一种医用防粘连膜及其制备方法

专利名称：一种医用防粘连膜及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种医用防粘连膜及其制备方法，属于生物医学技术领域。
技术背景外科手术后组织粘连一直是临床医学面临的一大难题，全国每年有近千万 的各种类型的手术病例，而几乎所有手术都涉及到组织之间防粘连和局部抗炎 症问题。在人体腹部、心血管、脊柱、骨关节、腿部、妇科盆腔等外科手术后 发生的组织粘连不但给患者带来极大的痛苦，而且造成巨大的经济损失。术后 粘连可以引起严重的并发症，如腹部、盆腔等均可引起粘连性肠梗阻，曱状腺 手术后引起喉返神经损伤，心脏与胸廓的粘连还需再做一次开胸术以及因盆腔 组织粘连而导致的女性不育症，而且也是再次手术时并发症明显增高的最主要原因。90%的患者在术后均有不同程度的粘连产生，60%的患者需要采取一 定的防粘连措施。粘连的形成过程有以下几步(1)纤维蛋白胶状基质形成.损伤后，机体 反应涉及凝血、激肽、纤溶及花生四烯酸代谢四大系统，使机体很快进入临界 凝血状态，存在于血液及内的纤维蛋白原分泌于创面，在凝血酶的作用下，其 相互作用形成可溶性聚合物.这些聚合物在腹腔内停留足够的时间，与一些凝 血因子充分接触后，成为不溶性聚合物，最后再与较大分子蛋白相连接，形成 纤维蛋白胶状基质。这一过程发生于伤后3h内.，此胶状物位于两受损面间， 形成粘连雏形。(2)伤后1 ~ 3 d纤维蛋白基质逐渐被包含有纤维母细胞、巨噬 细胞的血管颗粒组织所取代.此时，粘连表面尚无间皮细胞出现.(3)第4d大 部分纤维蛋白消失，呈现出大量的纤维母细胞及与之相关的胶原纤维，并见不 少巨噬细胞.(4)第5d纤维蛋白网逐渐形成，其间可见明显的胶原纤维束、纤 维母细胞及一些乳突细胞.另外，可见具有内皮细胞的小血管系统.(5)5~10d 纤维母细胞逐渐排列规整，胶原纤维沉积增多.2wk后细胞成分明显减少，且 主要是纤维母细胞.最后，损伤部位被间皮细胞覆盖，形成纤维性粘连。因此， 胶原是粘连的主要成分之一，也是组成瘫痕组织的主要成分，通过抑制胶原再生，可以抑制粘连的产生。上述是术后粘连产生的过程，近年来对术后粘连产生的分子机制研究较多， 一般认为生理状态下，纤维蛋白胶状物的形成和溶解处于动态平衡状态， 凝固的纤维蛋白能在72 96h内被纤溶酶溶解。损伤、缺血、炎症均能使纤维 溶活性降低，这是粘连形成最主要的原因.损伤早期，毛细血管通透性增高， 血液中纤维蛋白、纤维连接蛋白渗出，血小板、淋巴细胞、中性粒细胞游出， 同时组织缺氧、局部异物刺激等激活单核巨噬细胞、肥大细胞、成纤维细胞、 血小板，产生并释放大量生物活性物质如前列腺素、白三烯、氧自由基、止血 和防粘连药物、5羟色胺、组织胺及激肽释放酶，进而促进纤维母细胞的增生、 胶原的合成、纤维蛋白胶状物的沉积.纤维蛋白胶状物是以胶原-纤维连接蛋白 4白多糖复合物的形式存在。纤溶酶可将纤维蛋白和纤维蛋白原降解为纤维 蛋白降解产物(FDP),从而阻碍细胞外基质中纤维胶状物的形成。组织中的纤 溶酶是以酶原形式存在的，纤溶系统的活性有赖于纤维蛋白酶原激活剂(t-PA) 的活性，t-PA可被体内的纤溶酶原激活剂抑制物(PAI)所拮抗.通常认为，损伤 早期(72 h内)，t-PA降低和PAI浓度增高导致大量的基质纤维胶状物不能被分 解而永久性沉积下来，形成粘连.Hellebrekersetal研究认为，损伤后，t-PA含 量在创伤后4h最低，以后逐渐增高，24 72h增高至正常或稍高水平，而局 部纤维蛋白合成量明显增多，因而导致沉积.lwk后大部分纤维蛋白消失，呈 现大量的纤维母细胞及胶原纤维，形成纤维性粘连.另外，影响粘连形成的因 子尚有细胞外基质中的金属蛋白酶，因其可以降解I-III、 VII型胶原及纤维结 合蛋白.基质金属蛋白酶(MMP-1)与基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)作用相 反，二者受多种止血和防粘连药物及激素的调节，与创伤愈合结局关系密切。 故此，现有技术常用的减少粘连的方法有两种l)直接灌注各种物质， 减少或抑制纤维结締组织的形成。如注射链激酶。但全身给药缺乏有效的药 物载体不能达到粘连部位、腹膜的快速吸收限制了药物的半衰期，疗效也不显著；2)使用隔离剂，在创伤组织之间提供机械屏障，但隔离剂在体内无法生 物降解、存留时间短以及缺乏安全性等方面的原因，尚未获得临床的普遍认可。 目前防止术后粘连国际上采用较多的是短期屏障法，即术后在容易发生粘连的 部位植入隔离材料。到目前为止，已经尝试过的多种防粘连材料，大体可划分为三代。第一代材料是人体不可降解的机械屏障材料，如金属片、丝绸、橡胶片、聚四氟乙烯 等；第二代材料是人体难以吸收的屏障材料，如矿物油、右旋糖配、曱壳素等； 第三代材料是人体易于吸收的生物材料，如透明质酸、几丁糖、聚乳酸等。其 中，第一、二代材料因存在一些不能降解吸收、对组织有刺激、易引起感染等 缺陷逐渐:帔市场淘汰。第三代材料可生物降解吸收材料已得到医疗市场的认可，在临床上得到了 广泛应用，可生物降解吸收材料在国内己有产品上市，其中有防粘连膜、防粘连液体、 防粘连凝胶等，对防止术后粘连起到了一定的效果。但防粘连液体流动性强， 不能很好的起到物理屏障的作用，体内可随体位及《1流而使创面部位浓度下 降，削弱了抗粘连的效果。而防粘膜的隔离作用更佳，近来，用可吸收的物理 隔离体来防止手术创面粘连有良好效果。但目前的防粘膜产品或多或少存在一些纯度和降解速度难以控制等不足之处。目前已有的防粘连材料有以下几种改性壳聚糖、透明质酸、梭曱基纤维素。改性壳聚糖是比较常见的防粘连材料，本具有优良的生物屏障性能和组织 相容性，涂于组织创面，防止术后组织粘连。壳聚糖由于具有生物相容性和组 织可降解性等特点，从理论上讲制成膜后可作为理想的手术后防粘连剂。但目 前在临床上使用的几丁质胶存在纯度不够高，对很多防粘连效果差，，降解速 度难于人为调控，曱壳素的降解还受到人体内溶菌酶水平高低的影响，吸收效 果不可预知。因此应用面窄。过去在预防术后粘连的研究中，仅限于腹腔手术 预防粘连性肠梗阻。更因为产生了眼科不良反应，出现群体性事件，正被SFDA 紧急叫停。透明质酸基本原理是基于透明质酸和交联的透明质酸分子良好的生物相 容性、物理(流变学)特性和独特的生物作用。但是，天然的透明质酸由于在 植入部位存留时间较短，其预防粘连作用不能达到理想的效果。交联的透明质 酸具有良好的生物相容性，且在组织内的存留时间较长。自此，交联的透明质 酸作为预防和减少术后粘连的有效制剂，其应用引起广泛的重视。但由于透明 质酸^i^各昂贵，造成患者就医成本高，且透明质酸多属动物源，在体内存在免 疫原性问题，而且透明质酸在提取和纯化的过程复杂，要保持高纯度难度很大，而且会有重金属残留，会导致植入后人体中毒。
梭曱基纤维素是纤维素醚的一种，通常所用的是它的钠盐。它具有良好的生物相容性，在体内可完全降解吸收，且降解物无毒、副作用，对腹膜无刺激
性，能减少腹腔术后粘连发生率及减轻粘连。但梭曱基纤维素吸收降解快(4
天)，远少于创伤愈合的时间，通常需要加入增塑剂改性方能应用于临床，但还是没有实现降解速度可控。
目前商业化的产品有美国ETHICON公司开发的INTERCEED纤维隔离
膜，该膜是由氧化再生纤维制成，可在体内28天完全吸收。防粘连效果是单纯使用良好手术技术的1.6 ~ 2.5倍。另如CENZYNE公司开发出SEPRAFILM膜，它主要由与其它添加剂混合性较差的梭甲基纤维素材料制成。但因这两种吸收膜主要材料为纤维素，使膜的降解性能不易通过另加入添加剂来进行改善，成品膜在体内吸收速度恒定，难以适应临床手术中因手术部位不同等条件变化而对膜的降解速率的不同要求。SEPRAFILM膜的强度也不够，难以满足术中缝合之需要，尤其在湿态下可操作性较差。
目前临床上防粘连材料，如石家庄瑞诺生物医学材冲十有限7>司生产的聚乳酸防粘连凝胶和烟台万利医用品有P艮公司生产的"粘停宁，，剂等，使用不方便，对部分手术防粘连效果差；在一些固体膜片防止粘连材料中如北京百利康生化有限公司生产的"百菲米"壳聚糖隔离膜、成都迪康中科生物医学材料有限公司生产的聚乳酸膜等有的降解时间过快，有的易造成酸性积累引发炎症，并且都缺乏与机体的粘附性，不易固定难于操作，产品在技术上都存在一定的缺陷和片面性，应用效果不很理想。
由上述现有技术可知，医用防粘连膜技术还存在以下技术难题需要解决
(1) 实现时间可控。可生产出不同降解时间的防粘连膜，以适应不同创伤部位的要求。例如腹肠手术通常28天能复原，头三天是最易产生粘连的时期，降解时间一般可控制在这个时间段上；但肌腱受伤后，通常要3周后才开始进行功能锻炼，其降解时间必然要求更长。
(2) 自我粘附性能好，粘附性不好，手术粘连膜在应用中受到很大的限制，如腹膜与肠管间、肠管与肠管间，由于肠管处在不断蠕动中，隔离膜容易滑动，有可能造成原本健康无损的部位造成新的创伤。
(3) 拉伸性能好。能适应创面不平的要求。克服不易覆盖凸凹不平的创面，覆盖的范围受膜材大小的影响，覆盖不完全等缺点，解决附着效果不佳的问题，特别是对有明显生理活动的部位(如，蠕动的肠道)。可均匀、快速、全面的4隻盖创面。
(4) 强度满足需要，05 5MPa,在使用过程中保持完整性。
(5) 可在湿态环境下方便的使用。
(6) 可加入止血和防粘连药物，可控释放，加速创伤愈合。有多种止血和防粘连药物能加入防粘连膜。防粘连药物可以是抗生素(抗生素已被证实有防粘连效果)，或其它防粘连药物，如胶原合成酶的抑制剂(如曲尼斯特和毗嗜司特，可以抑制胶原合成酶组胺和前列腺素的释放，抑制胶原再生)、抗凝血药(如双香豆素、肝素钠、水蛭素等)、消炎药(如异丙唤、地塞米+>、氢化可的松、泼尼松龙、布洛芬、羟基保泰松等)、钩通道阻滞剂(如盐酸地尔硫卓、硝苯地平、盐酸维拉帕米等)、细胞生长抑制剂(如氟尿嘧啶)、水解酶(如玻璃酸酶、链激酶、尿激酶、胃蛋白酶、tPA)、氧化还原剂(如亚曱蓝)等等。止血药物如止血因子(可使材料同时具备止血功能)、中药提取物(如黄连素)等。此外，要达到有计划的控释，在早期急性炎症期，所加入的止血及防粘连药物浓度应当更高，而在慢性炎症期，所加入的止血及防粘连药物浓度相对4交低。
生物打印技术是近年来出现的新技术。生物打印能按预定计划精确定位，这和打印技术的特点是一致的。生物打印与一^:打印的不同仅在于其墨水和接受打印的纸张不一样。生物打印的纸片是在体内可降解的生物纸片；生物打印的"生物墨水"是特制的细胞溶液或有生物活性的止血和防粘连药物溶液。生物打印技术是将这种特制溶液喷射到可生物降解的生物纸片上。打印后再将纸片按一定顺序的堆叠。由于使用了打印技术，可以将细胞或/和止血和防粘连药物("生物墨水")精确的结合到预定部位；而按特定的堆叠方式的生物纸片则会形成三维结构。理论上如果所用的生物墨水是细胞溶液，则形成三维的组织结构和器官，最后生物纸片降解，细胞保留下来，形成立体结构，例如，活的三维组织、血管和器官。但是生物打印技术仍处于基础研究的阶段，还没有出现直接利用细胞通过生物打印技术制备相关生物产品，也没有见到将生物打印技术应用于制备医用防粘连膜方面的相关报道。发明内容本发明的目的在于克服现有防粘连膜产品的缺陷，提供一种粘附性能好，生物相容性好、无毒性、无刺激性、可完全降解吸收、复合有可控释放的止血或/和防粘连药物、降解时间速度可控，价格低廉，制备工艺简单、纳米级的医用防粘连膜。
本发明的另一目的是提供上述防粘连膜的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现上述目的
提供一种医用防粘连膜，包括纳米支架和附着于其上的水溶胶，所述水溶胶内包覆有一种或几种止血或/和防粘连药物。所述止血/防粘连药物通过生物打印技术与电纺丝结合，电纺丝同时起到纳米纤维可控释体系的作用。
所述纳米支架是通过静电纺丝技术制备的，支架材料为以下一种或两种高
分子材料聚乳酸、聚已内酯、聚乙交酯、聚氨酯、聚乙二醇、聚对苯二曱酸乙二酯、聚曱基丙烯酸曱酯、聚羟基丁酸戊酸酯、聚羟基丁酸己酸酯、聚磷酸酯、聚氨基曱酸酣、聚L-乳酸、聚酯酰胺、聚乙烯醇、聚丙交酯、聚氧乙烷、聚对二恶酮、丙交酯、乙交酯、丁内酯、戊内酯、己内酯、环氧乙烷、环氧丙烷、聚氨酯类、聚碳酸酯、胶原蛋白、明胶、壳聚糖、改性壳聚糖、淀粉、纤维素、改性纤维素、明胶、纤维蛋白、丝蛋白、弹力蛋白拟态的肽聚合物、海藻酸、硫酸软骨素，肝素，琼脂，葡聚糖、褐藻酸。将上述材料溶于一定的溶剂，形成电纺液，就可以通过静电纺丝技术得到纳米支架。这些溶剂可以为曱酸、乙酸、乙醇、丙酮、二曱基曱酰胺、二曱基乙酰胺、四氢呋喃、二曱基亚砜、六氟异丙醇、三氟乙醇、二氯曱烷、三氯曱烷、曱醇、乙醇、氯仿、二噁烷、三氟乙烷、三氟乙酸、水或它们任意比例的混合物。上述的高分子材料和溶剂用于静电纺丝的相关技术，例如材料与溶剂的重量比例等参照现有技术。优选采用疏水性聚合物，例如疏水性聚氨酯、聚碳酸酯、聚乳酸、聚已内酯、聚乙交酯或聚对苯二曱酸乙二酯等等。因为疏水性材料有利于阻隔纤维蛋白等物质接触交接，防止细胞进入，从而防止粘连产生。
本发明可通过高分子材料的原材料和分子量不同来调节产品在人体内的降解时间，采用上述不同高分子材料的比例，可据不同创伤部位的要求调整降解时间。
用上面提到的一种或两种以上混合材料通过静电纺丝技术，可以按照具体需要做出合适孔径和直径的纳米材料。此项工艺在本发明制备方法一节有详细叙述，操作简单，所得到的纤维是纳米级的，比传统的方法得到的无纺布直径小几个数量级，其直径分布是几个纳米到几个微米，并可通过工艺参数调整得到不同直径，做到和人体真皮网状结締组织高度相似，形成的网状结构的孔径大小和其分布也可调整。所述防粘连膜是采用疏水性材料，不利于阻隔纤维蛋
白等物质接触和细胞的迁入，从而达到防粘连的目的；对制备该层材料的静电纺丝参数进行调整，其孔隙孔径在纳米以下，防止粘连产生。因为人体细胞直径平均在10 ~ 20 p M，平均孔径在3 iu M以下，已经可以有效的防止粘连的产生。静电纺纤维得到的孔隙大小分布很大程度上依赖于纤维直径，已知纤维直径减小时，孔径也在同时减小。据已发表的文献，纤维直径在4 10iuM时，孔径/人20 45juM。文献纟艮道，静电纺再生丝素纤维非织造织物的平均孔径可达到2 iu M。
本发明制备的防粘连膜平均孔径在3 iu M或以下，纤维直径在50 ~ 1000nM之间。
所述水溶胶可以是由以下聚合物制成的多糖类聚合物，如淀粉、纤维素、海藻酸、透明质酸或壳聚糖；多肽类聚合物，如胶原、聚L-赖氨酸或聚L-谷胺酸；合成的亲水高分子聚合物，如聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚丙烯酰胺或聚N-聚代丙烯酰胺。上述聚合物制备的水溶胶通过改变温度、酸碱度、经紫外线照射或者加入交联剂(固化液)等方法，可由液态转变为固态。
所述止血和防粘连药物有多种，可以参考现有技术。作为本发明的优选方案，所述防粘连药物可以是抗生素或其它防粘连药物，如胶原合成酶的抑制剂、抗凝血药、消炎药、4丐通道阻滞剂、细胞生长抑制剂、水解酶、氧化还原剂等等，例如胶原合成酶的抑制剂有曲尼斯特和毗嗜司特，可以抑制胶原合成酶组胺和前列腺素的释放，抑制胶原再生，抗凝血药例如双香豆素、肝素钠、水蛭素等，消炎药例如异丙嗪、地塞米松、氢化可的松、泼尼松龙、布洛芬、羟基保泰松等，4丐通道阻滞剂例如盐酸地尔硫卓、硝苯地平、盐酸维拉帕米等，细胞生长抑制剂例如氟尿嘧啶，水解酶例如玻璃酸酶、链激酶、尿激酶、胃蛋白酶、tPA,氧化还原剂例如亚甲蓝等。止血药物如止血因子(可使材料同时具备止血功能)、天然药物的提取物(如黄连素)等。此外，要达到有计划的控释，在早期急性炎症期，所加入的止血及防粘连药物浓度应当更高，而在慢性炎症期，所加入的止血及防粘连药物浓度相对较低。本发明同时提供了上述医用防粘连膜的制备方法，包括以下步骤
(1) 制备电纺溶液、含有止血和/或防粘连药物的水溶胶溶液和交联剂溶
液；
(2) 用所述交联剂溶液接收静电纺丝制得纳米支架；
(3 )用喷墨打印机将含有止血和防粘连药物的水溶胶溶液打印到所述纳米支架上，水溶胶固化后即得。
在本发明中，步骤(2)和(3)可重复一次或者更多次，以得到不同厚度的防粘连膜。所述的纳米支架在生物打印中同时起到生物"纸片"的作用。
所述电纺溶液是将前述支架材料溶于一定的溶剂，形成电纺液；支架材料包括聚乳酸、聚已内酯、聚乙交酯、聚氨酯、聚乙二醇、聚对苯二曱酸乙二酯、聚曱基丙烯酸甲酯、聚羟基丁酸戊酸酯、聚羟基丁酸己酸酯、聚磷酸酯、聚氨基甲酸酣、聚L-乳酸、聚酯酰胺、聚乙烯醇、聚丙交酯、聚氧乙烷、聚对二恶酮、丙交酯、乙交酯、丁内酯、戊内酯、己内酯、环氧乙烷、环氧丙烷、聚氨酯类、聚碳酸酯、胶原蛋白、明胶、壳聚糖、改性壳聚糖、淀粉、纤维素、改性纤维素、明胶、纤维蛋白、丝蛋白、弹力蛋白拟态的肽聚合物、海藻酸、硫酸软骨素，肝素，琼脂，葡聚糖、褐藻酸的一种或两种以上混合溶液；
溶剂为曱酸、乙酸、乙醇、丙酮、二曱基曱酰胺、二曱基乙酰胺、四氩吹喃、二曱基亚砜、六氟异丙醇、三氟乙醇、二氯曱烷、三氯曱烷、曱醇、乙醇、氯仿、二噁烷、三氟乙烷、三氟乙酸或水的任意一种或者两种以上任意比例的混合物。上述的高分子材料和溶剂用于静电纺丝的相关技术，例如材料与溶剂的重量比例等参照现有技术。
步骤(1)所述含有止血和防粘连药物的水溶胶溶液是含有止血和防粘连药物的水溶胶緩冲液；所述止血和防粘连药物所占质量百分比总数不高于30%。所述水溶胶緩冲溶液的优选方案是藻酸盐或藻酸盐与其它物质的混合溶液，交联剂溶液为氯化钙溶液；或所述水溶胶緩沖溶液为纤维蛋白原溶液，交联剂溶液为凝血酶溶液；或所述水溶胶緩冲溶液为透明质酸-友酸氢钠溶液，交联剂溶液为酰肼或碳化二亚胺；或所述水溶胶緩冲溶液为胶原-聚阴离子溶液，交联剂为碳化二亚胺。
步骤(2)所述静电纺丝的优选参数为注射泵推进速度为0.3~0.8ml/h，纺丝针头为10、 12、 14、 16、 18或20号针头，施加电压为15—25KV， 接收喷丝的细胞培养皿中装有交联剂溶液，生物打印的纸片为电纺制得的纳米支
恕木。
所述喷墨打印机优选改装的惠普550C喷墨打印机，改装方法参考美国专利US 7051654。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果
通过静电纺丝技术，可以按照设计做出合适孔径和直径的纳米材料。此项工艺通过长期大量的实验总结得到，但实际操作简单，所得到的纤维是纳米级的，比传统的方法得到的无纺布直径小几个数量级，膜片具有孔隙率高、比表面积大、纤维精细度与均一性高、长径比大等优点，利于体内营养物质交换，避免积血和积液现象，具有显著的防粘连效果。才几械特性能满足适应症对抗拉伸强度及柔韧性的要求。
通过高分子材料的原材料和分子量不同来调节产品在人体内的降解时间，采用上述不同高分子材料的比例，可据不同创伤部位的要求调整降解时间。
本发明采用疏水性材料，能防粘连，能起着很好地隔离作用。
能够在新生组织生成后被完全吸收的，无毒性、不产生免疫排斥反应，并有良好的生物相容性等。
通过生物打印技术，电纺丝与止血和/或防粘连药物混合；将电纺丝同时作为可控释体系；通过生物打印技术，可有效控制药物的分布空间和浓度，比如在在防粘连膜外层用更高的止血和防粘连药物，以防止急性炎症感染，而在防粘连膜内层采用更低浓度的药物，防止慢性炎症。
材料来源充分，成本较低，贮存运输简单；制备方法工艺步骤简化，生产时间短，能有效避免加工过程中产品受到污染，产品质量易于控制，产品标准容易实现，产品可实现低成本、高效率的产业化生产；临床应用简单。
具体实施例方式
以下通过具体的实施例进一步说明本发明的技术方案。实施例1
制备防粘连膜
(1)制备电纺溶液、含有止血因子的水溶月交溶液和交耳关剂溶液选择疏水性的L-聚乳酸和e-己内酯，两者比值为50: 50,作为共聚高分子材料，数均分子量是260000，溶于质量百分比为85%的六氟异丙醇制备得到电纺;容液。
交耳关剂溶液选用0.1M氯化4丐溶液。
含有止血因子的水溶胶溶液采用止血因子藻酸盐溶液，所述细胞因子藻酸
盐溶液中止血因子的质量百分比浓度为10ppm。
将适量配置好的0.1M氯化钓溶液》文入直径150mm的细胞培养皿中，置于静电纺丝装置及打印机共用的平板接收器上。将惠普550C喷墨打印机按照现有专利报道进行改装，参照美国专利US 7051654公开的方法，固定在电纺丝装置箱内电纺针头正下方，用作止血因子定位打印；将配好的细胞因子藻酸盐溶液装入喷墨打印墨盒中；本实施例采用的墨盒型号为HP51626A。(2)用所述交联剂溶液接收静电纺丝制得纳米仿生支架
将步骤(1)制得的电纺溶液加入静电纺装置的注射器中，调节微量注射泵的速率为5毫升/小时，调节高压发生器的电压为30KV，调节接收装置的接收距离为20厘米，用并将纤维接收为膜状结构。静电纺丝20分钟，关闭静电纺丝。
(3 )用喷墨打印机将含有止血因子的水溶胶溶液打印到所述纳米仿生支架上，水溶胶固化后即得。
纺丝和打印重复5次，制得防粘连膜厚度约0.2 mm 。此处通过静电纺制备得到纤维直径平均300nm。
2、蒸馏水漂洗5遍，经冻干后真空包装，经25kGy钴~60灭菌后负20揚_氏度低温保存。实施例2
制备防粘连膜
1、制备电纺溶液、含有药物和止血因子的水溶胶溶液和交联剂溶液(1)选择疏水性的聚已内酯，溶于氯仿/曱醇混合溶剂制备得到电纺液，氯仿和曱醇比例为1: 1,聚已内酯与溶剂的用量质量比为15: 85。交联剂溶液选用0.1M氯化钓溶液。
含有药物和止血因子的水溶胶溶液采用止血因子和头孢曲松钠藻酸盐溶液，所述藻酸盐溶液中止血因子的质量百分比浓度为10ppm,所述头孢曲+>钠藻酸盐溶液中头孢曲松钠的质量百分比浓度为3%。
将适量配置好的0.1M氯化钩溶液》欠入直径150mm的细胞培养皿中，置于
13静电纺丝装置及打印机共用的平板接收器上。将惠普550C喷墨打印机按照现有专利报道进行改装，参照美国专利US 7051654公开的方法，固定在电纺丝装置箱内电纺针头正下方，用作止血因子和抗生素的定位打印；将配好的细胞因子藻酸盐溶液装入喷墨打印墨盒中；本实施例采用的墨盒型号为HP51626A。(2)用所述交联剂溶液接收静电纺丝制得纳米仿生支架
将上述电纺溶液加入静电纺装置的注射器中，调节微量注射泵的速率为0.8毫升/小时，调节高压发生器的电压为12 KV，调节接收装置的接收距离为15厘米，用并将纤维接收为膜状结构。静电纺丝20分钟，关闭静电纺丝。(3 )用喷墨打印机将含有细胞因子和头孢曲松钠的水溶胶溶液打印到所述纳米仿生支架上，水溶胶固化后即得。
纺丝和打印重复5次，制得防粘连层厚度约0.2 mm 。
此处通过静电纺制备得到纤维直径平均600nm。
2、蒸馏水漂洗5遍，经冻干后真空包装，经25kGy钴^0灭菌后负20摄氏度低温保存。实施例3
用实施例2制得的防粘连膜进行兔动物实验
家兔15只，全身麻醉，沿中线剖开兔子腹部，取出子宫角，破坏子宫角部位的浆膜，产生出血，形成创面。分组处理，防粘连膜敷用5只作为实验组，5只采用成都迪康防粘连膜作为阳性对照组，5只作为空白对照组，然后缝合腹壁。14天后取材观察。发现实验组的兔子腹腔内都没有产生粘连，防粘连膜降解明显，优良率为100%,阳性对照组两只伤口延期愈合，但未影响到最终结果，优良率为60%,而空白对照组腹腔内产生严重的广泛粘连，子宫角不仅产生与自身的粘连，粘连带范围广且粘连强度高。
权利要求
1.一种医用防粘连膜，其特征在于包括纳米支架和附着于其上的水溶胶，所述水溶胶内包覆有一种或几种止血或/和防粘连药物。
2. 如权利要求1所述的防粘连膜，其特征在于所述纳米支架是采用以下一 种或两种以上的支架材料通过静电纺丝技术制备得到聚乳酸、聚已内酯、聚 乙交酯、聚氨酯、聚乙二醇、聚对苯二曱酸乙二酯、聚曱基丙烯酸曱酯、聚 羟基丁酸戊酸酯、聚羟基丁酸己酸酯、聚磷酸酯、聚氨基曱酸酣、聚L-乳酸、 聚酯酰胺、聚乙烯醇、聚丙交酯、聚氧乙烷、聚对二恶酮、丙交酯、乙交酯、 丁内酯、戊内酯、己内酯、环氧乙烷、环氧丙烷、聚氨酯类、聚碳酸酯、胶原 蛋白、明胶、壳聚糖、改性壳聚糖、淀粉、纤维素、改性纤维素、明胶、纤维 蛋白、丝蛋白、弹力蛋白拟态的肽聚合物、海藻酸、硫酸软骨素、肝素、琼脂、 葡聚糖或褐藻酸。
3. 如权利要求1所述的防粘连膜，其特征在于所述纳米支架的孔径不超过 3 juM。
4. 如权利要求1所述的防粘连膜，其特征在于所述水溶胶是采用以下一种 或两种以上聚合物制备得到多糖类聚合物、多肽类聚合物或亲水性高分子聚 合物。
5. 如权利要求1所述的防粘连膜，其特征在于所述止血药物是止血因子或 天然药物的提取物；所述防粘连药物为抗生素、胶原合成酶的抑制剂、抗凝血 药、钓通道阻滞剂、细胞生长抑制剂、水解酶或氧化还原剂中的任意一种或两 种以上的混合物。
6. —种权利要求1所述防粘连膜的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1) 制备电纺溶液、含有止血和/或防粘连药物的水溶"交溶液和交耳关剂溶液；(2) 用所述交联剂溶液接收静电纺丝制得纳米支架；(3 )用喷墨打印机将含有止血和防粘连药物的水溶胶溶液打印到所述纳 米支架上，水溶胶固化后即得。
7. 如权利要求6所述的制备方法，其特征在于步骤(2)和(3 )重复若干次。
8. 如权利要求7所述的制备方法，其特征在于所述制备电纺溶液是将支架材料溶于溶剂制备得到，所述溶剂选自曱酸、乙酸、乙醇、丙酮、二甲基曱酰 胺、二曱基乙酰胺、四氢呋喃、二曱基亚砜、六氟异丙醇、三氟乙醇、二氯曱 烷、三氯曱烷、甲醇、乙醇、氯仿、二噁烷、三氟乙烷、三氟乙酸或水的任意 一种或者两种以上<壬意比例的混合物。
9.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于步骤(2)所述静电纺丝的 参数为注射泵推进速度为0.3~10ml/h,纺丝针头为10、 12、 14、 16、 18或 20号4十头，施加电压为15~25KV。
全文摘要
本发明提供了一种医用防粘连膜及其制备方法。所述防粘连膜包括纳米支架和附着于其上的水溶胶，所述水溶胶内包覆有一种或几种止血或/和防粘连药物。本发明还提供上述防粘连膜的制备方法，步骤为制备电纺溶液、含有止血和/或防粘连药物的水溶胶溶液和交联剂溶液；用所述交联剂溶液接收静电纺丝制得纳米支架；用喷墨打印机将含有止血和防粘连药物的水溶胶溶液打印到所述纳米支架上，水溶胶固化后即得。本发明的防粘连膜粘附性能好，同时生物相容性好、无毒性、无刺激性、可完全降解吸收、复合有可控释放的止血或/和防粘连药物、降解时间速度可控，克服了已有技术的缺陷。
文档编号A61L31/10GK101623517SQ200910041780
公开日2010年1月13日 申请日期2009年8月11日 优先权日2009年8月11日
发明者弢 徐, 袁玉宇 申请人:广州迈普再生医学科技有限公司