专利名称：因子11表达的调节的制作方法
技术领域：
本发明的实施例提供了降低动物中因子11的mRNA和蛋白的表达的方法、化合物以及组合物。这些方法、化合物以及组合物可用于治疗、防止或改善血栓栓塞性并发症。
背景技术：
循环系统需要防止失血的机制，以及对抗不当血管内栓塞的机制。通常，凝血包括以可溶性纤维蛋白原转化为不溶性纤维蛋白凝胶为终点的级联反应。级联反应的步骤涉及非活性酶原向活性酶的转化。然后活性酶再催化级联反应的下一步骤。凝血级联反应凝血级联反应可能通过两条支路启动，作为初始通路的组织因子通路(也称为 “外源性通路”)，以及接触激活通路(也称为“内源性通路”)。组织因子通路由细胞表面受体组织因子(TF，也被称为因子III)启动，后者由血管外细胞(周边细胞、心肌细胞、平滑肌细胞和角质细胞)组成型表达，并且由血管单核细胞和内皮细胞在炎症细胞因子或内毒素的诱导下表达(Drake et al. ,Am J Pathol 1989， 134:1087-1097)。TF是凝结因子Vila(—种丝氨酸蛋白酶)的高亲和力细胞受体。缺少 TF时，VIIa具有非常低的催化活性，与TF的结合对于通过变构机制赋予VIIa功能是必要的(Drake et al.，Am J Pathol 1989，134 :1087_1097)。TF-VIIa 复合物将因子 X 激活为 Xa0 Xa再与辅因子因子Va结合为凝血酶原酶复合物，后者再将凝血酶原(也被称为因子 II或因子2)激活为凝血酶(也被称为因子IIa或因子2a)。凝血酶激活血小板，将纤维蛋白原转化为纤维蛋白，通过激活因子XIII促进纤维蛋白交联，然后在TF暴露于血管外细胞的位点形成稳定的栓塞。此外，凝血酶通过激活因子V和VIII来增强凝血级联反应。接触激活通路由因子XII向XIIa的活化所引起。因子XIIa将XI转化为XIa，而 XIa将IX转化为IXa。IXa与辅因子VIIIa结合，将X转化为Xa。当因子Xa与因子Va结合而将凝血酶原(因子II)转化为凝血酶(因子IIa)时，两条通路在这一点汇合。凝血抑制。至少有三种机制控制凝血级联反应，即活化蛋白C、抗凝血酶和组织因子通路抑制剂的作用。活化蛋白C是一种能降解辅因子Va和VIIIa的丝氨酸蛋白酶。蛋白C由凝血酶和血栓调节蛋白一起激活，行使功能需要辅酶蛋白S。抗凝血酶是一种能抑制凝血酶、Xa、 XIIa、XIa和IXa等丝氨酸蛋白酶的丝氨酸蛋白酶抑制剂(丝氨酸蛋白酶抑制剂)。组织因子通路抑制剂抑制Xa和TF-VIIa复合物的作用(Schwartz AL et al. ,Trends Cardiovasc Med. 1997 ；7 :234_239·)。
疾病血栓形成是血栓的病理学发展，当血凝块迁移至个体的另一部分并且干扰器官功能时，栓塞出现。血栓栓塞可能导致如深静脉血栓、肺栓塞、心肌梗塞和中风等状况。 很明显，血栓栓塞是发病的一个主要原因，其每年影响超过两百万个美国人(Adcock et al. American Journal of Clinical Pathology. 1997 ； 108 :434_49)。尽管大部分血栓形成的病例是因为例如手术、癌症以及不动等后天的外在问题，一些病例则是因为遗传易感性， 比如抗磷脂综合症和常染色体显性遗传，因子V Leiden (Bertina RM et al. Nature 1994 ； 369 64-67.)。治疗。最常用抗凝剂华法林、肝素以及低分子量肝素(LMWH)都有显著的缺点。华法林通常用于治疗患有心房颤动的病人。药物与包括因子II、VII、IX和X等维生素K依赖的凝结因子相互作用。抗凝剂蛋白C和S也被华法林所抑制。华法林与包括如胺碘酮等心房颤动治疗药物的其他药物相互作用的事实使华法林的药物治疗进一步变得复杂。因为华法林的治疗难以预测，为了检测任何异常出血迹象，必须对病人小心监测。肝素通过激活对凝血酶和因子X都抑制的抗凝血酶来作用(Bjork I, Lindahl U. Mol Cell Biochem. 1982 48:161-182.)。肝素治疗可能引起免疫反应，这使血管中血小板聚集而导致血栓形成。这种副作用被称为肝素诱导的血小板减少症(HIT)，需要对病人监测。肝素的延长治疗也可能导致骨质疏松症。LMWH也可以抑制因子2，但程度弱于未分级肝素(UFH)。LMWH与HIT发展有关。因此，现有的抗凝血药缺少可预测性和特异性，所以需要小心监测病人以防止如出血并发症等不良副作用。目前没有仅针对内源性或外源性通路的抗凝剂。
发明内容
此处提供了调节因子11的mRNA和蛋白的表达的方法、化合物以及组合物。在一些实施例中，因子11特异性抑制剂调节因子11的mRNA和蛋白的表达。在一些实施例中， 因子U特异性抑制剂是核酸、蛋白或小分子。在一些实施例中，调节作用在细胞或组织中发生。在一些实施例中，细胞或组织在动物中。在一些实施例中，所述动物是人。在一些实施例中，因子11的mRNA水平被降低。 在一些实施例中，因子11的蛋白水平被降低。这种降低可以时间依赖的方式或剂量依赖的方式发生。本申请也提供了用于防止、治疗和改善疾病、紊乱和状况的方法、化合物以及组合物。在一些实施例中，这些疾病、紊乱和状况是血栓栓塞性并发症。这种血栓栓塞性并发症包括各类血栓形成、栓塞和血栓栓塞。在一些实施例中，这些血栓栓塞性并发症包括深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中风。这些疾病、紊乱和状况通常具有一个或多个危险因素、原因或结果。血栓栓塞性并发症发展的某些危险因素和原因包括不动、手术(尤其是矫形手术)、恶性肿瘤、怀孕、高龄、使用口服避孕药、心房颤动、先前的血栓栓塞性并发症、慢性炎症疾病和遗传或后天的凝血紊乱。血栓栓塞性并发症发展相关的某些结果包括通过受影响血管的血流降低、组织坏死以及死亡。在一些实施例中，治疗方法包括将因子11特异性抑制剂给药于需要的个体。发明的详细说明在此声明，前面的一般说明和后面的详细说明都仅仅是示例性和说明性的，不限制本发明，这是可以理解的。此处，单数的使用包括复数，除非另有特别指明。如此处所用， 使用“或”意味着“和/或”，除非另有特别指明。而且，使用术语“包括”以及如“包括”和 “被包括”等其他形式，不是限制性的。如“元素”或“组分”等术语涵盖包括一个单元的元素和组分，也涵盖包括一个以上单元的元素和组分，除非另有特别指明。此处所用的分段标题仅用于组织的目的，不应被解释为限制所描述的主题。本申请中引用的所有文件或文件部分，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍和论文，其在此被套论的部分被作为参考，并且其全部内容被并入本申请。定义除非提供特别定义，此处描述的分析化学、合成有机化学和医药化学的相关术语以及其流程和技术是那些本领域所熟知和通用的。在化学合成和化学分析中可使用标准技术。本公开中准许引用的所有专利、申请、已发表的申请和其他出版物、从如国家生物技术信息中心(NCBI)等数据库中获得的GENBANK登录号和相关序列信息以及其他数据，其在此被套论的部分被作为参考，并且这些部分的全部内容被并入本申请。除非另行指出，下列术语具有下列含义“2’ -0-甲氧乙基”(也表示为2’ -MOE和2’ -O(CH2)2-OCH3)指的是呋喃 环的2’位置的0-甲氧-乙基修饰。2’ -0-甲氧乙基修饰的糖是修饰糖。“2’ -0-甲氧乙基核苷酸”是指包含2’ -0-甲氧乙基修饰糖基的核苷酸。“5-甲基胞嘧啶”是指5’位置连有甲基修饰的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶是修饰的核
苷碱基。“活性药剂”是指当给个体给药时能够提供治疗益处的药物组合物中的物质。例如，在一些实施例中，针对因子11的反义寡核苷酸是一种活性药剂。“活性靶区”或“靶区”是指一个或多个活性反义化合物针对的区域。“活性反义化合物”是指能降低目标核酸水平或蛋白质水平的反义化合物。“随附给药”是指两种试剂以它们的药理学效果在病人体内同时都显现的任何方式共同给药。随附给药不需要在单一药物组合物中、相同剂型中或以相同给药途径将两种试剂给药。两种试剂的效果不需要同时显现。效果只需要在一段时间重叠，不需要共同延伸。“给药”是指将一种药剂提供给个体，包括但不限于医学专业人员的给药以及自我给药。“改善”是指与疾病、紊乱或状况关联的至少一种指标、迹象或症状的减轻。指标的严重程度可以通过本领域普通技术人员已知的主观或客观的测定来确定。“动物”是指人或非人动物，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、狗、猫、猪和非人灵长类，包括但不限于猴和黑猩猩。“解毒化合物”指的是能降低任何反义介导活性的强度或持续时间的化合物。“解 毒寡核苷酸”是指包括与反义化合物互补且能与之杂交的寡核苷酸的解毒化合物。“解毒蛋白，，是指包括肽的解毒化合物。“抗体”指的是以通过某种方式与抗原特异性反应为特征的分子，其中抗体和抗原各自根据对方来定义。抗体可能是指完整的抗体分子或其中任何片段或区域，如重链、轻链、Fab区段以及Fc区段。“反义活性”是指反义化合物与目标核酸相杂交所引起的任何可检测或可测量的活性。在一些实施例中，反义活性是目标核酸或该目标核酸编码的蛋白质的量或表达的减少。“反义化合物”是指能够通过氢键与目标核酸相杂交的寡聚化合物。“反义抑制”是指在与目标核酸互补的反义化合物存在时，与没有反义化合物时的目标核酸水平或目标蛋白水平相比，目标核酸水平或目标蛋白水平降低。“反义寡核苷酸”是指具有能与目标核酸的相应区域或片段杂交的核苷碱基序列的单链寡核苷酸。“双环糖”是指通过两个非偕式环原子桥接而修饰的呋喃环。双环糖是一种修饰的糖。“双环核酸”或“BNA”指的是一种核苷或核苷酸，其中核苷或核苷酸的呋喃糖部分包括一个连接呋喃糖环上两个碳原子的桥键，从而形成一个双环系统。“帽结构”或“末端帽部分”是指包含在反义化合物任一末端的化学修饰。“化学独特区域”指的是反义化合物中在某些方面在化学上不同于相同反义化合物的另一区域的区域。例如，具有2’ -0-甲氧乙基核苷酸的区域在化学上不同于含有无 2’ -0-甲氧乙基修饰的核苷酸的区域。“嵌合型反义化合物”是指具有至少两个化学独特区域的反义化合物。“共同给药”是指将两种或多种药剂给药于一个个体。两种或多种药剂可以在单一药物组合物中，也可能在分开的药物组合物中。两种或多种药剂中的每一种可以通过相同或不同的给药途径给药。共同给药涵盖平行或顺序给药。“凝结因子”是指凝血级联反应中的因子I、II、III、IV、V、VII、VIII、IX、X、XI、 XII、XIII或TAFI中的任一个。“凝结因子核酸”是指编码凝结因子的任意核酸。例如，在一些实施例中，凝结因子核酸非限制地包括编码凝结因子的DNA序列(包括含内含子和外显子的基因组DNA)、由编码凝结因子的DNA转录的RNA序列以及编码凝结因子的mRNA序列。“凝结因子mRNA”是指编码凝结因子蛋白的mRNA。“互补性”是指第一核酸与第二核酸的核苷碱基间的配对能力。“相邻核苷碱基”是指彼此直接相邻的核苷碱基。“稀释剂”是指组合物中无药理学活性，但药学必需或需要的成分。例如，在注射的组合物中的稀释剂可能是液体，比如盐溶液。“剂量”是指在单一给药中或规定时间期间内提供的药剂的规定量。在一些实施例中，一个剂量可能通过一份、两份或多份丸药、片剂或注射剂来给药。例如，在一些需要皮下给药的实施例中，所需剂量需要通过一次注射不容易容纳的体积，因此，可以使用两次或多次注射以达到所需剂量。在一些实施例中，药剂是通过在延长的时间期间或连续输液来给药的。剂量可以按小时、日、周或月来规定。 “有效量”是指在需要药剂的个体中足以实现所需生理学结果的活性药剂量。根据待处理个体的健康与生理状况、处理个体的分类群、组合物的剂型、个体医疗状况的评估以及其他有关因素，个体间的有效量可能有变化。“因子11核酸”、“因子XI核酸”、“F 11核酸”或“F XI核酸”是指编码因子11的任意核酸。例如，在一些实施例中，因子11核酸包括编码因子11的DNA序列、由编码因子 11的DNA转录的RNA序列(包括含内含子和外显子的基因组DNA)以及编码因子11 WmRNA 序列。“因子1 ImRNA，，是指编码因子11蛋白的mRNA。“因子11特异性抑制剂”指的是能在分子水平上特异性抑制因子11的mRNA和/ 或因子11蛋白的表达的任何试剂。例如，因子11特异性抑制剂包括能够抑制因子11的 mRNA和/或因子11蛋白的表达的核酸(包括反义化合物)、肽、抗体、小分子以及其他试剂。 在一些实施例中，通过特异性调节因子11的mRNA表达和/或因子11蛋白的表达，因子11 特异性抑制剂可能影响凝血级联反应中的其他组分，包括下游组分。类似地，在一些实施例中，因子11特异性抑制剂可能影响动物中其他分子过程。“因子11特异性抑制剂解毒剂”是指能降低因子11特异性抑制剂效果的化合物。 在一些实施例中，因子11特异性抑制剂解毒剂挑选自因子11肽；因子11解毒剂寡核苷酸，包括与因子11反义化合物互补的因子11解毒化合物；以及影响内源性或外源性凝结通路的任何化合物或蛋白。“完全互补”或“100%互补”是指第一核酸的每个核苷碱基在第二核酸中具有一个互补的核苷碱基。在一些实施例中，第一核酸是反义化合物，目标核酸是第二核酸。“Gapmer”是指一种嵌合型反义化合物，其中，具有多个支持RNase H裂解的核苷的内部区段位于具有一个或多个核苷的外部区段之间，其中，组成内部区段的核苷化学上不同于组成外部区段的核苷。内部区段可被称为“间隙区段”，外部区段可被称为“侧翼区段”。“间隙扩大的”是指在具有一到六个核苷的5’和3’侧翼区段之间并且与其直接相邻处具有12或更多个连续的2’ -脱氧核糖核苷的嵌合型反义化合物。“杂交，，是指互补的核酸分子的退火。在一些实施例中，互补的核酸分子包括反义化合物和目标核酸。“找出具有血栓栓塞性并发症风险的动物”是指找出已经诊断具有血栓栓塞性并发症的动物，或找出具有发展血栓栓塞性并发症倾向性的动物。具有发展血栓栓塞性并发症倾向性的个体包括那些具有一种或多种血栓栓塞性并发症危险因素的个体，这些因素包括不动、手术(尤其是矫形手术)、恶性肿瘤、怀孕、高龄、使用口服避孕药和遗传或后天的凝血紊乱。这种识别可能通过包括评价个体病史和标准的临床测试或评估的任何方法来完成。“直接相邻”是指在直接相邻的元素之间没有任何干扰元素。“个体”是指被挑选用于处理或治疗的人或非人动物。“核苷内连接”指的是核苷间的化学连接。“连接的核苷”是指连接在一起的相邻核苷。
“错配”或“非互补核苷碱基”指的是当第一核酸的核苷碱基不能与第二或目标核酸的相应核苷碱基配对时的情形。“修饰的核苷内连接”指的是天然存在的核苷内连接(也就是磷酸二酯键核苷内键)的替换或任意改变。“修饰核苷碱基”指的是除了腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶或尿嘧啶之外的任何核苷碱基。“未修饰的核苷碱基”是指嘌呤碱基腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G)，以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。
“修饰核苷酸”是指独立具有修饰糖基、修饰核苷内连接或修饰核苷碱基的核苷酸。“修饰核苷”是指独立具有修饰糖基或修饰核苷碱基的核苷。“修饰寡核苷酸”是指包含修饰核苷内连接、修饰糖或修饰核苷碱基的寡核苷酸。“修饰糖”指的是从天然糖的替换或改变。“结构域”是指反义化合物中化学独特区域的模式。“天然存在的核苷内连接”是指3'至5'磷酸二酯键连接。“天然糖基”是指在DNA(2’ -H)或RNA(2’ -OH)中发现的糖。“核酸”指的是由单体核苷酸组成的分子。核酸包括核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)、单链核酸、双链核酸、小干扰核糖核酸(siRNA)以及微RNA(miRNA)。“核苷碱基”是指能与另一核酸的碱基配对的杂环基团。“核苷碱基序列”是指不依赖于任何糖、连接或核苷碱基修饰的连续核苷碱基的顺序。“核苷”是指连接于糖的核苷碱基。“模拟核苷”包括用于替代寡聚化合物的一个或多个位点上的糖或糖和碱基且未必是连接的那些结构，例如具有吗啉基、环己烯基、环己基、四氢吡喃基、如非呋喃糖单元的双环或三环模拟糖的模拟核苷。模拟核苷包括用于替代寡聚化合物的一个或多个位点上的核苷和连接的那些结构，例如肽核酸或吗啉(通过-N(H)-C( = 0)-0-或其他非磷酸二酯键连接而连接的吗啉)。糖替代物与稍广义术语模拟核苷有重叠，但仅仅倾向于用于表示糖单元(呋喃糖环)的替代。此处提供的四氢吡喃环是糖替代物例子的展示，其中，呋喃糖基团被四氢吡喃环系统所替代。“核苷酸”是指具有与核苷的糖部分共价连接的磷酸基团的核苷。“寡聚化合物”或“寡聚物”是指能与核酸分子的至少一个区段杂交的连接的单体亚单位的聚合物。“寡核苷酸”是连接核苷的聚合物，其中，这些核苷的每一可以是修饰或未修饰，并且彼此独立的。“肠胃外给药”是指通过注射或输液给药。肠胃外给药包括皮下给药、静脉给药、肌肉给药、动脉给药、腹腔内给药或颅内给药，比如鞘内给药或脑室内给药。“肽”是指以酰胺键连接至少两个氨基酸形成的分子。肽指多肽和蛋白质。“药物组合物”是指适于个体给药的物质的混合物。例如，药物组合物可以包含一种或多种活性药剂和无菌水溶液。“药用可接受盐”是指生理学和药学可接受的反义化合物的盐，也就是保留本体寡核苷酸的需要生物活性，但不另外赋予不需要的毒性效果的盐。 “磷硫酰连接”是指核苷间的连接，其中，一个非桥接氧原子被硫原子替代而修饰磷酸二酯键。磷硫酰连接(P = S)是修饰的核苷内连接。“部分”是指核酸中确定数量的连续(也就是连接的)核苷碱基。在一些实施例中，部分是指目标核酸中确定数量的连续核苷碱基。在一些实施例中，部分是反义化合物中确定数量的连续核苷碱基。“防止”指的是延迟或预防疾病、紊乱或状况的发生或发展几分钟到无限的时间期间。防止也指降低疾病、紊乱或状况发展的风险。“前体药物”是指以在身体或细胞内由其中的内源酶或其他化学品或条件的作用而转化为活性形式的非活化形式制备的治疗剂。“副作用”是指由治疗所引起的除了预期效果之外的生理反应。在一些实施例中， 副作用包括注射部位反应、肝功能测试异常、肾功能异常、肝脏毒性、肾脏毒性、中枢神经系统异常、肌肉疾病以及不适。例如，血清中提高的转氨酶水平可能表明肝脏毒性或肝功能异常。例如，增高的胆红素可能表明肝脏毒性或肝功能异常。“单链寡核苷酸”是指没有与互补链杂交的寡核苷酸。“可特异性杂交的”指的是反义化合物在反义寡核苷酸和目标核酸间具有足以诱导期望效果的互补度，而在期望特异性结合的条件下，也就是在体内化验和治疗处理时的生理条件下，表现出对非目标核酸最低影响或无影响。“靶向”或“被靶向”是指设计和选择与目标核酸特异性杂交并诱导预期效果的反义化合物的过程。“目标核酸”、“目标RNA”和“目标RNA转录本”都指的是能被反义化合物靶向的核酸。“目标区段”是指反义化合物靶向的目标核酸的核苷酸的序列。“5’靶向位点”指的是目标区段的最5’端核苷酸。“3’靶向位点”指的是目标区段的最3’端的核苷酸。“治疗有效量”是指为个体提供治疗益处的药剂的量。“血栓栓塞性并发症”是指涉及血栓引起的栓塞的任何疾病、紊乱或状况。这些疾病、紊乱或状况的示例包括各类血栓形成、栓塞和血栓栓塞。在一些实施例中，这些疾病、紊乱或状况包括深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中风。“处理”指的是将药物组合物进行给药以影响疾病、紊乱或状况的改变或改善。“未修饰核苷酸”是指由天然存在的核苷碱基、糖基和核苷内连接所组成的核苷酸。在一些实施例中，未修饰核苷酸是RNA核苷酸(也就是β -D-核糖核苷)或DNA核苷酸(也就是β -D-脱氧核糖核苷)。一些实施例本发明的实施例提供了降低因子11的mRNA和蛋白的表达的方法、化合物以及组合物。本发明的实施例提供了用于治疗、防止或改善需要治疗的个体中与因子11相关的疾病、紊乱和状况的方法、化合物以及组合物。也构思了用于治疗、防止或改善与因子11 相关的疾病、紊乱和状况的药剂制备的方法和化合物。与因子11相关的疾病、紊乱和状况包括血栓栓塞性并发症，如血栓形成、栓塞、血栓栓塞、深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中风。本发明的实施例提供了用于治疗、防止或改善因子11相关疾病的因子11特异性抑制剂。在一些实施例中，因子11特异性抑制剂是能够抑制因子11的mRNA和/或因子11 蛋白的表达的核酸(包括反义化合物)、肽、抗体、小分子以及其他试剂。在本发明的一些实施例中，因子11特异性抑制剂是肽或蛋白，比如但不限于J Clin Invest 1982，69 :844_852中所述的alpha 1蛋白酶抑制剂、抗凝血酶III、C1抑制剂和alpha 2纤溶酶抑制剂；Thromb Res 1987，48 145-151中所述的alpha 1抗胰蛋白酶 (alpha 1AT) ；USPPN 2008/021998 和 Blood 1998，92 :4198_206 中所述的因子 11 肽抑制剂；Thromb Res 2001，104 :451_465 中所述的MAP4-RGKWC ;Proc Natl Acad Sci 2004，101 3939-44 中所述的 beta 2 GPI ；Eur J Biochem 1999，262 :915_923 中所述的香菇蛋白酶抑制剂J Biol Chem 2004，279 :29485_29492中所述的连接蛋白酶2/beta淀粉样蛋白前体 Kunitz 结构域抑制剂(APPI)和抗凝血酶(AT)；以及 J Biol Chem 2005，280 :23523_30 中所述的抑肽酶。在本发明的一些实施例中，因子11特异性抑制剂是抗体，比如，但不限于Blood 1988,72 1748-54 中所述的 Winston-Salem(IgG3 kappa)禾Π Baltimore (IgGl kappa)； J Biol Chem 1985，260 :10714-719 中所述的 5F4、3C1 和 IFl ；Throm Haemost 1990,63 417-23 中所述的单克隆抗体；J Thromb Haem 2006，4 :1496_1501 中所述的 XI-5108 ； Thromb Res 1986,42 :225_34中所述的单克隆抗体4_1 ；以及USPN 6，566，140中例子19中所述的abcixmab抗体。在本发明的一些实施例中，因子11特异性抑制剂是小分子，比如，但不限于二丙烯基氟磷酸盐(DFP) ；USPPN 2004/0180855中例子1-7中所述的小分子抑制剂；以及J Biol Chem 2005,280 :23523_30中所述的对氨基苄脒(pAB)。本发明的实施例提供了因子11特异性抑制剂，如此处所述，可用于治疗、防止或改善血栓栓塞性并发症，如血栓形成、栓塞、血栓栓塞、深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中风。本发明的实施例提供了如此处所述的因子11特异性抑制剂在用于治疗、防止或改善血栓栓塞性并发症，如血栓形成、栓塞、血栓栓塞、深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中风的药剂生产中的使用。本发明的实施例提供了此处所述的因子11特异性抑制剂与此处所述的其他试剂或治疗方法相结合的疗法中的应用，这些疗法用于治疗、防止或改善此处所述的血栓栓塞性并发症。试剂或治疗方法可以共同给药或随附给药。本发明的实施例提供了此处所述的因子11特异性抑制剂在药剂生产中的 应用， 该药剂与此处所述的其他试剂或治疗方法相结合的疗法用于治疗、防止或改善此处所述的血栓栓塞性并发症的药剂生产。试剂或治疗方法可以共同给药或随附给药。本发明的实施例提供了此处所述的因子11特异性抑制剂在用于治疗、防止或改善此处所述的病人体内血栓栓塞性并发症的药剂生产中的应用，该病人后续被给药其他试剂或疗法。本发明的实施例提供了用于治疗、防止或改善此处所述的血栓栓塞性并发症的试剂盒，其中试剂盒包括
(i)此处所述的因子11特异性抑制剂；以及作为选择(ii)此处所述的其他试剂或治疗方法。本发明的试剂盒可以进一步包括用试剂盒以此处所述的组合治疗方法来治疗、防止或改善此处所述的血栓栓塞性并发症的说明书。本发明的实施例提供了靶向因子11核酸的反义化合物。在一些实施例中，因子11 核酸是下列发布序列中的任一个GENBANK登录号NM_000128 :3(以SEQ ID NO :1并入本申请)，GENBANK 登录号 NT_022792. 17，19598000 至 19624000 缺失(以 SEQ ID NO 2 并入本申请)，GENBANK 登录号 NM_028066. 1(以 SEQ ID NO :6 并入本申请)，外显子 1-15，GENBANK 登录号 NW_001118167. 1 (以 SEQ ID NO 274 并入本申请)。在一些实施例中，本发明提供了包含修饰寡核苷酸的化合物。在一些实施例中，本发明的化合物包括由12至30个连接核苷组成的修饰寡核苷酸。在一些实施例中，本发明的化合物可以包括含有与SEQ ID NO=I的等长部分至少 80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列的修饰寡核苷酸。在一些实施例中，本发明的化合物可以包括含有与SEQ ID NO 1的等长部分至少100%互补的核苷碱基序列的修饰寡核苷酸。在一些实施例中，本发明提供了包括含有与SEQ ID NO 1的第656位至第676位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列的修饰寡核苷酸的化合物。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO :1的第656 位至第676位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO 1的相同长度部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、 至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO=I 的相同长度部分100%互补的核苷碱基序列。当在H印G2细胞中，用RT-PCR分析方法测定， 所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)。在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸含有与SEQ ID NO :1的第665位至第687位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第665位至第687位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、 至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO 1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在!fepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少50%的抑制(例如，如例3所述)。在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO :1的第675位至第704位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第675位至第704位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、 至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述 修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO 1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在!fepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少50%的抑制(例如，如例3所述)。
在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO :1的第677位至第704位核苷碱基至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第677位至第704位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、 至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO 1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在!fepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少60%的抑制(例如，如例3所述)。
在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO 1的第678位至第697位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第678位至第697位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、 至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO 1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在!fepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少70%的抑制(例如，如例3所述)。在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO :1的第680位至第703位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第680位至第703位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID N0:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少 96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO 1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在H印G2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3和例 30所述)。在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO :1的第683位至第702位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第683位至第702位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、 至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO 1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在!fepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少90%的抑制(例如，如例3所述)。在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO :1的第738位至第759位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第738位至第759位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID N0:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少 96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO=I的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在!fepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3和例 30所述)。在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO :1的第738位至第760位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第738位至第760位核苷碱基的等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID N0:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在H印G2细胞中，用RT-PCR 分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少60%的抑制(例如，如例3所述)O 在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO :1的第738位至第762位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第738位至第762位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、 至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO 1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在!fepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少45%的抑制(例如，如例3所述)。在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO 1的第1018位至第1042位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第1018位至第1042位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID N0:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在H印G2细胞中，用RT-PCR 分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)O在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO 1的第1062位至第1089位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第1062位至第1089位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID N0:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在H印G2细胞中，用RT-PCR 分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少70%的抑制(例如，如例3所述)O在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO=I的第1062位至第1090位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第1062位至第1090位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在H印G2细胞中，用RT-PCR 分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少60%的抑制(例如，如例3所述)在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO 1的第1062位至第1091位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第1062位至第1091位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在H印G2细胞中，用RT-PCR 分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少20%的抑制(例如，如例3所述)O在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO 1的第1275位至第1301位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第1062位至第1091位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID N0:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO 1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在!fepG2细胞中，用RT-PCR 分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)O在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO 1的第1276位至第1301位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可能包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第1062位至第1091位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少 96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO 1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在!fepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80 %的抑制(例如，如例30所述)O在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO 1的第1284位至第1308位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第1062位至第1091位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID N0:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在H印G2细胞中，用RT-PCR 分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)O 在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO 1的第1291位至第1317位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO 1的第1062位至第1091位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID N0:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO :1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在H印G2细胞中，用RT-PCR 分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)O在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO 1的第1275位至第1318位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20与SEQ ID NO 1的第1275位至第1318位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID N0:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO 1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在H印G2细胞中，用RT-PCR 分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少70%的抑制(例如，如例3所述)O本发明的实施例提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸由12至30 个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包括选自SEQ ID N0:15至241中列举的核苷碱基序列的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基。本发明的实施例提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸由12至30 个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包括选自SEQ ID N0:15至269中列举的核苷碱基序列的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基。本发明的实施例提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸由12至30 个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包括选自SEQ ID N0:242至269 中列举的核苷碱基序列的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18 个或20个连续核苷碱基。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、 至少16个或至少18个选自以下的核苷碱基序列的核苷碱基ISIS Nos 22、31、32、34、36 至 38、40、41、43、51 至 53、55、56、59、60、64、66、71、73、75、96、98 至 103,105 至 109,113 至 117、119、124、127、129、171、172、174、176、178、179、181 至 197、199 至 211 和 213 至 232。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包含选自以下的核苷碱基序列ISIS Nos 22、31、32、34、36至 38、40、41、43、51至53、55、56、59、60、64、66、71、73、75、96、98至103、105至109、113至117、 119、124、127、129、171、172、174、176、178、179、181 至 197,199 至 211 和 213 至 232。在一些实施例中，修饰寡核苷酸由选自以下的核苷碱基序列所组成SEQ ID NOs 22、31、32、34、 36 至 38、40、41、43、51 至 53、55、56、59、60、64、66、71、73、75、96、98 至 103,105 至 109,113 至 117、11 9、124、127、129、171、172、174、176、178、179、181 至 197、199 至 211 和 213 至 232。 当在H印G2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少 70%的抑制(例如，如例3所述)。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、 至少16个或至少18个选自以下的核苷碱基序列的核苷碱基ISIS Nos 22、31、34、37、40、 43、51 至 53、60、98、100 至 102、105 至 109、114、115、119、171、174、176、179、181、186、188 至 193、195、196、199至210和213至232。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括选自以下的核苷碱基序列SEQ ID NOs 22、31、34、37、40、43、51 至 53、60、98、100 至 102、105 至 109、114、 115、119、171、174、176、179、181、186、188 至 193、195、196、199 至 210 和 213 至 232。在一些实施例中，修饰寡核苷酸由选自以下的核苷碱基序列所组成SEQ ID NOs 22、31、34、37、 40、43、51 至 53、60、98、100 至 102,105 至 109、114、115、119、171、174、176、179、181、186、 188至193、195、196、199至210和213至232。当在H印G2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、 至少16个或至少18个选自以下的核苷碱基序列的核苷碱基ISIS Nos 31、37、100、105、 179,190 至 193、196、202 至 207、209、210、214 至 219,221 至 224、226、227、229 和 231。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括选自以下的核苷碱基序列SEQ ID NOs 31、37、100、105、 179,190 至 193、196、202 至 207、209、210、214 至 219,221 至 224、226、227、229 和 231。在一些实施例中，修饰寡核苷酸由选自以下的核苷碱基序列所组成SEQ ID NOs 31、37、100、 105、179、190 至 193、196、202 至 207、209、210、214 至 219,221至 224、226、227、229和 231。 当在H印G2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少 90%的抑制(例如，如例3所述)。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、 至少16个或至少18个选自以下的核苷碱基序列的核苷碱基SEQ ID NOs 34、52、53、114、 115、190至213、232、242至260以及262至266。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括选自以下的核苷碱基序列SEQ ID NOs 34、52、53、114、115、190、213至232、242至260 以及262 至266。在一些实施例中，修饰寡核苷酸由选自以下的核苷碱基序列所组成SEQ ID NOs 34、52、53、114、115、190、213至232、242至260和 262至266。当在 H印G2 细胞中，用 RT-PCR 分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少70 %的抑制(例如，如例30所述)O在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、 至少16个或至少18个选自以下的核苷碱基序列的核苷碱基SEQ ID NOs 34、52、53、114、 115、190、213 至 216,218 至 226,243 至 246、248、249、252 至 259,264 和 265。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括选自以下的核苷碱基序列SEQ ID NOs 34、52、53、114、115、190、213至216、218至226、243至246、248、249、252至259、264和265。在一些实施例中，修饰寡核苷酸由选自以下的核苷碱基序列所组成SEQ ID NOs 34、52、53、114、115、190、213至216、 218 至 226、243 至 246、248、249、252 至 259、264 和 265。当在!fepG2 细胞中，用 RT-PCR 分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例30所述)O在一些实施例中 ，修饰寡核苷酸包括至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、 至少16个或至少18个选自以下的核苷碱基序列的核苷碱基SEQ ID NOs 34、190、215、 222、223、226、246和254。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括选自以下的核苷碱基序列 SEQ ID NOs 34、190、215、222、223、226、246和254。在一些实施例中，修饰寡核苷酸由选自以下的核苷碱基序列所组成SEQ ID NOs 34、190、215、222、223、226、246和254。当在 HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少90% 的抑制(例如，如示例30所述)。在一些实施例中，化合物由单链修饰寡核苷酸所组成。在一些实施例中，修饰寡核苷酸由20个连接核苷所组成。在一些实施例中，修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与SEQ ID N0:1、SEQ ID NO :2、 SEQ ID NO 6或SEQ ID NO 274的核苷碱基序列100%互补。在一些实施例中，化合物具有至少一个修饰的核苷内连接。在一些实施例中，核苷内连接是硫代磷酸核苷内连接。在一些实施例中，化合物具有至少一个包含修饰糖的核苷。在一些实施例中，至少一个修饰糖是双环糖。在一些实施例中，至少一个修饰糖包含2’ -0-甲氧乙基。本发明的实施例提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸由12至30 个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包括选自SEQ ID N0:15-241、SEQ ID NO 15-269或SEQ ID NO :242_269中所列举的核苷碱基序列的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基，其中，至少一个核苷包含修饰糖。在一些实施例中，所述至少一个修饰糖是双环糖。在一些实施例中，所述至少一个双环糖包含4’ -(CH2)n-0-2'桥联，其中η为1或 2。在一些实施例中，所述至少一个双环糖包含4’ -CH(CH3)-0_2’桥联。在一些实施例中，所述至少一个修饰糖包含2’ -0-甲氧乙基基团。本发明的实施例提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸由12至30 个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包括选自SEQ ID N0:15-241、SEQ ID NO 15-269或SEQ ID NO :242_269中所列举的核苷碱基序列的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基，包含至少一个四氢吡喃修饰核苷，其中，四氢吡喃环取代了呋喃糖环。在一些实施例中，所述至少一个四氢吡喃修饰核苷具有如下结构
在一些实施例中，化合物具有至少一个包含修饰的核苷碱基的核苷。在一些实施例中，修饰核苷碱基是5-甲基胞嘧啶。在一些实施例中，化合物的修饰寡核苷酸包括(i)由连接的脱氧核苷组成的间隙区段；(i)由连接的核苷组成的5’侧翼区段；(iii)由连接的核苷组成的3’侧翼区段，其中，间隙区段直接相邻于且位于5’侧翼区段和3’侧翼区段之间，其中，每一侧翼区段的每个核苷包含一个修饰糖。在一些这样的实施例中，修饰寡核苷酸中的每个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一些实施例中，化合物的修饰寡核苷酸包括(i)由10个连接脱氧核苷组成的间隙区段；(i)由5个连接的核苷组成的5’侧翼区段；(iii)由5个连接的核苷组成的3’侧翼区段，其中，间隙区段直接相邻于且位于 5’侧翼区段和3’侧翼区段之间，其中，每一侧翼区段的每个核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖； 其中，每个核苷内连接是磷硫酰连接。在一些这样的实施例中，修饰寡核苷酸中的每个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一些实施例中，化合物的修饰寡核苷酸包括(i)由14个连接脱氧核苷组成的间隙区段；(ii)由3个连接的核苷组成的5’侧翼区段；(iii)由3个连接的核苷组成3’侧翼区段，其中，间隙区段直接相邻于且位于5’ 侧翼区段和3’侧翼区段之间，其中，每一侧翼区段的每个核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖；其中，每个核苷内连接是磷硫酰连接。在一些这样的实施例中，修饰寡核苷酸中的每个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一些实施例中，化合物的修饰寡核苷酸包括(i)由13个连接脱氧核苷组成的间隙区段；(i)由2个连接的核苷组成的5’侧翼区段；(iii)由5个连接的核苷组成的3’侧翼区段，其中，间隙区段直接相邻于且位于 5’侧翼区段和3’侧翼区段之间，其中，每一侧翼区段的每个核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖； 其中，每个核苷内连接是磷硫酰连接。在一些这样的实施例中，修饰寡核苷酸中的每个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。本发明的实施例提供了包括修饰寡核苷酸的组合物，该修饰寡核苷酸由12至30 个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包括选自SEQ ID N0:15-241所列举的核苷碱基序列的至少12个连续核苷碱基，或其盐以及药用可接受的载体或稀释剂。本发明的实施例提供了包括修饰寡核苷酸的组合物，该修饰寡核苷酸由12至30 个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包括选自SEQ ID N0:15-269所列举的核苷碱基序列的至少12个连续核苷碱基，或其盐以及药用可接受的载体或稀释剂。本发明的实施例提供了包括修饰寡核苷酸的组合物，该修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包括选自SEQ ID N0:241-269所列举的核苷碱基序列的至少12个连续核苷碱基，或其盐以及药用可接受的载体或稀释剂。本 发明的实施例提供了方法，这些方法包括向动物给药包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包含选自SEQ ID NO :15-241所列举的核苷碱基序列的至少8个连续核苷碱基。本发明的实施例提供了方法，这些方法包括向动物给药包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包含选自SEQ ID NO: 15-269所列举的核苷碱基序列的至少8个连续核苷碱基。本发明的实施例提供了方法，这些方法包括向动物给药包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包含选自SEQ ID NO 241-269所列举的核苷碱基序列的至少8个连续核苷碱基。在一些实施例中，动物是人。在一些实施例中，给药防止了深静脉血栓形成或肺栓塞。在一些实施例中，所述化合物与从阿司匹林、氯吡格雷、双嘧达莫、肝素、来匹卢定、噻氯匹啶、华法林、阿哌沙班、利伐沙班和依诺肝素钠中挑选的任一个共同给药。在一些实施例中，所述化合物与任何因子Xa抑制剂共同给药。在一些实施例中，因子Xa抑制剂是利伐沙班、LY517717、YMl50,阿哌沙班、 PRT054021 和 DU-176b 中的任一种。在一些实施例中，化合物与从阿司匹林、氯吡格雷、双嘧达莫、肝素、来匹卢定、噻氯匹啶、华法林、阿哌沙班、利伐沙班和依诺肝素钠中挑选的任一个随附给药。在一些实施例中，给药是肠胃外给药。在一些实施例中，肠胃外给药是皮下注射或静脉注射给药中的任一种。本发明的实施例提供了方法，包括鉴定有发展血栓栓塞性并发症的风险的动物， 以及向该有风险的动物给药治疗有效量的包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸由 12至30个连接的核苷组成，其中，该修饰的寡核苷酸与因子11核酸互补。在一些实施例中，血栓栓塞性并发症是深静脉血栓形成、肺栓塞或其组合。本发明的实施例提供了方法，包括通过向动物给药治疗有效量的包括修饰寡核苷酸的化合物识别出有凝血紊乱风险的动物，该修饰寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成， 其中，修饰的寡核苷酸与因子U核酸互补。在一些实施例中，化合物与从阿司匹林、氯吡格雷、双嘧达莫、肝素、来匹卢定、噻氯匹啶、华法林、阿哌沙班、利伐沙班和依诺肝素钠中挑选的任一个共同给药。在一些实施例中，化合物与从阿司匹林、氯吡格雷、双嘧达莫、肝素、来匹卢定、噻氯匹啶、华法林、阿哌沙班、利伐沙班和依诺肝素钠中挑选的任一个随附给药。本发明的实施例提供了方法，该方法包括通过向动物给药治疗有效量的包括修饰寡核苷酸的化合物，降低动物血栓栓塞性并发症的风险，其中，修饰寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成，其中，修饰的寡核苷酸与因子11核酸互补。本发明的实施例提供了方法，包括通过向动物给药治疗有效量的包括修饰寡核苷酸的化合物，治疗动物体内的凝血紊乱，其中，修饰寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成， 其中，修饰的寡核苷酸与因子U核酸互补。
本发明的实施例提供了方法，包括通过向动物给药治疗有效量的包括修饰寡核苷酸的化合物，抑制动物体内因子11的表达，其中，修饰寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成，其中，修饰的寡核苷酸与因子U核酸互补。在一些实施例中，通过给药修饰寡核苷酸的解毒剂逆转动物体内因子11的抑制。
在一些实施例中，解毒剂是与修饰寡核苷酸互补的寡核苷酸。反义化合物寡聚化合物包括，但不限于，寡核苷酸、寡核苷、寡核苷酸类似物、寡核苷酸模拟物、反义化合物、反义寡核苷酸以及siRNA。寡聚化合物可以与目标核酸“反义”，是指它能够通过氢键作用与目标核酸相杂交。在一些实施例中，反义化合物具有核苷碱基序列，当以5’至3’方向表示时，其包含其靶向的目标核酸的目标区段的反式互补序列。在一些这样的实施例中，反义寡核苷酸具有核苷碱基序列，当5’至3’方向表示时，其具有其靶向的目标核酸的目标区段的反式互补序列。在一些实施例中，靶向因子11核酸的反义化合物的长度为12-30个亚单位。换言之，这样的反义化合物是12到30个连接的亚单位。在其他实施例中，反义化合物是8至 80、12至50、15至30、18至24、19至22或20个连接的亚单位。在一些这种实施例中，反义化合物的长度是8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、 29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、 54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79 或80个连接的亚单位，或是由任意两个上述数值定义的范围。在一些实施例中，反义化合物是反义寡核苷酸，连接的亚单位是核苷酸。在一些实施例中，靶向因子11核酸的反义寡核苷酸可能被缩短或截短。例如，可以从5’末端(5’截短)或者从3’末端(3’截短)删除单个亚单位。靶向因子11核酸的缩短或截短的反义化合物可能有两个从反义化合物的5’末端删除的亚单位，或者两个从反义化合物的3’末端删除的亚单位。另外，被删除的核苷可能分散在反义化合物的各处，例如，分散在有一个从5’末端删除的亚单位以及一个从3’末端删除的亚单位的反义化合物中。当加长的反义化合物中存在单个额外的亚单位时，该额外的亚单位可以位于反义化合物的5’或3’末端。当存在两个或多个额外的亚单位时，这些增加的亚单位可能彼此相邻，例如，在有两个亚单位被加到反义化合物的5’末端(5’增加)或者3’末端(3’增加) 的反义化合物中。或者，增加的亚单位可以分散在反义化合物的各处，例如，在有一个亚单位被增加到5’末端以及一个亚单位被增加到3’末端的反义化合物中。增加或降低反义化合物，如反义寡核苷酸，的长度，和/或引入错配碱基而不消除活性是可能的。例如，在Woolf等人的工作中(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309， 1992)，对一系列长度为13-25个核苷碱基的反义寡核苷酸在卵母细胞注射模型中诱导目标RNA裂解的能力进行了测试。靠近反义寡核苷酸末端有8或11个错配碱基且长度为25 个核苷碱基的反义寡核苷酸能够引导目标mRNA的特异性裂解，虽然其程度小于不含错配的反义寡核苷酸。类似地，用包括那些有1个或3个错配的13个核苷碱基的反义寡核苷酸实现了目标特异性裂解。
Gautschi 等人(J. Natl. Cancer Inst. 93 :463_471，March 2001)说明了与 bcl-2mRNA 100%互补并且与bcl_xL mRNA有3个错配的寡核苷酸在体外和体内对bcl_2 和bcl-xL兼有降低表达的能力。而且，这种寡核苷酸在体内表现出有效地抗肿瘤活性。Maher 和 Dolnick(Nuc. Acid. Res. 16 :3341_3358，1988)分别对一系列 14 个核苷碱基串联的反义寡核苷酸以及由两个或三个串联反义寡核苷酸构成的28个和42个核苷碱基的反义寡核苷酸测试了它们在兔网织红细胞测试中阻止人DHFR翻译的能力。3条14个核苷碱基的反义寡核苷酸的每一个单独能抑制翻译，虽然水平比28个或42个核苷碱基的反义寡核苷酸的水平要更弱些。反义化合物结构域在一些实施例中，靶向因子11核酸的反义化合物具有模式化排列的化学修饰亚单位或结构域，以赋予反义化合物如增强抑制活性、增强对目标核酸的结合力或对体内核酸酶引起的降解的抵抗力等特性。嵌合型反义化合物通常包含至少一个修饰区域，以便赋予对核酸酶降解的增强的抵抗力、增强的细胞摄入、对目标核酸的增强的结合力和/或增强的抑制活性。嵌合型反义化合物的第二个区域可作为裂解RNA:DNA双螺旋的RNA链的细胞核酸内切酶RNase H的底物。具有gapmer结构域的反义化合物被视为嵌合型反义化合物。在gapmer中，具有多个支持RNase H裂解的核苷酸的内部区段位于具有多个化学上不同于内部区域核苷的核苷酸的外部区段之间。就具有gapmer结构域的反义寡核苷酸而言，间隙区段通常作为核酸内切酶裂解的底物，而侧翼区段包含修饰的核苷。在一些实施例中，gapmer的区域的差别在于包括每个独特区域的糖基的类型。在一些实施例中，用来区别gapmer区域的糖基类型包括 β -D-核糖核苷、β -D-脱氧核糖核苷、2'-修饰的核苷(这些2'-修饰的核苷可以包括 2’ -MOE和2’ -O-CH3等等)和双环糖修饰的核苷(这些双环糖修饰的核苷可以包括那些具有4’-(CH2)n-0-2’桥联的核苷，其中η= 1或η = 2)。优选地，每一独特区域包括统一的糖基。侧翼-间隙-侧翼结构域经常表示为“Χ-Υ-Ζ”，其中，“X”代表5’侧翼区域的长度， “Y”代表间隙区域的长度，“Ζ”代表3’侧翼区域的长度。如此处所用，被描述为“Χ-Υ-Ζ”的 gapmer具有间隙区段与5’侧翼区段和3’侧翼区段每个直接相邻的结构。因此，在5’侧翼区段和间隙区段之间或间隙区段与3’侧翼区段之间没有干扰核苷。此处描述的任何反义化合物可以有gapmer结构域。在一些实施例中，X和Z相同，在其他实施例中，它们不同。在优先实施例中，Y介于8个至15个核苷酸之间。X、Y或Z可以是1个、2个、3个、4个、5个、 6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、 25个、30个或更多个核苷酸。因此，本发明的gapmer包括，但不限于，例如5_10-5、4-8_4、
4-12-3、4-12-4、3-14-3、2-13-5、2-16-2、1-18-1、3-10-3、2-10-2、1-10-1、2-8-2、5-8-5或 6-8-6。在一些实施例中，反义化合物具有侧翼-间隙或间隙-侧翼结构的“wingmer”结构域，也就是上面描述的gapmer结构的X-Y或Y-Z结构。因此，本发明的wingmer结构包括， 但不限于，例如 5-10、8-4、4-12、12-4、3-14、16-2、18-1、10-3、2-10、1-10、8-2、2-13、5-13、
5-8或 6-8。在一些实施例中，靶向因子11核酸的反义化合物具有5-10-5gapmer结构域。
在一些实施例中，靶向因子11核酸的反义化合物具有3-14-3gapmer结构域。在一些实施例中，靶向因子11核酸的反义化合物具有2-13-5gapmer结构域。在一些实施例中，靶向因子11核酸的反义化合物具有5-8-5gapmer结构域。在一些实施例中，靶向因子11核酸的反义化合物具有6-8-6gapmer结构域。
在一些实施例中，靶向因子11核酸的反义化合物具有间隙扩宽的结构域。在一些实施例中，靶向因子11核酸的间隙扩宽的反义寡核苷酸具有由14个 2’ -脱氧核糖核苷构成的间隙区段，其直接相邻并介于由三个化学修饰的核苷构成的侧翼区段之间。在一些实施例中，化学修饰包括2’-糖基修饰。在另一实施例中，化学修饰包括含2’ -MOE糖基修饰。在一些实施例中，靶向因子11核酸的间隙扩宽的反义寡核苷酸具有由13个 2’ -脱氧核糖核苷构成的间隙区段，其直接相邻并介于由两个化学修饰的核苷构成的5’侧翼区段和由五个化学修饰的核苷构成的3’侧翼区段之间。在一些实施例中，化学修饰包括 2’ -糖基修饰。在另一实施例中，化学修饰包括2’ -MOE糖基修饰。目标核酸、目标区域和核苷酸序列编码因子11的核苷酸序列包括，但不限于以下GENBANK登录号NM_000128. 3， 1999 年 3 月 24 日 GENBANK 首次收录，指定为 SEQ ID NO 1 ；NT_022792. 17，从 19598000 至 19624000截断，2000年11月29日GENBANK首次收录，指定为SEQ ID NO :2 ;GENBANK登录号 NM_028066. 1，2002年6月2日GENBANK首次收录，指定为SEQ ID NO 6 ；以及外显子1-15, GENBANK 登录号 NW_001118167. 1，2006 年3 月 28 日 GENBANK 首次收录，指定为 SEQ ID NO: 274。可以理解，此处包含的例子中每个SEQ ID NO所对应的序列独立于任何糖基、核苷内连接或核苷碱基的修饰。同样，SEQ ID NO定义的反义化合物可以独立地包含一个或多个糖基、核苷内连接或核苷碱基的修饰。Isis号(Isis No)描述的反义化合物表示核苷碱基序列和结构域的结合。在一些实施例中，目标区段是目标核酸的结构性定义的区段。例如，目标区段可包含3’UTR、5’UTR、外显子、内含子、外显子/内含子结合点、编码区域、翻译起始区域、翻译终止区域或其他定义的核酸区域。针对因子11的结构性定义区域可以通过登录号从如NCBI 等序列数据库中获得，这些信息在此被作为参考并并入本申请。在一些实施例中，目标区域可包含从目标区域中目标区段的5’目标位点到同样目标区域中另一目标区段的3’目标位点间的序列。靶向包括确定反义化合物与之杂交以便发生预期效果的至少一个目标区段。在一些实施例中，预期效果是目标核酸mRNA水平的下降。在一些实施例中，预期效果是目标核酸编码的蛋白水平的下降或目标核酸相关的表型变化。目标区域可包含一个或多个目标区段。目标区域中的多个目标区段可以重叠。或者，它们可以不重叠。在一些实施例中，目标区域中的目标区段被至多约300个核苷酸分开。在一些实施例中，目标区域中的目标区段被目标核酸的大约、至多、至多约250、200、 150、100、90、80、70、60、50、40、30、20或10个核苷酸，或者任意两个前面数值定义的范围的数量的核苷酸分开。在一些实施例中，目标区域中的目标区段被目标核酸的至多或至多约 5个核苷酸分开。在一些实施例中，目标区段是连续的。由具有以此处所列的5’目标位点或3’目标位点中任一个为起始核酸的范围所定义的目标区域同样被构思。合适的目标区段可能在5’ UTR、编码区域、3’ UTR、内含子、外显子或外显子/内含子结合点中被发现。包含起始密码子或终止密码子的目标区段也是合适的目标区段。合适的目标区段可能特异性地排除如起始密码子或终止密码子等特定结构性定义的区域。合适的目标区段的确定可包括目标核酸序列与基因组中其他序列的比较。例如， BLAST算法可用于鉴定不同核酸中有相似性的区域。这种比较可以防止挑选出可能与选中的目标核酸之外的序列(也就是非靶向的或脱靶序列)非特异性杂交的反义化合物序列。反义化合物在活性目标区域中的活性(例如，以目标核酸水平的降低百分比来定义)可能会变化。在一些实施例中，因子IlmRNA水平的降低表明了因子11表达的抑制。因子11蛋白水平的降低也表明了对目标mRNA表达的抑制。而且，表型变化表明了因子11表达的抑制。例如，延长的aPTT时间可表明因子11表达的抑制。在另一例子中，延长的aPTT 时间连同正常的PT时间可表明因子11表达的抑制。在另一例子中，血小板因子4 (PF-4) 的减少量可表明因子11表达的抑制。在另一例子中，减少的血栓形成或血栓形成时间增加可表明因子11表达的抑制。杂交在一些实施例中，杂交发生在此处披露的反义化合物与因子11核酸之间。杂交最常见的机制涉及核酸分子的互补核苷碱基间的氢键作用(例如Watson-Crick，Hoogsteen 或反向Hoogsteen S键作用)。杂交可以在不同条件下发生。严谨条件是序列依赖的，取决于待杂交的核酸分子的特性和组成。确定序列是否与目标核酸特异性杂交的方法为本领域所熟知。在一些实施例中， 此处提供的反义化合物可与因子11的核酸特异性杂交。互补当反义化合物的足够数量的核苷碱基与目标核酸的相应核苷碱基发生氢键作用而产生期望效果时(例如，目标核酸，如因子11核酸，的反义抑制)，那么反义化合物与目标核酸彼此互补。反义化合物和因子11核酸间的非互补核苷碱基是可被容忍说明反义化合物依然能够与目标核酸特异性杂交。而且，反义化合物可与因子11核酸的一个或多个区段杂交， 以至于干扰或相邻区段不涉及到杂交事件中(例如，回环结构、错配或发卡结构)。在一些实施例中，此处提供的反义化合物或其中指定部分与因子11核酸、目标区域、目标区段或其中指定部分有或至少有70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、 91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%^； 100%的互补。反义化合物和目标核酸的互补百分比可以用常规方法测定。例如，反义化合物的20个核苷碱基中的18个与目标区域互补并因此特异性杂交的反义化合物展示90%的互补性。在该例中，剩下 的非互补核苷碱基可以是聚集的或点缀着互补核苷碱基，不必彼此之间或与互补核苷碱基相连续。 同样，长度为18个核苷碱基且具有4(四)个两侧有与目标核酸完全互补的两个区域的非互补核苷碱基的反义化合物即具有与目标核酸77. 8%的总的互补性，也落在本发明的范围之内。可以用本领域已知的BLAST程序(基本的局部比对搜索工具)和PowerBLAST程序 (Altschul et al. , J. Mol.Biol. ,1990,215,403 410 ；Zhang and Madden, Genome Res.,1997,7,649 656)以常规的方法确 定反义化合物与目标核酸区域的互补性百分比。同源百分比、序列身份或互补性可以用例如采用默认设置的Gap程序(Wisconsin序列分析软件包，Unix的版本8，遗传学计算机组，Research Park大学，Madison Wis.)来确定，其利用 Smith 和 Waterman 算法(Adv. Appl. Math.，1981，2，482-489)。在一些实施例中，此处提供的反义化合物或其中指定部分与目标核酸或其中指定部分完全互补(也就是100%互补)。例如，反义化合物可与因子11核酸或目标区域或其中的目标区段或目标序列完全互补。如此处所用，“完全互补”是指反义化合物的每个核苷碱基能够与目标核酸的相应核苷碱基准确碱基配对。例如，只要400个核苷碱基长的目标核酸中有20个核苷碱基部分与反义化合物完全互补，20个核苷碱基反义化合物就与该目标序列完全互补。完全互补也可以用于第一条和/或第二条核酸的指定部分。例如，30个核苷碱基的反义化合物中的20个核苷碱基部分可以与400个核苷碱基长度的目标序列“完全互补”。如果目标序列有相应的20个核苷碱基，其中每个碱基与反义化合物的20个核苷碱基部分互补，那么30个核苷碱基寡核苷酸的20个核苷碱基部分与目标序列完全互补。同时，根据反义化合物剩下10个核苷碱基是否也与目标序列互补，整个30个核苷碱基反义化合物与目标序列可能完全互补或可能不完全互补。非互补核苷碱基的位置可在反义化合物的5’末端或3’末端。或者，非互补核苷碱基或核苷碱基可在反义化合物的内部位置。当存在两个或多个非互补核苷碱基时，它们可以是连续的(也就是连接的)或非连续的。在一个实施例中，非互补核苷碱基位于gapmer 反义寡核苷酸的侧翼区段。在一些实施例中，相对于如因子11核酸的目标核酸或其中指定部分，长度为或高至12、13、14、15、16、17、18、19或20个核苷碱基的反义化合物包含不多于4、不多于3、不多于2、不多于1个非互补核苷碱基。在一些实施例中，相对于如因子11核酸的目标核酸或其中指定部分，长度为或高至 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29 或 30 个核苷碱基的反义化合物包含不多于6、不多于5、不多于4、不多于3、不多于2、不多于1个非互补核苷碱基。此处提供的反义化合物还包括那些与目标核酸的部分互补的化合物。如此处所用，“部分”指的是在目标核酸的区域或区段中确定数量的连续的(也就是连接的)核苷碱基。“部分”也可以指反义化合物中确定数量的连续核苷碱基。在一些实施例中，反义化合物与目标区段的至少8个核苷碱基的部分互补。在一些实施例中，反义化合物与目标区段的至少12个核苷碱基的部分互补。在一些实施例中，反义化合物与目标区段的至少15个核苷碱基的部分互补。与目标区段中至少9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个核苷碱基或由这些数值中任意两个所定义的范围内的核苷碱基数相互补的反义化合物也被考虑到了。标i只此处提供的反义化合物也可有与特定核苷酸序列、SEQ ID NO或由特定Isis号代表的化合物或其中部分的相似度百分比。如此处所用，如果具有相同的核苷碱基配对能力， 反义化合物就与此处披露的序列相同。例如，由于尿嘧啶和胸腺嘧啶与腺嘌呤都能配对，在披露的DNA序列中包含尿嘧啶替代胸腺嘧啶的RNA被认为与该DNA序列的相同。此处描述的反义化合物的缩短和延长版本以及具有相对于此处提供的反义化合物的非相同碱基的化合物也被考虑了。非相同碱基可彼此相邻或分散在反义化合物中各处。根据相对于被比较序列具有相同碱基配对的碱基数量计算反义化合物的相似度百分比。在一些实施例中，反义化合物或其中部分与此处公开的一个或多个反义化合物或 SEQ ID NOs或其中部分有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或 100%的相同。在一些实施例中，反义化合物的部分与目标核酸的等长部分相比较。在一些实施例中，8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25 个核苷碱基部分与目
标核酸的等长部分相比较。在一些实施例中，反义寡核苷酸的部分与目标核酸的等长部分相比较。在一些实施例中，8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25 个核苷碱基部分与目标核酸的等长部分相比较。修饰核苷是碱基_糖组合。核苷的核苷碱基(也被称为碱基)部分通常是一个杂环碱基部分。核苷酸是进一步包括共价偶联在核苷的糖部分的磷酸基的核苷。对于那些包括五呋喃糖的核苷，磷酸基团可被连接在糖的2'、3'或5'羟基上。寡核苷酸是通过彼此相邻的核苷间的共价连接形成，以形成线性多聚寡核苷酸。在寡核苷酸结构中，磷酸基团通常被认为形成寡核苷酸的核苷内连接。反义化合物的修饰包括核苷内连接、糖基或核苷碱基的取代或改变。因为像例如增强细胞摄入、对核酸目标的增强亲和力、核酸酶存在时的增强稳定性或增强抑制活性等期望特性，相对于天然形式，优选修饰的反义化合物。化学修饰核苷也可能用来增加缩短或截短的反义寡核苷酸对其目标核酸的结合力。所以，以具有这样化学修饰核苷的更缩的反义化合物，经常可以获得类似的结果。修饰的核苷内连接RNA和DNA的天然存在的核苷内连接是3'至5'磷酸二酯键连接。因为像例如增强细胞摄入、对目标核酸的增强亲和力和核酸酶存在时的增强稳定性等期望的特性，相对于天然存在的核苷内连接，优选具有一个或多个修饰的，也就是非天然存在的核苷内连接的反义化合物。具有修饰的核苷内连接的寡核苷酸包括保留磷原子的核苷内连接以及没有磷原子的核苷内连接。典型的含有磷原子的核苷内连接包括，但不限于，磷酸二酯、磷酸三酯、甲基磷酸酯、氨基磷酸酯以及磷硫酰。制备含磷和不含磷连接的方法是业界习知的。在一些实施例中，靶向因子11核酸的反义化合物包含一个或多个修饰的核苷内连接。在一些实施例中，修饰的核苷内连接是磷硫酰连接。在一些实施例中，反义化合物的每个核苷内连接是磷硫酰核苷内连接。修饰的糖基可选地，本发明的反义化合物可包含一个或多个其中糖基被修饰的核苷。这样的糖修饰的核苷可赋予反义化合物增强的核酸酶稳定性、增强的结合力或一些其他有益的生物学特性。在一些实施例中，核苷包含化学修饰的呋喃核糖环部分。化学修饰的呋喃核糖环的例子非限制地包括加入取代基(包括5'和2'取代基)、形成双环核酸(BNA)的非偕环原子的桥联、以S或N(R)或C(Rl) (R) 2 (R = H, C1-C12烷基或保护基团)替代核糖环氧原子，以及其组合。化学修饰糖的例子包括2' -F-5' _甲基取代核苷(见08年8月 21日公开的PCT国际申请WO 2008/101157，其是有关其他被披露的5'，2'-双取代核苷)，或者以S取代核糖环氧原子并在2'-位(见2005年6月16日公开的美国专利申请 US2005-0130923号)或者在5'-取代BNA(见07年11月22日公开的PCT国际申请WO 2007/134181号，其中LNA被例如5'-甲基或5'-乙烯基所取代)。具有修饰糖基的核苷的例子非限制地包括含有5'-乙烯基、5'-甲基(R或 S)、4' -S、2' -F、2' -0CH3以及2' -0(CH2) 20CH3取代基团的核苷。2’位的取代也可以选自烯丙基、氨基、叠氮基、硫代的、0-烯丙基、0-C1-C10烷基、0CF3、0(CH2)2SCH3、 0 (CH2) 2-0-N (Rm) (Rn)和 0-CH2-C ( = 0) -N (Rm) (Rn)，其中，Rm 和 Rn 各自独立地是 H 或取代的或非取代的Cl-Cio烷基。双环核酸(BNAs)的例子非限制地包括包含4'和2'核糖环原子间桥联的核苷。在一些实施例中，此处提供的反义化合物包括一个或多个BNA核苷，其中，桥联包括下列分子式之一 4' -(CH2)-0-2 ‘ (LNA) ；4 ‘ -(CH2)-S-2 ‘ ；4，-(CH2)-0-2，(LNA)； 4，-(CH2) 2-0-2，(ENA) ；4，-C (CH3) 2_0_2，(见 PCT/US2008/068922) ； 4，-CH(CH3)，-0-2， 和4，-OH(CH2OCH3) 0-2，(见美国专利7，399，845号，2008年7月15日授权)； 4，-CH2-N(0CH3)-2，(见 PCT/US2008/064591) ；4，-CH2-0_N(CH3)-2，(见已公开的美国专利申请US2004-0171570号，2004年9月2日公开)；4，_CH2_N(R)-0-2，(见美国专利 7，427，672 号，2008 年 9 月 23 日公开)；4，-CH2-C(CH3)-2lP4，-CH2-0(=CH2)-2'(见 PCT/ US2008/066154)；其中，R独立地是H、C1-C12烷基或保护基团。每一个前面的BNA包含包括例如α -L-呋喃核糖和β -D-呋喃核糖(见PCT国际申请PCT/DK98/00393号，于1999 年3月25日公开为WO 99/14226)的各种立体化学的糖构型。在一些实施例中，核苷被以糖替代物对核糖环的替代所修饰。这样的修饰非限制地包括以替代环系统(有时指的是DNA类似物)对核糖环的替代，替代环系统如吗啉环、环己烯
HO^/O. HO-^O ΗΟ^^Ο
H0 ^^Bx HO、V^Bx HO ^^Bx FOCH3基环、环己基环或如具有下列结构式之一的四氢吡喃环可用于修饰以包含在反义化合物中的核苷的许多其他双环和三环糖替代环系统也为本领域已知(见例如综述文章Leumann, J. C, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2002，10,841-854)。这种环系统可以承受各种附加替代以增强活性。制备修饰糖的方法为本领域普通技术人员所熟知。具有修饰糖基的核苷中，核苷碱基部分(天然的、修饰的或其组合)被保留，用于与合适的核酸目标杂交。在一些实施例中，靶向因子11核酸的反义化合物包含一个或多个具有修饰的糖部分的核苷酸。在一些实施例中，修饰的糖基是2 ’ -MOE。在一些实施例中，2 ’ -MOE修饰的核苷酸以gapmer结构域排列。修饰的核苷碱基
核苷碱基(或碱基)修饰或取代与天然存在或合成的未修饰的核苷碱基在结构上可区别，然而在功能上可互换。天然和修饰的核苷碱基都能够参与氢键作用。这样的核苷碱基修饰可能赋予反义化合物核酸酶稳定性、结合力或一些其他有益的生物学特性。修饰的核苷碱基包括像例如5-甲基胞嘧啶(5-me-C)等合成和天然的核苷碱基。包括5-甲基胞嘧啶取代的一些核苷碱基取代对于增强反义化合物与目标核酸的亲和力特别有用。例如，5-甲基胞嘧啶取代已经被证明使核酸双螺旋稳定性增加了 0. 6-1. 2V (Sanghvi,Y. S.， Crooke, S.T. and Lebleu, B. , eds. , Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton,1993，pp.276-278)。另外的修饰核苷碱基包括5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基和其他烷基衍生物、2-硫脲嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶和2-巯基胞嘧啶、5-卤素尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基(-C ε C-CH3)尿嘧啶和胞嘧啶以及嘧啶碱基的其他炔基衍生物、6-含氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4_硫脲嘧啶、8-卤素、8-氨基、8-硫醇、8-硫代烷基、8-羟基和其他8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤、5-卤素特别是 5_溴代、5-三氟甲基和其他5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤、 2-F-腺嘌呤、2-氨基-腺嘌呤、8-氮鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤、7-去氮杂鸟嘌呤和7-去氮杂腺嘌呤和3-去氮杂鸟嘌呤以及3-去氮杂腺嘌呤。杂环碱基部分也可包括那些其中的嘌呤或嘧啶碱基被其他杂环所取代的，例如 7-去氮杂-腺嘌呤、7-去氮杂鸟嘌呤、2-氨基吡啶和2-吡啶酮等。对于增强反义化合物的结合力特别有用的核苷碱基包括5-取代嘧啶、6-氮杂嘧啶和N-2、N-6和0-6取代嘌呤，包括2-氨丙基腺嘌呤、5-丙基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。在一些实施例中，靶向因子11核酸的反义化合物包含一个或多个修饰的核苷碱基。在一些实施例中，靶向因子11核酸的间隙扩宽的反义寡核苷酸包含一个或多个修饰的核苷碱基。在一些实施例中，修饰核苷碱基是5-甲基胞嘧啶。在一些实施例中，每一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。配制药物组合物的组分和方法为制备药物组合物或剂型，反义寡核苷酸可与药用可接受的活性或惰性物质相混合。配制药物组合物的组分和方法取决于一些标准，包括但不限于，给药方式、疾病程度或给药剂量。通过组合反义化合物和合适的药用可接受的稀释剂或载体，靶向因子11核酸的反义化合物可被用于药物组合物。药用可接受的稀释剂包括磷酸盐缓冲液(PBS)。PBS是一种适合用在非肠道给药的组合物中的稀释剂。因此，在一个实施例中，被此处描述的方法采用的是一种包含靶向因子11核酸的反义化合物以及药用可接受的稀释剂的药物组合物。在一些实施例中，药用可接受的稀释剂是PBS。在一些实施例中，反义化合物是反义寡核苷酸。含反义化合物的药物组合物涵盖在给包括人的动物给药时能提供(直接或间接) 生物活性的代谢物或其残基的任何药用可接受的盐、酯类、或这些酯的盐、或者任何其他寡核苷酸。因此，例如，本披露也指向反义化合物的药用可接受的盐、前体药物、这种前体药物的药用可接受的盐以及其他生物等同物。合适的药用可接受的盐包括但不限于，钠和钾盐。前体药物可以包括在反义化合物的一个或两个末端添加额外的核苷，其被体内的内源性核酸酶裂解以形成活性反义化合物。偶联的反义化合物反义化合物可共价连接至能增强得到的反义寡核苷酸的活性、细胞分布或细胞摄入的一个或多个部分或偶联物。典型的偶联基团包括胆固醇基或脂基。另外的偶联基团包括碳水化合物、磷脂、生物素、吩嗪、叶酸、菲啶、蒽醌、吖啶、荧光素、若丹明、香豆素以及染料。反义化合物也可以被修饰为具有一个或多个通常连接在反义化合物的一个或两个末端的稳定基团，以增强例如核酸酶稳定性等特性。稳定基团包括帽结构。这些末端修饰能防止具有末端核酸的反义化合物被核酸外切酶降解，并有助于细胞内的传送和/或定位。帽可以存在于5'-末端(5'-帽)，或在3'-末端(3'-帽)，或者在两个末端都存在。帽结构为本领域普通技术人员所熟知，包括，例如，反转的脱氧脱碱基帽。可用于在反义化合物的一个或两个末端形成帽结构以赋予核酸酶稳定性的3'和5'稳定基团还包括2003年1月16日公开的WO 03/004602中所披露的那些基团。细胞培养和反义化合物处理可以在各种细胞类型中体外测试反义化合物对因子11核酸水平、活性或表达的影响。用于这种分析的细胞类型可购自商业供应商(例如美国菌种保藏中心，Manassus， VA ；Zen-Bio,Inc. ,Research Triangle Park,NC ；Clonetics Corporation,Walkersvilie, MD)，根据供应商说明书用商售试剂(例如Invitrogen Life Technologies,Carlsbad,CA) 进行培养。示例性的细胞类型包括但不限于，HepG2细胞、H印3B细胞以及原代肝细胞。反义寡核苷酸的体外测试此处描述的是用反义寡核苷酸处理细胞的方法，这些方法可以被适当修改从而用其他反义化合物来处理。通常，当细胞达到约60-80%培养克隆率时，用反义寡核苷酸处理细胞。通常用于将反义寡核苷酸转入培养细胞的试剂包括阳离子脂类转染试剂 LIP0FECTIN(Invitrogen, Carlsbad, CA)。将反义寡核苷酸与 LIP0FECTIN 在 0ΡΤΙ-ΜΕΜ Klnvitrogen, Carlsbad, CA)中混合以达到期望的反义寡核苷酸的终浓度以及通常每 IOOnM反义寡核苷酸对应2至12ug/mL范围的LIP0FECTIN浓度。用于将反义寡核苷酸转入培养细胞的另一种试剂包括 LIPOFECTAMINE (Invitrogen, Carlsbad, CA)。将反义寡核苷酸与 LIP0FECTAMINE 在 OPTI-MEM 1减血清培养基(Invitrogen，Carlsbad，CA)中混合以达到期望的反义寡核苷酸的浓度以及通常每IOOnM反义寡核苷酸对应2至12ug/mL范围的LIPOFECTAMINE的浓度。用于将反义寡核苷酸转入培养细胞的另一种技术包括电穿孔。细胞用反义寡核苷酸以常规方法处理。细胞通常在反义寡核苷酸处理后16-24小时收获，此时用此处描述的本领域已知的方法测定目标核酸的RNA或蛋白水平。通常，以多份重复进行处理时，以重复处理的平均值作为结果。采用的反义寡核苷酸的浓度因细胞株而变化。针对特定细胞株确定最佳反义寡核苷酸浓度的方法为本领域所熟知。当用LIPOFECTAMINE转染时，通常在InM至300nM的浓度范围内使用反义寡核苷酸。当用电穿孔转染时，通常在625至20，OOOnM的浓度范围内使用反义寡核苷酸。
分离 RNA可对总的细胞RNA或po 1 y (A) +mRNA进行RNA分析。分离RNA的方法为本领域所熟知。用本领域熟知的方法制备RNA，例如，根据制造商推荐的操作规程用TRIZOL试剂 (Invitrogen, Carlsbad, CA)进^J0目标水平或表达的抑制的分析因子11核酸的水平或表达的抑制可以用本领域已知的各种方法测试。例如，目标核酸水平可以用例如印记杂交分析(Northen blot analysis)、竞争性聚合酶链式反应或定量实时PCR来定量。可对总的细胞RNA或poly (A) +mRNA进行RNA分析。分离RNA的方法为本领域所熟知。印记杂交分析也是本领域的常规方法。定量实时PCR可以根据制造商的说明用加利福尼亚州福斯特市的PE-应用生物系统公司提供的商售ABI PRISM 7600,7700 或7900序列检测系统方便地完成。目标RNA水平的定量实时PCR分析目标RNA水平的定量可以根据制造商的说明用ABI PRISM 7600、7700或7900序列检测系统(PE-应用生物系统公司，福斯特市，加利福尼亚州)的定量实时PCR来完成。定量实时PCR的方法为本领域所熟知。在实时PCR之前，分离的RNA要进行逆转录酶(RT)反应，以产生随后可用作实时 PCR扩增的底物的互补DNA(cDNA)。RT和实时PCR反应在同样的样本孔中顺序进行。RT和实时PCR的试剂从hvitrogen(Carlsl3ad，CA)获得。RT和实时PCR反应用本领域普通技术人员熟知的方法实现。用实时PCR获得的基因(或RNA)目标量用如亲环素A等表达恒定的基因的表达水平或用RIBOGREENanvitrogen，Inc. Carlsbad, CA)对总RNA的定量来归一化。亲环素 A用实时PCR来定量，与目标同时或多通路或分别地运行。总RNA用RIB0GREEN RNA定量试剂(Invetrogen, Inc. Eugene, OR)来定量。RIB0GREEN 定量 RNA 的方法在 Jones, L. J 等人的工作(Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374)中讲授。CYT0FLU0R 4000 设备 (PE应用生物系统公司)用来测定RIB0GREEN荧光。设计与因子11核酸杂交的探针和引物。设计实时PCR探针和引物的方法为本领域所熟知，可包括使用如 PRIMER EXPRESS 软件(Applied Biosystems, Foster City, CA)等软件的使用。蛋白水平分析因子11核酸的反义抑制可以通过测定因子11蛋白水平来评估。因子11的蛋白水平可以用本领域熟知的各种方法来评价或定量，比如免疫沉淀反应、Western印记分析(免疫印记)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、定量蛋白质分析、蛋白活性分析(例如，凋亡蛋白酶活性分析)、免疫组织化学、免疫细胞化学或荧光活化细胞分选(FACS)。指向目标的抗体可被识别并从如MSRS抗体目录(Aerie Corporation, Birmingham,MI)等各种来源获得，或可以通过本领域熟知的常规单克隆或多克隆抗体生产技术来制备。对探测小鼠、大鼠、猴和人的因子11有用的抗体可以通过商业途径购买。反义化合物的体外测试在动物体内测试了例如反义寡核苷酸的反义化合物，以评价它们抑制因子11表达和产生表型变化的能力，例如，延长的aPTT、与正常PT交汇的延长的aPTT时间、血小板因子4(PF_4)的减少量以及血栓形成减少或血栓形成时间增加。测试可以在正常动物体内或在实验疾病模型中进行。向动物给药的反义寡核苷酸在如磷酸盐缓冲液等药用可接受的稀释剂中配制。给药包括如腹腔注射、静脉注射以及皮下注射等非肠道给药途径。对反义寡核苷酸剂量和给药频率的计算在本领域普通技术人员的能力范围之内，取决于如给药方式和动物体重等因素。以反义寡核苷酸的处理一段期间之后，从肝脏组织中分离RNA，测定因子11核酸表达的改变。还用凝血酶生成试验测定了因子11蛋白水平的改变。另外，用已处理动物的血浆测定对例如PT和aPTT等凝结时间的影响。耐受性在一些实施例中，此处提供的化合物表现最低的副作用。副作用包括通常与因子 11靶向无关的对反义化合物的给药的反应，比如在动物中的炎症反应。在一些实施例中，化合物被动物很好地耐受。增强的耐受性取决于一些因素，包括但不限于反义化合物的核苷酸序列、核苷酸的化学修饰、反义化合物中未修饰或修饰核苷的特定结构域，或其组合。耐受性取决于许多因素。这些因素包括体重、器官重量、肝功能、肾功能、血小板数、白细胞数。在一些实施例中，此处提供的化合物表现出对器官重量的最低影响。在一些实施例中，化合物表现出脾脏和/或肝脏重量的低于7倍、6倍、5倍、4倍、3倍、2倍或没有明显的增加。在一些实施例中，此处提供的化合物表现出对肝功能的最小影响。评价肝功能的因素包括ALT水平、AST水平、血浆胆红素水平以及血浆白蛋白水平。在一些实施例中，此处提供的化合物表现出ALT或AST的低于7倍、低于6倍、低于5倍、低于4倍、低于3倍、 低于2倍或没有明显的增加。在一些实施例中，此处提供的化合物表现出血浆胆红素水平的低于3倍、低于2倍或没有明显的增加。在一些实施例中，此处提供的化合物表现出对肾功能的最低影响。在一些实施例中，此处提供的化合物表现出血浆血液尿素氮(BUN)浓度的低于3倍、至少2倍或没有明显的增加。在一些实施例中，此处提供的化合物表现出尿蛋白与肌酐比值的低于6倍、5倍、4 倍、3倍、2倍或没有明显的增加。在一些实施例中，此处提供的化合物表现出对血液指标的最低影响。在一些实施例中，此处提供的化合物表现出血小板数的低于60 %、50 %、40 %、30 %、20 %、10 %或5 % 的减少。在一些实施例中，此处提供的化合物表现出单核细胞数的低于4倍、低于3倍、低于2倍或没有明显的增加。在一些实施例中，化合物进一步表现出有利的药物动力学。在一些实施例中，反义化合物在相关生物体液或组织中显示出相对高的半衰期。在一些实施例中，化合物或组合物进一步表现出有利的粘度。在一些实施例中，化合物或组合物在165-185mg/mL浓度时的粘度仅为40cP。在其他实施例中，化合物表现出上述特征的组合，在动物模型中高效地降低因子 IlmRNA的表达。一些适应症在一些实施例中，本发明提供了治疗个体的方法，包括给药本发明的一种或多种药物组合物。在一些实施例中，个体具有血栓栓塞性并发症。在一些实施例中，个体具有血液凝结紊乱的风险，包括但不限于，梗塞、血栓形成、栓塞以及血栓栓塞，比如如深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中风。这包括个体具有引起血栓形成风险的后天问题、疾病或紊乱，例如手术、癌症、不动、败血症、动脉粥样硬化、心房颤动等，以及例如抗磷脂综合症和常染色体显性遗传的因子V Leiden突变等遗传倾向性。在一些实施例中，个体被鉴定为需要抗凝治疗。这样的个体的例子包括但不限于，那些经受大型矫形手术(例如，髋骨/膝关节置换术或髋骨骨折手术)的人以及如那些经历心房颤动需防止中风等需要长期治疗的病人。在一些实施例中，本发明提供了预防性地降低个体内因子11表达的方法。一些实施例包括通过向需要治疗的个体给药治疗有效量的靶向因子11核酸的反义化合物。在一个实施例中，给药治疗有效量的靶向因子11核酸的反义化合物的同时，伴随着监测个体血清中的因子11的水平，以确定个体对于反义化合物给药的反应。个体对于反义化合物给药的反应被内科医师用来确定治疗干预的用量及持续时间。在一些实施例中，靶向因子11核酸的反义化合物的给药导致因子11的表达至少 15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95 或 99%，或者这些数值中任意两个所定义的范围的降低。在一些实施例中，靶向因子11核酸的反义化合物的给药导致用标准测试测量的血液凝结的测量值的改变，例如但不限于，活化部分凝血活酶时间(aPTT) 测试、凝血酶原时间(PT)测试、凝血酶时间(TCT)、出血时间或D-二聚体。在一些实施例中， 因子11的反义化合物的给药至少增加了测量值15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、 75、80、85、90、95或99%或者这些数值中任意两个所定义的范围。在一些实施例中，因子11 的反义化合物的给药至少降低了测量值15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、 85,90,95或99%或者这些数值中任意两个所定义的范围。在一些实施例中，包含靶向因子11的反义化合物的药物组合物被用于用来治疗遭受或易患血栓栓塞性并发症的病人的药剂生产。一些联合治疗在一些实施例中，本发明的一种或多种药物组合物与一种或多种其他药剂共同给药。在一些实施例中，这样的一种或多种其他药剂被设计成用于治疗本发明的一种或多种药物组合物所治疗的相同的疾病、紊乱或状况。在一些实施例中，这样的一种或多种其他药剂被设计成用于治疗不同于本发明的一种或多种药物组合物所治疗的疾病、紊乱或状况。 在一些实施例中，这样的一种或多种其他药剂被设计成用于治疗本发明的一种或多种药物组合物的不希望的副作用。在一些实施例中，本发明的一种或多种药物组分与另一种药剂共同给药以治疗其他药剂的副作用。在一些实施例中，本发明的一种或多种药物组合物与另一种药剂共同给药以产生联合效果。在一些实施例中，本发明的一种或多种药物组合物与另一种药剂共同给药以产生协同效应。在一些实施例中，本发明的一种或多种药物组合物与一种或多种其他药剂同时给药。在一些实施例中，本发明的一种或多种药物组合物与一种或多种其他药剂在不同时间给药。在一些实施例中，本发明的一种或多种药物组合物与一种或多种其他药剂一起制备成单一制剂。在一些实施例中，本发明的一种或多种药物组合物与一种或多种其他药剂分别制备。在一些实施例中，可与本发明的药物组分共同给药的药剂包括抗凝剂或抗血小板剂。在一些实施例中，可与本发明的药物组分共同给药的药剂包括NSAID/环氧酶抑制剂， 比如阿司匹林。在一些实施例中，可与本发明的药物组分共同给药的药剂包括二磷酸腺苷(ADP)受体抑制剂，比如氯吡格雷(波立维)和噻氯匹啶(TICLID)。在一些实施例中，可与本发明的药物组分共同给药的药剂包括磷酸二酯酶抑制剂，比如西洛他唑(PLETAL)。在一些实施例中，可与本发明的药物组合物共同给药的药剂包括糖蛋白IIB/IIIA抑制剂，比如阿昔单抗(REOPRO)、埃替非巴肽(INTEGRILIN)、替罗非班(AGGRASTAT)以及去纤苷。在一些实施例中，可与本发明的药物组合物共同给药的药剂包括腺苷再摄取抑制剂，比如双嘧达莫(PERSANTINE)。在一些实施例中，可与本发明的药物组合物共同给药的药剂包括但不限于，华法林(和相关香豆素)、肝素、直接凝血酶抑制剂(比如来匹卢定、比伐卢定)、阿哌沙班、依诺肝素钠以及直接干扰特定凝结因子的小分子化合物(例如，干扰因子fe的利伐沙班)。在一些实施例中，可与本发明的因子11特异性抑制剂共同给药的药剂包括但不限于，其他因子11抑制剂。在一些实施例中，抗凝剂或抗血小板剂在本发明的药物组合物给药之前给药。在一些实施例中，抗凝剂或抗血小板剂在本发明的药物组合物给药之后给药。 在一些实施例中，抗凝剂或抗血小板剂在本发明的药物组合物给药同时给药。在一些实施例中，共同给药的抗凝剂或抗血小板剂的剂量与该抗凝剂或抗血小板剂单独给药时的给药剂量相同。在一些实施例中，共同给药的抗凝剂或抗血小板剂的剂量低于该抗凝剂或抗血小板剂单独给药时的给药剂量。在一些实施例中，共同给药的抗凝剂或抗血小板剂的剂量高于该抗凝剂或抗血小板剂单独给药时的给药剂量。在一些实施例中，第二个化合物的共同给药增强了第一个化合物的抗凝效果，以至于化合物的共同给药会导致高于第一个化合物单独给药时的抗凝效果。在其他实施例中，相对于单独给药化合物，共同给药导致了增加的抗凝效果。在一些实施例中，相对于单独给药化合物，共同给药导致了超量增加的抗凝效果。在一些实施例中，第二个化合物的共同给药会增加抗血栓形成的活性，同时不增加出血风险。在一些实施例中，第一个化合物是反义化合物。在一些实施例中，第二个化合物是反义化合物。在一些实施例中，解毒剂在因子11特异性抑制剂给药后的任意时间给药。在一些实施例中，解毒剂在靶向因子11的反义寡核苷酸给药后的任意时间给药。在一些实施例中，解毒剂在靶向因子11的反义化合物给药的几分钟、几小时、几天、几周或几月后给药。 在一些实施例中，解毒剂与靶向因子11的反义化合物互补(例如，同义链)。在一些实施例中，解毒剂是因子7、因子7a、因子11或因子Ila蛋白。在一些实施例中，因子7、因子7a、 因子11或因子Ila蛋白是人因子7、人因子7a、人因子11或人因子Ila蛋白。在一些实施例中，因子7蛋白是N0V0SEVEN。一些共同给药的抗血小板治疗在一些实施例中，因子11抑制剂与抗血小板治疗联用。在一些实施例中，相比于单独抗血小板治疗，与抗血小板治疗联用的因子11抑制剂的给药导致出血风险的少量至没有可觉察或可检测的增加。在一些实施例中，风险概况或风险指标与单独抗血小板治疗相比没有改变。抗血小板和抗凝血疗法联用在临床实践中最频繁使用于被诊断具有例如血栓栓塞、心房颤动、心瓣膜紊乱、瓣膜性心脏病、中风、CAD的病人以及有机械阀的病人。双重疗法的益处有关对血小板和凝结因子活性兼有抑制的可能的累加效应。双重疗法的风险是增加出血的可能性(Dowd, M. Plenary Sessions/Thrombosis Research 123(2008)) 相比于抗凝血或抗血小板单独治疗，以前的抗血小板和抗凝血疗法联用已经表现出出血风险的增加。这样的联用包括Fxa抑制剂(例如阿匹西班和利伐沙班)与ADP受体/P2Y12抑制剂(噻吩并吡啶类，比如氯吡格雷-也被称为PLAVIX)以及NSAIDs (例如阿司匹林和萘普生)(Kubitza, D. et al.，Br. J. Clin. Pharmacol. 63 :4(2006) ；Wong，P. C. et al. Journal of Thrombosis and Haemostasis 6(2008)；新药申请的 FDA 咨询委员会简 艮文件22-406 Q009))。例如，Wong报道增加特定剂量的阿哌沙班至阿司匹林和至阿司匹林与氯吡格雷中，相比于单用阿司匹林和阿司匹林与氯吡格雷会显著增加出血时间。Kubitza 报道利伐沙班和萘普生联合给药相比于单用萘普生会显著增加出血时间。例子非限制性披露及通过参考并入文献尽管此处所述的一些化合物、组合物和方法已经依照某些实施例进行了具体描述，下面的例子仅仅用于说明此处所述的化合物，而非限制。本申请列举的每个参考文献都在此被参考并且其全文被并入本申请中。例1 对H印G2细胞中人因子11的反义抑制在体外测试靶向因子11核酸的反义寡核苷酸对因子11 WmRNA的影响。用含75ηΜ 反义寡核苷酸的脂质体试剂转染密度为每孔10，000个细胞的培养的H印G2细胞。在处理约 24小时后，从细胞中分离RNA，以定量实时PCR测定因子11的mRNA水平。根据RIB0GREEN 测定的总的RNA量对因子11的mRNA水平进行校正。结果以相对于未处理的对照细胞的因子11的抑制百分比来表示。表1和2中的嵌合型反义寡核苷酸被设计为5-10-5 MOE gapmer。gapmer长度为 20个核苷酸，其中，中央的间隙区段由10个2’ -脱氧核苷酸组成，两边(在5’和3’方向) 为各包含5个核苷酸的侧翼。5’侧翼区段中的每个核苷酸和3’侧翼区段中的每个核苷酸有2’ -MOE修饰。每条gapmer中的核苷内连接是磷硫酰(P =幻连接。每条gapmer中的所有胞嘧啶核苷都是5-甲基胞嘧啶核苷。“目标起始位点”是指gapmer靶向的最5’端的核苷酸。“目标终止位点”是指gapmer靶向的最3’端的核苷酸。表1中所列的每条gapmer 靴向SEQ ID NO :1(GENBANK登录号NM_000128. 3)，表2中所列的每条gapmer靶向SEQ ID NO 2 (GENBANK 登录号 NT_022792. 17，19598000 至 19624000 缺失)。表1具有靶向SEQ ID NO=I的5_10_5M0E侧翼和脱氧间隙的嵌合型反义寡核苷酸对人因子IlmRNA水平的抑制
权利要求
1.一种化合物，包含由12至30个连接的核苷组成的修饰寡核苷酸，并且所述修饰寡核苷酸包含包括SEQ ID NO 223的至少12个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
2.如权利要求1所述的化合物，由单链修饰寡核苷酸构成。
3.如权利要求2所述的化合物，其中，所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与SEQID NO 1的核苷碱基序列100%互补。
4.如权利要求2所述的化合物，其中，至少一个核苷内连接是修饰的核苷内连接。
5.如权利要求4所述的化合物，其中，每一个核苷内连接是磷硫酰核苷内连接。
6.如权利要求1所述的化合物，其中，至少一个核苷包含修饰糖。
7.如权利要求6所述的化合物，其中，至少一个修饰糖是双环糖。
8.如权利要求7所述的化合物，其中，所述至少一个双环糖的每一个包含4’-(CH2)n-0-2’ 桥联，其中η为1或2。
9.如权利要求7所述的化合物，其中，所述至少一个双环糖的每一个包含 4’ -CH(CH3)-0-2’ 桥联。
10.如权利要求6所述的化合物，其中，至少一个修饰糖包含2’-0-甲氧乙基基团。
11.如权利要求1所述的化合物，包含至少一个四氢吡喃修饰的核苷，其中，四氢吡喃环取代了呋喃环。
12.如权利要求11所述的化合物，其中，所述至少一个四氢吡喃修饰的核苷中的每一个包含如下结构其中，Bx是可选择地被保护的杂环碱基。
13.如权利要求2所述的化合物，其中，至少一个核苷包含修饰核苷碱基。
14.如权利要求13所述的化合物，其中，所述修饰核苷碱基是5-甲基胞嘧啶。
15.如权利要求1所述的化合物，其中，所述修饰寡核苷酸包含 由连接的脱氧核苷组成的间隙区段；由连接的核苷组成的5’侧翼区段； 由连接的核苷组成的3’侧翼区段；其中，所述间隙区段直接相邻于且位于5’侧翼区段和3’侧翼区段之间，其中，每一侧翼区段的每个核苷包含修饰糖。
16.如权利要求15所述的化合物，其中，所述修饰寡核苷酸包含 由10个连接的脱氧核苷组成的间隙区段；由5个连接的核苷组成的5’侧翼区段； 由5个连接的核苷组成的3’侧翼区段；其中，所述间隙区段直接相邻于且位于5’侧翼区段和3’侧翼区段之间，其中，每一侧翼区段的每个核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖；其中，每一个核苷内连接是磷硫酰连接。
17.如权利要求16所述的化合物，其中，每一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
18.如权利要求2或17所述的化合物，其中，所述修饰寡核苷酸由20个连接的核苷所组成。
19.一种如权利要求1至18中的任一项的用于治疗血栓栓塞性并发症的化合物。
20.如权利要求19所述的化合物，其中，所述动物是人。
21.如权利要求20所述的化合物，用于预防深静脉血栓形成。
22.如权利要求20所述的化合物，用于预防肺栓塞。
23.如权利要求19所述的中化合物，用于与选自阿司匹林、氯吡格雷、双嘧达莫、肝素、 来匹卢定、噻氯匹啶、华法林、阿哌沙班、利伐沙班、依诺肝素钠和因子叙抑制剂的任意组共同给药。
24.如权利要求19所述的化合物，用于与选自阿司匹林、氯吡格雷、双嘧达莫、肝素、来匹卢定、噻氯匹啶、华法林、阿哌沙班、利伐沙班、依诺肝素钠和因子)(a抑制剂的任意组随附给药。
25.如权利要求23所述的化合物，用于非消化道给药。
26.如权利要求M所述的化合物，用于非消化道给药。
27.如权利要求25所述的化合物，用于皮下或静脉给药。
28.如权利要求沈所述的化合物，用于皮下或静脉给药。
29.一种化合物，包含由12至30个连接的核苷组成的修饰寡核苷酸，其中，所述修饰寡核苷酸与因子11核酸互补，用于治疗凝血紊乱。
30.如权利要求1至18中任一项所述的化合物与选自阿司匹林、氯吡格雷、双嘧达莫、 肝素、来匹卢定、噻氯匹啶、华法林、阿哌沙班、利伐沙班和依诺肝素钠的任意组，在用于治疗血栓栓塞性并发症的药剂生产中的用途。
31.一种组合物，包含由12至30个连接的核苷组成的修饰寡核苷酸，并且该修饰寡核苷酸包含包括SEQ ID NO :223的至少12个连续核苷碱基的核苷碱基序列，或其盐以及药用可接受的载体或稀释剂。
32.如权利要求31所述的组合物，由单链寡核苷酸组成。
33.如权利要求32所述的组合物，其中，所述修饰寡核苷酸由20个连接的核苷所组成。
34.一种方法，包括鉴定具有血栓栓塞性并发症风险的动物；以及将治疗有效量的包含由12至30个连接的核苷所组成的修饰寡核苷酸的化合物给药于所述有风险的动物，其中，所述修饰的寡核苷酸与因子11核酸互补。
35.如权利要求34所述的方法，其中，血栓栓塞性并发症是深静脉血栓形成、肺栓塞或其组合。
36.一种方法，包括鉴定患有凝血紊乱的动物；以及将治疗有效量的包含由12至30个连接的核苷所组成的修饰寡核苷酸的化合物给药于该动物，其中，所述修饰的寡核苷酸与因子U核酸互补。
37.如权利要求36所述的方法，包括将化合物与选自阿司匹林、氯吡格雷、双嘧达莫、 肝素、来匹卢定、噻氯匹啶、华法林、阿哌沙班、利伐沙班、依诺肝素钠和因子叙抑制剂的任意组共同给药。
38.一种方法，包括降低动物中血栓栓塞性并发症的风险；以及将治疗有效量的包含由12至30个连接的核苷所组成的修饰寡核苷酸的化合物给药于该动物，其中，所述修饰的寡核苷酸与因子U核酸互补。
39.一种方法，包括治疗治疗动物中凝血紊乱；以及将治疗有效量的包含由12至30个连接的核苷所组成的修饰寡核苷酸的化合物给药于该动物，其中，所述修饰的寡核苷酸与因子U核酸互补。
40.如权利要求39所述的方法，包括通过将修饰寡核苷酸的解毒剂给药以逆转所述动物体内因子11的抑制。
41.如权利要求39所述的方法，其中，所述解毒剂是与所述修饰寡核苷酸互补的寡核苷酸。
42.如权利要求40所述的方法，包括通过给药选自因子7、因子7a、因子11或因子1Ia 蛋白的任意组，以逆转所述动物体内因子11的抑制。
43.一种方法，包括鉴定具有血栓栓塞性并发症风险的动物；以及向所述有风险的动物给药治疗有效量的因子11特异性抑制剂与抗血小板治疗药物。
44.一种方法，包括鉴定患有凝血紊乱的动物；以及向所述动物给药治疗有效量的因子11特异性抑制剂与抗血小板治疗药物。
45.一种方法，包括降低动物体内血栓栓塞性并发症的风险；以及向所述动物给药治疗有效量的因子11特异性抑制剂与抗血小板治疗药物。
46.一种方法，包括治疗动物体内凝血紊乱；以及向所述动物给药治疗有效量的因子11特异性抑制剂与抗血小板治疗药物。
47.如权利要求43至46中任一项所述的方法，其中，所述抗血小板治疗药物选自ADP 受体抑制剂、NSAID、磷酸二酯酶抑制剂、糖蛋白IIB/IIIA抑制剂或腺苷重摄取抑制剂或其组合。
48.如权利要求47所述的方法，其中，NSAID是阿司匹林、萘普生或二者的组合。
49.如权利要求47所述的化合物，其中，ADP受体/P2Y12抑制剂是噻吩吡啶。
50.一种化合物，包含由12至30个连接的核苷组成的修饰寡核苷酸，并且该修饰寡核苷酸包含包括与SEQ ID NO :1的核苷碱基738至762的等长部分互补的至少8个连续核苷碱基部分的核苷碱基序列；其中，所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与SEQ ID N0:1至少 90%互补。
51.一种化合物，包含由12至30个连接的核苷组成的修饰寡核苷酸，并且该修饰寡核苷酸包含包括与SEQ ID NO 1的核苷碱基656至704的等长部分互补的至少8个连续核苷碱基部分的核苷碱基序列；其中，所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与SEQ ID N0:1至少 90%互补。
52.一种化合物，包含由12至30个连接的核苷组成的修饰寡核苷酸，并且该修饰寡核苷酸包含包括与SEQ ID NO 1的核苷碱基1018至1042的等长部分互补的至少8个连续核苷碱基部分的核苷碱基序列；其中，所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与SEQ ID N0:1至少90%互补。
53.一种化合物，包含由12至30个连接的核苷组成的修饰寡核苷酸，并且该修饰寡核苷酸包含包括与SEQ ID NO 1的核苷碱基1062至1091的等长部分互补的至少8个连续核苷碱基部分的核苷碱基序列；其中，所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与SEQ ID N0:1至少90%互补。
54. 一种化合物，包含由12至30个连接的核苷组成的修饰寡核苷酸，并且该修饰寡核苷酸包含包括与SEQ ID NO 1的核苷碱基1275至1318的等长部分互补的至少8个连续核苷碱基部分的核苷碱基序列；其中，所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与SEQ ID N0:1至少90%互补。
全文摘要
此处披露了用于在需要的个体中降低因子11以及治疗或预防血栓栓塞性并发症的反义化合物和方法。可以通过将靶向因子11的反义化合物给药而改善的疾病状况的例子包括血栓形成、栓塞以及血栓栓塞，比如如深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中风。靶向因子11的反义化合物也可以用作防止个体血栓形成及栓塞风险的预防性治疗。
文档编号A61K31/70GK102245186SQ200980150276
公开日2011年11月16日 申请日期2009年10月15日 优先权日2008年10月15日
发明者A·M.·斯夫科夫斯基, B·P.·莫尼亚, J·R.·克罗斯比, S·M.·弗赖尔, 张宏, 赵臣广 申请人:Isis制药公司