一种细辛脑脂质毫微球及其制备方法

专利名称：一种细辛脑脂质毫微球及其制备方法
技术领域：
本发明涉及到一种可注射用的细辛脑脂质毫微球及其制备方法，属于药品技术领 域。
背景技术：
细辛脑又名α-细辛脑及α-细辛醚，主要存在于石菖蒲等植物的挥发油中。自60 年代起，国内外对细辛脑进行了广泛的研究，已证实其有很强的药理活性，研究结果表明， 该药可对抗组胺、乙酰胆碱，缓解支气管痉挛起到平喘作用，对咳嗽中枢也有较强的抑制作 用；可引起分泌物增加，起到祛痰的作用；有类似氨茶碱的作用，对离体支气管平滑肌有松 弛作用；能通过提高大脑皮质的电刺激阀，抑制点刺激的突触传导及癫痫性电的扩散，治疗 癫痫发作等；同时对肺炎双球菌、金黄葡萄球菌和大肠杆菌也有不同程度的抑制作用。临床 应用上，该药主要应用于肺炎、支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病及癫痫发作的治疗。该药已上市剂型有片剂、胶囊剂和注射剂。由于细辛脑为脂溶性化合物，难溶于 水，口服给药吸收差，绝对生物利用度仅为2% 10%，而市售细辛脑注射液采用聚乙二 醇与丙二醇或吐温为溶剂，易导致严重的不良反应(如溶血等)，不利于临床治疗，针对 上述一系列问题，已有部分文献和专利报道了解决方法，如一种细辛脑脂微球制剂及其 制备方法，专利申请号200510020878. 2，细辛脑注射乳剂及其制备方法，专利申请号为 200510130064. 4，细辛脑干乳剂及制备方法与应用，专利申请号为2006100211M. 4，细辛脑 亚微乳制剂及制备方法，专利申请号为200610092037. 7，细辛脑脂肪乳剂及其制备方法，专 利号为200510045827. 5，在以上申请的专利技术方案中，药物细辛脑均被制成可注射用的 水包油型脂质微球制剂(脂肪乳)，与口服给药相比提高了生物利用度，与现有上市注射液 相比也解决了细辛脑注射液存在的不良反应问题，但是以上专利均为常规注射脂微球或脂 质乳剂，从公开的处方、工艺和发明内容的技术方案看，制剂平均粒径一般大于150nm，多数 在200nm以上，属于脂质微球或亚微乳范围，溶液不透明或不能过滤除菌，不属于脂质毫微 球范围。同时这些发明的技术方案均未涉及到药物组织代谢分布内容，这些技术方案也未 表明其发明的制剂能够增加靶器官肺组织的药物浓度，减少肝组织的药物浓度。我们通过 大量实验发现，常规注射乳剂，即较大粒径细辛脑亚微乳乳剂注射入血后绝大部分迅速被 肝脏所摄取，在靶器官肺组织分布较少，不能更好的发挥疗效，同时，由于细辛脑对肝脏具 有一定的毒性，分布较多，将不利于制剂的安全性。而本发明的小粒径细辛脑脂质毫微球可 以显著提高肺组织的药物摄取量，而降低肝脏组织的药物摄取量，从而既可以避免了大粒 径(平均粒径大于IOOnm)的常规注射乳剂过多的被肝组织摄取，无法到达靶治疗组织更好 的发挥药效，又可以降低临床上长期用药引起的肝毒性或大剂量给药的潜在用药毒性。本 发明的细辛脑脂质毫微球制可以降低毒性，增加疗效。我们通过对处方组成和工艺的调整，通过对药物细辛脑、注射用油、磷脂、HS15、甘 油、灭菌注射用水的共同组合考察，制备出小粒径(平均粒径小于IOOnm)的细辛脑脂质毫 微球制剂，对比文件专利 200510020878. 2、专利 200610021154. 4、专利 200610092037. 7、专
3利200510130064. 4制备的传统亚微乳剂，其粒径将大于150nm，而专利200510045827. 5，虽 然在专利中罗列了包括药物细辛脑、注射用油、大豆卵磷脂、HS15、纯水、甘油组合，但目的 是为了制备干乳，因此加入了大量冻干保护剂和采用了冻干工艺，从而使其乳剂粒径不可 能小于lOOnm，并且在该专利中，没有特别指出只有本发明的这种处方组合能够达到脂质毫 微球小粒径的这种效果
发明内容
本发明的目的是提供在了一种小粒径的细辛脑脂质毫微球制剂及其制备方法，其 粒径小于lOOnm，产品更为稳定，可以过滤除菌，临床上可以降低潜在肝毒性，更好的发挥药 效，尤其是在肺部的靶向性显著提高。通过研究发现，传统脂肪乳处方，即大豆油与蛋黄卵磷脂、甘油，可以得到 150-1000nm的亚微乳剂，为了得到小粒径的脂质毫微球，本发明人进行了大量实验处方考 察，发现只有包含细辛脑、大豆油或中链油、卵磷脂、聚乙二醇-12羟基硬脂酸酯(HS15)、甘 油合适比例组合时，经过均化才可制备成稳定的小粒径的脂质毫微球，其中含有细辛脑脂 肪乳处方中必须含有HS15成分。实验还发现在这个处方中再加入一些保护剂或上述对比 文件专利中含有的其他成分，或者经过冻干复溶过程后，乳剂系统将被破坏，不能形成稳定 的小粒径脂质毫微球。研究证明，这种小粒径的脂质毫微球在小鼠药代动力学组织分布的 试验中，肺组织有较多药物分布，肝组织分布减少。为了解决上述技术问题，本发明是通过如下技术方案实现的一种细辛脑脂质毫微球，它是由下述原料按重量份数比经均化制备而成细辛脑 0. 2 1. O份，中链油或大豆油或它们的混合物5 15份，卵磷脂0. 5 5份，聚乙二醇-12 羟基硬脂酸酯1 30份，甘油1 4份，注射用水40-100份。所述的细辛脑脂质毫微球，它是由下述原料按重量份数比经均化制备而成细辛 脑0. 4 0. 8份，中链油或大豆油或它们的混合物8 12份，卵磷脂1 3份，聚乙二醇-12 羟基硬脂酸酯1 10份，甘油2 3份，注射用水70-88份。所述的中链油为辛/癸酸甘油酯(简称中链三甘油酯MCT)。所述的细辛脑脂质毫微球的粒径在IOOnm以下。所述的卵磷脂为大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂的一种或其混合物。一种细辛脑脂质毫微球的制备方法，按上述重量比分别取细辛脑、中链油或大豆 油或它们的混合物、磷脂和聚乙二醇-12羟基硬脂酸酯放入高速勻浆机中在55-65°C混溶， 形成油相；然后按上述重量比分别取甘油和55-65°C注射用水，向该油相加入已分散甘油 的注射用水，以15000 20000rpm均质3 5分钟形成初乳；然后，使用高压均质机，在 20 100MP的压力下，通N2保护，经过4 6次循环，形成均一的乳剂，调节pH至6. 8-7. 2， 制备成乳剂，将乳剂除菌，除菌是先使用0. 45 μ m的微孔滤膜加压过滤，再采用0. 22 μ m微 孔滤膜过滤，既得。所述的除菌由下述步骤替代，将乳剂分装后采用热压灭菌法进行灭菌。本发明的优点和效果如下本发明制备的细辛脑脂质毫微球制剂，与常规注射乳剂相比较，具有更小的粒径， 可以达到IOOnm以下，透明，可以采用过滤除菌的方法除菌，减少因热压灭菌高温造成主药的降解，提高制剂的物理化学稳定性。同时，按照药代动力学理论，IOOnm以下小粒径乳剂更 有利于在肺组织存留，减少毒性靶器官肝组织药物浓度，有利于通过血脑屏障。动物药代动 力学试验证实，本发明的脂质毫微球制剂与市售细辛脑注射液及大粒径乳剂相比，在肺部 的靶向性显著提高，肝组织分布量却明显降低，从而可以降低潜肝毒性，更好的发挥药效。


图1是实施例1中处方粒径图。图2是实施例2中处方粒径图。图3是实施例3中处方粒径图。图4是实施例4中处方粒径图。图5是实施例5中处方粒径图。图6是实施例6中处方粒径图。图7是实施例14中干乳冻干前后粒径图。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明的保护范围不受实施例所 限。实施例1 细辛脑脂质毫微球的制备所用原料细辛脑4g，蛋黄卵磷脂12g，大豆油50g，中链油50g，甘油24g，聚乙 二醇-12羟基硬脂酸酯35g，按上述重量比分别取细辛脑、中链油、大豆油、磷脂和聚乙二 醇-12羟基硬脂酸酯(HS 15)放入高速勻浆机中在60°C混溶，形成油相；然后按上述重 量比取甘油，取60°C注射用水，向该油相加入已分散甘油的注射用水825g，以15000 20000rpm均质3 5分钟形成初乳；然后，使用高压均质机，在20 100MP的压力下，通N2 保护，经过4 6次循环，形成均一的乳剂，调节pH至7，制备好的乳剂首先使用0. 45 μ m的 微孔滤膜加压过滤，再采用0. 22μπι微孔滤膜过滤；或分装封口，热压灭菌，既得。经测定 平均粒径73nm，结果见图1。本实施例所制备的细辛脑脂质毫微球粒径测定方法，取细辛脑脂质毫微球0. Iml, 加纯化水(预先用孔径为0. 22μπι滤膜过滤)稀释成5000倍，混勻，做为供试液，采用马尔 文Nano^S 90粒度测定仪测定。经测定平均粒径73nm，结果见图1。本实施例中的中链油为辛/癸酸甘油酯(简称中链三甘油酯MCT)实施例2 细辛脑脂质毫微球的制备所用原料细辛脑2g，大豆油30g，中链油70g，蛋黄卵磷脂2g、大豆卵磷脂3g，聚 乙二醇-12羟基硬脂酸酯20g，甘油Mg，加灭菌注射用水至IOOOmL,按照实施例1工艺方法 制备。本实施例所制备的细辛脑脂质毫微球粒径测定方法是取细辛脑脂质毫微球 0. 1ml，加纯化水(预先用孔径为0. 22μπι滤膜过滤)稀释成5000倍，混勻，做为供试液，采 用马尔文NanoIS 90粒度测定仪测定。平均粒径94nm，结果见图2。
本实施例中的中链油为辛/癸酸甘油酯(简称中链三甘油酯MCT)实施例3 细辛脑脂质毫微 球的制备所用原料细辛脑5g，中链油150g，蛋黄卵磷脂50g，聚乙二醇-12羟基硬脂酸酯 300g，甘油22g，加灭菌注射用水至IOOOmL,按照实施例1工艺方法制备。本实施例所制备的细辛脑脂质毫微球粒径测定方法是取细辛脑脂质毫微球 0. 1ml，加纯化水(预先用孔径为0. 22μπι滤膜过滤)稀释成5000倍，混勻，做为供试液，采 用马尔文Nano-ZS 90粒度测定仪测定。经测定平均粒径35nm，结果见图3。本实施例中的中链油为辛/癸酸甘油酯(简称中链三甘油酯MCT)。实施例4 细辛脑脂质毫微球的制备处方细辛脑8g，大豆油150g，蛋黄卵磷脂50g，聚乙二醇-12羟基硬脂酸酯100g， 甘油30g，加灭菌注射用水至IOOOmL,按照实施例1工艺方法制备，热压灭菌。本实施例所制备的细辛脑脂质毫微球粒径测定方法是取细辛脑脂质毫微球 0. 1ml，加纯化水(预先用孔径为0. 22μπι滤膜过滤)稀释成5000倍，混勻，做为供试液，采 用马尔文Nano-ZS 90粒度测定仪测定。经测定平均粒径87nm，结果见图4。实施例5 细辛脑脂质毫微球的制备所用原料细辛脑10g，大豆油75g，中链油75g，大豆卵磷脂50g，聚乙二醇-12羟 基硬脂酸酯200g，甘油26g，加灭菌注射用水至IOOOmL,按照实施例1工艺方法制备。本实施例所制备的细辛脑脂质毫微球粒径测定方法是取细辛脑脂质毫微球 0. 1ml，加纯化水(预先用孔径为0. 22μπι滤膜过滤)稀释成5000倍，混勻，做为供试液，采 用马尔文Nano-ZS 90粒度测定仪测定。经测定平均粒径45nm，结果见图5。本实施例中的中链油为辛/癸酸甘油酯(简称中链三甘油酯MCT)。实施例6 细辛脑脂质毫微球的制备所用原料细辛脑4g，大豆卵磷脂18g，大豆油15g，癸酸甘油酯35g，甘油24g，聚 乙二醇-12羟基硬脂酸酯10g，加灭菌注射用水至IOOOmL,按照实施例1工艺方法制备。本实施例所制备的细辛脑脂质毫微球粒径测定方法是取细辛脑脂质毫微球 0. 1ml，加纯化水(预先用孔径为0. 22μπι滤膜过滤)稀释成5000倍，混勻，做为供试液，采 用马尔文Nano-ZS 90粒度测定仪测定。经测定平均粒径95nm，结果见图6。实施例7 HPLC法测定细辛脑脂质毫微球中的药物含量对照品的配制取α-细辛脑对照品10mg，精密称定，至IOmL棕色容量瓶中，加无 水乙醇溶液并稀释至刻度，精密量取该溶液ImL至IOmL棕色容量瓶中，加无水乙醇稀释至 刻度，制成100 μ g/mL对照品溶液(1)，0. 45 μ m膜滤过，备用。供试品的配置精密移取实施例1方法制得α -细辛脑脂质毫微球0. 2mL至IOmL 棕色容量瓶中，加入无水乙醇破乳得到澄清透明溶液，无水乙醇稀释至刻度，摇勻，0. 45 μ m 膜滤过，备用。
含量测定用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(72 28)为流动相； 检测波长为313nm ；柱温30°C;流速为lmL/min ；精密量取供试品溶液和对照品溶液各20 μ 1 注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得含量。实施例8 HPLC法测定生物样品中α-细辛脑的含量。内标液的配置取吲哚美辛对照品10mg，精密称定，至IOmL棕色容量瓶中，加乙 腈溶液并稀释至刻度，精密量取该溶液ImL至IOmL棕色容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，制成 100 μ g/mL内标溶液(2)，0. 45 μ m膜滤过，备用。对照品的配置分别精密量取实施例3中(1)溶液与内标溶液(2)适量，无水 乙醇稀释至刻度，制成每ImL中含有α -细辛脑与吲哚美辛对照品各20 μ g/mL的溶液， 0. 45 μ m有机膜滤过，备用。组织中α -细辛脑的含量测定用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水 (色谱级磷酸调PH至3. 0) (72 28)为流动相；检测波长为313nm ；柱温30°C;流速为ImL/ min ；精密量取对照品溶液及组织样品离心提取液各20 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱图， 按内标法以峰面积计算，即得含量。血浆中α -细辛脑的含量测定用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水 (色谱级磷酸调PH至3. 0) (69 31)为流动相；检测波长为313nm ；柱温30°C ；流速为ImL 每分钟；精密量取对照品溶液及组织样品离心提取液各20 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱 图，按内标法以峰面积计算，即得含量。主要试剂与辅料来源鸡卵清蛋白(OVA)(Sigma) ； α -细辛脑(哈尔滨三联药 业)；α -细辛脑注射液(辽宁玉皇药业)；磷脂(Ε80，S75) (Lipoid) ；HS15 (巴斯夫)实施例9 实施例1制备的细辛脑脂质毫微球(LMS-2)的组织分布实验肺炎模型动物的准备预先腹腔注射OVA与氢氧化铝的生理盐水混悬液，2周后给予小鼠OVA-生理盐水 溶液体外雾化激发，连续三天，每天一次，经肺组织病理切片结果验证，M小时后得到间质 性肺炎模型小鼠。将实验动物(间质性肺炎模型小鼠)随即分成三组，给药前禁食12小时，自由饮 水，分别尾静脉注射S (细辛脑注射液)、LMS-I (基本处方制备，粒径205nm)、LMS-2 (73nm)， 给药剂量为40mg/kg，给药后分别于0. 5,1. 0,5. 0、10、15、30分钟处死小鼠，取出心、肝、脾、 肺、肾、脑，生理盐水洗净，滤纸吸去分，精密称定各组织质量，适当比例加入生理盐水勻浆， 取出IOOuL组织勻浆液，加入无水乙醇及内标液后加入200uL乙腈沉淀蛋白并提取药物，低 温离心，取上清液，进样分析，矩形法计算各给药组的不同组织中的AUC值，得出数据如下
权利要求
1.一种细辛脑脂质毫微球，其特征在于它是由下述原料按重量份数比经均化制备而 成细辛脑0. 2 1. 0份，中链油或大豆油或它们的混合物5 15份，卵磷脂0. 5 5份， 聚乙二醇-12羟基硬脂酸酯1 30份，甘油1 4份，注射用水40-100份。
2.根据权利要求1所述的细辛脑脂质毫微球，其特征在于它是由下述原料按重量份数 比经均化制备而成细辛脑0. 4 0. 8份，中链油或大豆油或它们的混合物8 12份，卵磷 脂1 3份，聚乙二醇-12羟基硬脂酸酯1 10份，甘油2 3份，注射用水70-88份。
3.根据权利要求1或2所述的细辛脑脂质毫微球，其特征在于所述的中链油为辛癸/ 酸甘油酯。
4.根据权利要求1或2所述的细辛脑脂质毫微球，其特征在于所述的细辛脑脂质毫微 球的粒径在IOOnm以下。
5.根据权利要求1或2所述的细辛脑脂质毫微球，其特征在于所述的卵磷脂为大豆卵 磷脂或蛋黄卵磷脂的一种或其混合物。
6.一种权利要求1或2所述的细辛脑脂质毫微球的制备方法，按上述重量比分别取细 辛脑、中链油或大豆油或它们的混合物、磷脂和聚乙二醇-12羟基硬脂酸酯放入高速勻浆 机中在55-65°C混溶，形成油相；然后按上述重量比分别取甘油和55-65°C注射用水，向该 油相加入已分散甘油的注射用水，以15000 20000rpm均质3 5分钟形成初乳；然后，使 用高压均质机，在20 100MP的压力下，通N2保护，经过4 6次循环，形成均一的乳剂， 调节PH至6. 8-7. 2，制备成乳剂，将乳剂除菌，除菌是先使用0. 45 μ m的微孔滤膜加压过滤， 再采用0. 22 μ m微孔滤膜过滤，既得。
7.根据权利要求6所述的细辛脑脂质毫微球的制备方法，其特征在于除菌由下述步骤 替代，将乳剂分装后采用热压灭菌法进行灭菌。
全文摘要
本发明公开了一种细辛脑脂质毫微球及其制备方法，属于药品技术领域。细辛脑脂质毫微球，它是由下述原料按重量份数比经均化制备而成细辛脑0.2～1.0份，中链油或大豆油或它们的混合物5～15份，卵磷脂0.5～5份，聚乙二醇-12羟基硬脂酸酯1～30份，甘油1～4份，注射用水40-100份。制备时将水相加入油相，搅拌形成粗品，调节pH值，过均质机，反复均化得到终产品。该脂质毫微球的平均粒径小于100nm，本发明的脂质毫微球制剂与市售细辛脑注射液及大粒径乳剂相比，在肺部的靶向性显著提高，肝组织分布量却明显降低，从而可以降低潜在的肝毒性，更好的发挥药效。
文档编号A61P25/08GK102085183SQ200910220358
公开日2011年6月8日 申请日期2009年12月3日 优先权日2009年12月3日
发明者李乐, 艾莉, 董英杰 申请人:沈阳万嘉生物技术研究所有限公司