用于治疗或预防涉及组胺h4受体的病症的美喹他嗪的制作方法

专利名称：用于治疗或预防涉及组胺h4受体的病症的美喹他嗪的制作方法
用于治疗或预防涉及组胺H4受体的病症的美喹他嗪本发明主要涉及10-[(3R，3S)-1-氮杂双环[2.2.2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻 嗪，10- [ (3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，或10- [ (3R)-1-氮杂双 环[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪及其药学上可接受的盐在制备通过局部、口服或 肺部途径预防或治疗由组胺H4受体的激活所介导的病症的药物中的用途。10-[(3R)-1-氮 杂双环[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪和10-[(3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛 烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪由外消旋体衍生而来。首先，这个外消旋体是有效治疗过敏性 病症的药物。其为Hl类的抗组胺。其具有不对称的碳，从而引起两个不同的空间构型左 旋(S构型)和右旋(R构型)。两种对映异构体和外消旋混合物的药理学研究显示这些 化合物出人意料的具有针对组胺H4受体的亲和性。这个性质是在其针对Hl受体的亲和性 之外的性质。在现有技术中没有证明甚至是简单考虑过这个特别性质。以下例证这个特别 性质。由Nakamura等人(2000)描述并由Morse等人(2001)克隆的H4受体是与Gi/o 异二聚体偶联的具有390个氨基酸的跨膜蛋白，其激活诱导细胞内钙流动、cAMP的下降和 MAP激酶途径的激活。虽然该受体在三维结构上与Hl受体相似，但是它们只有35%的同源 性。人们普遍推测不同的生理学或生理病理学效应将表达一个或另一个组胺受体亚 型的激活。这种受体选择性将证明组胺受体亚型的存在。Hl受体的激活诱导蛋白Gq的激 活，H2受体的激活诱导蛋白Gs的激活，H3受体的激活诱导蛋白Gi/o的激活(Lovenberg 等人，1999)。功能上来讲，这些受体的激活是由不同的分子效应表达的。取决于所考 虑的H3受体的配体，一些对H4受体具有亲和性。这些包括噻普酰胺(thioperamide)、 (31(^6即1~0 ^、丨11^{^和1 -0-甲基组胺。此外，受体亚型的分布也是不同的。对于人类 来讲，H4受体主要表达于外周组织，例如骨髓细胞和造血细胞(嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细 胞、肥大细胞、T淋巴细胞和树突状细胞)。除了它们的解剖学分布之外，组胺受体在生理病理学中的作用的特异性取决于这 些过程中组胺的参与。已经很好地确定了组胺作为过敏症调节子的功能。最近的数据赋予 了组胺在调节免疫反应中的功能，更确切地说是通过最近描述的H4受体。H4受体拮抗剂抑 制T淋巴细胞的反应，根据细胞凋亡蛋白激酶依赖性过程，H4受体的灭活在体外抑制了针 对抗原刺激的细胞免疫反应(Sugata等人，2007)。组胺是速发型过敏反应的重要调节子， 但是其也干预抗原递呈细胞的调控(Dy等人，2004)。因此，H4受体的激活诱导免疫活性树 突状细胞中的单核细胞分化。当H4受体被激活时，出现IL-12 p70的下降并引起单核细胞 的分化(Gutzner等人，2005)。Takeshita等人(2003)公开H4受体直接干预多核中性粒细 胞的募集，这种募集或趋向性依赖于肥大细胞。因此，已经清楚地确定了趋向性的下降以及通过H4受体灭活引起的中性粒细胞 渗透的下降。例如，在注射某些试剂例如角叉菜胶引起的炎症的模型中，或者在卵白蛋白刺 激导致的炎症的模型中，H4受体拮抗剂的重要性显示作为控制外周炎症现象的假定试剂。 主要部分涉及生理病理性症状
·遗传性过敏皮炎，皮肤瘙痒；·支气管炎症(哮喘、阻塞性支气管肺病)；·肠炎症(肠应激综合征)；·关节炎症(风湿性关节炎)；·引起血管形成的瘤周基质的炎症及其结果肿瘤的发生。H4警体参与皮肤炎症/痦痒通过特异性配体例如JNJ7777120抑制H4受体限制了动物中的自我挠搔行为，其 中在所述动物中预先通过皮下注射组胺诱导瘙痒(Bell等人，2004)。似乎H4受体拮抗剂 的活性高于Hl拮抗剂(例如地氯雷他定或西替利嗪)的活性。但是，在该模型中，这些“经 典”抗组胺的活性不为零，因此显示Hl抗组胺的抗瘙痒效应不依赖于其镇静特性。此外，对 于一些剥夺了镇静效应的Hl拮抗剂也显示出了这种抗瘙痒活性。另外，H4受体的外周定位 确认了一种假设，根据该假设，H4受体的灭活使得能够局部控制影响，而不是中心控制。受 体H4的表达确认了这些数据。确实，根据Lippert等人(2004)，人类皮肤肥大细胞表达组 胺H4受体，这确认了组胺作为皮肤炎症的自分泌和副分泌调节子的作用。此外已经表明 在没有遗传性过敏症的病人的T淋巴细胞中，组胺通过抑制STATl蛋白的激活经由H4受体 发挥作用。这个信使是激活控制免疫反应和Thl/Th2平衡的转录因子的蛋白。在患有遗传 性过敏症的病人的淋巴细胞的情形中，信号仍然是由组胺对H4受体的激活所介导，并最终 由干扰素-Y的产生所表达。这个因子引起炎症现象的扩大。在没有遗传性过敏症的病人 的细胞中，STATl的表达已经被降低并且干扰素-γ水平低。因此，在患有遗传性过敏症的 病人中H4受体的抑制比健康志愿者中更加有效(Horr等人，2006)。因此可以得出结论H1拮抗剂与H4拮抗剂偶联的组合效应将构成旨在限制瘙痒 的皮肤病学上的结果(例如疥疮)及其并发症(损伤、感染)的治疗试剂的选择权利。H4受体参与气道炎症H4受体在支气管和肺泡上皮中的表达引起研究者探索其在支气管炎症现象(例 如哮喘或阻塞性支气管肺病)中的参与。这些使用卵白蛋白刺激的病症的动物模型使得可 以确定H4受体在该情况下的作用(Dimford等人，2006)。如前所见，通过特异性拮抗剂将 H4受体灭活后限制了趋向性从而限制了中性粒细胞进入发炎的肺部上皮细胞。其结果是打 乱了免疫和炎性级联。确实，当H4受体被中和后，CD4 T淋巴细胞不再被激活。此外，化学 因子和细胞因子水平下降，结果是T淋巴细胞反应减少。因此，可以合乎逻辑地推出任何H4 受体拮抗剂都是抵抗肺部上皮细胞中炎症现象的试剂，不论其来源中毒，过敏反应或肿瘤 诱导的慢性呼吸性窘迫。H4受体参与肠道炎症在Varga等人(2005)的研究中提供了 H4受体拮抗剂抑制炎症现象的另一个例 子。在动物中通过施用三硝基苯诱导结肠的炎症。预先以H4受体拮抗剂进行处理。在最 后，经此预处理的动物比对照动物具有更少的组织学炎症得分。与此并行，观察到炎性因子 例如TNF-α水平的下降。因此，H4受体抑制剂在病症例如肠应激综合征中显示了其重要 性。H4受体参与关节炎症在与风湿性关节炎相联的炎症现象中也确定了 H4受体的参与。Ikawa等人(2005)
4通过间接测量来自风湿性关节炎患者的滑膜细胞的样品中的转录本(RT-PCR)分析了 H4受 体的表达。分析显示在这些样品中H4受体的表达非常高，这提示组胺H4受体在与风湿性 关节炎相联的炎性级联中发挥作用。因此，H4受体抑制剂在滑膜细胞的炎性病症中显示出
一些重要性。H4警体参与和肿瘤发牛相关的血管形成在一些肿瘤组织中发现了组胺脱羧酶(一种催化组胺合成的酶)的活性。这并不 一定意味着组胺水平的升高引起肿瘤现象的出现，但是，已经清楚地确定与组织癌化同时 出现的炎症涉及组胺。在结肠肿瘤、乳腺肿瘤和子宫内膜肿瘤、小细胞肺肿瘤和黑色素瘤中 有组胺脱羧酶的表达。Cianchi等人(2005)的研究成果证明该酶在Cac02、HT29和HCT116 细胞中过度表达。在体外，组胺在结肠腺癌的这些培养物中诱导促炎性因子(即前列腺素 E2)产量的增加和血管内皮生长因子(VEGF)产量的增加。有可能细胞分裂的增强通过H4 受体产生组胺的这种激动效应。确实，这两种生物标记物参与瘤周血管网的发展(血管生 成)。组胺对血管发生的激动效应被H4受体抑制剂以及环氧合酶1和2抑制剂所拮抗。虽 然由于抗炎能力而知道COX抑制剂的作用，但是最近描述了 H4受体拮抗剂的作用及其对于 瘤周血管网发生这一现象的有效性。这些数据提示H4受体拮抗剂在血管生成中的用处。此 外，这些研究的结果显示通过阻断H4受体而抑制组胺活性降低了培养的结肠腺癌细胞的 细胞分裂。由于以上原因，似乎候选抑制剂应该具有对于Hl受体和H4受体的双重结合作用， 从而具有抑制组胺介导的外周炎症的完全作用。在涉及H4受体的皮肤病学病症的情况下，以及为了降低抗组胺诱导的副作用的 目的，经皮途径具有优势，因为候选分子具有跨越角膜层并到达其皮下靶标——表达H4受 体的肥大细胞的倾向。类似地，在气道炎性病症的情况下，优选为提供盖仑制剂形式，其可 能直接到达支气管上皮中的靶标而限制目标药剂的全身渗透。因此，除了特定的施药途径之外，对与药物的活性代谢物的血浆水平的限制还可 以依赖于特定的肝脏代谢，所述肝脏代谢不产生能够加剧最初施用的药物的效应或提高副 作用的频率和强度的活性代谢物。此外，较长的产物半衰期意味着较低的施用频率，这会促进治疗依从性。本发明的目标是证明10-[(3R)_1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻 嗪(美喹他嗪的右旋对映异构体；本文中命名为￥0162)、10-[(3幻-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛 烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪(美喹他嗪的左旋对映异构体；本文中命名为VOl 14)和两种 对映异构体的外消旋混合物10-[(3R，3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩 噻嗪(本文中命名为L0013)的特别的、出人预料的特性。本发明涉及10-[(3R)_1-氮杂双环[2.2.2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪， 10- [ (3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，或10- [ (3R，3S)-1-氮杂双 环[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪及其药学上可接受的盐在制备预防或治疗涉及 组胺H4受体的病症的药物中的用途。根据本发明的另一个特征，涉及组胺H4受体的病症选自遗传性过敏性皮炎、瘙 痒和支气管炎症，例如哮喘和阻塞性支气管肺病。根据本发明的另一个特征，所述药物以适合于口服施用的形式提供，药物包含足以拮抗靶标组胺H4受体的量的活性成分。 根据本发明的另一个特征，所述药物以口服剂量单元提供，从而能够提供1 μ g/kg
至10mg/kg，优选0. 01mg/kg至lmg/kg的施用剂量。 根据本发明的另一个特征，所述药物以药片的形式提供。根据本发明的另一个特征，所述药物以口服喷雾溶液或吸入式粉末的形式提供， 特别适合于治疗哮喘或阻塞性支气管肺病。根据本发明的另一个特征，所述药物用于预防或治疗同时涉及H4受体和毒蕈碱 (muscarinic)受体的病症。根据本发明的另一个特征，涉及前述受体的病症选自呼吸道病症。根据本发明的另一个特征，前述病症选自肺气肿、哮喘或阻塞性支气管肺病。根据本发明的另一个特征，本发明延伸至含有10-[(3R)_1-氮杂双环[2.2.2]辛 烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪的产品。根据本发明的另一个特征，所述药物以适合于以局部途径施用的形式提供。根据本发明的另一个特征，所述药物以凝胶、乳剂或乳膏的形式提供，其中活性成 分的浓度按重量计是0.01%至10%。根据本发明的另一个特征，所述药物用于治疗遗传性过敏性皮炎和瘙痒。遗传性过敏性皮炎是皮肤的炎性疾病，有时称为遗传性过敏性湿疹，其特征是各 种来源(例如细菌、真菌或过敏原)的发痒损伤。大体上讲，本发明的目标是治疗瘙痒，瘙痒一般被认为是与各种类型的皮肤病损 伤相联的发痒的皮肤症状。最后，本发明还延伸至一种产品，其含有10-[(3R)_1-氮杂双环[2.2.2]辛 烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，10- [ (3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻 嗪，或10-[ (3R，3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪或其药学上可接 受的盐，以及Hl抗组胺、肾上腺皮质素(corticoid)、长效或速效的抗毒蕈碱和β 2-模拟物 这类的药物；作为组合产品通过拮抗组胺Η4受体以同时、分别或延长用于抗炎治疗。以下实施例显示——上述三种化合物在微摩尔浓度时对于人类组胺Η4受体的体外亲和性是有效 的。——化合物作为针对Η4受体的反向激动剂发挥作用，这个特性在现有技术中从未 被描述过。——化合物V0114、V0162和L0013的皮肤穿透性和粘膜穿透性是显著的，对于该 药效团是特异性的。——这些化合物的半衰期长，这使得可以设想与这些产品的潜在适应症相容的剂
量安排。所有这些特性组合(作为本专利的例子聚集在一起)以出人预料的方式证明 10-[(3R)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪(右旋对映异构体；本文 中命名为V0162)、10-[(3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪(左旋 对映异构体；本文中命名为VOl 14)和外消旋混合物10-[(3R，3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛 烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪(本文中命名为L0013)是在涉及H4受体的病症(例如以上所列的那些)中有活性的化合物。实施例1 :10-「(3R)-l-ii杂双环「2. 2. 21辛烷_3_某甲某1-10H-吩PJlff泰(右 旋对映异构体本文中侖名为V0162)、10-「(3S)-1-氮杂双环「2. 2. 21辛烷-3-基甲 某1-10H-卩泰(左旋对日央异构体本f中命名为V0114)禾Π两种对日央异构体的夕卜消!^混 合物10-「(3尺，35)-1-氮,杂双环「2. 2. 21辛烷-3-某甲某1-10Η-吩PJlff泰(本命名为 L0013)对人类组胺Η4警体的体外亲和件本研究的目标是确定化合物针对人类组胺Η4受体的体外亲和常数。选择的模型 是ΗΕΚ-293细胞，其以稳定方式经过编码人类Η4受体的cDNA转染(Liu等人，2001)。首先 确定表达每种受体的类型对于配体的亲和性，同时确定其与受体100%结合。对于重组受体 的最佳配体是IOnM氚化组胺。受体结合定义如下在过量的冷配体(coldligand)存在的 情况下确定的总结合和非特异性结合之间的差异。结果按照以配体模型获得的最佳结合的 百分率表示(100% )0表1:体外受体结合 结果显示V0162、V0114和L0013是以出人预料的方式与人类组胺H4受体强烈结 合的化合物。在第二个系列的实验中，通过来自CHO细胞的膜制备物上的氚化组胺放射性配体 的竞争精确测定了这三个化合物的亲和常数，该CHO细胞以稳定方式表达组胺H4受体。表2 针对H4受体的体外亲和常数的测定 这些结果显示三个化合物显示出与组胺H4受体的亲和性。这些亲和性是微摩尔 水平的。这些化合物针对H4受体的活性由以下事实得到加强三个化合物V0162、V0114和 L0013具有跨越皮肤屏障的强烈能力。此外，它们在生物中的长半衰期提示在受体靶标水平 上的残余效应。实施例2 化合物V0162、V0114和L0013作为H4警体的反向激动剂的鉴定为了确定化合物10-[(3R)_1-氮杂双环[2.2.2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪 (右旋对映异构体；本文中命名为V0162)、10-[(3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷-3-基甲 基]-10H-吩噻嗪(左旋对映异构体；本文中命名为VOl 14)和两种对映异构体的外消旋混 合物10-[(3R，3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪(本文中命名为 L0013)对H4受体的功能影响(激动剂、拮抗剂、反向激动剂)，进行了这些研究。G蛋白属于在多种必需的细胞功能中作为分子开关的蛋白家族。其调控活性是基 于它们在与GDP相关的非活性形式和与GTP相关的活性形式之间循环的能力，后者将作用 信号传递至所谓的效应蛋白(位于信号级联的下游)。为了鉴定三个化合物V0162、V0114 和L0013对H4受体的功能影响，使用G蛋白激活测试进行了研究。简而言之，测试依赖于 各种化合物与受体结合过程中所诱导的与G蛋白结合的[35S]放射标记的GTP的量化。在附

图1和2中以图的形式报告了这些结果。图Ia中显示的G蛋白激活测试的结果表明三个化合物V0114、V0162和L0013 拮抗H4受体上的0. 1 μ M组胺诱导的激活作用，如使用噻普酰胺和选择性的Η4拮抗剂 JNJ7777120所观察到的那样。已知Η4受体具有组成型活性(constitutive activity)，图 Ib显示化合物V0114、V0162和L0013像噻普酰胺一样作为H4受体的反向激动剂发挥作用 (在不存在激动剂时基础活性的下降)，而化合物JNJ7777120是中性拮抗剂。化合物V0162、V0114、LOO13和噻普酰胺的反向激动剂活性肯定是由于对H4受体 的作用，因为图2a至2d显示中性拮抗剂JNJ7777120阻断该活性。这些结果综合起来第一 次显示化合物V0162、V0114和L0013是H4受体的反向激动剂。这种对于受体灭活的功能 将V0162、V0114和L0013与中性拮抗剂家族(例如JNJ7777120)区别开来。实施例3 在小鼠中组胺诱导的足跖水肿模型中V0114和L0013的体内抗炎活性本实验的目标是检测V0114、V0162和L0013对于小鼠中组胺诱导的足跖水肿的可能的抗炎活性。测试的原理受Kreutner等人(2000)出版物的启示。所有的组均由10只 动物组成。在炎症生成试剂之前的不同时间120、90、60和30分钟，在预处理中通过口服 途径施用产品(25ml/kg)。60分钟之后，经异氟烷麻醉后在爪子中进行注射(10 μ 1)。右爪 接受13 μ g组胺二盐酸盐，左爪接受生理盐水溶液(组胺载体)。注射30分钟之后，通过 断颈法使动物安乐死。对爪子进行取样并称重。通过爪子重量的差异(右爪重量减左爪重 量)对水肿进行定量。表3 口服施用之后，体内抗炎活性的确定 与使用载体在相同的时间进行预处理的组相比，V0114和L0013诱导强烈的和统 计学上显著的抗炎效应。当在爪子中注射炎症生成试剂之前90和120分钟进行预处理时， 这个活性(对于V0114为-58%至-72% ；对于L0013为-54%至-82% )更高。在这些实 验条件下，事先120、90、60和30分钟通过口服途径施用VOl 14和LOO13显示出强烈的针对 小鼠爪子上的组胺水肿的抗炎效应。V0162不减少这种水肿，这证明其在该模型中没有抗组 胺效应。但是，产品是通过口服途径施用的。然而在以下测试中，当直接通过静脉内途径施 用时，产品V0162似乎是有活性的。结论是该研究显示在体外证明的H4抗组胺活性在体 内的动物中得到确认。
^WM 4 目胺i秀导的小鼠气ι管IHr缩1草型中，诵i寸静fe内涂径施用V0114禾口 L0013后的体内抗组胺活件这些实验的目标是评价三个化合物￥0162、￥0114和1^0013在1(0皿6 (1940)天竺 鼠模型中针对组胺诱导的支气管收缩的活性。以前我们发现三个化合物在体外显示出针对 H4受体的抗组胺活性，而另一方面在体内时，当通过组胺产生炎症时，只有VOl 14和L0013 显示出抗炎活性。似乎当通过口服途径施用时，V0162丧失了其活性。为了分析静脉内途 径施用的三种产品的活性，进行了以下测试。使用恒压呼吸泵向动物通气，空气体积为过量 的。空气不穿透进入肺，而是到达感应器并测定每次吸气。观测到的差异代表支气管紧张 (tonus)的变化。组胺诱导的支气管收缩引起感应器所测的过量体积的升高。通过颈静脉 (预先插管)途径施用各种化合物。然后通过静脉内途径以7 μ g/kg的剂量进行组胺刺激。表4 静脉内施用化合物之后，体内抗组胺活性的确定 在该模型中，组胺诱导支气管收缩。当通过静脉内途径施用时，三个化合物诱导对 组胺效应的抑制。因此，施用途径似乎对于达到靶标是重要的。但是，当考虑到30分钟之 后的测量时，这个结果被修改。V0162似乎丧失了其拮抗活性，而V0114的这种活性是最大 的。这些实验显示出，在体内经过静脉内施用时候，化合物抵抗在肺水平上产生这种 调节子的现象中的组胺的作用。实施例5:10-「(3135)-1-氮杂双环「2. 2. 21辛烷基甲基1-10H-吩噻嗪的皮 肤穿诱件最近确定了 H4受体在瘙痒中的重要性。因此，参与皮肤病瘙痒的靶向组胺H4受 体的拮抗剂能够构成破坏与瘙痒有关的行为的选择的手段，从而避免瘙痒引起的皮肤损伤 产生的重复感染。类似地，这样的H4抗组胺将证明可用于预防或减少如前所示的遗传性过敏症中观察到的症状。为此，这对H4抗组胺能跨越皮肤屏障从而到达其靶标皮下肥大 细胞是有用的。这些实验的目的是评价10-[(3R，3S)-1-氮杂双环[2.2.2]辛烷_3_基甲 基]-10H-吩噻嗪的跨越皮肤屏障的能力。将人类皮肤外植体置于动态扩散室(扩散面积 为 0. 636cm2)中，真皮与受体介质(水；0. 9% NaCl 0. 9% NaN3 0. 1% / 乙醇；75/25 ；ν/ν) 接触。流速为1. 5ml/h。在32°C进行本研究。在T = 0时加入含有化合物的溶液(500 μ 1 至2.5mg/ml，或1(^以/细胞)。在阻塞的情况下进行皮肤穿透性研究。在第3、6、9、12、 16、20和24小时对接收液体进行取样。结果显示16小时后，几乎达到了化合物恒定最大流量，在24小时的时候，积累的 数量为 5. 4 μ g/cm2/h ；107 μ g/cm2。在24小时的时候表皮和真皮中的化合物数量(图3b)显示出浓度梯度，因此该分 子在皮肤中是均勻分布的——表皮=56士 17 μ g/cm2-真皮=45 士 14 μ g/cm2-合计=101 μ g/cm2-受体区域=107 士 28 μ g/cm2本研究显示10-[(3R，3S)_1-氮杂双环[2.2.2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪是 具有良好的皮肤穿透性潜力的分子(大约100μ g/cm2/24h)。24小时之后储存在皮肤中的 化合物数量等于甚至高于24小时后接收液体中发现的积累数量。实施例6 在大鼠阻塞性慢性支气管肺病模型中化合物V0114和V0162的抗炎活 性的评价在以下模型中评价了化合物在降低肺部炎症中的重要性。通过慢性雾化将动物暴 露于镉剂量中。最终，动物产生炎性反应和肺气肿。在大鼠中验证了这个模型以证实其鉴 定潜在的有效分子以治疗与H4受体激活介导的中性炎性反应的持续性相关的慢性呼吸疾 病的用途。一旦发生该病症，每天以肺部施用剂量为IOyg至50yg的目标化合物(通过 雾化施用)处理动物。结果显示所测化合物部分恢复了呼吸能力，最显著的呼吸速率，增加了吸气和呼 气流量。此外，在实验结尾，抽取支气管肺泡液体样品，免疫活性细胞进行计数。结果显示 当比较处理组和仅接受安慰剂的动物时，渗透的中性粒细胞下降。这些实验综合起来确认了所测化合物通过拮抗组胺H4受体的抗炎活性。三个化合物显示出针对H4受体的受体亲和性。我们确定它们是该受体的反向激 动剂。在体外和体内显示了这些抗炎活性并在接受的模型中得到确认。此外，这些化合物 具有药物动力学和皮肤穿透特性，这使得能够进行局部施用(皮肤或肺)。以前从未证明过 这三个化合物对H4受体的特殊性质和产生的治疗用途。以上例证了这些性质(合在一起 或单独考虑)。这些实施例显示了在组胺H4受体介导的病症中合理使用10-[(3R)_1-氮杂双 环[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，10-[(3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷_3_基甲 基]-10H-吩噻嗪，或10-[(3R，3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪。 此外，以前确定的左旋衍生物(10-[(3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩 噻嗪)和外消旋混合物(10-[(3R，3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪)作为Hl受体抑制剂的活性赋予这两个产品H4和Hl抗组胺的双重特性。这个双重能 力使这些化合物相对于迄今为止的现有技术中描述的抗组胺产品具有优越性。类似地，其 它地方清楚确定的右旋衍生物(10-[(3R)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩 噻嗪)的抗毒蕈碱活性由其H4抗组胺活性得到加强。现有技术中没有描述过化合物 10-[(3R，3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪，10-[ (3S)-1-氮杂双环 [2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，和10-[(3R)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷_3_基甲 基]-10H-吩噻嗪的这种双重性质。另外，本发明显示了 V0162和L0013的双重抗H4和抗M1/M3活性在抑制患有哮喘 或阻塞性支气管肺病的病人中炎症现象和呼吸性窘迫中的重要性。受体H4参与涉及免疫活性细胞(主要是嗜酸性粒细胞和巨噬细胞)的募集的病 症。因此考虑到使用该受体的配体以限制肺气肿、阻塞性支气管肺病或哮喘中肺水平上的 嗜酸性粒细胞的渗透和巨噬细胞的募集。该活性可明智地由解痉活性补充。出人意料地，V0162或(10-[(3R)_1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩 噻嗪)和L0013或(10-[(3R，3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪) 证明具有补充性的抗胆碱活性。对于左旋对映异构体V0114或(10-[(3S)-1-氮杂双环 [2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪)在体内没有观测到该活性。这两种性质组合在同一个化合物中使得能够预见V0162和/或L0013治疗呼吸病 症(例如哮喘和阻塞性支气管肺病)的用途。实施例7 :V0162对毒蕈碱受体的亲和性本测试的目标是评价化合物对于乙酰胆碱结合Ml、M2和M3受体的抑制活性。为 此，将固定数量的放射标记的乙酰胆碱与不同剂量的待测化合物V0162、LOO13和V0114孵育。 因此，在体外V0162和L0013显示出非常高的针对参与启动、调节和维持支气管肌 肉收缩的毒蕈碱受体的亲和性。左旋对映异构体对乙酰胆碱与三个毒蕈碱受体的结合的抑 制较弱。该差异在体内更加明显，因为只有V0162和L0013拮抗乙酰胆碱的效应。实施例8 乙酰胆碱对于呼吸肌肉收缩的效应的抑制
将天竺鼠麻醉并人工通气。通过感应器测定穿透到肺部的空气。因此每次吸气被 定量。然后通过静脉内注射乙酰胆碱诱导支气管收缩。乙酰胆碱的效应是直接的和瞬时的 支气管紧张的修饰。在效应的峰值处以mm评价乙酰胆碱的支气管收缩效应。注射乙酰胆 碱20分钟后，施用待测的各种产品V0162、L0013和V0114。将产品的效应与阿托品的效应 (参考方法)进行比较。 结果显示V0162和L0013是两种能够诱导抑制乙酰胆碱诱导的支气管痉挛的产 品。另一方面，V0114活性不高。实施例9 :L0013的支气管扩张效应，VOl 14无支气管扩张效应在雄性Wistar大鼠中(8只大鼠/剂量)口服施用(per os)之后分析V0114(0. 5、 50和100mg/kg)对于呼吸功能的效应。在相同条件下施用的L0013(100mg/kg)用作参考 物质。在相同实验条件下施用的茶碱(100mg/kg)用作参考物质。蒸馏水中的羧甲基纤维 素(0. 5% )用作对照载体。在测试期的结尾(即施用剂量之后360分钟)，评价动物的行 为以及其瞳孔的直径(瞳孔缩小/瞳孔散大)。从每只大鼠抽取血液样品(除了那些与茶 碱组有关的之外)以分析血液中物质的浓度。对照载体在吸气时间、呼气时间、吸气峰值流 量、呼气峰值流量、呼吸体积、呼吸速率、松弛时间或呼吸暂停没有影响，且在360分钟的测 试期之后改进了呼吸暂停。施用之后在呼吸暂停中观察到非常轻微的上升(在对照载体组 中在120分钟时最大值为+24%, ρ < 0. 01)。V0114(0. 5、50和100mg/kg, p. ο.)对于所评 价的9个呼吸参数中任何一个都没有显著影响，这与360分钟的测试期之后的对照载体组 相反。L0013(100mg/kg, p. ο.)显著提高了呼吸速率(最大值为+80%，对比于对照载体 组中的_9%，施用之后60分钟，ρ < 0. 05)。L0013倾向于降低吸气时间(_26%，对比于对 照载体组中的+6 %，施用之后60分钟)、呼气时间(-24 %，对比于对照载体组中的+3 %，施 用之后60分钟)、松弛时间(-30 %，对比于对照载体组中的_2 %，施用之后120分钟，)和呼吸体积(-26%，对比于对照载体组中的_6%，施用之后60分钟)。它还倾向于增加吸气峰 值流量(+14%，对比于对照载体组中的-13%，施用之后60分钟)、呼气峰值流量(+23%， 对比于对照载体组中的_4%，施用之后120分钟)。这些效应表明刺激和支气管扩张呼吸 特性。茶碱(100mg/kg，p. ο.)明显且迅速降低吸气时间(_60 %，对比于对照载体组中 的+6%，施用之后60分钟，ρ < 0.001)、呼气时间(-63%，对比于对照载体组中的+3%， 施用之后60分钟，ρ < 0. 001)和松弛时间(_61%，对比于对照载体组中的+0%，施用之 后60分钟，ρ < 0. 001)。茶碱明显且迅速提高吸气峰值流量(+116%，对比于对照载体组 中的-13%，施用之后60分钟，ρ <0. 001)、呼气峰值流量(+121%，对比于对照载体组中 的-7%，施用之后60分钟，ρ <0. 001)和呼吸速率(+223%，对比于对照载体组中的-9%， 施用之后60分钟，ρ<0. 001)。此外，茶碱轻微降低呼吸暂停(_20%，对比于对照载体组中 的+15%，施用之后300分钟，ρ <0. 01)并改进呼吸暂停(_37%，对比于对照载体组中的 +19%，施用之后300分钟，ρ < 0. 05)。茶碱还倾向于轻微地、逐渐降低呼吸体积(_17%， 对比于对照载体组中的+2%，施用之后120分钟，NS)。这些效应表明了茶碱的刺激和支气 管扩张呼吸特性。在实验结尾(即，施用之后360分钟)，没有观察到施用VO114(0.5、50和IOOmg/ kg)、L0013(100mg/kg)和茶碱(100mg/kg)之后的行为或病态迹象的改变。在以V0114处 理的组中，施用之后360分钟，测定了大鼠瞳孔直径，注意到相对于施用50mg/kg有所增加。 以同样的方式，在以L0013(100mg/kg)(作为对照物质)处理的大鼠中注意到瞳孔直径可评 估的增加。这些结果提示在雄性Wistar大鼠中口服施用的V0114(0. 5、50和100mg/kg)在 360分钟的测试期之后对于呼吸功能没有任何影响。另一方面，L0013(100mg/kg)显示出刺激和支气管扩张呼吸特性的效应。总之，这些结果表明V0162和L0013除了其H4受体抑制活性之外，还具有抗毒蕈 碱的潜力。这两个特性对于制备预防、减少或治疗涉及毒蕈碱和组胺能H4受体的呼吸病症 (例如阻塞性支气管肺病、哮喘或任何呼吸功能缺陷)的药物的目的中是重要的。实施例10 对于呼吸困难的动物以溶液或吸入式粉末施用的V0162的有利效应乙醇用作通过雾化施用V0162的溶剂。另外，制备了无水粉末制剂。在这 些实验中评价了两种盖仑制剂形式V0162的溶液和含有V0162的吸入粉末。通过 V0162(10-[(3R)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪)溶液的雾化处理 大鼠或以含有V0162的无水粉末的粉化处理大鼠。以各种浓度施用V0162，动物置于暴露 室(exposurechamber)。暴露于V0162 15分钟之后，进行乙酰甲胆碱刺激测试。以浓度渐 增的乙酰甲胆碱处理动物。显示的数值是每个施用乙酰甲胆碱的步骤之后呼吸系统对气流 产生的抗性的数值。结果显示，V0162减轻了呼吸困难，因此增加了剩余功能量(residual functional capacity)0大鼠中的乙酰甲胆碱刺激测试，两个V0162的吸入制剂(粉末和溶液)的效应。
通过抑制H4受体的双重抗毒蕈碱和抗炎活性似乎赋予V0162 (以粉末或溶液的形 式吸入)可广泛开发用于治疗支气管炎症(例如阻塞性支气管病或哮喘)和呼吸性窘迫的 真正特性。
权利要求
10-[(3R)-1-氮杂双环[2.2.2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，10-[(3S)-1-氮杂双环[2.2.2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，或10-[(3R，3S)-1-氮杂双环[2.2.2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗涉及组胺H4受体的病症的药物中的用途，所述病症选自遗传性过敏性皮炎、瘙痒或支气管炎症，例如哮喘和阻塞性支气管肺病。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物是10-[(3S)-1-氮杂双环 [2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物是10-[(3R)-1-氮杂双环 [2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪。
4.根据权利要求1或3所述的用途，其特征在于，所述药物以适合于口服施用的形式提 供，其包含足以拮抗靶标组胺H4受体的量的活性成分。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述药物以口服剂量单元提供，从而能够 提供1 μ g/kg至10mg/kg，优选0. 01mg/kg至lmg/kg的施用剂量。
6.根据权利要求4或5所述的用途，其特征在于，所述药物以药片的形式提供。
7.根据权利要求4或5所述的用途，其特征在于，所述药物以口服喷雾溶液或吸入式粉 末的形式提供，特别适合于治疗哮喘或阻塞性支气管肺病。
8.根据前述权利要求中的一项所述的用途，其特征在于，所述药物旨在预防或治疗同 时涉及组胺H4受体和毒蕈碱受体的病症。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，涉及前述受体的病症选自呼吸道病症。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，前述病症选自肺气肿、哮喘或阻塞性支 气管肺病。
11.根据权利要求8至10中的一项所述的10-[(3R)-1-氮杂双环[2.2. 2]辛烷_3_基 甲基]-10H-吩噻嗪的用途。
12.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述药物以适合于以局部途径施用 的形式提供。
13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述药物以凝胶、乳剂或乳膏的形式提 供，其中活性成分的浓度按重量计是0.01%至10%。
14.根据权利要求12和13中的一项所述的用途，其特征在于，所述药物用于治疗遗传 性过敏性皮炎和瘙痒。
15.根据权利要求14所述的用途，其特征在于，所述药物是10-[(3S)-1-氮杂双环 [2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪。
16.一种产品，其含有10-[(3R)-1-氮杂双环[2.2.2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪， 10- [ (3S)-1-氮杂双环[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，或10- [ (3R，3S)-1-氮杂双 环[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪或其药学上可接受的盐，以及抗Hl抗组胺、肾上 腺皮质素、长效或速效的抗毒蕈碱和β 2-模拟物这类的药物；作为组合产品通过拮抗组胺 Η4受体以同时、分别或延长用于抗炎治疗。
全文摘要
本发明涉及10-[(3R)-1-氮杂双环[2.2.2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，10-[(3S)-1-氮杂双环[2.2.2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，或10-[(3R，3S)-1-氮杂双环[2.2.2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗涉及组胺H4受体的病症的药物中的用途。
文档编号A61K31/5415GK101883566SQ200880118801
公开日2010年11月10日 申请日期2008年12月4日 优先权日2007年12月4日
发明者C·普日贝尔斯基, D·屈萨克, J·蒂内-凡尔赛, T·克莱尔 申请人:皮埃尔法布雷医药公司