专利名称：：一种系统溶剂法制备的细辛挥发油及其用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及细辛挥发油及其制备方法和用途，属药物领域。
背景技术：
：马兜铃科植物北细辛AsarumheterotropoidesFr.Schmidtvat.mandshuricum(Maxim.)Kitag.的干燥全草。细辛为常用中药，具有解热抗炎，镇痛，镇静等药理活性，主要药效成分为挥发油。如三种细辛属植物挥发油的镇痛消炎作用研究，中华中医药杂志(原中国医药学报)，2006年第21巻第5期；细辛醚的研究进展，中医药学刊，2006年7月，第24巻第7期，报道了细辛醚对神经系统、心血管系统、呼吸系统、消化系统等多种活性。针对细辛的提取工艺，报道针对挥发油的提取较多，如正交试验优化细辛挥发油提取及包合工艺的研究，中药材第29巻第5期，2006年5月，报道了细辛挥发油的提取工艺取细辛80.0g，置挥发油提取器中，加入规定倍量水，浸泡一定时间，按《中国药典》2000年版一部，附录XD挥发油测定法(甲法)水蒸汽蒸馏规定时间，读取挥发油量。优选细辛提取挥发油的最佳工艺，发现浸泡时间、加水量对挥发油提取量无明显影响，确定最佳挥发油提取条件为浸泡时间lh,加水量8倍，提取时间3h。此外，细辛挥发油的提取方法还有1、水蒸气蒸馏法将辽细辛170g装入挥发油提取器中，加水蒸馏6h，收集挥发油，称重，萃取率为1.62%;2、微波萃取法将辽细辛样品准确称量30g，装入烧瓶中，加入IOOmL石油醚，在辐射时间200s，微波功率720W,溶剂用量300mL的条件下进行微波萃取.用30mL石油醚洗涤烧瓶的残渣，将滤液集中于一锥形瓶中.经减压蒸馏回收石油醚，用无水Na干燥样品，24h后称重，萃取率为5.46;3、超临界C02萃取法准确称取辽细辛170g，装入1L的萃取罐内，超临界C02萃取萃取压力16MPa，萃取温度32。C，流量20kg/h;解析釜I压力7MPa8MPa，温度6(TC;解析釜II压力4MPa6MPa，35°C，萃取时间为80min，每20min收集提取物称量，萃取率为3.78%，储存于冰箱用GC一MS分析(不同方法提取的辽细辛挥发油指纹图谱分析，测试技术学报，2004年第18巻第3期；超临界C02萃取苕叶细辛挥发油，精细化工，2003年11月，第20巻第11期)。细辛有毒，现代毒理研究表明，细辛挥发油中黄樟醚的毒性较大，具有麻痹动物呼吸中枢的作用，也是致癌物质。这一结果与临床中细辛粉末的毒性大于煎剂的毒性相印证随着煎煮时间的延长，强挥发性的黄樟醚将逐渐减少。有学者建议采用长时间煎煮的方法降低细辛的毒性(李述文，细辛治疗坐骨神经痛，中医杂志，1993，34(7):391)，近年来还出现了采用精馏法去除黄樟醚的研究[蔡国琴，周俊，徐运；除去细辛挥发油中有害物质黄樟醚方法的研究，中成药，1997，19(7):37.]，该文献报道了通过分段蒸馏，制备的细辛挥发油中甲基丁香酚与黄樟醚的含量为42.34%和7.74%;该实验表明有毒物质黄樟醚的挥发性大于甲基丁香酚，通过本实验，可以设计出用蒸馏法弃出细辛蒸馏液的最先流份来提取细辛的挥发性成分的方法，可做到使含细辛挥发油的制剂安全有效。但采用该方法制备的挥发油中黄樟醚的含量仍然较高；有文献报道采用高效液相色谱技术对北细辛的正己烷提取物中强毒性成分黄樟醚进行了目标去除，并采用霍恩氏法和二甲苯所致小鼠耳壳肿胀试验对去除前后的提取物进行急性毒性及抗炎药理活性研究(程孟春，等，一种利用制备液相色谱特异性去除北细辛毒性成分的新方法，世界科学技术-中医药现代现基础研究，2006年第八巻第二期)，利用长时间蒸煮虽可有效去除黄樟醚，但同时甲基丁香酚等细辛的主要药效成分也会被除掉了；用液相色谱技术去除黄樟醚的成本较高且不能大规模制备，在生产应用中不能广泛运用。目前文献中报道的均是将细辛挥发油直接提取作为药用部分，但是由于挥发油中的成分复杂，除了有效成分外，还有毒性成分，如黄樟醚，且有效成分中，各种成分发挥的药效各异，目前尚没有有效将细辛挥发油进一步分离后进行药效监控的相关文献的报道。
发明内容本发明的技术方案是提供了一种细辛挥发油，本发明的另一技术方案是提供了该挥发油的制备方法。本发明提供了细辛挥发油，它是取细辛提取挥发油粗品，将挥发油溶于乙醚中，依次用10%盐酸，5%碳酸氢钠，1%_2%氢氧化钠和30%-40%亚硫酸氢钠逐级萃取，分别得到碱性成分、强酸性成分、弱酸性成分、醛、酮类成分和中性油部分，将除中性油部分外的4个组分混合，所得组分用棕色容量瓶密封，低温保存。所述的低温保存为于-l(TC保存。进一步地，所述的逐级萃取步骤为a、挥发油乙醚液用10%盐酸萃取，得酸水层，碱化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到碱性成分；b、乙醚层水洗后用5%碳酸氢钠萃取，得碱水层，酸化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到强酸性成分；C、乙醚层用1%_2%氢氧化钠萃取，得碱水层，酸化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到弱酸性成分；d、乙醚层用30%-40%亚硫酸氢钠萃取，出现的沉淀或水层酸化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到醛、酮类成分；剩余的部分蒸去乙醚，得到中性油部分。本发明细辛挥发油含有甲基丁香酚的重量百分含量大于30%;黄樟醚的重量百分含量不高于3.5%。本发明还提供了一种制备权利要求l所述的细辛挥发油的方法，包括如下步骤a、取细辛提取挥发油粗品；b、用10%盐酸，5%碳酸氢钠，1%_2%氢氧化钠和30%-40%亚硫酸氢钠逐级萃取，分别得到碱性成分、强酸性成分、弱酸性成分、醛、酮类成分和中性油部分，将除中性油部分外的4个组分混合，所得组分用棕色容量瓶密封，低温保存。所述的低温保存为于_10°C保存。进一步优选地，b步骤所述的逐级萃取步骤为a、挥发油乙醚液用10%盐酸萃取，得酸水层，碱化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到碱性成分；b、乙醚层水洗后用5%碳酸氢钠萃取，得碱水层，酸化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到强酸性成分；c、乙醚层用1%-2%氢氧化钠萃取，得碱水层，酸化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到弱酸性成分；d、乙醚层用30%_40%亚硫酸氢钠萃取，出现的沉淀或水层酸化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到醛、酮类成分；剩余的部分蒸去乙醚，得到中性油部分。本发明还提供了细辛挥发油在制备镇痛、抗炎的药物中的用途。本发明还提供了细辛挥发油在制备免疫调节的药物中的用途。本发明还提供了细辛挥发油在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。本发明通过系统溶剂提取分离的方法可以在去除绝大部分黄樟醚的同时保留有效成分，临床使用更安全，通过将挥发油中不同组分分离后配伍，药效更明确、稳定，可控性强；且具有成本低，仪器简单，操作容易，能在生产中推广，为临床提供了一种新的选择。以下通过具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变和变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。具体实施例方式实施例l本发明细辛挥发油的制备1挥发油提取将细辛属植物样品全草粉碎，过40目筛，按照中国药典中挥发油提取方法提取挥发油，充分静置后分离，收集油水混合物，萃取得淡黄色油状液体。用棕色瓶密封，于-10'C冰箱保存。2组分分离将挥发油溶于乙醚中，挥发油乙醚液用10%盐酸萃取，得酸水层，碱化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到碱性成分；乙醚层水洗后用5%碳酸氢钠萃取，得碱水层，酸化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到强酸性成分；乙醚层用1%-2%氢氧化钠萃取，得碱水层，酸化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到弱酸性成分；乙醚层用30%-40%亚硫酸氢钠萃取，将出现的沉淀或水层酸化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到醛、酮类成分；剩余的部分蒸去乙醚，得到中性油部分。所得组分用棕色容量瓶密封，于-10。C冰箱保存，用时以5%吐温-80配成所需浓度。上述碱化和酸化的方法可按教科书或本领域公知的方法操作。3检测石英毛细管柱HP-5MS,50mX0.25mmXO.25um;程序升温60°C以8°C/min速度升至12(TC,再以10°C/min速度升至280。C;载气He;柱流量:0.9ml/min;进样量1ul;进样口温度25(TC;接口温度23(TC;柱压80kPa;分流比:50:1。采用黄樟醚及甲基丁香酚两种标品做对照，确定两种成分的峰位。结果显示黄樟醚在中性油部分，甲基丁香酚在弱酸性成分中。实施例2本发明挥发油中甲基丁香酚、黄樟醚的含量测定采用气相色谱归一化法测定实施例l中甲基丁香酚、黄樟醚在挥发油中的相对含量，参考文献王栋，等，北细辛不同生长期甲基丁香酚和黄樟醚气相色谱法定量分析，色谱，1997年1月第15巻第1期；所述的方法进行测定，结果实施例1制备的挥发油中含有甲基丁香酚的重量百分含量为35.7%;黄樟醚的重量百分含量为3.1%。以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。试验例l辽细辛挥发油中不同组分镇痛作用研究实验材料71药材来源与鉴定按实施例1的方法制备的挥发油。2动物昆明小鼠，18-22g，由成都实验动物饲养中心提供。3药品与试剂吐温-80;硫酸吗啡，北京萌蒂制药有限公司，每片30mg，批号070423U4仪器电子分析天平；智能热板仪方法1热板法取雌性小鼠，1822g，于实验前l天放入热板剌痛仪中，记录从放入到出现舔后足的时间(即痛阈值)，取痛阈值为530s的合格小鼠60只，按痛阈值随机分为3组，每组20只。实验前禁食16h，不禁水。给药前再测l次痛阈值，作为正常痛阈值。阳性对照组皮下注射盐酸吗啡10mg/kg;阴性对照组灌胃同体积5%吐温-80(0.2ml/20g体重)；实验组灌胃O.15ml/kg。每隔30分钟测定一次反应时间，以60s为限，如痛阈超过60s，按60s计。室温15'C。2醋酸扭体法取雌性小鼠60只体重1822g，随机分为3组(给药剂量同上)。灌胃给药30min后腹腔注射0.6G/o醋酸0.2ml，观察注射后至开始出现扭体的时间，记录注射后20min内每只小鼠的扭体次数。表l热板法实验数据(系统溶剂)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表2细辛挥发油对醋酸所致疼痛产生扭体的次数<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>结论用系统溶剂法制备的细辛挥发油具有显著的镇痛效果，但起效时间较吗啡晚。试验例2细辛挥发油消炎的药效试验实验材料弗氏完全佐剂取羊毛脂加热溶解后取30rnL置于研钵中,稍冷却后,边研磨边加液体石腊至50ml液体石腊加完，高压消毒，然后按5mg/ml加入卡介苗。实验仪器足趾容积测量仪动物模型大鼠佐剂性关节炎原理大鼠佐剂关节炎有人的RA有许多相似性，大鼠脚掌内注射弗氏完全佐剂致炎后，35天炎症达到高峰，约1112天在非注射部位(后足、前足、耳、鼻、尾巴)出现继发炎症病变，并能下调IL-1、IL-6、TNFa;上调IL-2等。实验方法1、预防性试验取50只健康雄性Wistar大鼠，^g^200250g。随机分为5组，阴性对照组灌胃2ml5。/。吐温-80;挥发油(实施例l制备)低、中、高剂量组分别灌胃0.15，0.30，0.60ml/kg;阳性对照组灌胃阿司匹林157mg/kg。给药前测量足跖体积并划线，在注射弗氏佐剂前3天开始给药；第3天给药同时按每只0.1ml将弗氏佐剂注于各组大鼠左后足垫内，弗氏佐剂注射一次。在致炎后18小时测一次足跖体积，后两天每天测量一次，实验数据用t检验处理。2、治疗性试验取50只健康雄性Wistar大鼠，#j200~250g。随机分为5组，阴性对照组灌胃2ml5%吐温-80;挥发油小、中、大剂量组分别灌胃0.15,0.30,0.60ml/kg;阳性对照组灌胃阿司匹林157mg/kg。试验第一日，测正常两后足跖体积，按每只0.1ml将弗氏佐剂注于各组大鼠左后足垫内，弗氏佐剂注射一次，再持续给药一周，每天测量足跖体积，并计算实验前后足体积差及足体积抑制百分率，实验数据用t检验处理。3、继发病变试验取50只健康雄性Wistar大鼠，#200~250g。随机分为5组，阴性对照组灌胃2ml5。/。吐温-80;挥发油小、中、大剂量组分别灌胃0.15,0.30，0.60ml/kg;阳，对照组灌胃阿司匹林」57mg/kg。试验第一日，测正常两后足跖体积，按每只0.1ml将弗氏佐剂注于各组大鼠左后足垫内，弗氏佐剂注射一次，待出现显著继发性炎症(一般为第ll日)，再持续给药2周，每天测量足跖体积，观察全身症状，并计算实验前后足体积差及足体积抑制百分率，实验数据用t检验处理。实验结束后处死动物取血清检测IL-1、TNF-a。根据试剂盒说明书用放免法检测IL-1、TNF-a。表1细辛挥发油对佐剂性关节炎大鼠足肿胀的抑制作用组别剂量实验前足体积/ml实验后足体积/ml足体积差/ml阴性对照—0,62±0.111,34±0.140.72±0.07阳性对照157mgkg—10.58±0.131.01±0.100,44±0.04*细辛挥发油除黄樟醚组分(预防)0.15mlkg—10.63±0.111.21±0.130.57±0.05*0.3mlkg'0.59±0.121.02±0.120.42±0.04*0.6ml*kg—'0.60±0.141.13±0.100.52±0.05*阴性对照_0.61±0.131.30±0.110.69±0.07阳性对照157mgkg—'0.57±0.141.03±0.110.46±0,05细辛挥发油除黄樟醚组分(治疗)0.15mlkg—10.64±0.111.13±0.130.50±0.030.3mlkg—10.59±0.130.99±0.140.41±0.050.6mlkg—10.66±0.101,11±0.120.46±0.05阴性对照_0.66±0.121.46±0.110.80±0.08阳性对照157mgkg—10.65±0.111.13±0.110.49±0.04细辛挥发油除黄樟醚组分(继发病变)0.15mlkg—10.56±0.141.08±0.150.52±0.040.3mlkg—10.66±0.111.20±0.120.55±0.070.6mlkg—10.61±0.121.18±0.110.57±0.05表2细辛挥发油对细胞因子的影响组别剂量IL-1(ng/ml)TNFa(ng/ml)阴性对照_1.85±0.26.55±0.29阳性对照157mgkg—10.63±0.072.36±0.18细辛挥发油除黄樟醚组分(预防)0.15mlkg—10.79±0.112.78±0.160.3mlkg-'0.75±0.092.64±0.130.6mlkg—10.77±0.122.90±0.09阴性对照-2.16±0.156.87±0.26阳性对照157mg*kg—10.81±0.122.65±0.19细辛挥发油除黄樟醚组分(治疗)0.15mlkg—10.73±0.152.54±0.130.3mlkg10.76±0.082.33±0.120.6mlkg—'0.69±0.072.57±0.15阴性对照-2.33±0.137.03±0.31阳性对照157mg*kg—10.89±0.112.77±0.14细辛挥发油除黄樟醚组分(继发病变)0.15mlkg—10.90±0.112.26±0.160.3mlkg—10.83±0.102.64±0.100.6mlkg—10.85±0.062.55±0.1510结论从表1可知，在预防、继发病变关节炎的实验中，系统溶剂法提取的细辛挥发油混合物效果与阳性对照组接近，中剂量组的效果最好，大剂量组的效果反而有所下降；关节治疗实验的抑制效果要好于阳性对照组，中剂量组的药效最为显著。对血清的检测发现，挥发油能明显下调血清中IL-l和TNFa。从表2可知，在治疗和继发病变实验中，挥发油的效果比阳性对照组好，而在预防实验中效果接近阳性对照组。上述试验证明，本发明细辛挥发油具有明显镇痛、抗炎、免疫调节的作用，用于治疗类风湿性关节炎，药效明确，且以中剂量的药效最佳，为临床提供了一种新的选择。权利要求1、细辛挥发油，其特征在于它是由下述方法制备取细辛提取挥发油粗品，将挥发油溶于乙醚中，依次用10％盐酸，5％碳酸氢钠，1％-2％氢氧化钠和30％-40％亚硫酸氢钠逐级萃取，分别得到碱性成分、强酸性成分、弱酸性成分、醛、酮类成分和中性油部分，将除中性油部分外的4个组分混合，低温保存，得本发明细辛挥发油。2、根据权利要求l所述的细辛挥发油，其特征在于所述的低温保存为于-l(TC保存。3、根据权利要求l所述的细辛挥发油，其特征在于所述的逐级萃取步骤为a、挥发油乙醚液用10%盐酸萃取，得酸水层，碱化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到碱性成分；b、乙醚层水洗后用5%碳酸氢钠萃取，得碱水层，酸化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到强酸性成分；c、乙醚层用1%_2%氢氧化钠萃取，得碱水层，酸化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到弱酸性成分；d、乙醚层用30%-40%亚硫酸氢钠萃取，出现的沉淀或水层酸化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到醛、酮类成分；剩余的部分蒸去乙醚，得到中性油部分。4、根据权利要求l-3任一一项所述的细辛挥发油，其特征在于本发明细辛挥发油含有甲基丁香酚的重量百分含量大于30%;黄樟醚的重量百分含量不高于3.5%。5、一种制备权利要求l所述的细辛挥发油的方法，包括如下步骤a、取细辛提取挥发油粗品；b、用10%盐酸，5%碳酸氢钠，1%_2%氢氧化钠和30%-40%亚硫酸氢钠逐级萃取，分别得到碱性成分、强酸性成分、弱酸性成分、醛、酮类成分和中性油部分，将除中性油部分外的4个组分混合，所得组分用棕色容量瓶密封，低温保存。6、根据权利要求5所述的细辛挥发油的制备方法，其特征在于b步骤所述的低温保存为于-l(TC保存。7、根据权利要求5所述的细辛挥发油的制备方法，其特征在于所述的逐级萃取步骤为a、挥发油乙醚液用10%盐酸萃取，得酸水层，碱化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到碱性成分；b、乙醚层水洗后用5%碳酸氢钠萃取，得碱水层，酸化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到强酸性成分；c、乙醚层用1%-2%氢氧化钠萃取，得碱水层，酸化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到弱酸性成分；d、乙醚层用30%-40%亚硫酸氢钠萃取，出现的沉淀或水层酸化后用乙醚萃取，蒸出乙醚，得到醛、酮类成分；剩余的部分蒸去乙醚，得到中性油部分。8、权利要求l-4任一一项所述的细辛挥发油在制备镇痛、抗炎的药物中的用途。9、权利要求l-4任一一项所述的细辛挥发油在制备免疫调节的药物中的用途。10、权利要求l-4任一一项所述的细辛挥发油在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。全文摘要本发明提供了一种细辛挥发油，它是由下述方法制备取细辛提取挥发油粗品，将挥发油溶于乙醚中，依次用10％盐酸，5％碳酸氢钠，1％-2％氢氧化钠和30％-40％亚硫酸氢钠逐级萃取，分别得到碱性成分、强酸性成分、弱酸性成分、醛、酮类成分和中性油部分，将除中性油部分外的4个组分混合，低温保存，得本发明细辛挥发油。本发明还提供了该细辛挥发油的用途。本发明通过系统溶剂提取分离的方法可以在去除绝大部分黄樟醚的同时保留有效成分，临床使用更安全，通过将挥发油中不同组分分离后配伍，药效更明确、稳定，可控性强；且具有成本低，仪器简单，操作容易，能在生产中推广，为临床提供了一种新的选择。文档编号A61K36/185GK101530443SQ20091012761公开日2009年9月16日申请日期2009年3月12日优先权日2008年3月12日发明者伟严,许志晖,益郭,蕊黄申请人:四川师范大学