专利名称：嵌合利尿钠多肽和抑制心脏重构的方法
技术领域：
本申请文件涉及包含利尿钠多肽的组合物，和利用利尿钠肽来防止、降低和/或 抑制心脏重构以及防止、降低和/或抑制心肌梗死(MI)后的缺血损伤的方法。
背景技术：
利尿钠肽家族包括心激素心房利尿钠肽(ANP)、B-型利尿钠肽(BNP)、C-型利尿 钠肽(CNP)和树眼镜蛇属(Dendroaspis)利尿钠肽(DNP)，所有这些都通过充分表征的微 粒鸟苷酸环化酶受体(即，NPR-A用于ANP和BNP ；NPR-B用于CNP)和第二信使环3’ 5’ 鸟苷单磷酸(cGMP)发挥作用(Kuhn(2003)Circ Res 93 :700_709 ;Tawaragi 等，(1991) Biochem Biophys Res Commun 175 :645_651 ；禾口 Komatsu 等，(1991)Endocrinology 129 1104-1106)。CNP具有有益的血管和抗增殖特性。由于缺乏肾脏作用，CNP降低血压的作用 小于ANP和BNP，但由于具有静脉舒张作用因此能降低心脏负载。DNP是一种能显著降低血 压的有效的利尿钠肽和利尿肽。CNP和DNP通过独立的鸟苷酸环化酶受体发挥作用。发明概述本申请文件部分基于鉴定出了将两种单独利尿钠肽的有益特性加以组合的嵌 合肽组合物和方法。如本文所述，CNP(GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC ;SEQ ID NO :1)与DNP 的15-AA线性C-末端(PSLRDPRPNAPSTSA ;SEQ ID NO 2)融合得到了一种合成的嵌合肽 (CD-NP)，其在体内具有利尿钠和利尿、增强GFR、降低心脏负载、抑制肾素、以及极轻微降低 血压的特性。此外，在利用心脏成纤维细胞(CF)进行的体外研究证实，CD-NP具有活化cGMP 和抗增殖特性。此外，根据本发明的描述，可使用其他利尿钠多肽和嵌合多肽。本文披露的 发现促成了利尿钠肽药物研发领域中一项革命性的设计策略，从而能够产生具有优于天然 利尿钠肽的特性，同时在治疗诸如急性心力衰竭(AHF)、急性心肌梗死(AMI)、再灌注损伤、 缺血损伤和心脏重构等心肾疾病状态时具有潜在有益功效且安全的治疗肽。一方面，本申请文件的特征在于一种降低被鉴定为有此需要的对象的心脏重构的 方法，所述方法包括给予所述对象包含药学上可接受的载体和能够升高所述对象尿液和血 浆cGMP水平的多肽的组合物，其中，所述组合物的给予量能使一个或多个心脏重构参数的 水平相比给予所述组合物之前所述一个或多个参数的水平有效改变至少10个百分点，其 中所述一个或多个参数选自下组心脏负载降低、肾小球滤过率升高、醛固酮水平降低、血 浆肾素活性降低、血管紧张素II水平降低、心脏成纤维细胞增殖降低、左心室质量降低、左 心室肥大减轻、心室纤维化减轻、射血分数升高、左心室收缩末期内径降低、肺毛细血管楔压降低、右房压降低、和平均动脉压降低。所述多肽可以是利尿钠多肽。所述利尿钠多肽可以是嵌合利尿钠多肽，其包含(a) 第一利尿钠多肽的环结构或所述第一利尿钠多肽环结构的变体，和(b)第二利尿钠多肽的 氨基酸序列或所述第二利尿钠多肽所述氨基酸序列的变体。所述利尿钠多肽可以包含SEQ ID NO 3所示氨基酸序列，但相对于SEQ ID NO 3所示序列可具有1、2、3、4、或5个氨基酸 取代。所述多肽能够结合NPR-B受体和NRP-A受体。所述多肽在给予所述对象后的消除半 衰期为至少15分钟。所述方法可包括以连续静脉输注方式给予所述组合物(例如，1-7天)。所述方法 可包括以连续静脉输注形式给予所述组合物1-7天，随后皮下给予所述组合物5-30天。所 述方法可包括以约0. Ing多肽/千克体重/分钟至约30ng多肽/千克体重/分钟的剂量 以连续静脉输注形式给予所述组合物，随后以约IOng多肽/千克体重/天至约30ng多肽/ 千克体重/天的剂量皮下给予所述组合物。所述方法可包括以约0. Ing多肽/千克体重/ 分钟至约30ng多肽/千克体重/分钟的剂量以连续静脉输注形式给予所述组合物约3小 时至约7天，随后以约IOng多肽/千克体重/天至约30ng多肽/千克体重/天的剂量皮 下给予所述组合物约5-约30天。所述对象被鉴定患有急性心力衰竭或急性心肌梗死。所述方法可包括在再灌注开 始时或大致开始时或在再灌注开始后约3小时开始给予所述连续静脉输注。所述组合物可 在再灌注后约3小时至约12小时给予。所述方法可包括以约Ing多肽/千克体重/分钟 至约30ng多肽/千克体重/分钟(例如，约IOng多肽/千克体重/分钟、约12. 5ng多肽 /千克体重/分钟、约15ng多肽/千克体重/分钟、约17. 5ng多肽/千克体重/分钟、或 约20ng多肽/千克体重/分钟)的剂量给予所述组合物。所述方法可进一步包括监测所 述对象中一个或多个心脏重构参数的水平。另一方面，本发明的特征在于一种包含药学上可接受的载体和多肽的组合物，其 中所述多肽能够升高对象的尿液和血浆cGMP水平，其中所述组合物当被给予鉴定为有此 需要的对象时导致心脏重构降低，其中所述降低的或抑制的心脏重构通过选自下组的一个 或多个参数水平的改变来表示心脏负载降低、肾小球滤过率升高、醛固酮水平降低、血浆 肾素活性降低、血管紧张素Π水平降低、心脏成纤维细胞增殖降低、左心室质量降低、左心 室肥大减轻、心室纤维化减轻、射血分数升高、左心室收缩末期内径降低、肺毛细血管楔压 降低、右房压降低、和平均动脉压降低，且其中所述一个或多个参数的水平相比所述给药之 前所述一个或多个参数的水平改变至少10个百分点。所述多肽是利尿钠多肽。所述利尿钠多肽可以是嵌合利尿钠多肽，其包含(a)第 一利尿钠多肽的环结构或所述第一利尿钠多肽环结构的变体，和(b)第二利尿钠多肽的氨 基酸序列或所述第二利尿钠多肽所述氨基酸序列的变体。所述利尿钠多肽可以包含SEQ ID NO :3所示氨基酸序列，但相对于SEQ ID N0:3所示序列可具有1、2、3、4、或5个氨基酸取 代。所述多肽能够结合NPR-B受体和NRP-A受体。所述多肽在给予所述对象后的消除半衰 期为至少15分钟。所述利尿钠多肽可包含与SEQ ID NO :3所述氨基酸序列有91-98%相同 的氨基酸序列。所述利尿钠多肽可以包含SEQ ID NO :3所示氨基酸序列，但相对于SEQ ID NO 3所示序列可具有1、2、3、4、或5个氨基酸取代。所述对象被鉴定患有急性心力衰竭或 急性心肌梗死。所述药物载体可以是生理盐水或者葡萄糖和水。
除非另有限定，在本文中使用的所有技术和科学术语具有和本领域普通技术人员 共知的相同含义。虽然在实践本发明时可以采用类似于或等同于本文所述的那些方法和材 料，但是，下面描述了合适的方法和材料。本文中述及的所有出版物、专利申请、专利和其他 文献都全文参考结合于本文。在矛盾时，以本说明书(包括定义)为准。此外，材料、方法 和例子都只是说明性的，并不构成限制。在附图和下述描述中详细描述了本发明的一种或多种实施方式。通过详述和附图 以及权利要求书，不难了解本发明的其它特征、目的和优点。
图 1 是 CNP (SEQ ID NO 1) ,DNP (SEQ ID NO 17) ,37-AA 嵌合利尿钠肽、CD-NP (SEQ ID NO 3)、和被称为CNP-C的27-AA “转化”CNP(SEQ ID NO 4)的氨基酸序列和结构的示意图。图2中的两张图显示了 DNP的C-末端对正常犬(η = 6)的钠泌尿排泄(UNaV ；图 2Α)和尿流量(UV;图2Β)的作用的实施例。数据表示为平均值士SE。C-末端，42ng/kg/分 钟静脉输注C-末端。*相比基线P < 0. 05。图3中的一系列图显示了⑶-NP对正常犬(η = 6)的平均动脉压(MAP ；图3Α)、 右房压(RAP ；图3B)和肺毛细血管压(PCWP ；图3C)的作用的实施例。数据表示为平均值 + SE0 CD-NP 10，剂量为 CD-NP 10ng/kg/分钟；CD-NP 50，剂量为 CD-NP 50ng/kg/分钟; CD-NP 100，剂量为 CD-NP 100ng/kg/ 分钟。* 相比基线 P < 0. 05。图4中的一系列图显示了⑶-NP对正常犬(η = 6)的钠泌尿排泄(UNaV图4Α)、尿 流量(UV ；图4Β)和肾小球滤过率(GFR ；图4C)的作用的实施例。数据表示为平均值士SE。 CD-NP 10，剂量为 CD-NP 10ng/kg/ 分钟；CD-NP 50，剂量为 CD-NP 50ng/kg/ 分钟；CD-NP 100，剂量为CD-NP 100ng/kg/分钟。*相比基线P <0.05。图5中的两张图显示了⑶-NP对正常犬(η = 6)的近端钠重吸收分数(PFRNa ；图 5Α)和远端钠重吸收分数(DFRNa ；图5Β)的作用的实施例。数据表示为平均值士SE。⑶-NP 10，剂量为 CD-NP 10ng/kg/分钟；CD-NP 50，剂量为 CD-NP 50ng/kg/分钟；CD-NP 100，剂 量为CD-NP 100ng/kg/分钟。*相比基线P <0.05。图6中的两张图显示了两种剂量的⑶-NP和等摩尔剂量的人BNP在两组正常犬 (每组η = 6)中的作用的实施例。图6Α显示了⑶-NP对平均动脉压(MAP)的作用，图6B 显示了⑶-NP对肾小球滤过率(GFR)的作用。实心条是⑶-NP，空心条是BNP。数据表示 为平均值士SE。⑶-NP 10，剂量为⑶-NP lOng/kg/分钟，或者在另一组中为等摩尔剂量的 BNP KD-NP 50，剂量为⑶-NP 50ng/kg/分钟或者在另一组中为等摩尔剂量的BNP。*相比 基线P < 0. 05。f两组之间的P < 0. 05。图7中的两张图显示了⑶-NP对人CF的作用的实施例。图7A显示了⑶-NP对 人CF中cGMP生成的作用。数据表示为平均值士SE。*相比未处理P < 0.05 相比 CP-NP IiT11M P < 0. 05 ；+ 相比 CD-NP ICT8M P < 0. 05。图 7B 显示了 CD-NP 对人 CF 的抗增 殖作用的实施例，如通过比色法测得的用光密度单位表示的BrdU摄取所示。对照，未处理 的人心脏成纤维细胞；心脏营养素-1，心脏营养素-1作用下成纤维细胞的增殖；心脏营养 素-1+⑶-NP，加入心脏营养素-1的⑶-NP刺激成纤维细胞。数据表示为平均值士SE。*相比对照P < 0. 05。图8显示了一个实施方式中心肌梗死(MI)三周后大鼠的左心室(LV)质量。MI， 未处理；MI+CDNP，MI 后用 1. 7xl(T7g/kg/ 分钟 CD-NP 处理 2 周。图9A中的一系列图显示了如图所示用⑶-NP或CNP处理的犬的血浆cGMP水 平(左图)、尿cGMP排泄(中图)以及cGMP的净肾脏生成(右图)。数值表示为平均值 士SEM(CD-NP，η = 9-10 ；CNP, η = 7-9)。相比输注前进行了组内比较(平均值士SEM，P < 0. 05% P < 0.011·)，并进行了组间比较(P <0.00111)。时间表示清除率中值。图9Β中的两 张图显示了如图所示用⑶-NP或CNP处理的犬的尿流量(左图)和尿钠排泄(右图)。数 值表示为平均值士SEM。相比输注前进行了组内比较(平均值士SEM，P < 0. 05*,P < 0.01卞 )，并进行了组间比较(Ρ<0.05$，Ρ<0.001η) (CD-NP，n = 10 ；CNP,n = 7)。时间表示清除 率中值。图10A-10D显示了如图所示用⑶-NP或安慰剂处理的人的血浆cGMP水平(图 10A)、尿cGMP排泄(图10B)、尿钠排泄反应(图10C)以及血压反应(图10D)。相比输注 前进行了组内比较(平均值士SEM，P < 0. 05*,P < 0.011·)，并进行了组间比较(P = 0.0111)。 图IOE显示了在分离的犬肾小球中在不存在或存在NPR-A拮抗剂(1 μ M)时cGMP对CD-NP 的反应。*相比空白P < 0. 05，1"相比空白P < 0.0001。发明详述化合物本申请文件提供了利尿钠化合物，所述化合物可用于在有此需要的对象中提高 cGMP水平和减低心脏重构。如本文所述，该化合物可结合NPR-A受体和/或NPR-B受体，并 且，在某些情况下结合NPR-C受体。此外，在给予对象后所述化合物的消除半衰期长于天然 NP。在一些实施方式中，本文提供的化合物可以是多肽。例如，本申请文件描述了示例性的分离的利尿钠多肽，所述多肽能够抑制或降低 AHF、AMI、再灌注损伤、缺血损伤和心脏重构。在一些实施方式中，利尿钠肽可用于治疗、抑 制、和/或预防心脏重构和缺血损伤，尤其是在AMI和/或AHF之后。文中，术语“利尿钠多 肽”或“NP”包括天然(天然形成的，野生型)NP (例如，ANP、BNP、CNP、DNP和尿扩张素)，天 然NP的一个或多个部分，天然NP的变体，或天然NP的嵌合肽，天然NP的部分，或者天然NP 或天然NP的部分的变体。在一些实施方式中，NP仅包括天然NP成熟形式的一部分。含有 来自CNP和DNP的氨基酸序列的NP尤其有用，但其他天然和嵌合NP也可考虑用于本文。CNP是一种与ANP和BNP有结构同源性但在遗传上不同的22-氨基酸肽。与 ANP或BNP不同，CNP缺乏C-末端氨基酸延伸，这可能部分解释了它缺乏利尿钠特性的原 因(Clavell 等，(1993) Am Heart J 1104-1106 ；和 Hunt 等，(1994) J Clin Endocrinol Metab 78:1428-1435)。CNP 主要是一种内皮细胞延伸肽(Stingo 等，(1992)Am Heart J H1318-1321 ；Ogawa 等，(1992)Hypertension 19 809-813 ；Doi 等，(2001)Arterioscler Thromb Vasc Biol 21 930-936 ；Naruko φ, (2005) Atherosclerosis 181 241-250 ；Horio 等，(2003)Endocrinology 144 :2279_2284 ;Langenickel 等，(2006)Proc Natl Acad Sci USA 103 :4735-4740 ；和Scotland等，(2005)Proc Natl Acad Sci USA 102:14452-14457)。 在分离的静脉环和动脉环中，CNP激活静脉中的NPR-B受体，而ANP和BNP同时结合动脉和 静脉内的NPR-A受体。这与CNP的降低血压的作用弱于ANP和BNP —致(Wei等，(1993) AmJ Physiol 264 :H71_73 ；Igaki 等，(1998)Hypertens Res 21 :7_13 ；和 LaVilla 等，(1998) Clin Sci(Lond)95 :595-602)。除了静脉舒张特性，CNP在CF中的抗增殖能力和胶原抑制特性强于ANP和 BNP(Horio等，同上)。例如，研究显示，给患有AMI的啮齿动物连续14天输注CNP能显 著减轻心室扩张、心脏纤维化和心肌细胞肥大(Soeki等，(2005) J Am Coll Cardiol 45: 608-616)。慢性输注CNP不导致降低血压的作用。不同于ANP和BNP，当给人输注时CNP缺乏显著的利尿钠和利尿作用。这可以解 释CNP对诸如AHF的钠和水阻挡综合征无效，尽管它具有突出的静脉舒张和抗纤维化特性 (Igaki等，同上；和La Villa等，同上)。DNP最初分离自绿色树眼镜蛇。DNP在体内显著利尿钠和利尿，并具有降低心 脏负载的作用，但具有显著降低血压的特性(Schweitz等，(1992)J Biol Chem 267 13928-13932 ;Lisy 等，(1999)Kidney Int 56 :502_508 ；和 Lisy 等，(2001)Hypertension 37 1089-1094)。与ANP和BNP —样，DNP通过NPR-A受体发挥作用，即被ANP饱和将显著 降低DNP在培养的人内皮细胞内对cGMP的活化作用。其实，包括利钠作用和降血压作用在 内的DNP的体内作用与NPR-A的活化一致，这种作用密切模拟ANP和BNP的特性，但不同于 CNP。实际上，与ANP和BNP相比，DNP在人心肌中已显示出对NPR-A受体具有较高亲和力 (Singh 等，(2006) Circ Res 99:183-190)。DNP具有已知利尿钠肽中最长的C-末端，由15个氨基酸构成，相比之下ANP为5 个，BNP为6个，而CNP没有。DNP的长C-末端使得DNP对中性肽链内切酶(NEP)的降解 具有较高耐性，因此有助于增强其利尿钠和利尿作用(Chen等，(2002) J Am Coll Cardiol 40:1186-1191)。此外，CNP缺乏C-末端也解释了在三种已知的内源利尿钠肽中CNP最易 于被NEP降解。缺乏C-末端也可以解释CNP的肾脏作用，因为NEP在肾脏中具有最高表达 (Kenny 和 Stephenson(1988)FEBS Lett 232 :1_8)。尿扩张素是一种具有强利尿钠和利尿活性的NPR-A受体的ANP-样激动剂。尿扩 张素定位在肾脏内，是从与ANP相同的前体差异加工得到的，并分泌到尿液中。尿扩张素的 32氨基酸序列包括ANP的完整的28氨基酸序列，并在其N-末端有4个氨基酸延伸。术语“心脏重构”表示可与MI、AHF或其他征状一起发生的对心脏的影响。其中包 括，例如，心脏膨胀、肌细胞肥大和心脏纤维化(即间质成纤维细胞增殖)。本文提供的NP 可抑制或防止与AMI或AHF —起发生的心脏重构。在一些实施方式中，表示降低的心脏重 构的参数可包括以下一个或多个心脏负载降低(即，心脏压力降低)，肾小球滤过率升高 (GFR)，血浆肾素活性降低(PRA)，血管紧张素II水平降低，心脏成纤维细胞增殖降低，左心 室(LV)肥大减轻，LV质量降低(表示纤维化和肥大减轻)，肺毛细血管楔压降低(PWCP;左 心房压力的间接度量)，右房压降低，平均动脉压降低，醛固酮水平降低(预示抗纤维化作 用)，心室纤维化减轻，射血分数升高，以及LV收缩末期内径减小。为确定NP是否能够抑制 或降低心脏重构，可采用本领域已知的和/或本文所述的方法评价这些参数中的一个或多 个(例如，在用NP治疗之前和之后)。诸如AMI和AHF等征状可导致肾损伤以及心脏损伤。在一些实施方式中，本文提 供的NP还能保护肾脏免遭AMI和AHF损伤。表示肾脏保护作用的参数包括，例如，近端钠 重吸收分数(PFRNa)降低，远端钠重吸收分数(DFRNa)降低，尿钠排泄(UNaV)升高以及尿
8流量(UV)增加。可评价这些参数中的任何一个或多个(例如，在给予NP之前和之后)以 确定NP是否具有肾脏保护作用。评价这些参数的方法是本领域已知的，并在本文中描述。术语“分离的多肽”表示满足以下条件的多肽(1)与天然发现的蛋白质无关，(2) 不含相同来源的其他蛋白质(例如，不含人蛋白质)，(3)由来自不同物种的细胞表达，或 (4)不是天然产生的。本文提供的分离的多肽通常含有10个或更多(例如，12个或更多、 15个或更多、或者20个或更多)氨基酸残基。分离的多肽可以，例如，由DNA或RNA，包括 合成的DNA或RNA，或它们的某些组合编码。嵌合NP可包括两个多个个体NP的氨基酸序列。在一些实施方式中，嵌合多肽可 包括CNP和DNP的氨基酸序列。此外，在一些情况下，嵌合NP可包括环结构和半胱氨酸键 (例如，ANP、BNP、CNP或DNP的环结构和半胱氨酸键)与其他NP的一个或多个氨基酸区段 的组合。例如，嵌合CD-NP可包括CNP的完整22-AA序列(GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC ；SEQ ID NO 1)以及 DNP 的 15-AA C-末端(PSLRDPRPNAPSTSA ;SEQ ID NO :2)，因此可具有 SEQ ID NO 3 所述氨基酸序列(GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSTSA)。在一些实施方式中， 嵌合NP可包括CNP和尿扩张素的氨基酸序列。例如，嵌合⑶-NP可包括CNP的环结构和二 硫键(CFGLKLDRIGSMSGLGC ；SEQ ID NO 5)以及尿扩张素的 10氨基酸N-末端(TAPRSLRRSS ； SEQ ID NO 6)和 5 氨基酸 C-末端(NSFRY ；SEQ ID NO 7)，因此可具有序列 TAPRSLRRSSCF GLKLDRIGSMSGLGCNSFRY(SEQ ID NO :8)。在一些情况下，嵌合NP可在SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :8的一个或多个位置(例 如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个位置)上包括突变(例如，取代、添加或缺失)。变体NP，例 如，相对于天然NP氨基酸序列具有一个或多个氨基酸取代的变体，可按照本文所述进行制 备和修饰。在一些情况下，可通过选择不显著改变以下情况的取代制造氨基酸取代(a)被 取代区域的肽主链的结构，(b)靶位点上分子的电荷或疏水性，或(c)侧链的大小(bulk)。 例如，天然残基根据侧链特性可分成以下几组(1)疏水性氨基酸(正亮氨酸、甲硫氨酸、丙 氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸)；(2)中性亲水性氨基酸(半胱氨酸、丝氨酸和苏氨酸)； (3)酸性氨基酸(天冬氨酸和谷氨酸)；(4)碱性氨基酸(天冬酰胺、谷氨酰胺、组氨酸、赖 氨酸和精氨酸)；(5)影响链取向的氨基酸(甘氨酸和脯氨酸)；和(6)芳香性氨基酸(色 氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸)。用这些基团进行的取代可被认为是保守性取代。有用的取代的 非限制性的例子包括但不限于，用缬氨酸取代丙氨酸，用赖氨酸取代精氨酸，用谷氨酰胺取 代天冬酰胺，用谷氨酸取代天冬氨酸，用丝氨酸取代半胱氨酸，用天冬酰胺取代谷氨酰胺， 用天冬氨酸取代谷氨酸，用脯氨酸取代甘氨酸，用精氨酸取代组氨酸，用亮氨酸取代异亮氨 酸，用异亮氨酸取代亮氨酸，用精氨酸取代赖氨酸，用亮氨酸取代甲硫氨酸，用亮氨酸取代 苯丙氨酸，用甘氨酸取代脯氨酸，用苏氨酸取代丝氨酸，用丝氨酸取代苏氨酸，用酪氨酸取 代色氨酸，用苯丙氨酸取代酪氨酸，和/或用亮氨酸取代缬氨酸。变体⑶-NP的非限制性例子包括PLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSTSA(SEQ ID NO 9),GISKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSTSA(SEQ ID NO: 10)，GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSTTA(SEQ ID NO: 11)，GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSTSV(SEQ ID NO: 12)，GLTKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSTSA(SEQ ID NO: 13)，
原始残基示例性取代优选取代AlaVal, Leu, lieValArgLys, Gin,AsnLysAsnGin, His，Lys, ArgGlnAspGluGluCysSerSerGlnAsnAsnGluAspAspGlyProProHisAsn，Gin, Lys, ArgArgIleLeu, Val, Met，Ala，Phe，正亮氨酸LeuLeuNorleucine，lie, Val, Met，Ala，PhelieLysArg，Gin, AsnArgMetLeu, Phe, lieLeuPheLeu, Val, lie, AlaLeuProGlyGlySerThrThrThrSerSerTrpTyrTyrTyrTrp, Phe, Thr, SerPhe
10
GLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSTSA(SEQ ID NO: 14)， GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSSSA(SEQ ID NO: 15)，禾口 GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPTTSA(SEQ ID NO 16). 可在CD-NP内任何位置进行的保守性取代的其它例子列在表1中。 表1
保守性氨基酸取代的例子
权利要求
1.一种降低被鉴定为有此需要的对象的心脏重构的方法，所述方法包括给予所述对象 包含药学上可接受的载体和能够升高所述对象尿液和血浆环3’5’鸟苷单磷酸(cGMP)水平 的多肽的组合物，其中，所述组合物的给予量能使一个或多个心脏重构参数的水平相比给 予所述组合物之前所述一个或多个参数的水平有效改变至少10个百分点，其中所述一个 或多个参数选自下组心脏负载降低、肾小球滤过率升高、醛固酮水平降低、血浆肾素活性 降低、血管紧张素II水平降低、心脏成纤维细胞增殖降低、左心室质量降低、左心室肥大减 轻、心室纤维化减轻、射血分数升高、左心室收缩末期内径降低、肺毛细血管楔压降低、右房 压降低、和平均动脉压降低。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多肽是利尿钠多肽。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述利尿钠多肽是嵌合利尿钠多肽，其包含 (a)第一利尿钠多肽的环结构或所述第一利尿钠多肽环结构的变体，和(b)第二利尿钠多 肽的氨基酸序列或所述第二利尿钠多肽所述氨基酸序列的变体。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述利尿钠多肽包含SEQID N0:3所示氨 基酸序列，但相对于SEQ ID N0:3所示序列具有1、2、3、4、或5个氨基酸取代。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多肽能够结合NPR-B受体和NRP-A受体。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多肽在给予所述对象后的消除半衰期 为至少15分钟。
7.如权利要求1所述的方法，包括以连续静脉输注形式给予所述组合物。
8.如权利要求7所述的方法，包括给予所述连续静脉输注1-7天。
9.如权利要求1所述的方法，包括以连续静脉输注形式给予所述组合物1-7天，随后皮 下给予所述组合物5-30天。
10.如权利要求1所述的方法，包括以约0.Ing多肽/千克体重/分钟至约30ng多肽 /千克体重/分钟的剂量以连续静脉输注形式给予所述组合物，随后以约IOng多肽/千克 体重/天至约30ng多肽/千克体重/天的剂量皮下给予所述组合物。
11.如权利要求1所述的方法，包括以约0.Ing多肽/千克体重/分钟至约30ng多肽 /千克体重/分钟的剂量以连续静脉输注形式给予所述组合物约3小时至约7天，随后以 约IOng多肽/千克体重/天至约30ng多肽/千克体重/天的剂量皮下给予所述组合物约 5-约30天。
12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象被鉴定患有急性心力衰竭或急性 心肌梗死。
13.如权利要求12所述的方法，包括在再灌注开始时或大致开始时给予所述连续静脉输注。
14.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述组合物在再灌注开始后约3小时时开始给予。
15.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述组合物在再灌注后约3小时至约12 小时给予。
16.如权利要求1所述的方法，包括以约Ing多肽/千克体重/分钟至约30ng多肽/ 千克体重/分钟的剂量给予所述组合物。
17.如权利要求1所述的方法，还包括监测所述对象的所述一个或多个心脏重构参数 的水平。
18.—种包含药学上可接受的载体和多肽的组合物，其中所述多肽能够升高对象的尿 液和血浆cGMP水平，其中所述组合物给予鉴定为有此需要的对象时导致心脏重构降低，其 中所述降低的或抑制的心脏重构通过选自下组的一个或多个参数水平的改变来表示心脏 负载降低、肾小球滤过率升高、醛固酮水平降低、血浆肾素活性降低、血管紧张素Π水平降 低、心脏成纤维细胞增殖降低、左心室质量降低、左心室肥大减轻、心室纤维化减轻、射血分 数升高、左心室收缩末期内径降低、肺毛细血管楔压降低、右房压降低、和平均动脉压降低， 且其中所述一个或多个参数的水平相比所述给药之前所述一个或多个参数的水平改变至 少10个百分点。
19.如权利要求18所述的组合物，其特征在于，所述多肽是利尿钠多肽。
20.如权利要求19所述的组合物，其特征在于，所述利尿钠多肽是嵌合利尿钠多肽，其 包含(a)第一利尿钠多肽的环结构或所述第一利尿钠多肽环结构的变体，和(b)第二利尿 钠多肽的氨基酸序列或所述第二利尿钠多肽所述氨基酸序列的变体。
21.如权利要求19所述的组合物，其特征在于，所述利尿钠多肽包含SEQID NO :3所 示氨基酸序列，但相对于SEQ ID N0:3所示序列具有1、2、3、4、或5个氨基酸取代。
22.如权利要求18所述的组合物，其特征在于，所述多肽能够结合NPR-B受体和NRP-A 受体。
23.如权利要求18所述的组合物，其特征在于，所述多肽在给予所述对象后的消除半 衰期为至少15分钟。
24.如权利要求18所述的组合物，其特征在于，所述利尿钠多肽包含与SEQID NO :3所 示氨基酸序列有91-98%相同的氨基酸序列。
25.如权利要求18所述的组合物，其特征在于，所述利尿钠多肽包含SEQID NO :3所 示氨基酸序列，但相对于SEQ ID N0:3所示序列具有1、2、3、4、或5个氨基酸取代。
26.如权利要求18所述的组合物，其特征在于，所述对象被鉴定患有急性心力衰竭或 急性心肌梗死。
27.如权利要求18所述组合物，其特征在于，所述药物载体是生理盐水或葡萄糖与水。
全文摘要
材料和方法涉及包含CNP的氨基酸序列和DNP的C-末端序列的嵌合多肽。与BNP相比，所述多肽具有利尿钠和利尿、增强GFR、降低心脏负载、抑制肾素以及不显著降低血压的特性。所述多肽还抑制心脏成纤维细胞增殖。
文档编号A61P9/10GK102143757SQ200980128932
公开日2011年8月3日 申请日期2009年6月3日 优先权日2008年6月6日
发明者J·C·伯内特, O·里斯, 陈鸿豪 申请人:梅约医学教育与研究基金会