专利名称：一种三尖杉内生真菌次生代谢产物中的新化合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体地说是涉及一种三尖杉(Cephalotaxus fortunei)内生真菌发酵产物中的新化合物，即一种木霉属内生真菌深绿木霉Trichoderma atroviride发酵产物中新化合物Trichodermanin B ；此外，本发明还涉及该化合物的的制备方法，以及iTrichodermanin B的用途。
背景技术：
内生真菌(Endophytic fungi)是指在生活史中某一阶段或整个阶段存在于健康植物组织内部，对植物组织没有引起明显病症或对宿主没有造成明显伤害的真菌。全世界已经研究过内生真菌的植物约有400种。自从1993年短叶红豆杉Taxus brevifolia的韧皮部分离到一株产抗癌物质紫杉醇的内生真菌。近二十年来发表的关于植物内生真菌的研究中涉及到的药用植物有47科110余种，并且研究多集中在内生真菌对植物影响的生理生化机制，生物转化，次生代谢物中的活性物质分离提取，以及活性此生代谢产物的产量调控等方面。这些都充分说明内生真菌可以作为生物活性代谢产物的潜在资源库，具有很大的深入研究的价值。三尖杉C印halotaxus fortune Hook. f.又名榧子、血榧、石榧，为三尖杉科三尖杉属，是我国亚热带特有的重要药源植物，其木材坚实，有弹性，具有多种用途，种子榨油可供制皂及油漆，果实入药有润肺、止咳，消积之效，其叶、枝，种子及根等可提取多种植物碱 (三尖杉碱，三尖杉酯碱，高三尖杉酯碱等)，可治疗癌症(其中主要用于提炼高三尖杉酯碱用于治疗急性粒细胞性白血病)，所以三尖杉是一种具有多种用途的重要野生经济植物，具有多方面的保护价值。由于其良好的抗癌活性，目前三尖杉植物资源被过度利用，资源数量急剧减少，处于渐危状态。若不加以保护有可能进一步陷入濒危境地。因此，寻找与之相关的活性产物新来源，是十分需要和迫切的。而内生真菌正是其中一个很好的可以深入研究的活性代谢产物的来源。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种三尖杉内生真菌发酵产物中的新化合物， 并提供该化合物的制备方法和用途。发明人在对三尖杉内生真菌的研究中，发现了一株木霉属内生真菌，即深绿木霉 Trichoderma atroviride,具有较好的抗稻瘟霉活性，发明人对其发酵产物在提取、分离和纯化方面进行了系统的研究，得到一种新化合物Trichodermanin B。进一步研究还发现该化合物的结构如下述结构式所示，其分子式为C15H28O3，分子量为256。
权利要求
1.具有下述结构式的化合物，其分子式为C15H28O3，分子量为256。
2.权利要求1所述的化合物的制备方法，以深绿木霉Trichodermaatrovirid为发酵菌种，先后采用液体发酵、溶剂萃取和硅胶色谱柱分离方法分离得到，包括如下步骤(1)菌种的准备使用PDA培养基，高温灭菌，制成斜面，置于常温状态下，无杂菌生长时，接种深绿木霉 Trichoderma atrovirid菌丝体，于常温下培养，作为菌种；(2)发酵种子液制备在多个锥形瓶中分别装入液体培养基；于高温灭菌后，进行接种Trichoderma atrovirid菌种，常温下振荡培养，将该培养物作为种子；(3)接种准备发酵瓶，发酵培养基适量，培养基组成与种子培养基相同，高温灭菌，接种，常温下震荡培养，真菌即可发酵成熟；(4)萃取待真菌发酵成熟后，分别收集发酵液和菌丝体①发酵液的处理方法待真菌发酵成熟后，过滤去菌丝体，对发酵成熟的滤液层进行乙酸乙酯部位的萃取，将乙酸乙酯部位合并、浓缩；②菌丝体的处理方法烘干菌丝体，用乙醇浸泡，再以乙醇为溶剂超声辅助萃取多次， 合并、浓缩乙醇；(5)单体分离纯化将发酵物萃取浓缩后的浸膏，用硅胶色谱柱分离，洗脱液的极性为石油醚丙酮 =15 1，以IOml为单位收集洗脱液，将第15管收集液重结晶，即可得到新化合物 Tri choderman inB0
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，( 发酵种子液制备中，常温下振荡培养是指 28°C、180r · min-1、培养 48h。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，(3)接种中，常温下震荡培养是指观！、 180r · mirT1，培养 6-7 天。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，菌丝体的处理方法包括如下步骤将菌丝体于30-70°C下烘干，用乙醇浸泡12-48小时，再以乙醇为溶剂超声辅助萃取1-5次，每次 10-50分钟，合并、浓缩乙醇。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征是，将菌丝体于50°C烘干，用乙醇浸泡M 小时，再以乙醇为溶剂超声辅助萃取3次，每次30分钟。
7.权利要求1所述的化合物在制备抗真菌的药物中的应用。
8.权利要求1所述的化合物在制备抗病毒的药物中的应用。
9.权利要求1所述的化合物在制备抗肿瘤的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种以一株三尖杉内生真菌深绿木霉Trichoderma atroviride为来源分离制备的具有下述结构式的化合物Trichodermanin B，其分子式为C15H28O3，分子量为256。本发明还公开了该化合物的制备方法，并通过体外实验发现其具有一定的抗真菌、抗病毒和抗肿瘤活性。本发明为新的活性药物开发打下了基础。
文档编号A61K31/343GK102464634SQ20101054158
公开日2012年5月23日 申请日期2010年11月11日 优先权日2010年11月11日
发明者孙培欣, 孙慧, 郑承剑, 韩婷, 马文辉 申请人:阅微生物技术(上海)有限公司