞中成髓鞘(promyelinating)转录程序的主要正调控剂，通过甲状腺激素受体进行的信号传导可能影响PMP22基因的转录(Mercier等，2001)。我们推测，甲巯咪唑在受损的施旺细胞中可能通过弱化甲状腺激素信号传导而降低PMP22基因的转录。米非司酮(化合物F)该药物C29H35NO2,已被批准用于药物终止49天内的宫内妊娠。化合物F的抗促孕活性源自于在孕酮受体位点上与孕酮的竞争性相互作用。基于在几种动物种类(小鼠，大鼠，兔和猴)中使用不同的口服剂量的研究，该化合物抑制内源或外源孕酮的活性。在CMTIA疾病中的目标代谢途径化合物F是孕酮和糖皮质激素受体的拮抗剂，是PMP22转录的正调控因子。尽管化合物F被开发用作孕酮受体拮抗剂，但它也被识别为糖皮质激素受体拮抗剂；此外，它也显示了弱的抗雄激素活性，并且不与雌激素受体或盐皮质激素受体结合。PMP22蛋白的转录受到施旺细胞中表达的几种核受体、包括留体激素受体的正调控(Robert等，2001；Schumacher等，2001)。我们建议，米非司酮这种同时降低孕酮和糖皮质激素受体二者的活性的非特异性拮抗剂，可能是PMP22转录的更有力的负调节剂，因此是比以前试验的孕酮受体特异性拮抗剂更有前途的用于开发CMTlA相关药物的候选物，而孕酮受体特异性拮抗剂已被证明具有相当边缘性的治疗效果，特别是在长期治疗模式中(Sereda等，2003;MeyerzuHorste等，2007)；该结论也得到了最近公布的数据的支持，这些数据表明，在施旺细胞中，糖皮质激素受体的表达比孕酮受体的表达强至少50倍(Groyer等，2006)。酮洛芬(化合物G)酮洛芬已被批准用于治疗类风湿性关节炎和骨关节炎。化合物G是非甾类抗炎性药物，阻断环加氧酶-I(COX-I)和环加氧酶-2(C0X-2)二者的活性，并且由于这种效应，抑制了前列腺素和白三烯的合成。在CMTIA疾病中的目标代谢途径以前已经证明，施旺细胞表达几种类型的功能性前列腺素EP，前列环素IP，血栓烷，半胱氨酰白三烯和白三烯B4受体，具有可诱导的C0X-2活性，能够产生前列腺素E2，血栓烷A2和白三烯LTC4(Constable等，1999；Muja等，2001；Woodhams等，2007)。前列腺素通过它们同族的GPCR受体，能够增加Akt信号传导途径的活性，这促进了髓磷脂相关蛋白、包括PMP22的表达。例如，最近的发现表明，PGE2前列腺素密切参与了联蛋白的代谢，这种蛋白在施旺细胞中是PAkt信号传导的下游效应子和成髓鞘转录程序的激活剂(Ogata等，2004)。已经证实，在EP受体被PGE2活化后，Gαs亚基与Axin/GSK-3β复合物结合，降低了GSK-3i3介导的磷酸化并降解β-联蛋白。同时，PGE2与EP受体的结合引起了Gi3γ亚基的释放，这通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)直接刺激了Akt蛋白(Castellone等，2006)。因此，cox抑制剂酮洛芬(化合物G)能够通过施旺细胞中的前列腺素受体抑制自分泌信号传导，增强了联蛋白活性，从而降低了ΡΜΡ22基因的转录。此外，本发明涉及组合地或单独地使用下列化合物来治疗CMT或相关疾病乙酰唑胺，氨鲁米特，氨曲南，巴氯芬巴柳氮，比卡鲁胺，溴隐亭，布美他尼，丁螺环酮，环丙沙星，可乐定，环孢菌素Α，双硫仑，依西美坦，非氨酯，非诺贝特，非那利得，氟吗西尼，氟硝西泮，呋塞米，加巴喷丁，加兰他敏，氟哌啶醇，布洛芬，异丙肾上腺素，L-肉毒碱，三碘甲状腺素(Τ3)，氯沙坦，洛沙平，奥西那林，间羟胺，甲福明，甲巯咪唑，甲基麦角新碱，美替拉酮，美托洛尔，米非司酮，孟鲁司特，纳多洛尔，纳曲酮，纳洛酮，氟诺沙星，戊唑星，酚苄明，苯丁酸酯，毛果芸香碱，吡格列酮，哌唑嗪，雷洛昔芬，利福平，辛伐他汀，螺内酯，他莫昔芬，曲洛司坦，丙戊酸，卡马西平，酮洛芬，氟比洛芬，双氯芬酸，美洛昔康，D-山梨糖醇，他克莫司，地西泮，度他雄胺，吲哚美辛，地诺前列酮，卡巴可，雌二醇，姜黄素，锂，雷帕霉素，甜菜碱，海藻糖，阿米洛利，沙丁胺醇。正如上面讨论的，本发明还显示了特定细胞途径可以被调节，以有效地治疗CMT或相关疾病。更具体来说，本发明显示，ΡΜΡ22包括其表达、折叠或运输的功能性，或外周髓磷脂蛋白的功能性，可以受到影响毒蕈碱受体、GABA-B受体、甾体激素受体、阿片样受体、山梨糖醇信号传导途径、甲状腺激素信号传导途径，或激活ERK(细胞外信号调控的激酶)或抑制pAkt激酶的药物，和/或COX抑制剂的调节，从而允许设计CMT及相关疾病的新的治疗途径。这些途径可以被独立地或组合地调节，以提供最好的可能治疗效果。总的来说，提出了使PMP22基因表达正常的药物组合类型来治疗性治疗CMT或相关疾病的(I)-影响牵涉PMP22基因及其蛋白功能的相同细胞途径的药物组合，(II)-调节不同信号传导途径的药物组合，这些途径汇集到PMP22基因及其蛋白的功能上(III)-调节不同信号传导途径的药物组合，这些途径控制了PMP22基因及其蛋白产物的功能。这些组合对PMP22基因的转录产生了附加或协同效应，因此将允许显著降低所选药物的有效治疗剂量，并最小化它们不想要的副作用。根据本发明，优选的药物组合选自-留体激素受体拮抗剂和选自下述的化合物毒蕈碱受体激动剂，GABA-B受体激动剂，ERK激活剂，pAkt激酶抑制剂，抑制甲状腺激素信号传导的药物，影响D-山梨糖醇信号传导途径的药物，阿片样受体拮抗剂，COX抑制剂；-毒蕈碱受体激动剂和选自下述的化合物=GABA-B受体激动剂，ERK激活剂，pAkt激酶抑制剂，抑制甲状腺激素信号传导的药物，影响山梨糖醇信号传导途径的药物，阿片样受体拮抗剂，COX抑制剂；-GABA-B受体激动剂和选自下述的化合物ERK激活剂，pAkt激酶抑制剂，抑制甲状腺激素信号传导的药物，影响山梨糖醇信号传导途径的药物，阿片样受体拮抗剂和COX抑制剂；-ERK激活剂和选自下述的化合物pAkt激酶抑制剂，抑制甲状腺激素信号传导的药物，影响山梨糖醇信号传导途径的药物，阿片样受体拮抗剂和COX；-pAkt激酶抑制剂和选自下述的化合物抑制甲状腺激素信号传导的药物，影响山梨糖醇信号传导途径的药物，阿片样受体拮抗剂和COX抑制剂；-抑制甲状腺激素信号传导的药物和选自下述的化合物影响山梨糖醇信号传导途径的药物和阿片样受体拮抗剂或COX抑制剂；_影响山梨糖醇信号传导途径的药物和选自阿片样受体拮抗剂或COX抑制剂的化合物；-阿片样受体拮抗剂和COX抑制剂。药物组合的优选例子选自-留体激素受体拮抗剂和毒蕈碱受体激动剂；-留体激素受体拮抗剂和GABA-B受体激动剂；-留体激素受体拮抗剂和ERK激活剂；-留体激素受体拮抗剂和pAkt激酶抑制剂；-留体激素受体拮抗剂和甲状腺激素信号传导抑制剂；-留体激素受体拮抗剂和COX抑制剂；-毒蕈碱受体激动剂和GABA-B受体激动剂；-毒蕈碱受体激动剂和ERK激活剂；-毒蕈碱受体激动剂和pAkt激酶抑制剂；_毒蕈碱受体激动剂和甲状腺激素信号传导抑制剂；-毒蕈碱受体激动剂和COX抑制剂；-GABA-B受体激动剂和ERK激活剂；-GABA-B受体激动剂和pAkt激酶抑制剂；-GABA-B受体激动剂和甲状腺激素信号传导抑制剂；-GABA-B受体激动剂和COX抑制剂；或-ERK激活剂和pAkt激酶抑制剂；-ERK激活剂和甲状腺激素信号传导抑制剂；-ERK激活剂和COX抑制剂；-或甲状腺激素信号传导抑制剂和COX抑制剂。在具体实施方案中，留体激素受体拮抗剂是化合物F，毒蕈碱受体激动剂是化合物A或化合物C，GABA-B受体激动剂是化合物B或化合物E，pAkt激酶抑制剂是化合物D，ERK激活剂是化合物A。本发明的具体实施方案在于治疗CMT或相关疾病的组合疗法，其中所述组合疗法包含化合物A和至少第二种选自下列的化合物留体激素受体拮抗剂、毒蕈碱受体激动剂、GABA-B受体激动剂、ERK激活剂、pAkt激酶抑制剂、阿片样受体拮抗剂、COX抑制剂和甲状腺激素信号传导抑制剂。本发明的具体实施方案在于治疗CMT或相关疾病的组合疗法，其中所述组合疗法包含化合物B和至少第二种选自下列的化合物留体激素受体拮抗剂、毒蕈碱受体激动剂、ERK激活剂、pAkt激酶抑制剂、影响山梨糖醇信号传导途径的药物、阿片样受体拮抗剂、COX抑制剂和甲状腺激素信号传导抑制剂。本发明的具体实施方案在于治疗CMT或相关疾病的组合疗法，其中所述组合疗法包含化合物C和至少第二种选自下列的化合物留体激素受体拮抗剂、GABA-B受体激动剂、ERK激活剂、pAkt激酶抑制剂、影响山梨糖醇信号传导途径的药物、阿片样受体拮抗剂、COX抑制剂和甲状腺激素信号传导抑制剂。本发明的具体实施方案在于治疗CMT或相关疾病的组合疗法，其中所述组合疗法包含化合物D和至少第二种选自下列的化合物留体激素受体拮抗剂、毒蕈碱受体激动剂、GABA-B受体激动剂、影响山梨糖醇信号传导途径的药物、ERK激活剂、COX抑制剂和甲状腺激素信号传导抑制剂。本发明的具体实施方案在于治疗CMT或相关疾病的组合疗法，其中所述组合疗法包含化合物E和至少第二种选自下列的化合物留体激素受体拮抗剂、毒蕈碱受体激动剂、影响山梨糖醇信号传导途径的药物、ERK激活剂、pAkt激酶抑制剂、阿片样受体拮抗剂、COX抑制剂和甲状腺激素信号传导抑制剂。本发明的具体实施方案在于治疗CMT或相关疾病的组合疗法，其中所述组合疗法包含化合物F和至少第二种选自下列的化合物毒蕈碱受体激动剂、GABA-B受体激动剂、ERK激活剂、pAkt激酶抑制剂、影响山梨糖醇信号传导途径的药物、阿片样受体拮抗剂、COX抑制剂和甲状腺激素信号传导抑制剂。药物组合的具体和优选的例子，作为活性物质至少包括(I)化合物F和化合物E(II)化合物C和化合物B(III)化合物F和化合物C化合物F和化合物B化合物F和化合物A化合物F和化合物D化合物C和化合物A化合物C和化合物D化合物B和化合物A化合物B和化合物D化合物A和化合物D化合物G和化合物D本发明的疗法可以作为药物组合或单独地和/或与任何其他疗法结合而进行。它可以在家、医生办公室、诊所、医院门诊部或医院提供，以便医生可以密切观察疗法的效果，并作出任何需要的调整。疗法的持续时间依赖于所治疗疾病的阶段，患者的年龄和状况，以及患者对治疗的响应如何。此外，发生其它神经病性疾病的风险较大的人(例如对例如糖尿病具有遗传易感性或患有糖尿病的人，或正在进行肿瘤病症治疗的人等)，可以接受预防性治疗，以缓解或延迟最终的神经病性响应。组合中每种成分的给药剂量、频率和方式可以独立地进行控制。例如，一种药物可以口服给药，而第二种药物可以肌肉内给药。组合疗法可以包括休息期的断续周期进行，以便患者的身体有机会从任何尚未预见到的副作用中恢复。药物也可以配制到一起，以便一次给药投送这两种药物。药物组合物的制剂组合中每种药物的给药，可以通过任何适合的方式进行，使得与其他成分组合的药物的浓度，在到达外周神经后，能够校正PMP22表达升高产生的效应。尽管对于组合中的活性成分来说作为纯的化学物质给药是可能的，但优选将它们作为药物组合物提供，在本文中也称为药物制剂。可能的组合物包括适合于口服、直肠、表面(包括透皮、颊和舌下)或肠胃外(包括皮下、肌肉内、静脉内和真皮内)给药的组合物。更通常情况下，这些药物制剂以含有多个剂量单位的“患者包”的形式，或其他用于将不同治疗时期内使用的计量单位剂量放置在单个包装、通常为泡壳包装中给药的方式，开给患者。患者包与药剂师从大包装药物供应品中分出患者的药物供应品的传统处方药相比，其优点在于患者总是能够得到患者包中包含的包装说明书(packageinsert)，它在传统处方药中一般是没有的。包含包装说明书已被显示出能够提高患者对医生指令的顺从性。进而，本发明还包括本文前述的药物制剂与适合用于所述制剂的包装材料的组合。在这样的患者包中，用于组合治疗的制剂的预期用法，可以从说明书、设备(facilities)、供应品(provisions)、适应症(adaptations)和/或其他帮助使用制剂最适合地用于治疗的手段，推断出来。这样的措施使得患者包特别适合并可改造以适用于以本发明的组合进行治疗。药物可以以任何适合的量包含在任何适合的载体物质中，可以以组合物总重量的1-99重量％的量存在。组合物可以提供在适合于口服、肠胃外(例如静脉内，肌肉内)、直肠、皮肤、鼻、阴道、吸入、表皮(贴片)或眼给药途径的剂型中。因此，组合物可以采取例如片剂、胶囊、丸剂、粉末、颗粒、悬液、乳液、溶液、凝胶包括水凝胶、糊剂、软膏、油膏、膏药、浸液(drenches)、渗透性投送装置、栓剂、灌肠剂、注射剂、植入物、喷剂或气溶胶的形式。药物组合物可以按照常规的药物实践进行配制(参见例如《Remington药物禾斗学与实践〉〉(第20版)(Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(20thed.))，A.R.Gennaro主编，Lippincottffilliams&Wilkins，2000，以及《制药技术百科》(EncyclopediaofPharmaceuticalTechnology),J.Swarbrick禾口J·C·Boylan3Ξ编，1988-1999，MarcelDekker,NewYork)。本发明的药物组合物可以配制成在给药后基本上立刻、或在给药后任何预定的时间或时期释放出活性药物。受控释放制剂包括(i)在体内产生较长时间段基本上恒定的药物浓度的制剂；(ii)在预定的时滞后，在体内产生较长时间段基本上恒定的药物浓度的制剂；(iii)通过维持体内相对恒定有效的药物水平并在同时最小化与活性药物物质的血浆水平波动有关的不想要的副作用，在预定时间段期间维持药物作用的制剂；(iv)通过例如将受控释放组合物空间放置在患病组织或器官附近或其中，使药物作用局部化的制剂；以及(ν)通过使用载体或化学衍生物将药物投送到特定靶细胞类型而将药物作用定向的制剂。药物以受控释放制剂的形式给药，在下列情况下是特别优选的，在这些情况中，药物单独或组合地具有(i)狭窄的治疗指数(即产生有害副作用或毒性反应的血浆浓度与产生治疗效果的血浆浓度之间的差异小；一般来说，治疗指数TI被定义为中值致死剂量(LD50)与中值有效剂量(ED50)的比率)；(ii)在胃肠道中狭窄的吸收窗；或(iii)非常短的生物学半衰期，使得在一天之内必需频繁用药才能将血浆水平维持在治疗水平。可以按照多种策略中的任何一种来获得其中释放速度超过所论述药物的代谢速度的受控释放。受控释放可以通过适当选择各种不同的制剂参数和成分，包括例如各种不同类型的受控释放组合物和包衣，来获得。因此，将药物用适合的赋形剂配制成给药后以受控方式释放出药物的药物组合物(单个或多个单位片剂或胶囊组合物，油溶液，悬液，乳液，微胶囊，微球，纳粒，贴片和脂质体)。口服使用的固体剂型口服使用的制剂包括含有活性成分与无毒性可药用赋形剂的混合物的片剂。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂或填充剂(例如蔗糖，微晶体纤维素，淀粉包括土豆淀粉，碳酸钙，氯化钠，磷酸钙，硫酸钙或磷酸钠)；成粒或崩解剂(例如纤维素衍生物包括微晶体纤维素，淀粉包括土豆淀粉，交联羧甲基纤维素钠，藻酸盐或藻酸)；黏合剂(例如阿拉伯树胶，藻酸，藻酸钠，明胶，淀粉，预明胶化淀粉，微晶体纤维素，羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，乙基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；以及润滑剂，助流剂和抗粘附剂(例如硬脂酸，二氧化硅或滑石粉)。其他的可药用赋形剂可以是着色剂，调味剂，增塑剂，保湿剂，缓冲剂等。片剂可以是无包衣的，或者它们可以通过已知技术任选地包衣，以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，由此在较长时间内提供持续的作用。包衣可以适合于以预定样式释放活性药物物质(例如以便获得受控释放制剂)，或者它可以适合于在通过胃之前不释放活性药物物质(肠溶包衣)。包衣可以是糖包衣，薄膜包衣(例如基于羟丙基甲基纤维素，甲基纤维素，甲基羟乙基纤维素，羟丙基纤维素，羧甲基纤维素，丙烯酸共聚物，聚乙二醇和/或聚乙烯吡咯烷酮)，或肠溶包衣(例如基于甲基丙烯酸共聚物，乙酸邻苯二甲酸纤维素，邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素，乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素，聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯，虫胶和/或乙基纤维素)。可以使用时间延迟材料例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。固体片剂组合物可以包含适合于保护组合物免于不想要的化学变化(例如活性药物物质释放前的化学降解)的包衣。包衣可以按照与《制药技术百科》(EncyclopediaofPharmaceuticalTechnology)中描述的相似的方式施加到固体剂型上。两种药物可以在片剂中混合在一起，或可以分隔开。例如，第一种药物包含在片剂内部，第二种药物在外部，使得相当部分的第二种药物在第一种药物释放之前释放。口服使用的制剂也可以表现为咀嚼片或作为硬质明胶胶囊，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如土豆淀粉，微晶体纤维素，碳酸钙，磷酸钙或高岭土)混合，或作为软质明胶胶囊，其中活性成分与水或油介质例如液体石蜡或橄榄油混合。粉末和颗粒可以使用上面在片剂和胶囊下提到的成分，以常规的方式制备。口服使用的受控释放组合物，可以构建成例如通过控制活性药物物质的溶解和/或扩散来释放活性药物。溶解或扩散受控释放，可以通过药物的片剂、胶囊、球粒或颗粒制剂的适当包衣，或通过将药物掺入适合的基质来实现。受控释放包衣可以包含一种或多种上面提到的包衣物质，和/或例如虫胶，蜂蜡，glycowax,蓖麻蜡，巴西棕榈蜡，硬脂醇，单硬脂酸甘油酯，二硬脂酸甘油酯，棕榈酰硬脂酸甘油酯，乙基纤维素，丙烯酸树脂，dl-聚乳酸，乙酸丁酸纤维素，聚氯乙烯，聚乙酸乙烯酯，乙烯吡咯烷酮，聚乙烯，聚甲基丙烯酸酯，甲基丙烯酸甲酯，2-羟基甲基丙烯酸酯，甲基丙烯酸酯水凝胶，1,3-丁二醇，甲基丙烯酸乙二醇酯，和/或聚乙二醇。在受控释放基质剂型中，基质材料也可以包含例如水合甲基纤维素，巴西棕榈蜡和硬脂醇，卡波姆934，有机硅，三硬脂酸甘油酯，丙烯酸甲酯_甲基丙烯酸甲酯，聚氯乙烯，聚乙烯，和/或卤代氟烃。含有要求权利的组合的一种或多种药物的受控释放组合物，也可以采取漂浮片剂或胶囊的形式(即片剂或胶囊在口服后，在胃内容物的顶部漂浮一定的时间段)。药物的漂浮片剂制剂，可以通过将药物与赋形剂和20-75%w/w的水胶体、例如羟乙基纤维素、羟丙基纤维素或羟丙基甲基纤维素的混合物成粒来制备。然后可以将获得的颗粒压缩成片剂。当与胃液接触时，片剂在其表面周围形成了基本上不透水的凝胶屏障。这种凝胶屏障参与了将密度维持在1以下，从而使片剂保持漂浮在胃液中。口服给药的液体适合于通过添加水来制备水性悬液的粉末、可分散粉末或颗粒，是用于口服给药的方便的剂型。作为悬液的制剂提供了活性成分与分散或润湿剂、悬浮剂以及一种或多种防腐剂的混合物。适合的悬浮剂是例如羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，藻酸钠等。肠胃外组合物药物组合物也可以通过以剂型、制剂的注射、输注或植入(静脉内，肌肉内，皮下等)，或通过适合的投送装置或含有常规的无毒性可药用载体和佐剂的植入物，进行肠胃外给药。这些组合物的制剂和制备对于药物制剂领域的专业人员来说是公知的。用于肠胃外使用的组合物可以以单位剂型提供(例如在单剂安瓿中)，或以含有几个剂量的小瓶提供，其中可以添加适合的防腐剂(参见下文)。组合物可以采取溶液、悬液、乳液、输注装置、或用于植入的投送装置的形式，或者它可以表现为干粉，在使用前用水或另一种适合的介质复溶。除了活性药物之外，组合物可以包含适合的肠胃外可接受的载体和/或赋形剂。活性药物可以掺入到微球、微胶囊、纳粒、脂质体等中用于受控释放。组合物可以包含悬浮剂、增溶剂、稳定剂、PH调节剂和/或分散剂。本发明的药物组合物可以采用适合于无菌注射的形式。为了制备这样的组合物，将适合的活性药物溶解或悬浮在肠胃外可接受的液体介质中。可以使用的可接受介质和溶剂包括水，通过加入适量的盐酸、氢氧化钠或适合的缓冲液调整到适合的PH的水，1，3_丁二醇，林格氏(Ringer's)溶液和等渗氯化钠溶液。水性制剂也可以包含一种或多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯、乙酯或正丙酯)。在其中一种药物只能略微或少量溶解在水中的情况下，可以添加溶解增强剂或增溶剂，或溶剂可以包含10-60%w/w的丙二醇等。受控释放的肠胃外组合物可以采取水性悬液、微球、微胶囊、磁性微球、油溶液、油悬液或乳液的形式。可选地，活性药物可以掺入到可生物相容的载体、脂质体、纳粒、植入物或输注装置中。用于制备微球和/或微胶囊的材料是例如可生物降解/可生物侵蚀的聚合物，例如丙交酯乙交酯共聚物(polygalactin)，聚(氰基丙烯酸异丁基酯)，聚(2-羟基乙基-L-谷氨酰胺)。在配制受控释放肠胃外制剂时可以使用的可生物相容载体是糖类(例如葡聚糖)，蛋白(例如白蛋白)，脂蛋白或抗体。在植入物中使用的材料可以是不可生物降解的(例如聚二甲基硅氧烷)或可生物降解的(例如聚(己内酯)，聚(羟基乙酸)或聚(原酸酯))。直肠组合物对于直肠使用来说，适合的用于组合物的剂型包括栓剂(乳剂或悬液剂类型)，以及直肠明胶胶囊(溶液或悬液)。在典型的栓剂制剂中，活性药物与适合的可药用栓剂基质例如可可脂、酯化脂肪酸、甘油胶，以及各种不同的水溶性或可分散的基质例如聚乙二醇混合。可以掺入各种不同的添加剂、增强剂或表面活性剂。经皮和表面组合物药物组合物也可以皮肤上表面给药，用于在含有常规的无毒性可药用载体和赋形剂的剂型或制剂、包括微球和脂质体中经皮吸收。制剂包括霜剂、软膏、洗剂、搽剂、凝胶、水凝胶、溶液、悬液、粘贴剂、喷雾剂、糊剂、膏药，以及其他种类的透皮药物投送系统。可药用载体或赋形剂可以包含乳化剂、抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、保湿剂、穿透增强剂、螯合剂、成胶剂、软膏基质、香料和皮肤保护剂。乳化剂可以是天然存在的树胶(例如阿拉伯树胶或黄耆树胶)。防腐剂、保湿剂、穿透增强剂可以是对羟苯甲酸酯，例如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯，以及苯扎氯铵，甘油，丙二醇，尿素等。上面描述的用于皮肤上表面给药的药物组合物也可用于在待治疗身体部分上或附近表面给药。组合物可以适用于直接施加，或通过特殊的药物投送装置例如敷料或可选的膏药、垫片、海绵、条带，或其他形式的适合的柔性材料施加。缓释制剂化合物可以在缓释制剂中使用，和/或与改变组织分布或生物利用度的药剂配制在一起。更具体来说，在优选实施方案中，至少两种化合物的组合，与药物洗脱聚合物或生物分子或形成胶束或脂质体的脂类或水包油乳液，或聚乙二醇化的或固体的纳粒或微粒配制在一起，用于口服或肠胃外或气管内给药，以改变组织分布或生物利用度。这种配制剂的具体例子包括PGA、PLGA、环糊精、白蛋白或蛋白载体、纳粒和微粒、脂质体、乳液和PEG。结合物在本发明的组合疗法中，化合物可以以不同方式与药物组合物联合。它们可以作为分开的实体混合在一起。它们可以分开配制。它们也可使用连接基或不使用连接基进行共价或非共价连接。在具体实施方案中，至少两种化合物优选通过可切开或不可切开的连接基连接。治疗剂量和持续时间应该认识到，组合中的药物可以在相同或不同药物制剂中同时或相继给药。如果相继给药，在第二种(或附加的)活性成分给药时的延迟不应该使得活性成分组合的有效效应的益处丧失。对于本说明书的组合来说，最低要求是组合应该预期将活性成分组合的有效效应的益处进行组合运用。组合所预期的应用可以由设备、供应品、适应症和/或有助于使用本发明的组合的其他手段推断出来。治疗有效量的作为本发明主体的两种或多种药物可以一起使用来制备药剂，所述药剂可用于降低PMP22基因表达增加的效应，阻止或降低发生CMTlA疾病的风险，一旦CMTlA疾病变得临床明显后阻止或减缓其发展，以及阻止或降低神经病性事件的初次或后续发生的风险。尽管本发明的活性药物可以分次剂量给药，例如每天2或3次，但组合中的每种药物每天单次给药是优选的，其中所有药物在单一药物组合物中(单位剂型)每天单次给药是最优选的。给药可以每天一次到几次，持续几天到几年，甚至可以持续患者终生。在大多数情况下，将要求长期或至少周期性重复地长期给药。术语“单位剂型”是指适合作为单一剂量用于人类对象的物理上分离的单位(例如胶囊、片剂或装好的注射器针筒)，每个单位含有经计算可以产生所需治疗效果的预定量的活性材料，以及所需的药物载体。优选用于单位剂量的组合中的每种药物的量，将依赖于几种因素，包括给药方法，患者的体重和年龄，由CMTlA疾病引起的神经病性损伤的严重性，或考虑到待治疗的人的总体健康状况的潜在副作用风险。此外，关于具体患者的药物基因组学(基因型对药物动力学、药效学的影响或治疗药物的功效情况)信息，可以影响使用的剂量。除了在应对特别伤害性CMT疾病的情况下可能需要较高剂量，或在治疗儿童时应该选择较低剂量之外，组合中的每种药物的优选剂量，一般将在不超出通常为长期维持性治疗所处方的剂量范围或在大型3期临床研究中被证明是安全的剂量范围之内。例如·对于化合物F来说，如果口服，每天大约2到大约lOOmg。如果表面给药应该选择特定的剂量。·对于化合物D来说，如果每天口服，每天大约1到大约20mg。对于化合物B来说，如果口服，每天大约2到大约20mg。如果以纳粒或类似制剂形式给药，不同的剂量可能是适合的。·对于化合物E来说，如果口服，每天大约125到大约500mg。·对于化合物C来说，如果口服，每天大约1到大约20mg。对于化合物A来说，如果口服，每天大约1到大约50g。如果注射，应该选择特定的剂量。最优选的剂量应该相当于通常为长期维持性治疗所处方的量的到最多10%。应该理解，实际给药的药物的量将由医生根据相关的情况来确定，所述情况包括待治疗的病症，待给药的具体组合物，个体患者的年龄、体重和响应，患者症状的严重性，以及所选的给药途径。因此，上述的剂量范围旨在为本文的讲述提供一般性的指导和支持，而不打算限制本发明的范围。给出了下面的实施例，其目的在于说明而不是限制。实施例1.细胞培养1.1可商购的大鼠原代施旺细胞将大鼠施旺细胞(SC)原代培养物(Sciencell#R1700)的小瓶解冻，以10,000个细胞/cm2的密度接种在聚L-赖氨酸预先包被的75cm2培养瓶中的“Sciencell施旺细胞培养基”中(来自Sciencell的基本培养基#R1701)。培养基由基本培养基，5%胎牛血清(3H-BiomedicalAB#1701_0025)，1%施旺细胞生长增补剂(3HBiomedicalAB#1701-1752)，庆大霉素(Sigma#G1397)和10μM毛喉素(Sigma#F6886)构成，以促进它们的增殖。在达到合生后(4到10天，依赖于细胞批次)，通过轻柔搅拌或通过thyl.1免疫淘洗，使SC与黏附性成纤维细胞分离来纯化施旺细胞，以产生至少95%纯的培养物。然后对SC进行计数(锥虫蓝方法)，接种到聚L-赖氨酸预先包被的75cm2培养瓶中的同样的SC培养基中。在合生时，将细胞洗涤，用胰蛋白酶处理(从InvitrOgen#1540054稀释Ix的胰蛋白酶-EDTA，在不含钙和镁的PBS中稀释)，计数，铺板于12孔板(140000个细胞/孔)中的Sciencell施旺细胞培养基中，该培养基还含有5%FBS，1%细胞生长增补剂(CGS)，40μg/ml庆大霉素和4μM毛喉素。1.2专门制备的原代施旺细胞从Sprague-Dawley新生大鼠(P0到P2之间)坐骨神经建立原代施旺细胞培养物(SC)。所有新生大鼠在皮氏培养血中处死和分离。解剖在无菌条件下进行。从后爪和下部躯干除去背部皮肤。分离出坐骨神经并转移到含有冰冷的Leibovitz(L15，Invitogen#11415)的培养皿中，Leibovitz中添力卩有1%青霉素/链霉素溶液(分别为50UI/ml和50μg/ml；Invitrogen#15070)和1%牛血清白蛋白(BSA，SigmaA6003)。将每只大鼠的两根神经都转移到含有冰冷的L15的15ml试管中。然后除去L15培养基，用含有10mg/ml胶原酶(Sigma#A6003)的2.4mlDMEM(Invitrogen#21969035)代替。将神经在该培养基中在37°C下温育30分钟。然后除去培养基，通过用不含钙和镁的PBS(Invitrogen#2007-03)稀释的胰蛋白酶(10%胰蛋白酶-EDTA10x,Invitrogen#15400054)在37°C处理20分钟，将两根神经松解。反应通过加入含有II级DNase1(0.lmg/ml,Rochediagnostic#104159)和胎牛血清(FCS10%,Invitrogen#10270)的DMEM终止。将细胞悬液用IOml移液管研散，通过过滤器收集在50ml管中(Swinnex13mm过滤装置，Millipore，带有20μm尼龙筛网滤膜，Fisher)。将细胞悬液在室温(RT)以350g离心10分钟，将沉淀悬浮在含有10%FCS和1%青霉素/链霉素的DMEM中。对细胞进行计数(锥虫蓝方法)，以5.105到106个细胞/板的密度接种到Falcon100mmPrimaria组织培养板中。在培养1天后，将培养基用DMEM，10%FCS，1%青霉素/链霉素和10μM胞嘧啶b-D-呋喃阿拉伯糖苷(Sigma#C1768)更换。48小时后，除去培养基，将细胞用DMEM洗涤3次。然后加入SC生长培养基，该培养基由DMEM，10%FCS,1%青霉素/链霉素，2μM毛喉素(Sigma#F6886)，10μg/ml牛垂体提取物(PEX,Invitrogen#13028)构成。每2-3天更换培养基。在培养8天后(4到10天，依赖于细胞批次)，施旺细胞达到合生，将含有大量成纤维细胞污染的培养物，通过thyl.1免疫淘洗方法进行纯化。纯化后，将细胞以10000个细胞/cm2悬浮在聚L-赖氨酸预先包被的75cm2培养瓶中的生长培养基中。一旦它们达到合生，将细胞清洗，用胰蛋白酶处理(胰蛋白酶-EDTA)，计数，并铺板于12孔板中(100000个细胞/孔)。1.3药物温育在将细胞铺板于12孔板后，将培养基更换为确定成分培养基，该培养基含有DMEM-F12混合物(Invitrogenii2I33IO2O)，并补充有N2补充剂(Invitrogeniil75O2)，L-谷氨酰胺(Invitrogen#25030024)，2·5%FBS(Sciencell#0025),0.02μg/ml皮质甾酮6丨8111￡1忧2505)，411|1毛喉素和5(^8/1111庆大霉素。没有向该培养基中添加生长因子，以促进SC分化。24小时后，将该培养基替换为确定成分培养基(DMEM-F12)，补充有1%胰岛素-转铁蛋白-硒-X(ITS，Invitrogen#51300),16μg/ml腐胺(Sigma#P5780)，0·02μg/ml皮质酮和50μg/ml庆大霉素。在该步骤中，培养基中既不存在孕酮也不存在毛喉素。1天后，将施旺细胞用药物组合或单独的药物刺激24小时(3个孔/条件)。每种化合物在将其添加到细胞培养基中之前新鲜制备。将药物添力Π到由DMEM-F12与胰岛素-转铁蛋白-硒_X(ITS，Invitrogen#51300)，16μg/ml腐胺，0.02μg/ml皮质酮，IOnM孕酮和50μg/ml庆大霉素构成的确定成分培养基中。在药物刺激过程中不存在毛喉素，避免了腺甘酸环化酶饱和。2.通过Thyl.1免疫淘洗纯化施旺细胞为了防止成纤维细胞培养物的污染，使用克隆Thyl.1(ATCCTIB_103)免疫淘洗方案对施旺细胞进行了纯化。抗体预包被的IOOmm细菌皮氏培养皿如下进行制备将这些平皿用PBS洗3次，用含有10μg/ml山羊抗小鼠IgMMU抗体(JacksonlmmunoResearchiill5-OO5-O2O)的2OmlpH9.5的50mMTrisHCl溶液，在4°C处理过夜；然后用PBS洗3次，用含有0.02%BSA和从TllD7e2杂交瘤培养物(ATCC#TIB_103)获得的含有Thyl.1IgM抗体的上清液的PBS溶液，在室温处理2小时。最后，将板用PBS洗3次，然后加入细胞悬液。SC用胰蛋白酶EDTA松开。一旦大部分细胞进入悬液，立即用DMEM-10%FBS中和胰蛋白酶，并将细胞离心。将松解的细胞的沉淀以每ml0.66xl06个细胞(最大值)的密度，重新悬浮在15ml含有0.02%BSA的培养基中，并转移到皮氏培养皿中(大约660万个细胞/lOml/lOOmm培养皿)。将细胞悬液在Thy1.1包被的皮氏培养皿中在37°C下温育45分钟，每15分钟轻轻搅拌，以防止非特异性结合。大部分表达Thyl.1的成纤维细胞黏附于培养皿上。在温育结束时，回收细胞悬液并离心。该细胞悬液理论上只含有施旺细胞。将细胞离心，将细胞沉淀以16000个细胞/cm2悬浮在聚L-赖氨酸处理过的T75cm2培养瓶中带有10μM毛喉素的生长培养基中。3-定量反转录酶聚合酶链反应(Q-RT-PCR)定量RT-PCR被用于比较药物刺激后PMP22mRNA相对于大鼠施旺细胞原代培养物中的看家核糖体L13AmRNA的水平。在用冷的无菌PBS清洗后，从SC中使用QiagenRneasy微量试剂盒(Qiagen#74004)提取和纯化每个细胞样品的总RNAs。使用1μ1RNA样品，通过Nanodrop分光光度计对核酸进行了定量。RNA完整性通过BioAnalyzer(Agilent))装置确定。按照标准方案将RNAs反转录成cDNA。用于PCR扩增的cDNA模板使用SuperScriptII反转录酶(Invitrogen#18064-014)，在存在寡聚(dT)的情况下在42°C经60分钟从200ng总RNA合成，终体积为20μ1。使用《LightCycler480》系统(RocheMolecularSystemsInc.)对cDNAs进行PCR扩增。在用于PCR扩增之前，将每个cDNA稀释5倍。将2.5μ1该cDNAs加入到PCR反应溶液中(终体积10μ1)。进行了初步实验以确保在两种序列的扩增过程的指数期中进行定量，并且参比基因的表达在不同培养条件下是一致的。PCR反应通过扩增大鼠ΡΜΡ22(ΝΜ_017037)的500ηΜ正向弓丨物，5-GGAAACGCGAATGAGGC-3,禾Π500ηΜ反向引物5-GTTCTGTTTGGTTTGGCTT-3来进行(扩增了148-bp)。通过使用500nM正向引物5-CTGCCCTCAAGGTTGTG-3和500nM反向引物5-CTTCTTCTTCCGGTAATGGAT-3，在分开的反应中平行地扩增了RPL13A核糖体(NM_173340)RNA的152-bp的片段，用于对结果进行归一化。我们使用了FRET化学来进行RT-Q-PCR分析。FRET探针由0.3μMPmp22-FL-5_GCTCTGAGCGTGCATAGGGTAC或Rpll3A_FL-5_TCGGGTGGAAGTACCAGCC构成，在它们的3，末端用供体荧光团染料(荧光素)标记。0.15μMRed640探针定义如下Pmp22-red_5‘-AGGGAGGGAGGAAGGAAACCAGAAA-或Rpl13A-red_5‘-TGACAGCTACTCTGGAGGAGAAACGGAA,在它们的5，末端用受体荧光团染料(罗丹明Red640)标记。每个PCR反应在总体积为10μ1的主混合物试剂盒(mastermixkit,Roche#04-887301001)中包含2·5μ1cDNA模板。使用了下述PCR条件95V10秒，63V10秒，72V12秒，和40V30秒(40个扩增循环)。PMP22基因表达的相对水平通过测定从靶基因PMP22与内源内部标准品RPL13A产生的产物之间的比率来计算。4-通过流式细胞术(FACS)进行PMP22蛋白表达分析在与药物温育8小时、24小时和48小时后，回收上清液，离心并冷冻。使用胰蛋白酶-EDTA分拆SC。一旦大部分细胞进入悬液，立即用含有10%FCS的DMEM中和胰蛋白酶。回收含有细胞的上清液并离心。将细胞沉淀转移到微量管中，在PBS中清洗一次，使用特定溶液(AbCysftReagentABUF09B)固定。10分钟后，将细胞用PBS洗涤一次，保持在4°C。细胞固定后5天，使用下面的方案，对所有温育时间不同的细胞制备物进行标记。将细胞以7000rpm离心5分钟，将沉淀悬浮在通透化溶液(AbCys#ReagentBBUF09B)中，用第一PMP22抗体(Abcam#ab61220，1/50)在室温标记1小时。然后将细胞以7000rpm离心5分钟，将细胞沉淀在PBS中洗涤一次。加入在室温与AlexaFluor488偶联的第二抗体(山羊抗兔IgG,MolecularProbes#A11008,1/100)1小时。然后将细胞以7000rpm离心5分钟，将细胞沉淀在PBS中洗涤一次。加入与AlexaFluor488偶联的第三抗体(鸡抗山羊IgG,MolecularProbes#A21467,1/100)，在室温温育1小时，以增加标记。然后将细胞在PBS中洗涤一次。执行了不含任何抗体的对照(未标记细胞)，以确定自身荧光的水平并调整光倍增器的灵敏度。执行了使用第二和第三抗体但是不使用第一抗体的对照，以评估抗体的非特异性结合。数据获取和分析使用FACS阵列细胞计数器和FACS阵列软件(BectonDickinson)在5000个细胞上进行。分析了与细胞体积(尺寸)相关的正向散射(FSC)和依赖于细胞的内部复杂性(颗粒度)的侧向散射。对于PMP22的表达来说，在总细胞中进行分析，并计算阳性细胞的百分数。阳性细胞是荧光强度高于使用第二抗体的对照的细胞。为了对SC数量进行定量，使用抗SlOO蛋白抗体分析了对照培养基中的细胞。细胞按照下列方案制备将施旺细胞用抗SlOO蛋白抗体(Dako#S0311，1/100)在室温染色1小时。该抗体按照上面描述的用于PMP22免疫染色的方案进行标记，但是不与第三抗体温育。5.药物温育和活件将药物在与上面描述的相同的确定成分培养基中温育24小时或48小时(3个孔/条件)，其中不存在毛喉素以避免腺苷酸环化酶刺激的饱和，但是存在IOnM孕酮。在与药物温育后，回收上清液，将施旺细胞冷冻用于RT-Q-PCR分析。当药物与对照相比明显降低PMP22水平时，我们确定了这些药物对PMP22表达的活性。下面的表1归纳了20种引起PMP22表达降低的活性药物的结果。表118种在温育24小时后导致PMP22mRNA表达显著降低的药物的数据显示在图1_3中。这些数据显示出PMP22mRNA水平的显著降低，即使在非常低的剂量下。6.温育24小时后的PMP22蛋白水平我们测试了一些药物抑制PMP22蛋白表达的能力(FACS分析)。图4描述了6种药物的结果，显示出它们在添加到培养基中24小时之后，能够显著降低PMP22蛋白表达。某些个体药物对PMP22蛋白水平的作用结果，也显示在上面的表1中。在图5中，显示了毛果芸香碱和纳曲酮的组合在温育24小时后对PMP22蛋白表达的影响。将蛋白表达水平与未处理的对照进行了比较。这些差异显示出是统计学显著的。下面的表2归纳了使用不同浓度的不同药物组合获得的对PMP22蛋白表达的结果。这些结果是统计学显著的，证明了提出的药物组合的优点和有益效应。表27.在CMT动物樽型中的体内实验我们测试了化合物在CMT转基因大鼠模型——带有三个附加拷贝的小鼠PMP22基因的半合子PMP22转基因大鼠(Sereda等，1996;Grandis等，2004)中的治疗效果。该CMT大鼠模型从临床的观点来说，很接近人类CMTlA疾病。成年CMT大鼠显示出减慢的运动神经传导速度，其值与CMTlA患者相似，即低于50%。在坐骨神经刺激后，化合物的肌肉动作电位显示出降低的幅度和去同步化作用。组织学和电生理改变出现在运动受损的明显临床体征之前(Sereda等，1996，2003)。由组织学显著的肌肉萎缩所证实的轴突丧失，与人类CMTlA的症状相符。在整个研究中使用了四周龄大鼠转基因PMP22大鼠。研究设计方面(随机化，多重比较的统计学，样本量等)已被检查，与ILARJournal(2002)第43卷第4期中提供的推荐相符合，该文献提供了生物医学研究中实验设计和统计学领域的综述。使用两种性别的幼龄大鼠分别形成实验组。大鼠根据体重按照随机方案分派到组中。在某些实验中，根据大鼠在杆试验中的表现进行随机化。两种性别由独立的对照组表示，它们在数量上与处理组相同或更大。大鼠用药物长期处理，在10-20周的时间内，根据每种药物的生物利用度，通过强制喂食或使用Alzet渗透皮下泵(DURECTCorporationCupertino,CA)注射。动物每周称重两次，以便根据体重的增长调节剂量。如果选择了渗透泵进行处理给药，则根据动物在泵送期间(6周)的年龄所预计的估计平均体重来计算药物的剂量。如果需要，可以使用适合的麻醉方案重新植入泵。行为测试每3或4周，对动物进行行为测试。每次测试由相同的研究人员在相同的房间中，在一天的同样时间进行；在整个实验过程中维持这种一致性。所有的处理对于研究人员来说都是盲法的。在整个研究中主要使用“杆试验(BarTest)”和“抓握力量(Gripstrength)”来评估行为。随着动物的生长，杆试验的方案可以改变(以避免由于例如学习而引起的偏差)。抓握力量的测定允许检测抓握行为中的细微差异，抓握行为看来由肌肉力量、敏感性状态(例如疼痛的触觉感可能改变测量到的力量值)、行为成分(“动机”)构成。前后肢之间的值是不同的，并极大地依赖于动物的年龄。抓握力量测试测量了动物分别用其前爪或后爪握在握杆上的力量。与握杆放置在一起的测力计测量力量(ForceGaUgere-5000A)。大鼠由实验人员抓住，使它用其前爪或用其后爪握住握杆，并将大鼠轻轻向后拉，直到它放开握杆。记录当动物释放握杆时测量到的力。对于每只动物，进行两次连续的测量前爪力量的试验和两次连续的测量后爪力量的试验；只记录最大的分值(前爪一个，后爪一个)(单位为N)。杆试验评估大鼠握住固定杆的能力。显示出肌肉虚弱的Pmp22大鼠在该试验中表现出成绩不佳(Sereda等，1996)。将大鼠放置，使其四爪在杆的中间(杆直径2.5cm;长度50cm；高于桌面30cm)。试验连续进行；在我们的实验中，试验的数量和持续时间取决于动物的批次。这种测试中的变异性已被引入，以确定在实验过程中适合于最好地检测CMT大鼠中运动缺陷的方案。记录每一期的表现指数-在杆上保持60秒(或对于第一批，第一期和第二期来说30秒)所需的试验数。-每次试验中在杆上度过的时间(即跌落等待时间)以及每一期的平均值。在大鼠在杆上停留了截止时间、即30或60秒后该期结束的实验程序中，将还未完成的试验设定为以截止时间(30秒或60秒)进行(例如，对于第8批来说，对于在试验1、2和3中在杆上停留了不到10秒，然后在试验4和5中停留了60秒的动物来说，将试验6到10设定为60秒)。_跌落的次数。总体健康评估在整个实验过程中监测动物的体重，外显体征(毛皮外观，身体姿势，步态，震颤等)。使用等级评定量表进行记录0=正常，1=异常。其他测试当适合时，对大鼠进行电生理评估和组织学测量。MM在整个处理过程中，甲巯咪唑改善杆试验表现(图6)，而在这里仅仅为了比较而出现的化合物PXT25，几乎不显示任何改善。同样地，毛果芸香碱在整个处理过程中改善杆试验表现(图6)。在用安慰剂处理的不同CMT大鼠中，与野生型(WT)组相比，运动表现的成功率平均低3倍。使用甲巯咪唑或毛果芸香碱处理，使得动物在此方面得到改进，当早在强迫喂饲8周后时，就变得统计学显著。在处理16周时这种效应相当具有论证性(图7)。与安慰剂组相比，动物变得明显更具执行性，并恢复到与WT安慰剂组相比没有明显差异的表现水平。在TG安慰剂组中，发现在尾部远端部分测量到的电位幅度明显减小，可能反映出转而由于脱髓鞘作用引起的重要的轴突丧失。在用甲巯咪唑处理后，该电生理参数转为明显改善(图8)，而神经传导速度(NCV)不受显著影响。该观察使我们推测，甲巯咪唑的作用可能阻止了轴突丧失，尽管外周神经的髓鞘化状态没有可测量到的改善。毛果芸香碱的效应似乎基本上是相同的，即使因为组内变异性，与安慰剂组参数的差异未能达到统计学显著。在CMTlA中，与CMT2中相比，感觉神经行动电位(SNAP)幅度更低，SNAP持续时间更长。在CMTlA中，合并肌肉行动电位(composedmuscleactionpotential,CMAP)与SNAP幅度的降低可能是脱髓鞘作用和轴突机能障碍的组合效应。在研究的最后，进行了形态测量分析。后肢组织的测量显示出在用安慰剂处理的CMT雌性大鼠中，与对照的WT大鼠相比，坐骨神经和比目鱼肌显著减小。这些缺陷看来通过甲巯咪唑处理得到了完全校正肌肉和神经的绝对质量甚至高于对照WT大鼠的，而在甲巯咪唑组中，与安慰剂组相比，总体重反而减少(数据未显示)。这些数据显示，在体内，本发明的化合物允许有效地治疗CMT。此外，应该指出，对于每种药物来说，显示出活性的第一剂量是相当于在人类中用于典型适应症的剂量的四分之一(甲巯咪唑)和二分之一(毛果芸香碱)的剂量。8.^^^mimmm^.下面，描述了在人类中两种组合(给药途径不同)的剂量。(1)化合物F和化合物D1作为单一药物组合物口服给药化合物D从大约0.1到大约20mg，化合物F从大约0.2到大约50mg，每天口服，为期数月，组合物中两种药物的最优选剂量在每单位(每天)0.1到5mg的范围内。2同时口服给药几个月化合物F从大约5到大约200mg，每周一次(最优选剂量高达每周50mg)，化合物D从大约0.1到大约20mg每日(该药物的最优选剂量是每日0.1至丨J5mg)ο3同时给药数月化合物D从大约0.1到大约20mg，每日口服(该药物的最优选剂量是每日0.1到5mg)，化合物F作为皮肤贴片，优选以每日大约0.2到大约2mg的速度释放药物。(2)化合物A和化合物F1长期口服给药，每天两次或三次，作为单一药物组合物，采用必须溶解在饮料中(优选牛奶中)的胶囊或滴剂的形式优选的每日总剂量，化合物F为大约0.1到大约5mg，化合物A为大约1到大约50g。2同时给药数月化合物F每周一次，每周一次大约5到大约200mg(最优选剂量高达每周50mg)，化合物A在饮料中每日两次，化合物A的每日总剂量为大约1到大约50g。3相继和同时给药用于长期治疗首先口服作为单一大丸剂的化合物F(大约200到600mg)，然后同时间歇性组合作为释放药物的皮肤贴片的化合物严(最优选情况下，以每日大约0.2到大约2mg的速度)，以及在饮用水中的化合物A，在7天期间每日两次，然后在14天期间不给药化合物A，然后在7天期间每日两次在饮用水中的化合物A(化合物A的每日优选总剂量是大约1到大约50g)等。*该药物在本发明中公开的任何组合中的剂量，在打算用于治疗男性或女性的制剂中可以显著不同。**与化合物F和化合物A(3)的治疗计划相同，但是可以使用低剂量化合物F的直肠/阴道给药来代替皮肤贴片。参考文献AmiciSA,DunnWAJr,MurphyAJ,AdamsNC,GaleNff,ValenzuelaDM,YancopoulosGD,NotterpekL.Peripheralmyelinprotein22isincomplexwithalpha6beta4integrin,anditsabsencealterstheSchwanncellbasallamina.(夕卜周髓磷脂蛋白22与α6β4整合蛋白形成复合物，并且其的缺乏改变施旺细胞的基膜)JNeurosci.2006；26(4):1179_1189·AmiciSA,DunnWAJr,NotterpekL.Developmentalabnormalitiesinthenervesofperipheralmyelinprotein22-deficientmice.(外周髓磷月旨蛋白22缺陷型小鼠神经中的发育异常)JNeurosciRes.2007；85(2)=238-249.AtanasoskiS,SchererSS,NaveK~A,SuterU.ProliferationofSchwannCellsandRegulationofCyclinDlExpressioninanAnimalModelofCharcot-Marie-ToothDiseaseTypeΙΑ.(1A型沙-马-图病动物模型中施旺细胞的增殖和周期蛋白Dl表达的调控)JNeurosciRes.2002；67(4)443-449.Basta-KaimA,BudziszewskaB,Jaworska-FeilL,TetichM,LeskiewiczΜ,KuberaΜ,LasofiW.Chlorpromazineinhibitstheglucocorticoidreceptor-mediatedgenetranscriptioninacalcium-dependentmanner.(氯丙嗪以丐依赖性方式抑制糖皮质激素受体介导的基因转录Neuropharmacology.2002；43(6)1035-1043BattyIH,FlemingIN,DownesCP.Muscarinic-receptor-mediatedinhibitionofinsulin-likegrowthfactor-1receptor-stimulatedphosphoinositide3-kinasesignallingin1321N1astrocytomacells.(1321N1星形细胞瘤细胞中毒蕈碱受体介导的抑制胰岛素样生长因子-1受体刺激的磷酸肌醇3-激酶信号传导)BioChemJ.2004；379(Pt3):641-651.BogoyevitchMA,KettermanAJ,SugdenPH.Cellularstressesdifferentiallyactivatec-JunN-terminalproteinkinasesandextrace1lularsignal-regulatedproteinkinasesinculturedventricularmyocytes.(细胞应激在培养的^已、室肌细胞中差异活化c-JimN-末端蛋白激酶和细胞外信号调控的蛋白激酶)JBiolChem.1995；270(50)29710-29717.BrancoliniC,MarzinottoS,EdomiP,AgostoniE,FiorentiniC,MiillerHW,SchneiderC.Rho-dependentregulationofcellspreadingbythetetraspanmembraneproteinGas3/PMP22.(四次跨膜的蛋白Gas3/PMP22对细胞伸展的ρ依赖性调控)Mol.Biol.Cell1999;10:2441-2459.CastelloneMD,TeramotoH,GutkindJS.Cyclooxygenase-2andColorectalCancerChemoprevention:Theβ-CateninConnection.(环力口氧醇_2禾口结肠直肠癌化学预防β-联蛋白的牵连)CancerRes.2006；66(23)11085-11088.ChenXR,BessonVC,PalmierB,GarciaY,PlotkineΜ,Marchand-LerouxC.Neurologicalrecovery-promoting,anti-inflammatory,andanti-oxidativeeffectsaffordedbyfenofibrate,aPPARalphaagonist,intraumaticbraininjury.(非诺贝特——一种PPARex激动剂，在外伤性脑损伤中提供的神经恢复促进、抗炎和抗氧化效应)JNeurotrauma2007；24(7)1119-1131.ChiesR，NobbioL，EdomiP，SchenoneA，SchneiderC，BrancoliniC.AlterationsintheArf6_regulatedplasmamembraneendosomalrecyclingpathwayincellsoverexpressingthetetraspanproteinGas3/PMP22.(在过表达四次跨膜蛋白Gas3/PMP22的细胞中Arf6调控的质膜内体再循环途径的改变)JCellSci.2003；116(Pt6)-.987-999.ConstableAL,ArmatiPJ.DMSOinductionoftheleukotrieneLTC4byLewisratSchwanncells.(DMSO诱导Lewis大鼠施旺细胞的白三烯LTC4)JNeurolSci1999；162(2):120-126.DevauxJJ,SchererSS.AlteredionchannelsinananimalmodelofCharcot-Marie-ToothdiseasetypeIA.(在IA型沙-马-图病动物模型中改变的离子通道)JNeurosci.2005；25(6)1470-1480.DiepQN,BenkiraneK,AmiriF,CohnJS,EndemannD,SchiffrinEL.PPARalphaactivatorfenofibrateinhibitsmyocardialinflammationandfibrosisinangiotensinII-infusedrats.(PPARa激活剂非诺贝特在输注血管紧张素II的大鼠中抑制心肌炎症和纤维变性)JMolCellCardiol.2004；36(2):295_304·DrachevaS,DavisKL,ChinB,WooDA,SchmeidlerJ,HaroutunianV.Myelin-associatedmRNAandproteinexpressiondeficitsintheanteriorcingulatecortexandhippocampusinelderlyschizophreniapatients.(在老年精神分裂症患者中，前扣带皮层和海马中与髓磷脂相关的mRNA和蛋白表达不足)NeurobiolDis.2006Mar；21(3)531-540.D'UrsoD,EhrhardtP,MiillerHW.Peripheralmyelinprotein22andproteinzero:anovelassociationinperipheralnervoussystemmyelin.(夕卜周髓憐月旨蛋白22和蛋白O外周神经系统髓磷脂中的新关联)JNeurosci.1999；19(9):3396_3403·FortunJ,DunnWAJr,JoyS,LiJ,NotterpekL.EmergingroleforautophagyintheremovalofaggresomesinSchwanncells.(g的新发现作用)JNeurosci.2003；23(33)10672-10680.FortunJ,LiJ,GoJ,FenstermakerA,FletcherBS,NotterpekL.Impairedproteasomeactivityandaccumulationofubiquitinatedsubstratesinahereditaryneuropathymodel.(遗传性神经病模型中受损的蛋白酶体活性和泛素化基质的积累)JNeurochem2005；921531-1541.FortunJ,GoJC,LiJ,AmiciSA,DunnWAJr,NotterpekL.AlterationsindegradativepathwaysandproteinaggregationinaneuropathymodelbasedonPMP22overexpression.(在基于PMP22过表达的神经病模型中降解途径的改变和蛋白聚集)NeurobiolDis.2006；22(1):153_164.FortunJ,VerrierJD,GoJC,MadorskyI,DunnWA,NotterpekL.Theformationofperipheralmyelinprotein22aggregatesishinderedbytheenhancementofautophagyandexpressionofcytoplasmicchaperones.(夕卜周粦月旨蛋白22I^y[本的形成受到自体吞噬的增加和细胞质分子伴侣表达的阻碍)NeurobiolDis.2007；25(2)252-265.GalvezAS,UlloaJA,ChiongΜ,CriolloA,EisnerV,BarrosLF,LavanderoS.Aldosereductaseinducedbyhyperosmoticstressmediatescardiomyocyteapoptosisdifferentialeffectsofsorbitolandmannitol.(由高渗应激诱导白勺ISH还原酶介导心肌细胞凋亡山梨糖醇和甘露糖醇的不同效应)JBiolChem.2003；278(40)38484-38494.GroyerG,EychenneB,GirardC,RajkowskiK,SchumacherΜ,CadepondF.Expressionandfunctionalstateofthecorticosteroidreceptorsand11beta-hydroxysteroiddehydrogenasetype2inSchwanncells.(施0王细胞中皮质类固醇受体和11β-羟基甾醇脱氢酶2型的表达和功能状态Endocrinology.2006；147(9)4339-4350.KantamneniS,CorreaSA,HodgkinsonGK,MeyerG,VinhNN,HenleyJM,NishimuneA.GISP:anovelbrain-specificproteinthatpromotessurfaceexpressionandfunctionofGABA(B)receptors.(GISP促进GABA(B)受体的表面表达和功能的新的脑特异性蛋白)JNeurochem.2007；100(4)1003-17·KhajaviM,ShigaK,WiszniewskiW,HeF,ShawCA,YanJ,WenselTG,SnipesGJ,LupskiJR.Oralcurcu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泮，度他雄胺，吲哚美辛，地诺前列酮，卡巴可，雌二醇，姜黄素，锂，雷帕霉素，甜菜碱，海藻糖，阿米洛利和沙丁胺醇。11.权利要求7到10任何一项的组合物或应用，其中化合物被组合用于同时或相继地成组或分开给药。12.药物组合物，其含有选自下列的至少两种化合物或其盐或前体药物的组合乙酰唑胺，氨鲁米特，氨曲南，巴氯芬，巴柳氮，比卡鲁胺，溴隐亭，布美他尼，丁螺环酮，环丙沙星，可乐定，环孢菌素A，D-山梨糖醇，依西美坦，非氨酯，非诺贝特，非那利得，氟吗西尼，氟硝西泮，呋塞米，加巴喷丁，加兰他敏，氟哌啶醇，布洛芬，异丙肾上腺素，酮洛芬，L-肉毒碱，三碘甲状腺素(T3)，氯沙坦，洛沙平，奥西那林，间羟胺，甲福明，甲巯咪唑，甲基麦角新碱，美替拉酮，美托洛尔，米非司酮，孟鲁司特，纳多洛尔，纳洛酮，纳曲酮，氟诺沙星，戊唑星，酚苄明，苯丁酸酯，吡格列酮，毛果芸香碱，哌唑嗪，雷洛昔芬，利福平，辛伐他汀，螺内酯，他莫昔芬，曲洛司坦，丙戊酸，卡马西平，氟比洛芬，双氯芬酸，美洛昔康，他克莫司，地西泮，度他雄胺，吲哚美辛，地诺前列酮，卡巴可，雌二醇，姜黄素，锂，雷帕霉素，甜菜碱，海藻糖，阿米洛利和沙丁胺醇，以及含有药学上适当的赋形剂。13.权利要求1到12任何一项的组合物或应用，其中所述至少两种化合物使用连接基或不使用连接基进行共价或非共价连接。14.权利要求13的组合物或应用，其中所述化合物使用可切开或不可切开的连接基连接。15.权利要求1到14任何一项的组合物或应用，其中所述至少两种化合物使用药物洗脱聚合物、生物分子、形成胶束或脂质体的脂类或水包油乳液、或聚乙二醇化的或固体的纳粒或微粒配制，用于口服或肠胃外或鞘内给药以改变组织分布或生物利用度。16.权利要求2、6、9或10任何一项的应用，其还包括诊断患者为患有CMT或相关疾病或具有发生CMT或相关疾病的风险的步骤。全文摘要本发明涉及用于治疗沙-马-图病(Charcot-Marie-Toothdisease)和相关疾病的组合物和方法。更具体来说，本发明涉及通过在对象中影响PMP22的表达来治疗所述疾病的组合疗法。文档编号A61K31/27GK101883561SQ200880118498公开日2010年11月10日申请日期2008年11月28日优先权日2007年11月30日发明者丹尼尔·科恩,伊利亚·楚马科夫,奥克萨纳·盖拉斯门科,谢尔盖·纳比罗钦申请人:法奈科斯公司