专利名称：颗粒组合物和含有其的医药组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及可以作为药物递送系统(DDS)的载体使用的颗粒组合物(例如，高分子微团)，和具有该颗粒组合物与在其中内包的药物的医药组合物(例如，高分子微团制剂)。
背景技术：
相比于利用低分子化合物的以往型的医药品，利用诸如蛋白质和核酸的生物体高分子的生物医药品，容易被酶分解或被免疫系统排除。专利文献1 4从提高生物医药品在生物体内的稳定性的观点出发，公开了使生物体高分子内包于由脂质双层膜构成的核糖体的DDS。现有技术文献专利文献专利文献1 国际公开第2001/034115号小册子专利文献2 国际公开第1998/58630号小册子专利文献3 国际公开第2005/092389号小册子专利文献4 日本特表2001-50409
发明内容
发明所要解决的课题在专利文献1 3中记载的以往型DDS中，通过以脂质双层膜保护作为药物的生物体高分子，虽然能够提高药物在生物体内的稳定性，但是药物难以从载体释放。另外，这样的以往型DDS，由于其粒径大小和构成脂质双层膜的脂质具有的电荷，从而容易被诸如肺、肝脏和脾脏的网状内皮系统捕捉，所以有时在到达投药对象物以前会从血中被除去。在专利文献4中记载的DDS中，通过将核糖体隐形化，可以实现防止被捕捉到这样的网状内皮系统，但仍然有药物难以从载体释放的倾向。相比于使用核糖体的以往型DDS，以高分子微团作为载体的DDS能够将DDS颗粒大幅度地小型化(例如，平均粒径IOOnm以下)，该高分子微团通过由疏水性聚合物链段和亲水性聚合物链段形成的嵌段共聚物单元构成。但是，这样的以高分子微团作为载体的DDS， 如后述的比较例所示，由于将生物体高分子保持在DDS颗粒内的作用过弱，仍然有难以将药物适当输送到投药对象物中的情况。另外，在这样的DDS中，有时在制造后的储藏期间中，药物也会从载体脱离。用于解决课题的方法本发明提供一种颗粒组合物，其含有具有疏水性聚合物链段和亲水性聚合物链段的嵌段共聚物单元，多个上述嵌段共聚物单元以上述疏水性聚合物链段朝向内侧，并且上述亲水性聚合物链片朝向外侧的状态放射状配置，该颗粒组合物还具有带电脂质，该带电脂质带有与应该被内包的药物的电荷相反的电荷，通过与该带电脂质的静电结合将上述药物保持在颗粒内，另一方面该带电脂质以被吸引到上述疏水性聚合物链段侧的状态配置， 从而防止颗粒外周面带有能够吸引与上述带电脂质带有相反电荷的带电性物质的电荷。从另一个侧面，本发明提供一种医药组合物，其具有上述颗粒组合物、和在该颗粒组合物中内包的带有与带电脂质相反电荷的药物。发明的效果根据本发明，能够提供适于DDS的药物载体和利用该药物载体的医药品，该药物载体药物保持性优异，并且能够防止生物体分子向载体表面的附着，该附着会导致妨碍药物向投药对象物搬运。相比于以往型的DDS，这些药物载体和医药品能够向投药对象物可靠地输送药物。
图1(a) (C)是表示本发明的颗粒组合物和医药组合物结构的一例的示意图。图2是表示在试验例Ib中测得的颗粒组合物的电动电位(zeta potential)的绝对值与在试验例Ic中测得的颗粒组合物的血中凝集度的关系的图表。图3是表示在试验例2b中的白蛋白-FITC荧光强度测定结果的图表。图4是表示在试验例5a中的电泳结果的图。图5是用于说明在试验例5c中测得的颗粒组合物的抗癌活性的图表。图6是用于说明在试验例5d中测得的颗粒组合物在血清中的凝集性的图表。图7是表示在试验例5b中测得的颗粒组合物的电动电位的绝对值与在试验例5d 中测得的颗粒组合物的血中凝集度的关系的图表。图8是用于说明在试验例5f中测得的药物的脏器转移性的图表。
具体实施例方式图1 (a)是表示本发明的颗粒组合物(以下，有时简称为“颗粒组合物”)结构的一例的示意图。图1(b)是其部分放大图。颗粒组合物1含有嵌段共聚物单元2和带电脂质 3。嵌段共聚物单元2具有亲水性聚合物链段2a和疏水性聚合物链段2b，以疏水性聚合物链段2b朝向内侧，并且亲水性聚合物链段2a朝向外侧的状态，放射状配置在颗粒组合物1 内。另外，带电脂质3带有与应该内包的药物的电荷相反的电荷，以吸引在疏水性聚合物链段2b侧的状态配置。图1(c)是表示本发明的颗粒状医药组合物(以下，有时简称为“医药组合物”)结构的一例的示意图。医药组合物1’具有颗粒组合物1和带有与带电脂质3相反电荷的药物4，药物4通过与带电脂质3静电结合被保持在颗粒组合物1内。在本说明书中，“带电脂质”是指在生理性pH(例如pH7. 4)的水性介质中具有多于正电荷的负电荷的阴离子性脂质，和在该水性介质中具有多于负电荷的正电荷的阳离子性脂质。因此，在本说明书中，关于具有阳离子性基团和阴离子性基团的所谓两性带电脂质， 也根据上述基准处理。带电脂质3在颗粒组合物1内通过静电结合保持应该被内包的药物4。带电脂质 3只要至少在从颗粒组合物1形成的医药组合物1’的储藏环境下，带有与被内包的药物4 的电荷相反的电荷即可。由此，能够在制造后的储藏期间中在颗粒组合物1内更可靠地保持药物4。带电脂质3和药物4优选即使以血中为代表的生理环境下(例如，pH7.4)，也带有相反的电荷。由此，能够更可靠地防止在向投药对象物的输送途中，药物4从颗粒组合物 1脱离。带电脂质3由下面的机理以吸引在疏水性聚合物链段侧2b的状态配置。颗粒组合物1通过包括将嵌段共聚物单元2和带电脂质3悬浊在水溶液中的工序的方法形成。嵌段共聚物单元2的疏水性聚合物链段2b因为是疏水性的，所以在水溶液中不扩散地凝集存在。亲水性聚合物链段2a可以在水溶液中扩散并自由地运动。因此，嵌段共聚物单元2 在水溶液中，以疏水性聚合物链段2b朝向内侧，亲水性聚合物链段2a朝向外侧的放射状配置。而且，带电脂质3因为疏水性强，相比于水或亲水性聚合物链段2a，与疏水性聚合物链段2b的亲和性高，所以被吸引在疏水性聚合物链段2b侧，与颗粒组合物1的外周面离开配置。由此，可以防止颗粒组合物1和医药组合物1’的外周面带有能够吸引带有与带电脂质 3相反电荷的带电性物质(例如，血中的蛋白质)的电荷。而且，如果这样操作悬浊在水溶液中，因为带电脂质3和嵌段共聚物单元2以混合的状态颗粒化，所以如图1(b)所示，带电脂质3不是在颗粒组合物1的环向以连续的状态配置，而是在颗粒组合物1的环向以介于相邻接的嵌段共聚物单元2之间的方式配置。由此，在颗粒组合物1中，在颗粒组合物1的环向相邻接的带电脂质3之间的接触被嵌段共聚物单元2隔断。因此，在颗粒组合物1中，在颗粒组合物1的环向相邻接的带电脂质3之间， 为形成有能够容纳嵌段共聚物单元2程度的间隙G的状态，换而言之，处于相邻接的带电脂质3之间形成间隙G，在该间隙G中配置有嵌段共聚物单元2的状态。带电脂质3和嵌段共聚物单元2之间的结合力小于带电脂质3之间的结合力。因此，如果相比于脂质在环向处于被连续配置状态的以往型DDS (核糖体)，在颗粒组合物1中，容易产生由带电脂质3的脱落造成的颗粒形状崩解，其结果，就可以防止应该被内包在颗粒(载体)内的药物4被过剩地保持。在专利文献4中记载的以DDS为代表的隐形核糖体，因为通过在形成由脂质双层膜构成的核糖体主体后，使二嵌段共聚物附着在该主体表面而形成，所以，在环向相邻接的脂质之间的接触没有被嵌段共聚物等隔断，脂质仍旧处于在环向连续配置的状态。防止颗粒组合物1和医药组合物1’的外周面带有可以吸引带电性物质的电荷的状态，例如，能够通过从颗粒组合物1和医药组合物1’测得的电动电位的绝对值在规定值以下的范围而确定。更具体而言，对于医药组合物1’，电动电位的绝对值希望为IOmV以下， 例如为5mV以下，或者例如为3mV以下，优选为2mV以下，更优选为ImV以下。由于在颗粒组合物1中含有药物4，医药组合物1’的电动电位的绝对值容易低于该颗粒组合物1固有的电动电位的绝对值。因此，对于颗粒组合物1，电动电位的绝对值希望为15mV以下，例如为12mV以下，或者例如为6mV以下，或者例如为3mV以下，优选为2mV以下，更优选为ImV以下。电动电位如下测定在pH为7. 4的IOmM的HEPES缓冲溶液中，以每ImL该缓冲溶液， 颗粒组合物1或医药组合物1’所含有的带电脂质3的总量为0. Img的方式，添加颗粒组合物1或医药组合物1，。在本说明书中，电动电位的绝对值作为将小数点以下四舍五入得到的数值处理。 例如，电动电位的绝对值为“2mV以下”的状态包含小于2. 5mV的状态。另外，如后述的实施例所示，通过控制颗粒组合物1或医药组合物1’的电动电位的绝对值使其变低，能够防止颗粒组合物1或医药组合物1’的血中凝集。更具体而言，通过将颗粒组合物1的电动电位的绝对值控制在规定范围以下，就能够防止在血中的凝集，使
7得颗粒组合物1的血中凝集度，例如，为0. 2以下，或者例如为0. 18以下，或者例如为0. 15 以下，进一步为0.1以下，根据情况为0.05以下的程度。另外，通过将医药组合物1’的电动电位的绝对值控制在规定范围以下，就能够防止在血中的凝集，使得医药组合物1’的血中凝集度，例如，为0. 2以下，或者例如为0. 16以下，进一步为0. 1以下，根据情况为0. 05 以下的程度。血中凝集度如下操作计算。i)在pH为7. 4的IOmM的HEPES缓冲溶液中，以每ImL该缓冲溶液带电脂质3的总量为2. 2mg的方式添加测定对象的组合物(颗粒组合物1或医药组合物1’)，再在每ImL 该缓冲溶液添加9mL FBS (牛血清)，制备测定样品A。ii)除了代替FBS (牛血清)，使用pH为7. 4的IOmM的HEPES缓冲溶液以外，和上述i)同样操作，制备测定样品B。iii)将测定样品A和B在37°C静置24小时后，分别测定相对于波长为700nm的光线的吸光度。iv)将从“由测定样品A得到的吸光度”减去“由测定样品B得到的吸光度”得到的值作为血中凝集度。此外，该值越小，测定对象组合物在血中越难以凝集。嵌段共聚物单元2相对于带电脂质3的比例，以质量比表示，希望为1.0以上，优选为1. 5以上，更优选为2. 0以上，还希望为50以下，优选为20以下，更优选为10以下。将该比例越提高，就能够越降低颗粒组合物1和医药组合物1’的电动电位的绝对值。另一方面，因为带电脂质3的比例越高，越能够将药物4更积极地包入颗粒内，所以希望如上所述该比例限制在50以下。带电脂质3可以是单纯脂质、复合脂质和衍生脂质中的任意1种，能够例示磷脂质、甘油糖脂质、神经鞘糖脂质、鞘氨基醇碱类和留醇类。更具体而言，作为阳离子性脂质，例如，可以列举1，2_ 二油酰基-3-三甲基铵丙烷(DOTAP)、N-(2，3-二油酰氧基丙烷-1-基)-N，N，N-三甲基氯化铵(D0TMA)、2，3-二油酰氧基-N-[2-(精胺羧基酰胺基)乙基]-N，N- 二甲基-1-丙铵三氟乙酸(DOSPA) ,1,2- 二肉豆蔻氧基丙基_3_ 二甲基羟基乙基溴化铵(DMRIE)、1，2-二油酰氧基丙基-3-二乙基羟基乙基溴化铵(DORIE)、3 β-[N-(N，， N’ - 二甲基氨基乙基)氨基甲酰基]胆固醇(DC-Chol)。作为阴离子性脂质，例如，可以列举心磷脂、二酰磷脂丝氨酸、二酰基磷脂酸、N-琥珀酰磷脂酰乙醇胺(N-琥珀酰PE)、磷脂酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酰乙二醇、琥珀酰胆留醇等。亲水性聚合物链段2a优选为来自由聚乙二醇或聚氧乙烯构成的水溶性聚合物的片段。亲水性聚合物链段2a的分子量希望为2500Da以上，优选为5000Da以上，更优选为 8000Da以上，还希望为200000Da以下，优选为20000Da以下，更优选为15000Da以下。疏水性聚合物链段2b优选为来自聚氨基酸链的片段。疏水性聚合物链段2b的重复单元数希望为10个以上，优选为20个以上，还希望为200个以下，优选为100个以下，更优选为60个以下。从降低颗粒组合物1的电动电位的绝对值，换而言之，从减小颗粒组合物1的表面电荷(接近于中性)的观点出发，优选在嵌段共聚物单元2中，亲水性聚合物链段2a的尺寸 (分子量)大于疏水性聚合物链段2b的尺寸(重复单元数)。亲水性聚合物链段2a和疏水性聚合物链段2b，只要能够防止颗粒组合物1和医药组合物1’的颗粒外周面带有可以吸引带电性物质的电荷，也可以含有以氨基和羧基为代表的带电性取代基。亲水性聚合物链段2a和疏水性聚合物链段2b，能够通过共价键使主链末端之间结合。更具体而言，作为嵌段共聚物单元2，能够例示由下述通式(I )和通式(II )表示的化合物。颗粒组合物1可以由2种以上的嵌段共聚物单元2形成。
权利要求
1.一种颗粒组合物，其特征在于含有具有疏水性聚合物链段和亲水性聚合物链段的嵌段共聚物单元，多个所述嵌段聚合物单元以所述疏水性聚合物链段朝向内侧，并且所述亲水性聚合物链段朝向外侧的状态放射状配置，该颗粒组合物还具有带有与应该被内包的药物的电荷相反电荷的带电脂质，通过与该带电脂质的静电结合将所述药物保持在颗粒内部，另一方面，该带电脂质以吸引在所述疏水性聚合物链段侧的状态配置，从而防止颗粒外周面带有能够吸引带有与所述带电脂质的电荷相反电荷的带电性物质的电荷。
2.如权利要求1所述的颗粒组合物，其特征在于所述带电脂质在颗粒组合物的环向不以连续状态配置，而是以在颗粒组合物的环向介于相邻接的所述嵌段共聚物单元之间的方式配置，从而在颗粒组合物的环向相邻接的带电脂质之间的接触处于被所述嵌段共聚物单元隔断的状态。
3.如权利要求1或2所述的颗粒组合物，其特征在于所述亲水性聚合物链段是聚乙二醇链，所述疏水性聚合物链段是聚氨基酸链。
4.如权利要求1 3中任一项所述的颗粒组合物，其特征在于所述疏水性聚合物链段是阴离子性聚合物链段。
5.如权利要求1 4中任一项所述的颗粒组合物，其特征在于所述疏水性聚合物链段由下述通式(I )和(II )表示，
6.如权利要求5所述的颗粒组合物，其特征在于在所述通式(I )和(II )中，R5是-0-，R6是苄基、-(CH2)4-苯基或者未取代的或被氨基或羰基取代的C4 C16烷基。
7.如权利要求1 6中任一项所述的颗粒组合物，其特征在于在PH是7. 4的IOmM的HEPES缓冲溶液中，以所述颗粒组合物所含有的所述带电脂质总量为每1毫升的该缓冲溶液为0. Img的方式添加所述颗粒组合物时，所测定的电动电位的绝对值被控制在15mV以下范围的状态，由此防止所述颗粒组合物在血中的凝集。
8.如权利要求7所述的颗粒组合物，其特征在于通过所述电动电位的绝对值被控制在3mV以下范围的状态，进一步防止所述的颗粒组合物在血中的凝集。
9.一种医药组合物，其特征在于具有权利要求1 8中任一项所述的颗粒组合物，和在该颗粒组合物中内包的带有与所述带电脂质相反电荷的药物。
10.如权利要求9所述的医药组合物，其特征在于在PH是7. 4的IOmM的HEPES缓冲溶液中，以所述颗粒组合物中所含有的所述带电脂质总量为每1毫升的该缓冲溶液为0. Img的方式添加所述医药组合物时，所测定的电动电位的绝对值被控制在IOmV以下范围的状态，由此防止所述医药组合物在血中的凝集。
11.如权利要求10所述的医药组合物，其特征在于通过所述电动电位的绝对值被控制在2mV以下范围的状态，进一步防止所述医药组合物在血中的凝集。
12.如权利要求9 11中任一项所述的医药组合物，其特征在于通过所述疏水性聚合物链段由阴离子性聚合物链段构成，所述医药组合物处于药物的血中滞留性提高的状态。
全文摘要
一种颗粒组合物，其含有嵌段共聚物单元和带电脂质，该嵌段共聚物单元以疏水性聚合物链段朝向内侧，并且亲水性聚合物链段朝向外侧的状态放射状配置，该带电脂质带有与应该被内包的药物的电荷相反电荷，该带电脂质以吸引在疏水性聚合物链段侧的状态配置。在该颗粒组合物中，通过与带电脂质的静电结合，药物被保持在颗粒内，另一方面可以防止颗粒外周面带有能够吸引与上述带电脂质带有相反电荷的带电性物质的电荷。
文档编号A61K31/7088GK102481255SQ201080038549
公开日2012年5月30日 申请日期2010年8月31日 优先权日2009年8月31日
发明者加藤泰己, 石井笃史 申请人:那野伽利阿株式会社