专利名称：竹节参皂苷v或/和竹节参总皂苷在制备抗血栓药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于中药领域，具体涉及竹节参皂苷ν或/和竹节参总皂苷在制备抗血栓 药物中的应用。
背景技术：
血栓的形成涉及到心脑血管疾病。特别是脑血栓的形成，可以由脑出血引起，可以 由脑缺血引起，可以由脑血管硬化引起，也可以由血液生化学变化引起。脑血栓的形成的致 死率和致残率极高。心肌梗塞同样是由血栓形成引起。心脑血管的血栓形成造成的危害， 居人类死亡率的首位。目前，治疗该类疾病临床应用的西药主要有抗血小板药和溶栓药物。其中常用的 有影响花生四烯酸代谢药，其代表药为阿司匹林(aspirin)。但是阿司匹林有许多不 良反应，如出血、胃肠道刺激症状及腹泻、皮疹等。对于经皮冠状动脉介入术(PCI)后需用 大剂量阿司匹林时，可同时使用胃黏膜保护剂、H2受体拮抗剂及质子泵抑制剂，有助于减少 胃肠黏膜出血的发生。血栓素A2(TXA2)合成酶抑制药和TXA2受体拮抗药，其代表药为奥扎格雷 (ozagrel) 0但是奥扎格雷会导致过敏反应，呼吸困难，过敏性休克，脑出血，眼结膜出血等 不良反应。环核苷酸磷酸二酯酶抑制药，其代表药为双嘧达莫(dipyridamole)(潘生丁)、西 洛他唑。双嘧达莫(潘生丁)是磷酸二酯酶抑制剂，其缺点为化学稳定性差，半衰期短，必 须加倍剂量或者使用缓释剂才能在Mh内起到抑制血小板功能的作用。推荐每日总量为 400mg。与ASA合用时剂量为100 200mg/d。副作用诱发心肌缺血，引起血压升高，引起 III度房室传导阻滞，双嘧达莫性结石病。双嘧达莫不良反应轻而短暂，长期服用可有头痛、 头晕、呕吐、腹泻、面红、皮疹和皮肤瘙痒等。而西洛他唑不良反应有皮疹、头晕、头痛、心悸、 恶心、呕吐，偶有消化道出血、尿路出血等。抗凝血药，其代表药为普通肝素(UFH)及低分子量肝素(LMWH)。肝素有如下不良 反应(1)可逆的血小板减少症①发生于开始肝素化的第10 15d ；②是免疫复合物和免 疫球蛋白交互作用即免疫机理产生；③肝素过量或与抗血小板药并用可出现出血的反应， 但严重出血危及生命者少。( 偶见过敏反应，包括发热。( 其他①脱发；②骨质疏松。 直接凝血酶抑制剂代表药水蛭素(hirudin)、重组水蛭素(recombinanthirudin)、来匹卢 定、比伐卢定(bivalirudin)、阿加曲班。溶栓药物的代表药为纤维蛋白溶解药尿激酶，但是其抗血栓的疗效也不甚理想。因此，目前研究具有消栓作用确切、安全性高、质量可控的中药新药，具有重要的 社会意义和经济意义。
发明内容
竹节参为五加科人参，属多年生草本植物Panax japonicus C. A. Mey.的干燥根， 含有多种皂苷、挥发油、糖类和多种氨基酸。原是一种名贵的民间中草药，现已收载于《中 华人民共和国药典》，药用功能类似人参和三七。竹节参生于山坡沟边、阴湿地区或岩石沟 涧旁，主要分布于贵州、湖南、云南、安徽、江西、湖北等地。每年秋季采挖，除去茎叶，分出肉 质根，将根茎除去外皮，晒干或阴干即可入药。始载于《本草纲目拾遗》。竹节参甘、微苦， 温。具有活血化瘀、消肿止痛、滋补强壮等多种功效，既有类似人参的滋补强壮作用，又有类 似三七的散瘀止痛、止血、祛痰作用，主要用于病后虚弱、劳嗽咳血、咳嗽痰多、跌打损伤。本发明的目的是提供一种竹节参皂苷ν或/和竹节参总皂苷在制备抗血栓药物中 的应用。本发明的目的是通过以下技术方案实现的竹节参皂苷ν或/和竹节参总皂苷作为活性成分在制备抗血栓药物中应用。特别 是竹节参皂苷ν或/和竹节参总皂苷可作为活性成分在制备抗脑血栓的药物中的应用。所 述的脑血栓可由脑出血引起、由脑缺血引起、由脑血管硬化引起或由血液生化学变化引起。其中，竹节参总皂苷中竹节参皂苷ν的含量> 50% ；所述的竹节参皂苷ν的纯度 彡 90%。竹节参总皂苷是由如下方法制备得到的取竹节参药材，加入竹节参6-12倍量的 乙醇或甲醇回流提取1-3小时，滤过，得滤液；药渣再用6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取 1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，配制成含0. 05-0. 5g药材/ ml的药液，上HPD-100大孔树脂柱，依次用水、60%的乙醇洗脱，弃去水洗脱液，合并60%的 乙醇洗脱液，回收溶剂至近干，减压干燥，得到竹节参总皂苷。所述的回流提取用的乙醇或 甲醇的浓度为10-90%，优选50-70%。竹节参皂苷ν是由如下方法制备得到的取竹节参药材，加入竹节参6-12倍量的 乙醇或甲醇回流提取1-3小时，滤过，得滤液；药渣再用6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取 1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，配制成含0. 05-0. 5g药材/ ml的药液，上HPD-100大孔树脂柱，依次用水、60%的乙醇洗脱，弃去水洗脱液，合并60%的 乙醇洗脱液，回收溶剂至近干，减压干燥，得到竹节参总皂苷，竹节参总皂苷再经ADS-7大 孔树脂柱纯化，收集50% -90%的乙醇洗脱液，减压干燥，得竹节参皂苷V。所述的回流提取 用的乙醇或甲醇的浓度为10-90 %，优选50-70 %。所述的竹节参皂苷ν或/和竹节参总皂苷作为活性成分可与药学上可接受的载体 或者常规辅料制备成抗血栓的组合物。上述药学上可接受的载体包括口服制剂辅料或胃肠 外途径给药的辅料。给药途径可以是口服、注射、局部给药等。根据本发明的技术方案，该 组合物可以是口服制剂或注射用制剂，其中口服制剂包括胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服 液、片剂、滴丸等。所用辅料包括淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二 醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙二醇、微晶纤维素钠、糊精、环糊精、氯化钠、维生素C、半胱氨 酸、柠檬酸、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、硬脂酸盐和明胶等常规辅料，制剂的后期制备工艺及设 备均属制药领域的常规技术，本发明对此不作限定，故在此不予详述。上述组合物口服给药的剂量为2-3次/天，每次折合成竹节参皂苷ν或竹节参总 皂苷的剂量分别为0. 075 0. 15g/次和0. 15 0. 30g/次。
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竹节参是常用的中草药，有长期的中医用药经验，该药使用安全性高，无明显毒性 作用记载。本发明所述的竹节参皂苷ν或竹节参总皂苷是从天然的中药竹节参中提取得到 的，药效实验表明竹节参总皂苷、竹节参皂苷ν对血凝块均有明显的溶解作用，并且体内抗 血栓形成实验结果显示竹节参总皂苷、竹节参皂苷V具有较强抗体内血栓形成的作用。与现有技术比较本发明的有益效果本研究首次表明竹节参总皂苷、竹节参皂苷 ν有显著的抗血栓的作用，因此，将竹节参总皂苷、竹节参皂苷ν开发成抗血栓药物具有广 阔的应用前景。
具体实施例方式实施例1竹节参皂苷ν (也称人参皂苷Ro，简称Ro)和竹节参总皂苷部位(简称Z5)的体外 溶栓试验1、受试药物竹节参总皂苷，制备方法为取竹节参粗颗粒200克，置于3000ml的圆底烧瓶中， 加入竹节参粗粉10倍量的60%的乙醇，浸泡2小时，水浴回流提取2小时，滤过，得滤液。 药渣再用10倍量的60%的乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过。合并3次滤液，减压回收 乙醇至无醇味，配制成浓度为含0. 5g药材/ml的药液，上HPD-100大孔树脂柱，依次用水、 60%的乙醇洗脱，弃去水洗脱液，合并60%的乙醇洗脱液，回收溶剂至近干，经65°C减压干 燥，得到竹节参总皂苷约15克。竹节参皂苷V，制备方法为取竹节参粗粉，加入竹节参粗粉10倍量的60%的乙 醇，浸泡2小时，水浴回流提取2小时，滤过，得滤液。药渣再用10倍量的60%的乙醇回流 提取2次，每次2小时，滤过。合并3次滤液，减压回收乙醇至无醇味，配制成浓度为含0. 5g 药材/ml的药液。上HPD-100大孔树脂柱，依次用水、60%的乙醇洗脱。合并60%的乙醇洗 脱液，回收溶剂至近干，经65°C减压干燥，得到竹节参总皂苷。竹节参总皂苷再经ADS-7大 孔树脂柱纯化，收集50% -90%的乙醇洗脱液，减压回收乙醇，减压干燥，得竹节参皂苷V。对照药注射用尿激酶，规格10万单位，丽珠制药厂，批号100403。2.竹节参皂苷ν及其竹节参总皂苷的含量测定(1)色谱条件SPD-20A 高效液相色谱仪，色谱柱为 Boston analytics, Green ODS-AQ 4. 6 X 150mm 5um，波长为203nm，进样量为20ul，流速为1. Oml/min，柱温为25°C，流动相为 乙腈(A) =IOmM磷酸缓冲水溶液(B)(称取KH2PO4药物0. 68g，加入500ml纯净水，用K2HPO4 调PH值至5. 8，混勻，经0.45um的微孔滤膜过滤，超声10-15分钟即得)梯度洗脱(洗脱 的梯度为0-19 分钟，A B = 27 73;20-33 分钟，A B = 28 72;34_43 分钟，A B =34 66;44-57 分钟，A B = 43 57 ;57. 5-64 分钟，A B = 85 15 ;65_80 分钟， A B = 27 7 。(2)对照品竹节参皂苷ν (也称人参皂苷Ro，可简称Ro)溶液的配制取竹节参皂 苷ν适量，以水配制成对照品溶液，其浓度为1. 45mg/ml。(3)竹节参皂苷ν及其竹节参总皂苷样品液的制备称取的竹节参总皂苷样品23. 71mg,以水定溶为25ml，为竹节参总皂苷样品液。
称取的竹节参皂苷ν样品12. OOmg,以水定溶为25ml，为竹节参皂苷ν样品液。(4)竹节参皂苷ν及其竹节参总皂苷样品的含量测定分别精取上述竹节参总皂苷样品液、竹节参皂苷ν样品液和对照品溶液各20ul， 注入色谱柱，按上述色谱条件测定，测得的对照品Ro峰面积为5750034. 5，测得的竹节参总 皂苷样品中Ro峰面积为1962145. 125，测得的竹节参皂苷ν样品中Ro峰面积为1758717. 5，计算得到的竹节参总皂苷样品中Ro的浓度， C竹节参总皂苷样品=C对照品Χ§竹节参总皂苷样品 /s对照品=1. 45X1962145. 125/5750034. 5 = 0. 495mg/ml。计算竹节参总皂苷样品中Ro的 百分含量，为 C竹节参总皂苷样品X V竹节参总皂苷样品/W竹节参总皂苷样品=0. 495mg/ml X 25ml/23. 7Img = 52. 2%。计算得到的竹节参皂苷ν样品中Ro的浓度， G竹节参皂苷ν样品=G对照品XS竹节参皂苷ν样品 /s对照品=1. 45X1758717. 5/5750034. 5 = 0. 4435mg/mL·计算竹节参皂苷ν样品中Ro的 百分含量，为C竹节参皂苷V样品χ ν竹节参皂苷V样品/W竹节参皂苷V样品=0. 4435mg/mlX25ml/12. OOmg = 92. 4%。3、实验动物家兔，普通级，体重Jkg，雌性。由江宁县青龙山动物繁殖场提供，动物质量合格证 号SCXK(苏)2007-0008。4、主要试剂与仪器(1)生理盐水，山东鲁抗辰欣药业有限公司，批号1005319012。(2) Sartorius分析天平北京赛多利斯天平有限公司；数显恒温水浴锅(HH-2) 国华电器有限公司。5、试验方法家兔颈总动脉插管采血，待血液凝固后分取大小近似的血块。各血块用滤纸吸取 液体部分，天平称重后(W)放入洁净的试管内，各试管加入等体积的试药，阴性对照组加相 应的生理盐水。池后取出，用滤纸吸取液体部分，天平称重(G)。比较给药前后血凝块的重 量，计算血凝块溶解率。溶解率=(W-G)/W X 100%6、统计学处理所有数据均用均值士标准差(SiS)表示。用单因素方差分析ANOVA对给药组与 对照组进行组间显著性检验，P < 0. 05表示有显著性差异，P <0.01表示有非常显著性差
已 升。7、试验结果由表1可见，与生理盐水组相比较，R0和Z5各剂量组对血凝块均有明显的溶解作 用，且有统计学意义。与尿激酶组比较，R0的25mg/ml、5mg/ml、lmg/ml、0. 2mg/ml剂量组与 Z5的0. 4mg/ml剂量组有显著性差异。表1.竹节参皂苷ν和竹节参总皂苷部位对兔血凝块的溶解作用
权利要求
1.竹节参皂苷V或/和竹节参总皂苷作为活性成分在制备抗血栓的药物中的应用。
2.竹节参皂苷ν或/和竹节参总皂苷作为活性成分在制备抗脑血栓的药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的脑血栓为由脑出血引起、由脑缺血 引起、由脑血管硬化引起或由血液生化学变化引起。
4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述的竹节参总皂苷中竹节参皂苷ν 的含量彡50%。
5.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述的竹节参皂苷ν的纯度>90%。
6.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述的竹节参总皂苷是由如下方法制 备得到的取竹节参药材，加入竹节参6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3小时，滤过，得 滤液；药渣再用6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液， 减压回收乙醇至无醇味，配制成含0. 05-0. 5g药材/ml的药液，上HPD-100大孔树脂柱，依 次用水、60%的乙醇洗脱，弃去水洗脱液，合并60%的乙醇洗脱液，回收溶剂至近干，减压干 燥，得到竹节参总皂苷。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述的回流提取用的乙醇或甲醇的浓度为 10-90%，优选 50-70%。
8.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述的竹节参皂苷ν是由如下方法制 备得到的取竹节参药材，加入竹节参6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3小时，滤过，得 滤液；药渣再用6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液， 减压回收乙醇至无醇味，配制成含0. 05-0. 5g药材/ml的药液，上HPD-100大孔树脂柱，依 次用水、60%的乙醇洗脱，弃去水洗脱液，合并60%的乙醇洗脱液，回收溶剂至近干，减压干 燥，得到竹节参总皂苷，竹节参总皂苷再经ADS-7大孔树脂柱纯化，收集50 % -90 %的乙醇 洗脱液，减压干燥，得竹节参皂苷V。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于所述的回流提取用的乙醇或甲醇的浓度为 10-90%，优选 50-70%。
10.一种抗血栓的药物组合物，含有权利要求1-9中任意一项的竹节参皂苷ν或/和竹 节参总皂苷及药物上可接受的载体。
全文摘要
本发明公开了竹节参皂苷v或/和竹节参总皂苷在制备抗血栓的药物中的应用。药效实验表明竹节参总皂苷、竹节参皂苷v对血凝块均有明显的溶解作用，体内抗血栓形成实验结果显示竹节参总皂苷及竹节参皂苷v具有较强抗体内血栓形成的作用。竹节参皂苷v和竹节参总皂苷用于制备抗血栓的药物具有良好的应用前景。
文档编号A61K31/704GK102125570SQ20101061596
公开日2011年7月20日 申请日期2010年12月30日 优先权日2010年12月30日
发明者杨小林 申请人:杨小林