专利名称：多层的血液产品的制作方法
技术领域：
本发明涉及多层的血液产品、制备所述血液产品的方法、可通过所述方法获得的血液产品以及血液产品制备容器装置。
背景技术：
人类凝血系统能够止血和启动愈合。该系统的功能是公知的，被广泛地研究。然而，凝血产物在启动愈合方面的重要性仅在近年来被认识到。血液制品，例如，血纤蛋白密封剂和血小板浓缩物通过从抗凝固的全血中分离富含血小板的血浆(PRP)来生产。血小板和血浆的存在部分地模拟了凝血酶激活时的天然的人类凝结系统。这产生了在血纤蛋白基质中生长促进因子的含血小板的自体浓缩物。这样的组合物可以用于覆盖伤口表面，并声称能启动愈合。David M. Dohan ^AW "Platelet-rich fibrin (PRF) A second-generation platelet concentrate. Part I: Technological concepts and evolution, Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2006; 101 :E37_44"描述了如何不添加任何添加剂或试剂从全血制备富含血小板的固体血纤蛋白网络。PRF方案是在10 mL玻璃管或玻璃包被的塑料中不使用抗凝血剂采集血液样品，立即在大约400 g离心10分钟。抗凝血剂的缺乏意味着血液样品的大多数血小板在与玻璃管壁接触几分钟内激活并释放凝结级联物。纤维蛋白原首先在试管的高部浓缩，之后循环的凝血酶将它转变为血纤蛋白。然后在试管的中部获得血纤蛋白块，从试管底部的红细胞的上部伸出到顶部的非细胞血浆中。血小板在血纤蛋白网眼中大规模地截留。这种技术的成功完全取决于血液采集和转移到离心机的速度。实际上，在没有抗凝血剂时，血液样品在与试管玻璃接触时几乎立即开始凝固， 其花费最少几分钟的离心来将纤维蛋白原浓缩在试管的中部和上部。快速操作是获得临床上可用的PRF血块的唯一方式。如果采集血液和启动离心所需的时间过长，将产生失败血纤蛋白将以弥散的方式在试管中聚合，将仅获得没有稠密性的小的血块。总之，PRF方案使得采集填充了血清和血小板的血纤蛋白块成为可能。通过从试管中取出血块，人工地切割红细胞部分，人工地逐出血纤蛋白基质中截留的流体(血清)，医师将获得自体的血纤蛋白膜。然而这种血纤蛋白网络包括含有红血细胞的实质部分的红色血栓，其必需人工地切除。此外，产生的血纤蛋白网络的成分，例如，血纤蛋白、白细胞和血小板，是任意分布的并且包埋在产品内部。没有描述在使用低g力下的白细胞回收，白细胞的回收是低的，因为某些白细胞将位于红细胞部分中。血纤蛋白内细胞的陷网导致这些细胞的缺乏或缓慢的释放，从而抑制被包括的白细胞的接触依赖性抗杀微生物潜力。Dohan 等人的"Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2006; 101 :E37-44 and 2006; 101 :E45_50”描述了一种网络，其不是一定形状和结构的血小
板浓缩物，其直接适合于覆盖伤口表面。为了获得可用于覆盖伤口表面的形状和形式/刚性和防止红血细胞包含，已知的富血小板固体血纤蛋白网络将必需人工地重塑和压缩。此外，所述方法包括几个步骤，不能在一个封闭的系统中制备，因而不便于临床使用。Sutton 等人的"Cell separation in the buffy coat. Biorheology. 1988; 25 (4) :663-73”描述了抗凝固全血将如何在离心或被动沉降时分离成几个层；红血细胞、白细胞和血小板(=暗黄覆盖层)和血浆。进一步的，通过使用10000 g的离心力10分钟和利用1. 053的密度漂浮，暗黄覆盖层可以通过戊二醛固定，以及取出用于研究；然而，这由于戊二醛的毒性而不能临床上使用。现有的从抗凝固的血提取暗黄覆盖层的几种方法包括利用密度限定的物质(即，Lymphoprep)。除了抗凝固的血的需要之外，提取的细胞将在血浆中悬浮和混合(打乱)，血浆将不可避免地被包括。EP 1637145A描述了通过薄片状多孔膜从悬浮液过滤细胞的方法(例如，包括血小板和白细胞的血细胞)，将细胞保留在所描述的膜中。薄片状多孔材料可以从血纤蛋白制备。然而，不能获得分层的结构，细胞在多孔材料的深部截留，同种异体的血纤蛋白的使用提高了与其他人交叉感染的风险。此外，所述方法包括几个步骤，不能在一个封闭的系统中制备，因而不便于临床使用。已知的方法在它们的用途、特别是临床用途上受限。在细胞分离之前抗凝剂的添加使得产品不是完全自体的，此外促进伤口愈合的物质(例如生长因子)的释放需要与其他非自体的物质(例如，凝血酶、Ca2等等)混合，产生没有细胞的期望分布的勻质的终产物。排除抗凝血的已知方法产生细胞的打乱的分布，细胞被锁定在产品的内部，有效地限制了这些细胞的释放和潜力。此外这些方法需要在封闭的系统外部的人工操作来获得物理上适合于临床使用的产物，不适当地限定的操作产生低于最佳细胞产量的可变的结果。此外，人工处理将需要劳动时间(成本)和延长准备时间。描述了明确定义的分层结构的方法取决于抗凝血和有毒成分的添加，不适合于临床使用、获得的结构的固定和自维持性。
发明内容
本发明的目的是提供新的和改进的血液产品，其克服或改善了至少一种现有技术的缺点或提供了有用的选择。此外本发明的目的是提供新的和改进的获得血液产品的方法，其克服或改善了至少一种现有技术的缺点或提供了有用的选择。本发明的目标通过包含来自全血的成分、特别是血纤蛋白、血小板和白细胞的血液产品来获得，所述血液产品包含第一层、第二层和第三层，所述第二层邻接所述第一层和所述第三层，所述第一层限定了所述血液产品的第一外表面，所述第三层限定了所述血液产品的第二外表面，所述第一层包含血纤蛋白的大部分，所述第二层包含血小板的大部分， 所述第三层包含白细胞的大部分。据此，提供了具有多层结构的血液产品，由于每一层不同的组成，每一层提供了不同的功能。所述血液产品是自持、紧密和固体的，所述血液产品具有结构，从而所述血液产品直接适合于预期的用途。大部分是指，某一成分，例如，血纤蛋白、血小板或白细胞，包含相应的层的按体积和/或质量的、和/或所述血液产品的按体积和 / 或质量的至少 50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99% 或甚至 100%，或根据这些提及的百分比的组合可以定义的任何区间。所述第一、第二和第三层是各自连续的和/或相互基本上平行的，例如，形成分层的和/或多层的血液产品。所述血液产品优选地由三层组成，例如，第一层包含血纤蛋白的大部分，第二层包含血小板的大部分，第三层包含白细胞的大部分。血液产品优选地具有1、2、3、4或5的最大宽度/厚度比例，然而，该比例可以达10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90或甚至达到100，其中所述宽度沿着所述
血液产品的层测量，所述厚度垂直于所述血液产品的层测量。在本发明的一个方面中，包含在血液产品中的血纤蛋白的大部分被包含在所述第一层中。据此，提供了一种血液产品，其中包含在整个血液产品中的血纤蛋白的大部分被包含在所述第一层中。在本发明的另一个方面中，包含在血液产品中的血小板的大部分被包含在所述第二层中。据此，提供了一种血液产品，其中包含在整个血液产品中的血小板的大部分被包含在所述第二层中。在本发明的另一个方面中，包含在血液产品中的白细胞的大部分被包含在所述第三层中。据此，提供了一种血液产品，其中包含在整个血液产品中的白细胞的大部分被包含在所述第三层中。在本发明的另一个方面，所述血液产品完全由来自全血的成分组成。据此，提供了完全由来自全血的成分组成的血液产品，意味着没有添加剂被添加到全血和/或血液产品中，所述血液产品是可从全血、全血的部分或全血的部分的组合直接得到的。在本发明的另一个方面，所述血液产品是自体的。在本发明的另一个方面，所述血液产品是柔性的。据此，提供了血液产品，其可以在正常使用期间抵抗外加应力而不破裂。由于所述血液产品的柔性，所述血液产品符合施加该血液产品之处的大部分连续轮廓。在本发明的另一个方面，所述血液产品进一步包含选自包含成纤维细胞、角质形成细胞和透明质酸的组的第一物质。据此，提供了血液产品，其包括已知对于皮肤再生为重要的其他细胞，从而进一步改善慢性创口的愈合潜力，特别是具有低的或无活性的邻近组织的区域中的伤口。皮肤的已知成分透明质酸具有提高血液产品的保水能力的潜力，以及提高血液产品在皮肤损失的区域掺入/浸润的潜力。本发明还涉及用于治疗用途的血液产品，和/或根据前述的血液产品用于治疗使用的用途。本发明还涉及血液产品用于制造用于治疗使用的药物的用途。本发明还涉及用于伤口治疗的血液产品，和/或根据前述的血液产品用于伤口治疗的用途。本发明还涉及血液产品用于制造用于伤口治疗的药物的用途。据此，提供了血液产品，其特别适合于制造用于伤口治疗的药物。通过向伤口施用由第三层限定的第二外表面，所述伤口被保持和/或维持基本上无菌，例如，免于感染，因为所述第三层包含白细胞的大部分，其是第一活性细胞，因而控制感染和吸引其他细胞，包括巨噬细胞，而第二层包含血小板的大部分，其包含刺激成纤维细胞生长的生长促进因子，而所述血液产品的第一层包含血纤蛋白的大部分，因而所述血液产品的第一外表面提供了对抗来自环境的污染的有效保护；所述第一层此外包含生长促进因子，其随着时间的过去释放。通过向伤口施用由第三层限定的第二外表面，所述伤口被保持和/或维持基本上没有感染，因为所述第三层包含白细胞的大部分，所述白细胞容易从所述产品释放。白细胞是保护身体对抗感染和外来物体的免疫系统的细胞，因而它们控制感染并进一步吸引其他细胞，包括巨噬细胞。所述第二层包含血小板的大部分，其包含刺激细胞的生长促进因子。由于白细胞将快速地从产品释放，所述第二层将面向伤口表面用于生长促进物质向伤口的最佳递送。血液产品的第一层包含血纤蛋白的大部分，因而所述血液产品的第一外表面提供了对抗来自环境的污染的有效保护；所述第一层此外包含生长促进因子，其随着时间的过去释放。本发明还涉及用于自体使用的血液产品，和/或根据权利要求1-7的任一项的血液产品用于自体使用的用途。本发明还涉及血液产品用于制造自体药物的用途。本发明还涉及用于外科使用，例如，区域的封闭、防止外科手术后粘附和/或在吻合术操作中使用的血液产品，和/或根据前述的血液产品用于外科使用的用途。本发明还涉及血液产品用于制造用于外科使用的药物的用途。在本发明的另一个方面，所述血液产品用于吻合术。通过根据前述的方法可获得的血液产品用于吻合术的用途。在本发明的另一个方面，所述血液产品用于制造用于吻合术的药物。本发明还涉及从一定体积全血制备血液产品的方法，所述方法包括以下步骤 a)将所述体积的全血置于容器装置中，所述容器装置包含限定内表面的第一材料，所述全血在其中与所述内表面接触，b)激活所述全血的凝血，c)通过作用于置入所述容器装置中的全血的离心力将所述全血分离成红血球、血清和血液产品，从而由于所述红血球、血液产品和血清之间密度的差异，所述全血分离成包含红血球、血液产品和血清的层，所述血液产品包含血纤蛋白、白细胞和血小板，施加的离心力至少为重力的1000倍大，例如，g， 作用于所述全血，以及d)从所述容器装置取出所述血液产品。据此，提供了一种方法，借助所述方法可以从全血得到血液产品。所述方法可以在一个周期内在密闭的系统中进行， 因为不需要分离红血球；然而所述方法也可以运用红血球的分离来进行。从全血提取血纤蛋白的方法的产率是至少高于10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、 80%、90%、95%、97%、98%、99%或甚至100%，而从全血提取物白细胞的方法的产率是至少高于 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、97%、98%、99% 或甚至 100%，而从全血提取血小板的方法的产率是至少高于 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、97%、98%、99% 或甚至100% 可获得的血液产品具有小于所述全血体积的30%、20%、15%或10%或甚至小于5%的体积。据此，提供了一种方法，通过所述方法，可通过例如离心产生离心力来获得血液产品。施加的离心力是重力的至少 1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、 10000、11000、12000、13000、14000、15000、16000、17000、18000、19000 或甚至 20000 倍大， 例如g，作用于所述全血，或所述施加的离心力在可从提及的数字的组合定义的任何区间之内。所述离心力施加至少30秒、40秒、50秒、60秒、1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、6 分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、11分钟、12分钟、13分钟、14分钟、15分钟、16分钟、 17分钟、18分钟、19分钟、20分钟、21分钟、22分钟、23分钟、24分钟、25分钟、26分钟、27 分钟、观分钟、四分钟或30分钟，或所述离心力在可从提及的数字的组合定义的任何间隔内施加。在本发明的一个方面，从全血提取血纤蛋白的所述方法的产率是至少高于60%。在本发明的一个方面，从全血提取白细胞的所述方法的产率是至少高于50%。在本发明的一个方面，从全血提取血小板的所述方法的产率是至少高于60%。
在本发明的一个方面，所述离心力施加至少30秒。离心力施加的时间是至少30秒、40秒、50秒、60秒、1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、 5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、11分钟、12分钟、13分钟、14分钟、15分钟、 16分钟、17分钟、18分钟、19分钟、20分钟、21分钟、22分钟、23分钟、24分钟、25分钟、26 分钟、27分钟、观分钟、四分钟或30分钟，或离心力在可从提及的数字的组合限定的任何区间之内施加。在本发明的一个方面，所述血液产品完全由来自全血的成分组成。据此，提供了一种方法，通过所述方法，血液产品可从全血得到，从而完全由来自全血的成分组成。因而，进行所述方法而不向全血和/或血液产品添加任何添加剂。在本发明的另一个方面，步骤b)中的凝血通过限定所述内表面的第一材料来激活。从而，提供了一种方法，其中当全血与内表面接触时启动凝血，因而其可以避免向全血添加任何物体等来启动凝血。在本发明的另一个方面，步骤b)中的凝血通过使所述全血暴露于物体例如玻璃珠来激活。据此，提供了一种方法，其中当全血与添加到全血的物体接触时启动凝血。据此， 凝血可以在对所述方法最佳的选定的时点启动。在本发明的另一个方面，所述容器装置的内表面的第一材料选自包含聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、聚酰胺、丙烯腈丁二烯苯乙烯、苯乙烯、修饰的苯乙烯、聚氨基甲酸酯和其他聚合材料的组。在所述提及的组中的聚合物此外可以是填充玻璃的。据此，提供了一种方法，其中具有第一材料的内表面的容器装置可以是由所有种类的聚合物、金属或玻璃制成的典型的试管等等。还可以选择所述材料，从而材料性质提供了血液产品和内表面之间最小的附着力/摩擦。聚酰胺和聚氨基甲酸酯是优选的，因为这些材料启动优选的活化水平内的凝血，其高于使用其他聚合物获得的水平。在本发明的另一个方面，所述容器装置的内表面是表面处理的，例如，包被的，以降低血液产品和第一材料的内表面之间的摩擦。据此，提供了一种方法，其中具有第一材料的内表面的容器装置可以是由所有种类的聚合物、金属或玻璃制成的典型的试管等等。所述内表面可以是表面处理的和/或包被的以获得血液产品和内表面之间的最小的附着力/摩擦。在本发明的另一个方面，所述离心力大于内表面和血液产品之间作用的附着力。 据此，提供了一种方法，其中与所述附着力相比所述离心力是优势的，其确保了血液产品的明确限定的分层结构。所述离心力可以是所述附着力的至少10、100、1000、5000、10000、 20000、50000、100000、1000000或甚至10000000倍大，或所述离心力处在可以从提及的数字的组合定义的任何区间之内。在本发明的另一个方面，所述离心力和离心时间是这样的强度，从而作用在所述内表面和血纤蛋白之间的附着力被破坏/释放，从而容许血纤蛋白层被浓集/压缩。据此，提供了一种方法，其中与所述附着力相比所述离心力是优势的，其确保了血液产品的明确限定的分层结构。释放对壁的附着所需的离心力将取决于血纤蛋白密度。血纤蛋白密度将取决于几个因素，包括凝血活化、血纤蛋白浓度、时间，等等。所述离心力可以是至少10、100、1000、5000、10000、20000、50000或甚至100000 g，或所述离心处在可以从提及的数字的组合定义的任何区间之内。在本发明的另一个方面，在步骤c)期间，附着于所述内表面的血液产品从内表面脱离至少一次。据此，提供了一种方法，其中血液产品与内表面的可能的粘附可以通过在步骤C)期间分离血液产品至少一次来进行。分离可以通过机械方式，例如通过切割等等来进行。血纤蛋白的浓集则可以在更低的g力下进行，因为不需要g力来从壁上释放血纤蛋白。在本发明的另一个方面，所述方法进一步包含浓集(compacting)步骤，其中所述血液产品通过浓集装置，例如，置入容器装置中的滤过器来浓集。据此，提供了一种方法，其中血液产品可以通过例如滤过器来浓集。滤过器可以固定或可活动地置入容器装置中，所述滤过器可以用于分离血液产品。在本发明的另一个方面，所述方法进一步包含分离步骤，其中在步骤C)期间红血球从血液产品分离。据此，提供了一种方法，其中在所述方法期间红血球从血清和血液产品分离。在本发明的另一个方面，所述方法进一步包含洗涤步骤，其中所述血液产品被洗涤，从而附着于所述血液产品的基本上所有的红血球和/或血清被脱除。据此，提供了一种方法，从而所述血液产品基本上没有血液产品本身的其他成分。在离心期间形成的血清可以用作洗涤液。在本发明的另一个方面，所述容器装置是包含可通过可分开的盖子闭合的开口端，以及闭合端。据此，提供了一种方法，其中标准的试管等被用于进行所述方法。在本发明的另一个方面，步骤b)先于步骤a)。据此，凝血可以在全血置入容器装置之前来激活，因而当全血置入容器装置时，容器装置不需要包含任何凝血激活物和/或全血不需要包含凝血激活物。举例来说，凝血可以通过将玻璃珠置入抽血管中、或选择将激活血液的管材料来在血液抽取期间激活。因而这可以避免向全血添加任何物体等等来启动凝血。在本发明的另一个方面，步骤b)在步骤a)之前至少1分钟发生。从而，提供了一种方法，其中不需要非常快速的操作。步骤b)可以在步骤a)之前至少30秒、40秒、50秒、 60秒、1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、11分钟、 12分钟、13分钟、14分钟、15分钟、16分钟、17分钟、18分钟、19分钟或甚至20分钟发生。 步骤b)中凝血的活化的水平也可以通过所述方法来控制。这容许步骤b)和a)之间的时间延长，因为步骤c)中的细胞分离必需在血纤蛋白水平足以抑制细胞分离之前发生。在本发明的另一个方面，步骤b)与步骤C)同时发生。据此，凝血可以在步骤C) 期间所述方法的最佳时点来激活。凝血可以通过整合到容器装置中的凝血激活物，和/或通过使用将会激活血液的容器材料来激活/启动。凝血材料可以是添加到容器装置中的全血的物体，例如，玻璃珠。在本发明的另一个方面，选自包含成纤维细胞，角质形成细胞和透明质酸的组的第一物质添加到全血中。据此，可获得一种血液产品，其包括已知对于皮肤再生重要的其他细胞，从而进一步改善慢性创口的愈合，特别是在具有低的或无活性的邻近组织的区域中的伤口。皮肤的已知成分透明质酸具有提高血液产品的保水能力的潜力，以及提高血液产品在组织损失的区域掺入/浸润的潜力。在本发明的另一个方面，浓集装置，例如，滤过器，具有第一固定位置和第二位置。 在离心的第一部分期间，其中白细胞和血小板已经分离，而血清中的血纤蛋白没有被浓集， 滤过器被固定在含有红血球的容器装置的部分中的位置上。如果滤过器的密度小于血清的密度，滤过器的释放将导致滤过器转移到试管的顶部，从而采集白细胞和血小板层并浓集血纤蛋白层。在本发明的另一个方面，所述浓集物装置，例如滤过器，通过容器装置壁中的变形被固定在第一固定位置。所述滤过器通过使管壁变形来固定。滤过器通过移除壁的变形来释放。在本发明的另一个方面，使用包含血纤蛋白的血浆和包含白细胞和血小板的暗黄覆盖层代替全血。据此，提供了一种方法，其中可以使用排除了红血球的全血，从而血液产品可从全血、全血的部分、或全血的部分的组合直接得到。在本发明的另一个方面，所述方法在15分钟内进行。所述方法在至少1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、11分钟、12分钟、13分钟、 14分钟、15分钟、16分钟、17分钟、18分钟、19分钟、20分钟、21分钟、22分钟、23分钟、24 分钟、25分钟J6分钟、27分钟、观分钟、四分钟或至少30分钟内进行。在本发明的另一个方面，通过所述方法获得的血液产品是根据权利要求1-8的任一项的血液产品。本发明还涉及可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的、包含来自全血的成分，特别是血纤蛋白、血小板和白细胞的血液产品，所述血液产品包含第一层、第二层和第三层，所述第二层邻接所述第一层和所述第三层，所述第一层限定了所述血液产品的第一外表面，所述第三层限定了所述血液产品的第二外表面，所述第一层包含血纤蛋白的大部分，所述第二层包含血小板的大部分，所述第三层包含白细胞的大部分。据此，可获得具有多层结构的血液产品；其中由于每一层的不同的组成，每一层提供了不同的功能。所述血液产品是自持、紧密和固体的，所述血液产品具有结构，从而所述血液产品直接适合于预期的用途。大部分是指，某一成分，例如，血纤蛋白、血小板或白细胞，包含相应的层的按体积和/或质量的、和/或所述血液产品的按体积和/或质量的至少50%、55%、60%、65%、 70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或甚至100%，或从这些提及的百分比的组合可以定义的任何区间。所述第一、第二和第三层是各自连续的和/或相互基本上平行的，例如，形成分层的和/或多层的血液产品。所述血液产品优选地由三层组成，例如，第一层包含血纤蛋白的大部分，第二层包含血小板的大部分，第三层包含白细胞的大部分。血液产品优选地具有1、2、3、4或5的最大宽度/厚度比例，然而，该比例可以达10、15、20、25、30、40、50、60、 70,80,90或甚至达到100，其中所述宽度沿着所述血液产品的层测量，所述厚度垂直于所述血液产品的层测量。在本发明的另一个方面，包含在血液产品中的血纤蛋白的大部分被包含在第一层中。据此，可获得一种血液产品，其中包含在整个血液产品中的血纤蛋白的大部分被包含在
第一层中。在本发明的另一个方面，包含在血液产品中的血小板的大部分被包含在第二层中。据此，可获得一种血液产品，其中包含在整个血液产品中的血小板的大部分被包含在第
二层中。在本发明的另一个方面，包含在血液产品中的白细胞的大部分被包含在第三层中。据此，可获得一种血液产品，其中包含在整个血液产品中的白细胞的大部分被包含在第
三层中。
在本发明的另一个方面，所述血液产品完全由来自全血的成分组成。据此，可获得完全由来自全血的成分组成的血液产品，意味着没有添加剂被添加到全血和/或血液产品中，所述血液产品是可从全血、全血的部分或全血的部分的组合直接得到的。在本发明的另一个方面，所述血液产品是自体的。在本发明的另一个方面，所述血液产品是柔性的。据此，可获得血液产品，其可以在正常使用期间抵抗外加应力而不破裂。由于所述血液产品的柔性，所述血液产品符合施加该血液产品之处的大部分连续轮廓。在本发明的另一个方面，所述血液产品进一步包含选自包含成纤维细胞、角质形成细胞和透明质酸的组的第一物质。据此，血液产品包括已知对于皮肤再生重要的其他细胞，从而进一步改善慢性创口的愈合，特别是在具有低的或无活性的邻近组织的区域中的伤口。皮肤的已知成分透明质酸具有提高血液产品的保水能力的潜力，以及提高血液产品在组织损失的区域掺入/浸润的潜力。在本发明的另一个方面，所述血液产品用于治疗用途。通过根据前述的方法可获得的血液产品用于治疗使用的用途。在本发明的另一个方面，所述血液产品用于制造用于治疗剂使用的药物。在本发明的另一个方面，所述血液产品用于伤口的治疗。通过根据前述的方法可获得的血液产品用于伤口治疗的用途。在本发明的另一个方面，所述血液产品用于制造用于伤口治疗的药物。据此，可获得血液产品，其特别适合于制造用于伤口治疗的药物。通过对伤口施用由第三层限定的第二外表面，所述伤口被保持和/或维持基本上无菌，例如，免于感染，因为第三层包含白细胞的大部分，其是第一活性细胞，因而控制感染和吸引其他细胞，包括巨噬细胞，而第二层包含血小板的大部分，其包含刺激伤口愈合和/或成粒作用的生长促进因子，而血液产品的第一层包含血纤蛋白的大部分，因而所述血液产品的第一外表面提供了对抗来自环境的污染的有效保护，所述第一层进一步包含生长促进因子，其随着时间的过去释放。通过向伤口施用由第三层定义的第二外表面，所述伤口被保持和/或维持基本上没有感染，因为所述第三层包含白细胞的大部分，所述白细胞容易从所述产品释放。白细胞是保护身体对抗感染和外来物体的免疫系统的细胞，因而它们控制感染并进一步吸引其他细胞，包括巨噬细胞。所述第二层包含血小板的大部分，其包含刺激细胞的生长促进因子。由于白细胞将快速地从产品释放，所述第二层将面向伤口表面用于生长促进物质向伤口的最佳递送。血液产品的第一层包含血纤蛋白的大部分，因而所述血液产品的第一外表面提供了对抗来自环境的污染的有效保护；所述第一层此外包含生长促进因子，其随着时间的过去释放。在本发明的另一个方面，所述血液产品用于自体使用。通过根据前述的方法可获得的血液产品用于自体使用的用途。 在本发明的另一个方面，所述血液产品用于制造自体药物。本发明还涉及用于外科使用，例如，区域的封闭、防止外科手术后粘附和/或在吻合术操作中使用的血液产品，和/或根据前述的血液产品用于外科使用的用途。在本发明的另一个方面，所述血液产品用于吻合术。通过根据前述的方法可获得的血液产品用于吻合术的用途。在本发明的另一个方面，所述血液产品用于制造用于吻合术的药物。
本发明还涉及用于制备根据权利要求1-8的任一项的血液产品的血液产品制备容器装置，其中所述血液产品制备容器装置包含聚酰胺和/或聚氨基甲酸酯。据此，提供了一种血液产品制备容器装置，其激活全血的凝血，或更具体地提供补体激活，同时包含聚合材料，由于聚合物的易碎性和/或成本，其相对玻璃容器是优选的，由于其他polymere容器的无凝血活性的性质，相对于其他polymere容器是优选的。聚酰胺和/或聚氨基甲酸酯激活全血的凝血的事实是令人惊讶的，提供了对典型的已知玻璃容器装置和无凝血活性的 polymere容器装置的更好替代，因为血液产品制备容器装置组合了已知的玻璃容器装置和 polymere容器装置的优点。本发明还涉及根据权利要求58的血液产品制备容器装置用于制造根据权利要求 1-8的任一项的血液产品的用途。本发明还涉及血液产品制备容器装置，其中所述血液产品制备容器装置包含聚酰胺和/或聚氨基甲酸酯。据此，提供了一种血液产品制备容器装置，其激活全血的凝血，或更具体地提供补体激活，同时包含聚合材料，由于聚合物的易碎性和/或成本，其相对玻璃容器是优选的，由于其他polymere容器的无凝血活性的性质，相对于其他polymere容器是优选的。聚酰胺和/或聚氨基甲酸酯激活全血的凝血的事实是令人惊讶的，提供了对典型的已知玻璃容器装置和无凝血活性的polymere容器装置的更好替代，因为血液产品制备容器装置组合了已知的玻璃容器装置和polymere容器装置的优点。本发明还涉及根据权利要求60的血液产品制备容器装置用于制造血液产品的用途。附图的简要说明
以下参考附图详细解释本发明，在附图中
附
图1显示了根据本发明的容器装置的第一实施方式的横截面图， 附图2显示了根据本发明的容器装置的第二实施方式的横截面图， 附图3显示了根据本发明的容器装置的第三实施方式的横截面图， 附图4显示了根据本发明的容器装置的第四实施方式的横截面图， 附图5显示了根据本发明的容器装置的第一实施方式的横截面图， 附图6显示了根据本发明的容器装置的第二实施方式的横截面图， 附图7显示了根据本发明的容器装置的第三实施方式的横截面图， 附图8显示了根据本发明的容器装置的第四实施方式的横截面图， 附图9说明了根据本发明的血液产品的实施方式的横截面图，以及附图10显示了根据本发明的血液产品的实施方式的横截面图。详细说明
附图1到4分别说明了容器装置1的第一、第二、第三和第四实施方式。四个实施方式中的容器装置1包含具有内表面3的空腔。所述空腔由壁4、闭合端12和可通过盖子2闭合的开口端限定。容器装置1包含一定体积的全血5，通过固定在容器装置1的开口端上的盖子2闭合于周围环境。容器装置1可以由任何材料制成，可以选择所述材料，从而容器装置1的材料由于经由内表面3与全血5接触而或者激活全血5凝结级联，这是附图1中第一实施方式和附图3中第三实施方式的情况。做为选择，可以选择容器装置1的材料，从而相对于全血5的凝血级联所述材料是无活性的，这是附图2中第二实施方式和附图3中第四实施方式的情况，其中由激活血液5凝血级联的材料制得的物体7被添加到全血5中，从而物体7被用于激活全血5的凝血级联。在四个实施方式中容器装置1的内表面3可以被包被和/或表面处理，以降低内表面3和血液5的任何成分之间的摩擦。此外，可以选择容器装置1的材料，从而获得内表面3和血液5的任何成分之间的低摩擦，例如，通过选择具有低的蛋白结合能力的材料。在附图3和4中显示的第三和第四实施方式中，浓集装置8， 例如，滤过器，被置于容器装置1中，从而血液产品10相对所述浓集装置被浓集。浓集装置8可以被锁定在容器装置1的闭合端12，在过程的开始部分，红血球位于此处。在以后的时点，浓集装置8可以被释放，如果所述浓集装置8的密度低于血浆的密度，所述浓集装置将被逼向血浆的顶部。通过除去盖子2，血液产品10可以从容器装置1中取出。浓集装置8或浓集装置的一部分，可以用于在从容器装置1转移期间支持血液产品 10。浓集装置8可以被锁定在容器装置1的闭合端12，在过程的开始部分，红血球位于此处。在以后的时点，浓集装置8可以被释放，如果所述浓集装置8的密度低于血清的密度，所述浓集装置将被逼向血清的顶部。通过除去盖子2，血液产品10可以从容器装置1中取出。浓集装置8或浓集装置的一部分，可以用于在从容器装置1转移期间支持血液产品 10。在所有四个实施方式中的全血5经历所说明的向下作用的离心力6，然而离心力6 不限于在所显示的方向作用。离心力6作为分离手段起作用，因为全血5的成分具有不同的密度，因而将不同地响应离心力6。附图1到4说明了在仅施加离心力6的时点容器装置1的四个实施方式，因此全血5的分离是不可见的，而附图5到8分别显示了离心力6已经作用了足够久和足够量的时点容器装置1的第一、第二、第三和第四个实施方式，因此全血5被分离成血清9，血液产品10和红血球11。附图1到4说明了在仅施加离心力6的时点容器装置1的四个实施方式，因此全血5的分离是不可见的，1处在离心力6已经作用足够长和足够量的时间点，因此全血5被分离成血清9 (这个血清部分中分布着血纤蛋白)，血小板和白细胞层10和红血球11。在以后的时点，浓集装置8可以被释放，如果浓集装置8的密度低于血清的密度，所述浓集装置将被逼向血清的顶部，从而从壁上释放血纤蛋白并浓集所述血纤蛋白。通过除去盖子2， 血液产品10可以从容器装置1中取出。浓集装置8或浓集装置的一部分，可以用于在从容器装置1转移期间支持血液产品10。附图9说明了包含第一层21、第二层22和第三层23的血液产品10的示意性性横截面图，其中第二层邻接第一层21和第三层23。第一层21限定了血液产品10的第一外表面M，第三层23限定了血液产品10的第二外表面。第一层21包含血纤蛋白的大部分，而第二层22包含血小板的大部分，第三层23包含白细胞的大部分。因而，血液产品10具有明确限定的多层结构，每个层具有不同的组成，因而具有不同的功能。附图10显示了通过利用由聚丙烯制成的试管作为容器装置，实验上获得的血液产品的横截面图。已经参考优选的实施方式描述了本发明。然而，本发明的范围不限于例举的实施方式，可以进行改变、组合和修饰而不背离本发明的范围。实施例实施例1
1.取用塑料容器(例如，2 ml微离心管)，添加凝血触发剂，例如，4个玻璃珠(直径
2 mm)。2.将血抽入塑料容器中。3.翻滚混合血液和凝血激活物2分钟。4.在16200 g旋转容器20分钟。5.此后，血液产品将在红血细胞和血清之间的层中形成。6.利用钳子取出血液产品。在这种方法中，需要的旋转时间和旋转速度将取决于激活的能量。例如，如果凝血活化是高的，细胞必需在它们截留在血纤蛋白网络中之前分离，这将需要高旋转速度。由于高旋转速度，旋转时间可以是短的。实施例2
1.取标准的50 ml离心试管容器和加入凝血触发剂，例如，玻璃珠。2.将血液抽取到离心试管中。3.混合所述试管中的血液1分钟。4.在3000 g旋转所述试管20分钟。5.打开所述盖子，从壁上松脱血纤蛋白(在顶部部分在血清中形成)(利用薄的塑料杆或针头)。6.在3000 g旋转样品另外5分钟。7.此后，血液产品将在红细胞和血清之间的层中形成。8.利用钳子取出血液产品实施例3
1.取由聚酰胺或聚氨基甲酸酯制备的20ml容器(内径26 mm)
2.添加盖子并在容器内产生真空
3.将针头插入患者中
4.将针头连接到容器而不损失真空度
5.借助真空度向所述塑料容器抽取血液
6.在15000g旋转试管12分钟
7.此后，血液产品将在红细胞和血清之间的层中形成。8.除去盖子，用钳子取出血液产品实施例4
1.取由聚酰胺或聚氨基甲酸酯制备的20ml容器(内径26 mm)
2.将盘片置入容器的底部。盘片的密度应当小于1，优选的尽可能低。3.将盘片固定在容器的底部，例如，压缩容器的壁。4.添加盖子并在容器内产生真空
5.将针头插入患者中
6.将针头连接到容器而不损失真空度
7.借助真空度向所述塑料容器抽取血液8.在3000 g旋转试管8分钟。在这个阶段，白细胞将处在红血细胞的顶部，血纤蛋白将在整个上部的血清层聚合，因为g力是低的，不能将它压缩在血小板的上部。9.释放底部中的盘片
10.在3000 g旋转试管2分钟。这将使得盘片移动到顶部，从而采集白细胞和血小板并将血纤蛋白层压缩到一个片层中。11.除去盖子并取出血液产品，其位于容器的顶部实施例5
1.取由聚酰胺或聚氨基甲酸酯制备的20ml容器(内径26 mm)
2.将盘片置入容器的底部。盘片的密度应当小于1，优选的尽可能低。3.将盘片固定在容器的底部，例如，通过压缩容器的壁。4.在容器内产生真空，添加盖子
5.将针头插入患者中
6.将针头连接到容器而不损失真空度
7.借助真空度向所述塑料容器抽取血液
8.在3700g旋转试管3分钟。在这个阶段，白细胞将处在红细胞的顶部，血纤蛋白将在整个上部的血清层聚合，因为g力是低的，不能将它压缩在血小板的上部。9.等待8分钟。10.释放底部中的盘片
11.在3000 g旋转试管2分钟。这将使得盘片移动到顶部，从而采集白细胞和血小板并将血纤蛋白层压缩到一个片层中。12.除去盖子并取出血液产品，其位于容器的顶部
根据上述实施例显现的是，凝血激活、旋转速度(g)、旋转时间、旋转之间的静止时间的组合可以在某些界限内变化。这些在以下的表格中说明
凝血激活旋转速度1.旋转时间在1次旋转之后或期间的凝血时间2.旋转低低长长是‘荀低低长长是,如果粘附到容器壁的血纤蛋白被机械地从壁上释放,可以是低的,或对壁的粘附是低的。低短长是‘荀长短无短短是‘荀
如果用盘片处理
凝血激活旋转速度1.旋转时间在1次旋转之后或期间的凝血时间2.旋转盘片被释放低低长长低低短长低长短低短短低
实施例6-相对离心力和时间的优化
1.全血抽取到 6 ml EDTA 试管(Vacutainer，BD )中。2.由聚酰胺或聚氨基甲酸酯制备的20 ml容器(内径26 mm)用18 ml填充，在不同的RCF下旋转不同的时间。3.在上述旋转时间之后，样品广300 ul)通过注射器在底部(高于底部约5 mm) 和顶部(表面下方约5 mm)采集，之后继续旋转获得下一个样品。底部样品用D-PBS 1:1稀释。4.样品通过自动化细胞计数(XE 2100, Sysmex公司)来分析，计算原始样品中的细胞数量。结果以每ml的细胞百万数给出。作为时间(min)的函数，在给定的相对离心力(g)下离心的血液的上部(顶部)和下部(底部)中每毫升的血小板百万数
权利要求
1.一种血液产品(10)，包含来自全血的成分，特别是血纤蛋白、血小板和白细胞，所述血液产品(10)包含第一层(21)、第二层(22)和第三层(23)，所述第二层(22)邻接所述第一层(21)和所述第三层(23)，所述第一层(21)限定了所述血液产品(10)的第一外表面(24)， 所述第三层(23 )限定了所述血液产品(10 )的第二外表面(25 )，所述第一层(21)包含血纤蛋白的大部分，所述第二层(22)包含血小板的大部分，所述第三层(23)包含白细胞的大部分。
2.根据权利要求1的血液产品，其中包含在所述血液产品(10)中的所述血纤蛋白的大部分被包含在所述第一层(21)中。
3.根据权利要求1或2的血液产品，其中包含在所述血液产品(10)中的血小板的大部分被包含在所述第二层(22)中。
4.根据权利要求1、2或3的血液产品，其中包含在所述血液产品(10)中的白细胞的大部分被包含在所述第三层(23)中。
5.根据前述权利要求的任一项的血液产品，其中所述血液产品(10)完全由来自全血的成分组成。
6.根据前述权利要求的任一项的血液产品，其中所述血液产品(10)是自体的。
7.根据前述权利要求的任一项的血液产品，其中所述血液产品(10)是柔性的。
8.根据前述任一项的血液产品，其中所述血液产品(10)进一步包含第一物质，所述第一物质选自包含成纤维细胞、角质形成细胞和透明质酸的组。
9.用于治疗剂用途的根据权利要求1-8的任一项的血液产品。
10.根据权利要求1-8的任一项的血液产品用于制造用于治疗使用的药物的用途。
11.用于伤口的治疗的根据权利要求1-8的任一项的血液产品。
12.根据权利要求1-8的任一项的血液产品用于制造用于伤口治疗的药物的用途。
13.用于自体使用的根据权利要求1-8的任一项的血液产品。
14.根据权利要求1-8的任一项的血液产品用于制造自体药物的用途。
15.用于外科使用的根据权利要求1-8的任一项的血液产品。
16.根据权利要求1-8的任一项的血液产品用于制造用于外科使用的药物的用途。
17.—种从一定体积的全血(5)制备血液产品(10)的方法，所述方法包括以下步骤a)将所述体积的全血(5)置于容器装置(1)中，所述容器装置(1)包含限定内表面(3 ) 的第一材料，所述全血(5 )在其中与所述内表面接触，b)激活所述全血(5)的凝血，c )通过作用于置入所述容器装置(1)的全血(5 )的离心力(6 )将所述全血(5 )分离成红血球(11)、血清(9)和血液产品(10)，从而由于所述红血球(11)、血液产品(10)和血清 (9)之间密度的差异，所述全血(10)分离成包含红血球(11)、血液产品(10)和血清(9)的层，所述血液产品(10)包含血纤蛋白、白细胞和血小板，所述施加的离心力(6)至少是重力的1000倍大，例如，g，作用于所述全血，以及d )从所述容器装置(1)取出所述血液产品(10 )。
18.根据权利要求17的方法，其中从所述全血提取血纤蛋白的所述方法的产率是至少高于60%。
19.根据权利要求17或18的方法，其中从所述全血提取白细胞的所述方法的产率是至少高于50%。
20.根据权利要求17，18或19的方法，其中从所述全血提取血小板的所述方法的产率是至少高于60%。
21.根据权利要求17-20的任一项的方法，其中所述离心力被施加至少30秒。
22.根据权利要求17-21的任一项的方法，其中所述血液产品(10)完全由来自全血的成分组成。
23.根据权利要求17-22的任一项的方法，其中所述步骤b)中的凝血通过限定所述内表面(3)的第一材料来激活。
24.根据权利要求17-23的任一项的方法，其中步骤b)中的凝血通过使所述全血(5) 暴露于物体(7)，例如玻璃珠来激活。
25.根据权利要求17-24的任一项的方法，其中所述容器装置(1)的内表面(3)的第一材料选自包含聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、聚酰胺、丙烯腈丁二烯苯乙烯、苯乙烯、修饰的苯乙烯、聚氨基甲酸酯和其他聚合材料的组。
26.根据权利要求17-25的任一项的方法，其中所述容器装置(1)的内表面(3)是表面处理的，例如，包被的，以降低所述血液产品(10)和所述第一材料的内表面(3)之间的摩擦。
27.根据权利要求17-26的任一项的方法，其中所述离心力(6)大于所述内表面(3)和所述血液产品(10)之间作用的附着力。
28.根据权利要求17-27的任一项的方法，其中附着于所述内表面(3)的所述血液产品 (10 )在步骤c )期间从所述内表面(3 )脱离，至少一次。
29.根据权利要求17-28的任一项的方法，其中所述方法进一步包括浓集步骤，其中所述血液产品(10)通过置入所述容器装置(1)中的浓集装置(8)，例如滤过器来浓集。
30.根据权利要求17-29的任一项的方法，其中所述方法进一步包括分离步骤，其中所述红血球(11)在步骤C)期间从所述血液产品(10)分离。
31.根据权利要求17-30的任一项的方法，其中所述方法进一步包括洗涤步骤，在其中所述血液产品(10)被洗涤，从而附着到所述血液产品(10)的基本上所有的红血球(11)和 /或血清(9)被分离。
32.根据权利要求17-31的任一项的方法，其中所述容器装置(1)是包含可通过可分开的盖子(2)闭合的开口端以及闭合端(12)的管(4)。
33.根据权利要求17-32的任一项的方法，其中步骤b)先于步骤a)。
34.根据权利要求17-33的任一项的方法，其中步骤b)在步骤a)之前至少1分钟发生。
35.根据权利要求17-34的任一项的方法，其中步骤b)与步骤c)同时发生。
36.根据权利要求17-35的任一项的方法，其中选自包含成纤维细胞、角质形成细胞和透明质酸的组的第一物质被添加给所述全血。
37.根据权利要求17-36的任一项的方法，其中所述浓集装置(8)，例如，滤过器，具有第一固定位置和第二位置。
38.根据权利要求17-37的任一项的方法，其中所述浓集装置(8)，例如，滤过器，通过所述容器装置(1)壁中的变形被固定在所述第一固定位置。
39.根据权利要求17-38的任一项的方法，其中使用包含血纤蛋白的血浆和包含白细胞与血小板的暗黄覆盖层代替全血(5 )。
40.根据权利要求17-39的任一项的方法，其中所述方法在15分钟内进行。
41.根据权利要求17-40的任一项的方法，其中通过所述方法获得的血液产品(10)是根据权利要求1-8的任一项的血液产品(10)。
42.—种可通过权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品(10)，包含来自全血 (5)的成分，特别是血纤蛋白、血小板和白细胞，所述血液产品(10)包含第一层(21)、第二层(22)和第三层(23)，所述第二层(22)邻接所述第一层(21)和所述第三层(23)，所述第一层(21)限定了所述血液产品(10)的第一外表面(24)，所述第三层限定了所述血液产品(10)的第二外表面(25)，所述第一层(21)包含血纤蛋白的大部分，所述第二层(22)包含血小板的大部分，所述第三层(23)包含白细胞的大部分。
43.一种可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品，其中包含在所述血液产品(10)中的血纤蛋白的大部分被包含在所述第一层(21)中。
44.一种可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品，其中包含在所述血液产品(10)中的血小板的大部分被包含在所述第二层(22)中。
45.一种可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品，其中包含在所述血液产品(10)中的白细胞的大部分被包含在所述第三层(23)中。
46.一种可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品，其中所述血液产品(10)完全由来自全血(5)的成分组成。
47.一种可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品，其中所述血液产品(10)是自体的。
48.一种可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品，其中所述血液产品(10)是柔性的。
49.一种可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品，其中所述血液产品(10)进一步包含第一物质，所述第一物质选自包含成纤维细胞、角质形成细胞和透明质酸的组。
50.一种用于治疗用途的可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品。
51.可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品用于制造用于治疗用途的药物的用途。
52.一种用于伤口的治疗的可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品。
53.可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品用于制造用于治疗伤口的药物的用途。
54.一种用于自体使用的可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品。
55.可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品用于制造自体药物的用途。
56.一种用于外科使用的可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品 ο
57.可通过根据权利要求17-41的任一项的方法获得的血液产品用于制造用于外科使用的药物的用途。
58.一种制备根据权利要求1-8的任一项的血液产品的血液产品制备容器装置(1)，其中所述血液产品制备容器装置(1)包含聚酰胺和/或聚氨基甲酸酯。
59.根据权利要求58的血液产品制备容器装置(1)用于制造根据权利要求1-8的任一项的血液产品(10)的用途。
60.血液产品制备容器装置(1)，其中所述血液产品制备容器装置包含聚酰胺和/或聚氨基甲酸酯。
61.根据权利要求60的血液产品制备容器装置(1)用于制造血液产品(10)的用途。
全文摘要
血液产品(10)，制备所述血液产品的方法、可通过所述方法获得的血液产品和血液产品制备容器装置。所述血液产品包含来自全血的成分，特别是血纤蛋白、血小板和白细胞。所述血液产品(10)包含第一层(21)、第二层(22)和第三层(23)。所述第二层(22)邻接所述第一层(21)和所述第三层(23)。所述第一层(21)限定了血液产品(10)的第一外表面(24)，所述第三层(23)限定了所述血液产品(10)的第二外表面(25)。所述第一层(21)包含血纤蛋白的大部分，所述第二层(22)包含血小板的大部分，所述第三层(23)包含白细胞的大部分。
文档编号A61K38/36GK102202674SQ200980141866
公开日2011年9月28日 申请日期2009年8月24日 优先权日2008年8月22日
发明者E. 霍尔姆 N., 伦德奎斯特 R. 申请人:里亚普利克斯有限公司