专利名称：一种制备治疗猪蓝耳病等导致呼吸道病的药物的方法
技术领域：
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本发明涉及一种治疗猪蓝耳病等导致呼吸道病的活性物质提取方 法，尤其涉及一种利用鸭脚树叶提取鸭脚树叶碱化合物的方法。本发明 还涉及利用鸭脚树叶提取的鸭脚树叶碱化合物制备治疗猪蓝耳病等导致 呼吸道病的药物的技术及其使用方法，属于天然产物活性成分的分离提 取和应用领域。
背景技术：
本发明所选用的原料为鸭脚树叶，属于夹竹桃科(Apocynaceae)鸡 骨常山属植物，不同地区有不同的名称，分别被称作灯台叶、糖胶树、 买别担、橡皮木、大树理肺散和面条树等。在两广和云南西双版纳地区 傣族作为止咳、退烧药而广泛应用。从民间应用历史和药理研究表明鸭 脚树叶疗效确切，然而，现有技术和药理研究报道的结果停留在植物的 水提取物上，其有效活性成分没有报道，更没有利用鸭脚树叶提取功能 性成分治疗猪蓝耳病等导致猪呼吸道病的相关技术。中国专利"灯台树 提取物及其制备方法和应用"(CN00113130.3),以云南生长的灯台树为 原料，经水煎煮，过滤，溶液浓縮，再用醇浸提而得，存在提取物成分 不清，药材和制剂之间无活性成分的相关性；中国专利"治疗呼吸道相 关疾病的药物及其制备方法和应用"(CN200610010940.4)说明糖胶树叶 对呼吸道相关疾病起治疗作用的主要成分为鸭脚树叶碱，该专利只说明 从鸭脚树叶提取鸭脚树叶碱一种活性成分的方法；"猪蓝耳病的治疗配
方、制作方法及其药液使用方法"(CN200710049720. 4)，说明一组中草 药经组合配伍并作一定的加工后具有治疗猪蓝耳病的功效。以上专利说 明鸭脚树叶含有治疗人呼吸道病的活性成分和中草药具有治疗猪蓝耳病 的功效，并未涉及用鸭脚树叶材料提取成分清晰的治疗猪蓝耳病等导致 呼吸道病的药物的技术。因此，针对现有技术的缺陷，进一步研究鸭脚 树叶中的活性物质及其对猪蓝耳病等导致呼吸道病治疗的效果。大家知道，猪肉是我们吃得最多的肉类食品，如果养猪场的猪得了猪蓝耳病、 气喘病和猪肺疫等导致呼吸道病的疫病，病猪发生咳嗽、喘气为主要特 征的呼吸道症状，如不能及时治疗，则会直接影响猪只生长发育，甚至 引起猪只死亡，进而影响整个生猪市场的供应，从而导致猪肉价格攀升， 影响人们的生活，而且还有可能引发人畜共患的传染病，危害人们身体 健康。
目前，还没有对猪蓝耳病、气喘病和猪肺疫等导致呼吸道病的疫病 特别有效的治疗药物， 一般都是采用喂食水杨酸钠、阿司匹林等抗炎性 药物或氟苯尼考、阿莫西林、金霉素、土霉素等抗菌药物的方法来减轻 病猪的症状，对未发病生猪采用注射疫苗等方式避免感染。所以，市场 非常需要有显著疗效且成分清楚的治疗猪蓝耳病、气喘病和猪肺疫等导 致呼吸道病的药物。
发明内容
本发明的目的就是提供一种具有显著疗效且成分清楚的治疗猪蓝耳 病、气喘病和猪肺疫等导致呼吸道病的药物的制作方法。 为了完成本发明的目的，本发明提供了如下技术方案 一种制备治疗猪蓝耳病等导致呼吸道病的药物的方法，其特征在于 将鸭脚树叶经酸水超声辅助提取，减压浓縮得浸膏，浸膏用0.2-2%盐酸 浸泡，所得酸液用碱水溶液调节PH9 10之间，以有机溶剂萃取，减压浓
縮回收溶剂后，得鸭脚树叶碱化合物。
所述碱水为氨水或NaOH或Na2C03;所述有机溶剂为氯仿或正丁醇或 乙酸乙酯。
所述鸭脚树叶碱加上药学上可接受的载体或辅料。
所述载体或辅料为稀释剂、赋形剂如水；填充剂如淀粉、蔗糖；黏 合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油； 崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活 性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂黏土；润滑剂如滑石粉、硬脂 酸钙和镁、以及和聚乙二醇；还可以在组合物中加入其他辅剂如香味剂、 甜酸剂。所述鸭脚树叶碱加上药学上可接受的载体或辅料，按药物常规制备 方法制成供注射或口服形式。
按每千克猪注射5毫克/次、口服10毫克/次，每天2次。 肌肉注射或静脉注射，按每千克猪注射5毫克/次、饮水或经词料口 服10毫克/次，每天2次。
与现有技术相比，本发明的优益效果在于-
本发明首次发现鸭脚树叶碱(Picpinirie)化合物具有显著的治疗猪 蓝耳病、气喘病和猪肺疫等导致呼吸道病的作用，为鸭脚树叶中的活性 成分，而且含量较高，占鸭脚树叶药材总量的0.2%以上。可用于在制备 治疗猪蓝耳病、气喘病和猪肺疫等导致呼吸道病的药物的质量指标控制。 鸭脚树叶碱(Picpinine)对猪蓝耳病、气喘病和猪肺疫等导致呼吸道病 具有治疗作用。本发明提供了一种药物组合物，含有鸭脚树叶碱为药用 活性成分，加上药学上可接受的载体或辅料制备而成供注射或口服的制 剂。
图l为鸭脚树叶碱化学结构图2为鸭脚树叶酸水提取、氯仿萃取物的HPLC图谱，
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述 实施例l:鸭脚树叶碱的制备和结构确定
本发明的药物活性成分鸭脚树叶碱(图1)是由鸭脚树叶中提取而得 到的，该方法包括如下步骤酸水超声辅助提取3-4次，减压浓縮得浸
膏，浸膏用0.2-2%盐酸浸泡，所得酸液用碱水(氨水/NaOH/Na2C03)溶液 调节pH9 10之间，以有机溶剂(氯仿/正丁醇/乙酸乙酯)萃取，减压浓 縮回收溶剂后，得鸭脚树叶碱化合物。氯仿-甲醇反复重结晶制备得到不 少于鸭脚树叶材料0. 2%的鸭脚树叶碱结晶。经与文献值仔细对照其红外、 紫外和氢谱，并对碳谱的解析，其结构确定为鸭脚树叶碱。鸭脚树叶碱 (Picpinine)为白色结晶性粉末，分子式C2。H22N203，化学结构如图1。 实施例2:治疗猪蓝耳病、气喘病和猪肺疫等导致呼吸道病的注射剂制备
注射剂活性成分鸭脚树叶碱(Picpinine) 20mg、氯化钠10mg，注 射用水100mL。
制备方法将活性成分和氯化钠溶解于适量的注射用水中，1%冰醋 酸调pH4 5，过滤所得溶液，在无菌条件下装入注射剂lte中。
实施例3:治疗猪蓝耳病、气喘病和猪肺疫等导致呼吸道病的口服剂
制备
口服剂活性成分鸭脚树叶碱(Picpinine) 10mg、乳糖180mg、可 溶性淀粉810mg。
制备方法将活性成分鸭脚树叶碱、乳糖和可溶性淀粉按处方剂量 混合，用工业乙醇均匀湿润，把湿润后的混合物过筛并干燥，再过筛， 然后将混合物分装。
实施例4:所制备制剂的HPLC质量控制方法
鸭脚树叶碱(Picrinine， C12H22N203)对照品溶液而的制备，取鸭脚 树叶碱对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并制成每lml含l-500ug的 溶液，溶剂可以是氯仿、乙睛、乙醇、丙酮、水或这些溶剂任意比例的 混合溶液。
色谱条件，用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；流动相可以是氯仿、 乙睛、甲醇、乙醇、丙酮、水等溶剂或它们的混合溶液，并可以用酸、 碱进行调节；检测波长为235nm。
供试品溶液的制备，取鸭脚树叶碱制剂适量，精密称定(口服制剂 0.1-50.0g，注射剂l 100mL)，置锥形瓶中，加氨水试液(2%浓氨水， PH=9)提取2—3次，过滤，滤液用氯仿萃取3—5次，合并萃取液，用 水振摇洗涤至中性，回收溶剂至干，用乙腈定容至刻度，摇匀，过滤， 滤液作为供试品溶液。
测定方法，精密取供试品溶液及对照品溶液，注入高效液相色谱仪 中，测定即得。供试品溶液色谱图见图2。
本发明将鸭脚树叶碱(Picrinine， C12H22N203)作为指示性成分，利
用常规的高效液相法对鸭脚树叶碱制剂进行含量测定，具有操作简便，
专属性好，可准确反应药材及产品的质量，能适应现代化药品生产和用 药安全可靠等优点。实施例5:小鼠急性经口毒性试验
动物来源SPF级KM小鼠，18.0 22.0g，雌雄各半，来源于广东省 医学实验动物中心，许可证号SCXK(粤)2003-0002，粤监证字2008A022。
小白鼠禁食12h后，鸭脚树叶碱制剂以1.0g/kg( bw)剂量，0. 2 mL/1.0g ( bw)经腹腔注射。给药后，连续观察14d，记录中毒表现及死 亡情况，计算LDs。。
给药后小白鼠末见明显的中毒症状，观察期间无死亡。可判定鸭脚 树叶碱制剂小白鼠腹腔注射的LD5。 〉1.0 g/kg ( bw)。属实际安全物质。 实施例6:小鼠蓄积毒性试验
动物来源SPF级KM小鼠，18.5 21.5g，雌雄各半，来源于广东省 医学实验动物中心，许可证号SCXK(粤)2003-0002，粤监证字2008A022。
采用剂量递增法，按体重计算染毒剂量。第1 - 4 d小鼠染毒剂量 为1.0g/kg ，按0. 2 mL /1.0 g( bw)—次腹腔注射，以后每4 d递增 1. 5倍剂量，直至20 d。每4 d称重一次，并相应调整染毒剂量。给药 期间，每天观察记录动物的中毒表现及死亡情况。
试验观察期间，小白鼠中毒表现不明显，给药20d,未见死亡，故中 止试验。表明鸭脚树叶碱制剂对小鼠蓄积系数K > 5,为弱蓄积性。
试验例7鸭脚树叶碱制剂对S02致小鼠咳嗽的影响
动物来源SPF级KM小鼠，18.0 21.5g，雌雄各半，来源于广东省 医学实验动物中心，许可证号SCXK(粤)2003-0002，粤监证字2008A022。
给药途径取小鼠48只，18 22g ，雌雄兼用，随机分为鸭脚树叶 碱大剂量组、小剂量组、磷酸可待因阳性对照组和生理盐水空白对照组。 分别ip给药，药后l小时，按每米3硫磺20g，点燃硫磺后将小鼠置点 燃硫磺的容器内密闭20s ，到时间后终止致咳实验，立即取出小鼠，记 录2分钟内小鼠的咳嗽次数和潜伏期，结果见表l 。
表l不同鸭脚树叶碱给药组小鼠的咳嗽次数和潜伏期_
动物给咳嗽次数_潜伏期_
组 剂 数 药
别 量 (只途药前(次)药后(次)药前(S) 药后(S)
) 径对照 组 (水
磷酸 可待 因
鸭脚 树叶 碱
鸭脚 树叶
20mg/ kg
10mg/ kg
5mg/k g
12
12
12
12
i 35.64±2 34.43±4 85.72±8. 84.92±11.
p .69 .42 87 28
i 36.33±5 24.74±2 85.23±12 138.00±13
p ，47 .63 .45 .41
i 39. 11±3 23.84±2 83. 19土4. 102.22±12
p .82 .23 85 .34
i 38.71±3 24.14±2 82.89±4. 102.24±13
p .62 .33 64 .45
表1结果显示，对照组，给水前后咳嗽次数无显著差异(t:O. 2246， P 〉 0. 05)，潜伏期亦无显著性差异(t = 0. 2177， P 〉 0. 05)。磷 酸可待因20mg/ kg剂量组，给药后的咳嗽次数明显低于给药前(t = 4.569， P〈0. 01)而潜伏期存在显著的差异(t = 3. 097， P 〈 0. 05)。 鸭脚树叶碱10mg/kg剂量组，给药后的咳嗽次数明显低于给药前(t二7. 556， P 〈 0. 001)，潜伏期差异显著(t = 2. 752， P 〈 0. 05);鸭脚 树叶碱5mg/kg剂量组，给药后的咳嗽次数明显低于给药前(t = 7. 556， P < 0. 001)，潜伏期差异显著(t = 2. 752 ， P < 0. 05)
实验结果表明磷酸可待因能明显延长S02致咳小鼠的咳嗽潜伏期， 减少咳嗽次数；鸭脚树叶碱两个剂量组均能明显减少小鼠的咳嗽次数， 对咳嗽潜伏期有延长趋势。
实施例8:鸭脚树叶碱对氨水致小鼠咳嗽的影响试验
动物来源SPF级KM小鼠，18.0 2L5g，雌雄各半，来源于广东省 医学实验动物中心，许可证号SCXK(粤)2003-0002，粤监证字2008A022。
给药途径取小鼠48只，18 21g ，雌雄兼用，随机分为鸭脚树叶 碱大剂量组、小剂量组、磷酸可待因阳性对照组和生理盐水空白对照组。 分别腹腔注射(ip)给药，药后l小时，浓氨水(25 28%)喷雾20s ，喷雾终止后，立即取出小鼠，记录2分钟内小鼠的咳嗽次数和潜伏期， 结果见表2。
表2不同鸭脚树叶碱给药组对小鼠浓氨水致咳的止咳作用_
动物给咳嗽次数_潜伏期_
组 剂 数 药
别 量 (只途药前(次)药后(次)药前(S) 药后(S)
) 径
结果中见鸭脚树叶碱大、小剂量组的咳嗽潜伏期均长于生理盐水组， 差异有显著意义；磷酸可待因给药组的咳嗽次数均少于生理盐水组，差 异有显著意义。提示鸭脚树叶碱和磷酸可待因一样，具有明显延长小鼠 浓氨水引咳潜伏期并明显减少小鼠咳嗽次数的作用。
实验结果表明，鸭脚树叶碱对小鼠浓氨水引咳有明显延长引咳潜伏 期并明显减少小鼠咳嗽次数的作用；
实施例9: 一农户家养的体重为50千克的母猪，完全废食已有三天，
只饮少量的汤汁，呼吸急促，频频咳嗽，气喘症状明显，像哮喘病人一 样，经检査，体温高达4(TC，耳朵略带蓝色，初步判断为猪蓝耳病中期。
i 34. 64±2. 32. 27 ±8. 90. 58±8. 37. 09±10
p 29 55 71 .68
i 35.33±5. 12.55±2. 70.42±12 90.58±8.
p 27 39 .39 71
i 38.71±3. 11.50±2. 90.82±4. 70.42±12
p 22 13 59 .39
i 38.71±3. 12.65±2. 62.29±4. 90.82±4.
p 22 66 59 59
2
2
2
2
m
o g o
2 k 1
k
k
g
照 水
对组<
待 脚叶 脚叶
可因鸭树碱鸭树碱取50毫升注射器，吸入40毫升的上述实施例2所制备的药液，从猪 耳后肌肉全部注射完毕，按相同方法，每天注射两次。2天后，猪的体温 降为38.5。C，呼吸比较平稳，开始逐步进食；用药第三天，猪的体温和 呼吸恢复正常，并完全正常进食，耳朵颜色基本恢复正常，停止用药； 半个月后回访， 一切正常，无反复。
实施例10: —农户家养的体重为30千克的公猪，已有两天吃很少的 食物，呼吸比较急促，频频咳嗽，偶尔有抽搐症状，经检査，体温高达 39.8°C，耳朵和四肢轻度发绀，初步判断为猪蓝耳病初期。
上述实施例3所制备的口服药粉，按饮水量的1. 5%将药粉投入饮水中， 连续用药3天，猪的体温降为38.9'C，呼吸渐趋平稳，咳嗽次数明显减 少，并开始逐步进食；继续用药2天，猪的体温降为37.8t:，呼吸基本 正常，未闻咳嗽声，精神也较好；又过两天后，猪的体温恢复正常，呼 吸自如，并能正常进食，耳朵颜色也基本恢复正常，停止用药；半个月 后回访， 一切正常，无反复。
实施例ll:某养猪场猪群中多数猪同时发病，传播迅速，流泪、鼻液 增多、阵发性咳嗽，其声音似犬叫，呼吸困难，完全厌食，触摸肌肉有 疼痛感，体温升高至40-41.7。C，粪便干硬，猪群发病率高(100%)，死亡 率低(不到1%)。初步判断为猪流行性感冒。
取上述实施例2所制备的药液，按5mg/kg剂量，从猪耳后肌肉全部 注射完毕，按相同方法，每天注射两次。2天后，猪群中多数猪的体温降 为38.5-C，呼吸比较平稳，开始逐步进食；用药至第三天，猪的体温和 呼吸恢复正常，并完全正常进食，停止用药；半个月后回访， 一切正常， 无反复。
实施例12:某猪场大群猪发生间隙性咳嗽(干咳)和喘气，呼吸增快及 腹式呼吸，呼吸次数剧增，60 120次/分。体温、精神、体姿正常，食 欲减少或废绝，生长阻滞或延缓，大小不均，死亡率却很低。解剖病变 为肺的病灶与正常肺组织之间分界清楚，两侧对称而病变区大都限于尖 叶、心叶、中间叶及隔叶前下部，有胰样坚实的感觉。初步判断为猪气 喘病。
上述实施例3所制备的口服药粉，按饮水量的1. 5%将药粉投入饮水 中，连续用药3天，呼吸渐趋平稳，咳嗽次数明显减少，并开始逐步进食；继续用药2天，呼吸基本正常，未闻咳嗽声，精神也较好；又过两 天后，猪的体温恢复正常，呼吸自如，并能正常进食，停止用药；半个 月后回访， 一切正常，无反复。
权利要求
1、一种制备治疗猪蓝耳病等导致呼吸道病的药物的方法，其特征在于将鸭脚树叶经酸水超声辅助提取，减压浓缩得浸膏，浸膏用0.2-2％盐酸浸泡，所得酸液用碱水溶液调节pH9~10之间，以有机溶剂萃取，减压浓缩回收溶剂后，得鸭脚树叶碱化合物。
2、 根据权利要求1所述的制备治疗猪蓝耳病等导致呼吸道病的药物 的方法，其特征在于所述碱水为氨水或NaOH或Na2C03;所述有机溶剂 为氯仿或正丁醇或乙酸乙酯。
3、 根据权利要求1所述的制备治疗猪蓝耳病等导致呼吸道病的药物 的方法，其特征在于所述鸭脚树叶碱加上药学上可接受的载体或辅料。
4、 根据权利要求3所述的制备治疗猪蓝耳病等导致呼吸道病的药物 的方法，其特征在于所述载体或辅料为稀释剂、赋形剂如水；填充剂 如淀粉、蔗糖；黏合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷 酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如 季铵化合物；表面活性剂如十六垸醇；吸附载体如高岭土和皂黏土；润 滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、以及和聚乙二醇；还可以在组合物中加 入其他辅剂如香味剂、甜酸剂。
5、 根据权利要求1所述的制备治疗猪蓝耳病等导致呼吸道病的药物 的方法，其特征在于所述鸭脚树叶碱加上药学上可接受的载体或辅料， 按药物常规制备方法制成供注射或口服形式。
6、 根据权利要求1所述的制备治疗猪蓝耳病等导致呼吸道病的药物 的方法，其特征在于按每千克猪注射5毫克/次、口服10毫克/次，每 天2次。
7、 根据权利要求1所述的制备治疗猪蓝耳病等导致呼吸道病的药物 的方法，其特征在于肌肉注射或静脉注射，按每千克猪注射5毫克/次、 饮水或经词料口服10毫克/次，每天2次。
全文摘要
本发明公开了一种制备治疗猪蓝耳病等导致呼吸道病的药物的方法，其特征在于将鸭脚树叶经酸水超声辅助提取，减压浓缩得浸膏，浸膏用0.2-2％盐酸浸泡，所得酸液用碱水溶液调节pH9~10之间，以有机溶剂萃取，减压浓缩回收溶剂后，得鸭脚树叶碱化合物。本发明提供了一种具有显著疗效且成分清楚的治疗猪蓝耳病、气喘病和猪肺疫等导致呼吸道病的药物的制作方法。
文档编号A61K36/24GK101658540SQ20091019264
公开日2010年3月3日 申请日期2009年9月24日 优先权日2009年9月24日
发明者冯翠兰, 刘嫒姬, 刘富来, 吴伟萍, 姚映如, 建 张, 潘燕飞 申请人:刘富来