专利名称：一种脂质微球组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生物制品，特别是涉及一种可以安全的用于人或其他动物体内的含有疫苗的脂质微球组合物，作为新型的疫苗佐剂和输送系统，特别重要的是本发明所述脂质微球组合物能很好地增强人体对各种抗原的免疫应答，具备优良的免疫调节功能从而达到交叉保护的效果，属于生物医药技术领域。
背景技术：
据2010年1月20日的《科学-转化医学》杂志报道说，目前在欧洲版本的针对大流行性的Hmi流感疫苗中所应用的疫苗可彻底地改变身体对流感疫苗的免疫反应，并增强身体产生对多种类型流感的抗体反应的能力。佐剂是人们经常加入到疫苗之中以增强免疫反应的物质，但它们本身则没有功效；这种现象的确切原因仍然让科学家们感到困惑。通过增强免疫反应，佐剂可让人们仅用较低剂量的疫苗，而疫苗供应在有的时候可能会是非常稀缺的，就像是在2009年秋季所看到的季节性流感疫苗的短缺。这些发现提示，某些佐剂可极大地改善大规模疫苗接种的效果，并对有关的流感病毒产生交叉性的保护。在这项研究中，Surender Khurana及其同僚对机体在加有或没有加MF59佐剂的情况下对某种禽流感疫苗所产生的免疫反应做了精密的比较。他们发现，将佐剂与疫苗进行混合之后可产生能够识别范围更为广泛的不同流感抗原的抗体，其中包括某些已知的可灭活禽流感病毒的抗体。具体地说，MF59可增加抗禽流感的抗体量，同时也会增加抗体类型的多样性。预计这些多样化的抗体可对多种类型的流感产生涵盖面广泛的保护作用。目前人们正在研发许多新型的疫苗佐剂。通过查明佐剂在疫苗中的作用，这些结果可能会帮助疫苗制造商选择那些最有可能对流感提供更好保护作用的疫苗。佐剂是非特异性免疫增强剂，当与抗原一起注射或预先注入机体时，可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。由于流感病毒很容易变异，近年来各国政府和相关企业不得不疲于开发新疫苗， 并为民众同时注射新疫苗和季节性流感疫苗。美国药管局的新研究表明，接种含有佐剂的单一流感疫苗有可能使接种者对多种流感病毒产生免疫力。疫苗佐剂在欧盟国家和加拿大被广泛使用。此前有研究显示，佐剂可以延长疫苗的有效作用时间。美国政府已购买了价值近7亿美元的佐剂，美提供6000万美元资金，供企业和研究人员研制新型佐剂。2007年在第九届国际呼吸道病毒感染研讨会上披露的两项临床研究数据首次显示，配方以葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司(GSK)专利佐剂系统的大流行强裂解抗原 H5N1疫苗，可以提供对预防H5W型毒株足够水平的交叉免疫力，从而在H5W型病毒引发人类大流行时，保护接种过疫苗的人群。第一项研究数据显示，用GSK专利佐剂技术生产的大流行前流感疫苗中，仅含有非常低水平的越南H5m型抗原，却能够在人体诱导强大的针对印度尼西亚病毒株交叉免疫中和抗体应答。和注射不含佐剂疫苗所得到的实验数据相比，如果在疫苗中添加了佐剂， 在第42天的中和性抗体血清阳转率是前者的25倍。这说明，添加了佐剂的疫苗敏感度要大大高于不添加佐剂的疫苗。第二项研究数据表明，同样在抗原使用量非常低的情况下，GSK专利佐剂大流行前疫苗可以抵抗两种H5m型流感毒株。临床前的体内研究数据表明，含有越南H5m毒株的 GSK佐剂疫苗，不仅可以抵抗疫苗毒株的攻击，而且可以对发生抗原性漂移的印度尼西亚 H5N1毒株的致死性攻击提供96%的交叉保护。这提示给予额外的加强免疫，可以期望接种此种流感疫苗，能够作为流感大流行前的一项应对措施。欧洲专家表示，在世界各种鸟类中呈地方性流行的禽H5W病毒，最有可能成为大流行的毒株。目前GSK专利佐剂系统的大流行强裂解抗原H5m疫苗，已在欧洲生产和使用。复立达(英文商品名Fluad)是诺华(Novartis)疫苗公司生产的含创新佐剂MF59 的亚单位流感疫苗。MF59是一种水包油的乳剂，包含鲨烯，0. 5% Tween80和0. 5%三油酸聚山梨脂的水包油乳液。被用于诺华公司的流感疫苗复立达中，在欧洲它是第一个被批准的添加佐剂的流感疫苗。经我国药品食品监督管理局(SFDA)批准，2009年，复立达流感佐剂亚单位疫苗已经被允许上市，成为我国目前唯一的老年专用流感疫苗。最早用于人类的铝佐剂，使用研究已经有近八十年的历史，尽管人们为研究新的佐剂配方付出巨大努力，但具有生产许可的新疫苗佐剂依然很少。1999年ECPI世界疫苗大会认为，“WHO或其他卫生权威部门试图夸大疫苗的绝对安全性的做法是不妥的，任何医药制品的使用都具有危险性，即使是最后的儿童疫苗也可能产生严重的个体与疫苗之间的相互作用”。但无论怎样，如果没有严格的毒性检测，佐剂疫苗是不会被批准使用的，这一原则将始终遵循。美国生物制品评价与研究中心期望继续对佐剂本身、也对佐剂疫苗混合物的毒性进行研究和评价。原因很简单，因为人类将继续面对新感染疾病的危机；面对那些因人类迁移和气候变化带来的原有疾病的威胁；现代人类的旅行活动会向新环境传播疾病。目前，已有大量关于佐剂选择的研究，但人们仍希望更多的佐剂和输送系统的研究能够尽早成功，并用于开发有效的疫苗。已经公开的数十篇外企在华申请的佐剂相关专利，分析其权利范围，多数以矿物油、角鲨烯和角鲨烷为油性基质制成的为水包油型的乳化液。其中CN127083.8A， CN1852735、CN10184501和CN101184501专利描述所用的油均为矿物油，这种油注射后，不能被动物经体内代谢和消除，以致它残留下来作为严重的慢性炎症和结痴的来源，因此也绝非能用于制造人类的疫苗佐剂中的组成物；CN1153064、CN10217977A、CN101365485和 CN101678096A主要采用了角鲨烯和角鲨烷为油性基质，该油是可代谢的，具备可允许用于注射药品的品质，为了乳化完全由C、H两种元素组成的烷/烯烃类油脂，使用了亲水类和亲油类2种不同的非离子型表面活性剂乳化制成。MF59与AS03乳状液是目前最成功的疫苗佐剂，然而在使用上仍有其副作用。事实上，MF59与AS03所选用的核心油脂角鲨烯，长久以来即有引起慢性发炎以及自身免疫破坏性疾病的疑虑，例如波湾战争综合病征(Gulf War Syndrome，GWS)，致使美国FDA至今迟迟未核准含有角鲨烯成分的疫苗上市；此外，这些疫苗所选用的乳化剂Span 85与Tween 80， 虽然俱备安全性高的特性，且已被长久使用于食品、化妆品或作为体内注射使用，但是此类型乳化剂皆属于多元醇类非离子型界面活性剂，无法有效刺激免疫细胞。因此，经由此制备而得的MF59、AS03均属于疫苗输送系统，虽然可以利用其抗原控制释放的能力来增强由病毒抗原所诱导引发的适应性免疫反应，达到对抗该病毒的效果，却因为缺乏免疫调节功能， 无法达到交叉保护的效果。表1 MF59和AS03乳化佐剂的比较
权利要求
1.一种脂质微球组合物，其特征在于包括有脂质微球乳剂和免疫原性组合物两部分， 脂质微球乳剂与免疫原性组合物的比例为10 1至1 10之间，其中脂质微球乳剂重量的1 30% (w/w)为医药级油脂，脂质微球乳剂重量的0. 1 10% (w/w)为两性离子/非离子表面活性剂组合，脂质微球乳剂重量的0.01 5% (w/w)为稳定剂，余量为水性溶液；免疫原性组合物是单价至多价，通常为3价组合物，其中包含来自一种或一种以上与大流行流感爆发相关或具有与大流行流感爆发相关的流感病毒株的病毒抗原或抗原性制剂。
2.根据权利要求1所述的脂质微球组合物，其特征在于所述脂质微球乳剂为外观带有淡蓝色乳光或乳白状液体并均勻分散于水性介质中，平均粒径为50 500nm。
3.权利要求2所述的脂质微球组合物，其特征在于所述的液体，进一步通过固化技术， 制成干燥的粉末或块状的脂质微球乳剂，临用前用水性溶液复性瞬即形成乳化液，平均粒径为50 500nm。
4.根据权利要求1所述的脂质微球组合物，其特征在于所述医药级油脂为至少为经过精制的植物油和动物油、天然或人工修饰/全合成的油中的一种，优选大豆油、中链甘油三酯、橄榄油、维生素E中的1种或2种以上的特征组合；所述两性离子/非离子表面活性剂组合，包含天然或人工修饰/全合成的，优选大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂及其衍生物、天然的D(L)-维生素E琥珀酸脂聚乙二醇衍生物(TPGS)、聚乙二醇660-12-羟基硬脂酸酯(HS-15)、Poloxamer (188)、聚山梨酯类(Tween-80)的1种或2种以上的特征组合；所述稳定剂，优选油酸、胆酸或脱氧胆酸及其钠盐，甘胆酸钠中的1种或2种以上的特征组合；所述水性溶液，是免疫原性组合物溶液，或纯化水、注射用水、甘油水溶液、缓冲盐水溶液的1种或2种以上的组合，或临床上可用的输液。
5.根据权利要求1所述的脂质微球组合物，其特征在于含有下列所述a d中的一种或2种以上的特征组合a、乳化液渗透压在200m0sm/kg-400m Osm/kg之间，优选M0-360m0sm/kg之间；b、pH为3 10，优选pH为5 8；c、脂质微球的平均粒径在50 500nm之间，优选100 300nm之间；d、含有单糖、二糖及多糖、甘露醇作为固化脂质微球工艺过程的保护剂，优选二糖。
6.根据权利要求1所述的脂质微球组合物，其特征在于所述免疫原性组合物包含来自至少三种季节性流感病毒株的病毒抗原或抗原性制剂，并且任选包含至少一种与大流行流感爆发相关或具有与大流行流感爆发相关的流感病毒株的病毒抗原或抗原性制剂。
7.根据权利要求1所述的脂质微球组合物，其特征在于所述大流行流感病毒株选自人类流感病毒中 A、B、C 型，包含 HlNl，H2N2，H3N2,H5N1, H7N7，H1N2，H9N2，H7N3，H10N7 ；猪型流感病毒 HlNl，H1N2, H3N1, H3N2 ；以及狗或马型流感病毒H7N7，H3N8 ；或禽流感病毒 H5N1，H7N2, H1N7, H7N3, H13N6, H5N9, H11N6, H3N8, H9N2, H5N2, H4N8,H10N7, H2N2, H8N4, H14N5, H6N5和H12N5中的一种或一种以上的流感病毒组合。
8.根据权利要求1所述的脂质微球组合物，其特征在于所述流感病毒抗原或其抗原性制剂来自于在卵(鸡胚)或细胞培养物上生长的流感病毒，或重组基因表达，合成的免疫原性组合物包括完整病毒、裂解病毒、病毒体或选自HA，NA, Ml, M2的一种或多种纯化的抗原。
9.根据权利要求1所述的脂质微球组合物，其特征在于所述的抗原包括但不限于人类抗原，非人类动物抗原，植物抗原，细菌抗原，真菌抗原，病毒抗原，寄生虫抗原或是癌肿抗原。
10.根据权利要求1所述的脂质微球组合物，其特征在于所述病毒抗原或抗原性制剂是每种流感病毒株每个人用剂量15 μ g或少于15 μ g HA，优选每剂2 7. 5 μ g HA。
11.根据权利要求1所述的脂质微球组合物，其特征在于所述免疫原组合物可独立包装，也可与乳化液混合后包装或混合后进一步固化得到干燥的脂质微球组合物。
12.权利要求1所述的脂质微球组合物的用途，其特征在于含有免疫原性组合物的脂质微球组合物的用途为作为疫苗的输送系统使用，包括静脉注射、脊椎腔注射、肌内注射、 皮下注射、皮内注射、经呼吸道喷入或吸入、腹腔给药、经鼻给药、经眼给药、经口给药、直肠给药、阴道给药、局部给药、透皮给药。
13.根据权利要求12所述的脂质微球组合物，其特征在于所述疫苗的输送系统，临床用于预防人类宿主或人群的季节性或大流行流感感染之一或这两者，所述人类宿主或人群年龄为65岁或以上的老年人、年龄为0 18岁的儿童及青少年，以及年龄为18岁以上的成年人。
全文摘要
一种脂质微球组合物，其特点是包括脂质微球乳剂和免疫原性组合物，其中脂质微球乳剂重量的1～30％(w/w)为医药级油脂，脂质微球乳剂重量的0.1～10％(w/w)为两性离子/非离子表面活性剂组合，脂质微球乳剂重量的0.01～5％(w/w)为稳定剂，余量为水性溶液；免疫原性组合物是单价至多价，通常为3价组合物，其中包含来自一种或一种以上与大流行流感爆发相关或具有与大流行流感爆发相关的流感病毒株的病毒抗原或抗原性制剂。本发明不仅可作为疫苗优良佐剂，还可作为疫苗的输送系统，适用于疫苗的不同给药途径，增加临床应用的顺应性、多样性和选择性，达到更加广泛、安全、有效的免疫效果。
文档编号A61K39/145GK102293743SQ20101020824
公开日2011年12月28日 申请日期2010年6月24日 优先权日2010年6月24日
发明者万艾玲, 周荔葆, 李淑斌, 段鹏杰, 殷建文, 高军, 魏晓莹 申请人:辽宁成大生物股份有限公司