专利名称：醋酸普兰林肽缓释微球制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，是醋酸普兰林肽的一种新剂型一微球制剂及其制备 方法。
背景技术：
胰淀粉样多肽是一种由37个氨基酸残基构成的多肽激素，在餐后由胰腺β细胞 释放，具有多种生理功能，如减慢食物(包括葡萄糖)在小肠的吸收速度，通过抑制高血 糖素减少肝糖的产生，减少患者食欲，协助机体调节血糖水平等等(Yong AA, Gedulin BR, Rink TJ. Dose-response for the slowing of gastric emptying in a rodent model byglucagons-like peptide(7-36)NH2, amylin cholecystokinin, and otherpossible regulator of nutrient uptake. Metabolism, 1996,45(1) :1_3)。不过，天然胰淀粉样多肽 在溶液中并不稳定，易水解，具有粘稠性大、易凝集的特点，因而不适合用于治疗。醋酸普兰 林肽是经筛选、合成出的一种稳定的胰淀粉样多肽类似物。醋酸普兰林肽与胰淀粉样多肽 的氨基酸序列差异表现在前者第25、28和29位上由脯氨酸所替代，其氨基酸序列为Lys-C ys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-As n-Asn-phe-Gly-Pro-IIe-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr-NH2ο 石if 究证 实，醋酸普兰林肽可以延缓葡萄糖的吸收，抑制胰高血糖素的分泌，减少肝糖生成和释放， 因而具有降低糖尿病患者体内血糖波动频率和波动幅度，改善总体血糖控制的作用(Ryan GL, Jobe LJ, martin R. Pramlintide in the treatment of typej andtype2 diabetes mellitus. Clin Ther 2005，27 :1500-1512)。2005 年 3 月美国 FDA 批准醋酸普兰林肽(一 种笔型注射剂)作为1型及2型糖尿病患者的辅助用药。然而，由于醋酸普兰林肽在体内 的半衰期很短(约为29分钟)，需每天多次给药，连续给药数周，如此频繁地注射给药无疑 给患者的身心带来巨大的痛苦，由于顺应性差，极容易导致中途治疗的失败。
发明内容
本发明目的在于采用PLGA为载体，将醋 酸普兰林肽制备成微球制剂，达到增加药 物稳定性，延长药物作用时间，减少注射次数和用量，提高药物疗效与经济效益的目的，并 提供醋酸普兰林肽微球的制备方法。本发明的醋酸普兰林肽微球的制备方法，是采用复乳——溶剂蒸发法。将醋酸普 兰林肽溶解于PBS溶液中形成内水相；将PLGA溶解于有机溶剂中形成有机相；再将内水相 与有机相混合，超声或搅拌乳化成W/0初乳；然后将初乳在搅拌的条件下加到外水相PVA水 溶液中，乳化成W/0/W复乳；再低速搅拌，使有机溶剂挥发完全；离心、洗涤、收集微球，低温 真空干燥得到微球成品。醋酸普兰林肽微球的制备方法，其特征在于制备方法包括以下步骤(1)醋酸普兰林肽PBS溶液的配制在避光的条件下，将醋酸普兰林肽溶解于PBS溶液中，得到内水相，醋酸普兰林肽的浓度15 30% g/ml。(2) PLGA 的配制将PLGA溶解于有机溶剂中形成有机相，PLGA的浓度20 50 % g/ml。(3)初乳的制备在避光的条件下，控制温度在10°C左右，将内水相与有机相混合形成初乳，超声乳化的功率为20 90W，时间0. 5 2分钟或搅拌乳化的速度为1000 30000rpm，时间0. 5 2分钟，有机相与内水相的体积比为10 1 10 3。(5)复乳的制备在避光的条件下，控制温度在10°C左右，把初乳在搅拌的情况下加到一定浓度的 PVA和NaCl的外相水溶液中，乳化成W/0/W复乳；复乳形成的搅拌速度为1000 30000rpm， PVA溶液的浓度为0. 5 10% g/ml,NaCl溶液的浓度为0. 5 10% g/ml，乳化时间为1 5分钟，初乳与外水相的体积比为1 50 1 150。(5)微球的形成在避光的条件下，控制温度在10°C左右，将复乳溶液移至低速搅拌直到有机溶剂挥发完全，离心、洗涤后收集微球；搅拌速度为300-500rpm，离心速度为4000 15000rpm， 离心时间为5 10分钟，洗涤次数为3次，低温真空干燥。本发明的积极效果是本发明采用复乳——溶剂蒸发法制备出醋酸普兰林肽微球，微球制备工艺稳定、可行，其体外释药性能符合长效制剂特征，可延长药物作用时间，提 高药物疗效与经济效益。
图1表示实施例1的醋酸普兰林肽微球的粒径分布图2表示实施例2的醋酸普兰林肽微球的粒径分布图3表示实施例3的醋酸普兰林肽微球的粒径分布图4表示实施例2的醋酸普兰林肽微球的体外释放曲线
具体实施例方式以下实施例对本发明作进一步的描述，以便本领域内的技术人员进一步理解，但不以任何形式限制本发明。实施例1精密称取50mg醋酸普兰林肽溶于0. 25ml PH7. 4的PBS缓冲液中，形成内水相，将PLGA(Mw = 15000,75 25)400mg溶解于2ml 二氯甲烷中形成有机相，将上述内水相加至 有机相中，IOOOOrpm高速分散乳化，形成W/0初乳，将含2% PVA溶液120ml (含10% NaCl) 置于搅拌容器中，将此初乳在高速搅拌(22000rpm)的情况下加到2% PVA溶液120ml (含 10% NaCl)中充分勻化成W/0/W复乳，2分钟后，将转速下调至400rpm，低温下(4 10°C ) 搅拌4小时，微球硬化后离心分离并洗涤，低温(4 10°C )真空干燥即可。实施例2精密称取50mg醋酸普兰林肽溶于0. 25ml PH7. 4的PBS缓冲液中，形成内水相，将PLGA(Mw= 15000,75 25)400mg溶解于1. 5ml 二氯甲烷中形成有机相，将上述内水相加至有机相中，IOOOOrpm高速分散乳化，形成W/Ο初乳，将含2% PVA溶液120ml (含10% NaCl) 置于搅拌容器中，将此初乳在高速搅拌(16000rpm)的情况下加到2 % PVA溶液120ml (含 10% NaCl)中充分勻化成W/0/W复乳，2分钟后，将转速下调至400rpm，低温下(4 10°C ) 搅拌4小时，微球硬化后离心分离并洗涤，低温(4 10°C )真空干燥即可。实施例3精密称取50mg醋酸普兰林肽溶于0. 25ml PH7. 4的PBS缓冲液中，形成内水相，将 PLGA(Mw = 15000,75 25)400mg溶解于Iml 二氯甲烷中形成有机相，将上述内水相加至 有机相中，IO OOOrpm高速分散乳化，形成W/0初乳，将含2% PVA溶液120ml (含10% NaCl) 置于搅拌容器中，将此初乳在高速搅拌(lOOOOrpm)的情况下加到2 % PVA溶液120ml (含 10% NaCl)中充分勻化成W/0/W复乳，2分钟后，将转速下调至400rpm，低温下(4 10°C ) 搅拌4小时，微球硬化后离心分离并洗涤，低温(4 10°C )真空干燥即可。实验例1醋酸普兰林肽微球的体外释放试验实验样品根据本发明实施例2所述的方法制备的微球。实验试剂pH7. 4的磷酸盐缓冲液(PBS，含抑菌剂0. 02 % NaN3,润湿剂0. 02 % Tween-80和吸附抑制剂0. 02% Tween-20)作为释放介质。实验仪器恒温振荡器、离心机。实验条件温度37 士 1°C，转速100转/分钟。实验方法精密称取实验样品约15mg，置于容积为15ml的具盖的离心管中，加入 5ml释放介质(pH为7. 4的磷酸盐缓冲液)，置于恒温振摇器中，在温度37 士 1 °C，转速为100 转/分的条件下进行考察，每隔三天吸取试管上部的释放介质，添加等量的新鲜介质。分别 在第1天，7天，15天和30天取出试管，在4000rpm离心20分钟，吸去上清液，沉淀物进行 低温真空干燥，沉淀物用乙睛破球，用HPLC检测微球内剩余药量。实验结果所得结果如图4所示，本发明醋酸普兰林肽的微球的释放可以长达30 天，达到了大大减少给药次数，提高其生物利用度的目的。
权利要求
一种醋酸普兰林肽微球制剂的制备方法，在避光的条件下按以下步骤进行将醋酸普兰林肽溶解于PBS(磷酸盐缓冲液)溶液中形成内水相；将聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)溶解于有机溶剂中形成有机相；再将内水相与有机相混合，超声或搅拌乳化成W/O初乳；然后将初乳在搅拌的条件下加到外水相PVA水溶液中，乳化成W/O/W复乳；再低速搅拌，使有机溶剂挥发完全；离心、洗涤、收集微球，低温真空干燥得到微球成品。
2.如权利要求1所述的醋酸普兰林肽微球的制备方法，其特征在于制备方法包括以 下步骤(1)醋酸普兰林肽PBS溶液的配制在避光的条件下，将醋酸普兰林肽溶解于PBS溶液中，得到内水相，醋酸普兰林肽的浓 度 15 30% g/mlo(2)PLGA的配制将PLGA溶解于有机溶剂中形成有机相，PLGA的浓度20 50% g/ml。(3)初乳的制备在避光的条件下，控制温度在10°C左右，将将内水相与有机相混合形成初乳，超声乳化 的功率为20 90W，时间0. 5 2分钟或搅拌乳化的速度为1000 30000rpm，时间0. 5 2分钟，有机相与内水相的体积比为10 1 10 3。(4)复乳的制备在避光的条件下，控制温度在10°C左右，把初乳在搅拌的情况下加到一定浓度的PVA 和NaCl的外相水溶液中，乳化成W/0/W复乳；复乳形成的搅拌速度为1000 30000rpm，PVA 溶液的浓度为0. 5 10% g/ml,NaCl溶液的浓度为0. 5 10% g/ml，乳化时间为1 5分 钟，初乳与外水相的体积比为1 50 1 150。(5)微球的形成在避光的条件下，控制温度在10°C左右，将复乳溶液移至低速搅拌直到有机溶剂挥发 完全，离心、洗涤后收集微球；搅拌速度为300-500rpm，离心速度为4000 15000rpm，离心 时间为5 10分钟，洗涤次数为3次，低温真空干燥。
3.如权利要求1或2所述的醋酸普兰林肽聚乳酸_羟基乙酸共聚物微球的制备方法， 其特征在于所述的有机溶剂包括二氯甲烷、氯仿、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氧六环、乙醚、丙 酮和四氢呋喃以及由它们所组成的混合物，优选二氯甲烷。
4.如权利要求1或2所述的醋酸普兰林肽微球的制备方法，其特征在于所述的共聚物 为乳酸和羟基乙酸共聚物(PLGA)，乳酸和羟基乙酸的分子量大小5000 150000，其单体组 成比例乳酸羟基乙酸为99 1 50 50，其在有机溶剂中的浓度为20 50% g/ml。
全文摘要
本发明公开一种醋酸普兰林肽的缓释微球制剂及其制备方法。该方法将醋酸普兰林肽溶解于PBS溶液中形成内水相；将聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)溶解于有机溶剂中形成有机相；再将内水相与有机相混合，超声或搅拌乳化成W/O初乳；然后将初乳在搅拌的条件下加到外水相PVA水溶液中，乳化成W/O/W复乳；再低速搅拌，使有机溶剂挥发完全；离心、洗涤、收集微球，低温真空干燥得到微球成品。采用该方法制备的微球形态圆整，表面光滑，流动性好，其体外释药性能符合长效制剂特征。
文档编号A61K38/16GK101797234SQ20101011068
公开日2010年8月11日 申请日期2010年2月21日 优先权日2010年2月21日
发明者张国华 申请人:华利源(上海)生物医药科技有限公司