含有攀援鱼藤的局部组合物以及治疗皮肤的方法

专利名称：含有攀援鱼藤的局部组合物以及治疗皮肤的方法
技术领域：
本发明涉及含有攀援鱼藤(“Derris”)提取物的局部组合物以及使用此种组合物来治疗、逆转和/或预防皮肤损伤或皮肤老化的迹象(包括皮肤中的细纹和皱纹)的方法。
背景技术：
面部皱纹(无论是细小的表面纹路还是更深的褶皱)的逐渐产生是累积的皮肤损伤和皮肤老化的早期迹象，这可以是内在的和/或由外部因素引起或加速的。例如，皮肤的提早老化和皱纹形成可通过下列被加速过度暴露于太阳和其它的损伤性元素，过度活跃的面部表情肌肉，经常使用烟草产品，不良的营养或皮肤病症。下列是可见的变化，其可以相组合而刻画出较不希望的外观细小的表面皱纹发展为更深的褶皱，由于重复的皮肤折叠而深化面部表情，以及随着成熟而产生的深的褶皱。可使用数种侵入性的技术，其中物质被注射或植入到皮肤的区域中，其暂时地削弱肌肉或者作为皮肤体积的填充剂起作用。然而，侵入性的技术通常是有风险的并且需要医师的监督或协助，这可以是不方便和昂贵的， 而非侵入性的处理在历史上仅获得了最小限度的成功。无论面部褶皱的原因是什么，用于减少或去除这些问题的安全有效的处理极难实现。皮肤弹性对于补救皮肤损伤或皮肤老化(例如松弛，减少的皮肤紧实度和年轻外观)和改善细纹和皱纹的出现是关键的。弹性蛋白使所有的这些成为可能，弹性蛋白是这样的蛋白聚合物其像橡皮筋一样起作用，重复地拉伸和收缩而不遭受任何损伤。弹性蛋白聚合物是通过弹性蛋白原单体的交联形成的。虽然有多至五种能够催化此过程的酶，不清楚所述交联确切地是如何被调控的。这些酶之一，赖氨酰氧化酶样1( “L0XL1”)，被发现是弹性蛋白聚合物更新的关键性调控因子，弹性蛋白聚合物是向结缔组织(包括皮肤)提供弹性特性的细胞外基质组分。Liu和同事报道了 LOXLl对于重塑弹性蛋白纤维是关键的。Liu预测了此酶被细胞外基质蛋白腓骨蛋白-5征募到弹性蛋白的位点。根据Liu，LOXLl然后引发弹性蛋白原单体(TE)整合为更大的聚合物。 Liu发现了 LOXLl是防止组织(例如动脉和肺)中与年龄相关的弹性丧失所必需的(Liu 等人(2004)Elasticfiber homeostasis requires lysyl oxidase-like 1 protein. NatGenet. 36(2) :178-82)。相信弹性蛋白不在青春期后产生，青春期以后组织中弹性蛋白聚合物的维持是由弹性蛋白聚合物的更新(例如“抗弹性蛋白酶”)和降解(例如弹性蛋白酶)的活性的竞争调控的。随着人老化，发生所述竞争性活性中的不平衡，这引起含有弹性蛋白的组织中弹性的丧失。皮肤中这种弹性的丧失可表现为皮肤表面的皱纹。虽然调控弹性蛋白的更新和降解(例如“抗弹性蛋白酶”和弹性蛋白酶活性)的确切机制是未知的，酶赖氨酰氧化酶样 1( “L0XL1”)被报道是“抗弹性蛋白酶”因子，其能够通过弹性蛋白原单体的聚合而介导弹性蛋白纤维的更新(见例如Kagan等人(2003) J. Cell. Biochem. 88:660-672;和Li等人 (2004) Nat. Genet. 36 178-182)。L0XL1因此是组织中弹性蛋白聚合物更新的关键性调节因子，所述弹性蛋白聚合物向结缔组织(包括皮肤)提供弹性特性。因此，起作用以增加L0XL1 转录和/或翻译或者L0XL1活性的试剂被相信增加“抗弹性蛋白酶”活性，促进弹性蛋白纤维的更新，并引起含有弹性蛋白的组织(例如皮肤)弹性的改善。Noblesse等人报道了 LOXLl存在于正常皮肤和皮肤等同模型(SE) 二者的真皮和表皮中。赖氨酰氧化酶样(LOXL)的超微结构定位显示出其与弹性蛋白阳性材料相关联。 研究人员假设的是LOXL可能在弹性纤维形成中起作用(Noblesse E，等人(2004)Lysyl oxidase-like and lysyl oxidase are present in the dermis and epidermis of a skin equivalent and in human skin and are associated to elastic fibers. J Invest Dermatol. 122(3):621-30)。Pascual和同事报道了弹性蛋白合成的标记物(包括L0XL1)的水平随着年龄以显著白勺禾呈度M少(Pascual，等人(2008) Down—regulation of lysyl oxydase-like in aging and venous insufficiency. Histol Histopathol. 23(2):179-86)。美国专利公开号2005/0188427 (Li和Liu)描述了治疗具有与弹性纤维丧失相关的状况(例如松弛或有皱纹的皮肤)的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的L0XL1增强剂。所述L0XL1增强剂据称是L0XL1多肽或其活性片段，或者编码 L0XL1多肽的核酸或其活性片段。所述L0XL1增强剂还据称包括通过其中描述的筛选方法所鉴别出的小分子或其它治疗性化合物。钙神经素是参与活化的T细胞核因子(“NFAT”)(转录因子)的活化的蛋白磷酸酶。NFAT转录因子的活化刺激参与钙运输和发炎反应的T细胞。钙神经素在皮肤中的表达随着年龄内在地随时间增加。局部的钙神经素抑制剂(例如他克莫司软膏，其作为PROTOPIC 商业上可得)被用于治疗特应性皮炎，这是通常用局部类固醇治疗的湿疹性皮肤疾病。他克莫司软膏(作为PR0T0PIC 商业上可得)被报道抑制钙神经素，这引起抑制抗原特异性的T细胞活化和抑制炎性细胞因子释放(见例如Beker sky等人，2001，J. Am. Acad. Dermatol. 441: S17-S27)。Furue等人报道了他克莫司软膏被用作特应性皮炎发炎的一线治疗。(见例如Furue，等人(2006)Dermatol. Ther. 19:118-26)。另一种商业上可得的钙神经
素抑制剂是吡美莫司，其在商业上可以霜剂获得并且在商业上作为ELIDEI/K:而以霜剂的
形式出售。观察到了炎症对于皮肤的外观可具有有害影响。发炎之后观察到了皮肤中的色素不足和色素过度。(见Ruiz-Maldonado等人(1997) kmin Cutan Med Surg. 16(1) :36-43 Jomita等人(1989)Dermatologica. 179Suppl 1 49-53)。Holland等人观察到了某些患有发炎的痤疮损伤的患者也显示出了皮肤的痤疮疤痕。(见Holland等人 Semin Cutan Med Surg. 2005Jun ； 24 (2) 79-83) Pillai 等人报道了发炎和其所引起的活性氧物质(R0Q的累积在体内人类皮肤的内在和光老化中起重要作用。Pillai等人报道了发炎进一步活化各种基质降解性金属蛋白酶的转录，从而引起异常的基质降解和非功能性基质组分的累积。Pillai等人观察到了发炎和ROS引起对细胞蛋白，脂质和碳水化合物的氧化性损伤，其在真皮和表皮分隔中累积，从而促成光老化的病因学。Pillai等人列出了许多用于防止由UV发起的这一反应级联引起的光损伤的策略，这包括通过物理和化学防晒剂防止UV穿透到皮肤中；使用抗炎化合物(例如环氧酶抑制剂，细胞因子产生的抑制剂) 来防止/减少炎症；通过抗氧化剂来清除和猝灭R0S;抑制嗜中性弹性蛋白酶的活性以防止细胞外基质损伤和基质金属蛋白酶(MMPs)的活化，以及抑制MMP表达(例如通过类视黄醇)和活性(例如通过天然和合成的抑制剂)(见Pillai，等人(2005) Int J Cosmet Sci. Feb;27(1):17-34)。Thornfeldt等人建议，利用治疗粘膜皮肤病况(包括老化)的医师推荐的活性成分的皮肤护理方案应更加关注逆转和防止慢性炎症。Thornfeldt报道了慢性炎症似乎与许多可预防的和可治疗的皮肤疾病和病况(例如可见的皮肤老化)紧密相关。Thornfeldt陈述道，粘膜皮肤炎症作为许多全身性和粘膜皮肤疾病(包括外因性老化)的最终共同的途径已在分子和细胞水平上被建立了。(见 Thornfe 1 dt，CIU2008) J. Cosmet. Dermatol. 7 78-82)。Bissett等人报道了长期暴露于亚红斑剂量的紫外(UV)辐射的白化无毛小鼠展现出真皮细胞构成(包括炎性细胞)的增加。在一个实验中，Bissett观察到了局部的氢化可的松，布洛芬和萘普生在白化无毛小鼠中保护抵抗UVB辐射诱导的可见皱纹形成，肿瘤形成和组织学改变。在另一个实验中，Bissett观察到了氢化可的松和萘普生在白化无毛小鼠中有效抵抗UVA辐射诱导的可见皮肤松弛和组织学改变。研究者假设的是这些数据暗示了炎症在慢性光损伤中的作用。(见Bissett，等人(1990) Photodermatol. Photoimmunol. Photomed. 7:153-8)。糖胺聚糖(GAGs)是长的非分支聚合物，其是由重复的二糖单元形成的，所述二糖单元包含各种己糖胺，己糖或己糖醛酸部分以及它们的硫酸盐。通常，GAG的每个二糖单元是由己糖胺部分(例如D-葡糖胺或D-半乳糖胺)或其硫酸盐，以及己糖(例如半乳糖) 或己糖醛酸部分(例如，D-葡醣醛酸或L-艾杜糖醛酸)，或者它们的硫酸盐组成的。在皮肤中所通常观察到的GAG包括透明质酸，某些软骨素硫酸盐，和硫酸皮肤素。此外，在皮肤中观察到了少量的肝素和硫酸乙酰肝素。GAG被认为是细胞外基质的重要组分。GAG可被共价连接至蛋白以形成蛋白聚糖。蛋白聚糖存在于所有的哺乳动物组织(包括皮肤)中，并且被认为促成所述组织的生长、保存和修复。已报道了 GAG和蛋白聚糖参与皮肤机械特性中与年龄相关的改变，这包括组织水合和回弹性方面的改变。(见Carrino等人，Arch Biochem Biophys. 2000Jan 1 ； 373 (1) :91-101 ； Vogel 等人，Z Gerontol. 1994May-Jun； 27 (3) 182-5 ； Lanir 等人，J Biomech Eng. 199(Feb ； 112 (1) 63_9)。透明质酸这种糖胺聚糖还被报道负责皮肤的水合， 营养交换和保护抵抗自由基损伤。(见Wiest等人J Dtsch DermatolGes. 2008Mar ； 6 (3) 17 6-80;Bert 等人Biorheology. 1998May-Jun； 35 (3) :211-9)。Wiest 等人报道了，在临床研究中重复注射透明质酸后，显示出弹性和充盈度方面的增加。还报道了，随着皮肤老化，GAG合成下降并且皮肤中总体的GAG含量随时间减少。(例如Smith等人，J. Invest. Dermatol.， 1962，39，第 347-350 页；Fleischmajer 等人，Biochim. Biophys. Acta, 1972，279，第 265-275 页；或 Longa s 等人，Carbohydr. Res.，1987，159，第 127-136 页)。攀援鱼藤(“Derris”)是木质藤本，其通常被发现遍及东南亚(包括泰国)而生长。特别地，攀援鱼藤是具有盘绕习性的攀登分枝灌木。其全年维持它的叶子并且被分类为常青、多年生植物。攀援鱼藤属于豆科植物科，并且在英语中通常被称作“Jewel Vine”， 而通常在泰语中已知为“Thaowanprieng”或“Tao-wan-priang”。已报道了许多泰国的民间应用，包括对于疼痛缓解，利尿剂，肌肉僵硬/疼痛的应用。(见Chuakul等人，Medicinal Plants in Thailand, Vol II, Bangkok Thai land:Mahidol University,1997)。Chuakul等人还报道了攀援鱼藤可赋予许多有益的药理学特性，例如抗细菌，抗组胺和降血压活性。此外，还报道了攀援鱼藤提取物可显示出类花生酸，髓过氧化物和白细胞三烯B(4) 的体外活性，这些是与炎症相关的活性(见例如，Laupattaraka sem等人^)04)Planta Med. 70:496-501 和 Laupattarakasem，等人 Q003)J Ethnopharmaco 1. 85:207-15)。在大鼠后爪肿胀测试中，当腹膜内施用时攀援鱼藤提取物被报道有活性，但是当经口施用时没有产生显著的效果。(见 Laupattarakasem，等人 Q003)J Ethnopharmacol. 85 207-15)。迄今为止，攀援鱼藤作为人类皮肤的局部治疗而用于抗老化目的的活性是未知的。仍存在对于减少老化迹象的化妆品组合物的需求，所述老化迹象包括松弛，减少的弹性，细纹和皱纹(特别是在面部、颈部、手等的皮肤上)。因此，本发明的目的在于提供改善的组合物和使用方法，以改善皮肤的外观，包括通过减少细纹和皱纹的出现。发明_既述令人惊讶地发现了攀援鱼藤的提取物在减少，逆转，减轻和/或预防由减少的皮肤弹性引起的皮肤老化迹象中是有效的，这包括细纹和/或皱纹的出现，深度或严重性，皮肤松弛和皮肤中相关的老化迹象。通常，所述组合物和方法可用于处理通常在人类中发现的、与弹性纤维丧失相关的任何皮肤状况。相信这些益处(至少部分地)产生自所述提取物刺激L0XL-1的产生，抑制钙神经素活性和/或刺激GAG的合成的能力。攀援鱼藤提取物因此可通过这三种独立的机制中的至少一种而潜在地减少老化的迹象，例如皱纹形成，皮肤变色和减少的弹性。基于这一发现，一个实施方案提供了用于向皮肤提供抗老化益处的方法，所述方法包括向皮肤区域应用化妆品上可接受的媒介中的局部组合物，其中所述皮肤区域的特征在于一种或多种皮肤老化的迹象，例如皱纹，细纹，皮肤松弛，萎缩，丧失皮肤弹力或充盈度，或丧失皮肤着色或色调；其中所述组合物包含含量有效向皮肤提供抗老化益处的攀援鱼藤提取物。此类皮肤老化迹象包括而不限于下列(a)治疗，减少和/或预防细纹或皱纹，(b)减少毛孔大小，(c)改善皮肤厚度，丰满度和/或紧固度；(d)改善皮肤柔韧度和/或柔软性；(e)改善皮肤色调，光泽和/或澄清度；(f)改善前胶原和/或胶原产生；(g)改善弹性蛋白的维持和重塑； (h)改善皮肤质地和/或促进重质构化；(i)改善皮肤屏障修复和/或功能；(j)改善皮肤轮廓的外观；(k)恢复皮肤光彩和/或明亮度；(1)补充皮肤中必需的营养和/或组成成分；(m)改善由老化和/或更年期而降低的皮肤外观；(η)改善皮肤水分和/或水合；(ο)改善(例如，增加和/或防止丧失)皮肤弹性和/或弹力；
(ρ)减少色素斑点的出现；(q)治疗，减少和/或预防皮肤松弛；和/或(r)治疗，减少和/或预防斑驳的皮肤外观。本发明的一个方面提供了用于预防，治疗或减轻皮肤中的皱纹或细纹的方法，所述方法包括向有需要的皮肤局部应用包含攀援鱼藤提取物和化妆品上可接受的媒介的组合物。本发明的另一个方面提供了用于向皮肤提供抗老化益处的局部组合物，所述组合物包含含量有效向皮肤提供抗老化益处的攀援鱼藤提取物和化妆品上可接受的媒介。所述局部组合物可以是洗液，霜剂，凝胶或泡沫的形式。通过参考下面的发明详述，将更好地理解本发明的这些和其它方面。


图1显示了 GAG的合成作为向人成纤维细胞施用的攀援鱼藤提取物的浓度的函数。发明详述在下面的发明描述中，将理解本文中所使用的术语具有其在本领域中通常的和习惯的涵义，除非另行说明。本文中所提及的所有重量百分比都以总组合物的“％按重量”或 “%wt”的形式给出，这是指向皮肤应用之前，在加入任何载体、溶剂、润滑剂或其它组分之后总制剂的重量百分比，除非另行说明。令人惊讶地发现了攀援鱼藤提取物能够刺激LOXLl的活性和/或表达，抑制钙神经素活性和刺激GAG的合成。LOXLl是维持和重塑皮肤中的弹性蛋白所需的必需的酶。相信LOXLl活性的增加促进弹性蛋白纤维的更新并产生皮肤弹性的改善。钙神经素在皮肤中的表达随着年龄内在地随时间增加。相信钙神经素与炎症相关，所述炎症对于皮肤的外观可具有有害的影响。抑制钙神经素被期待提供减少炎症对皮肤老化的贡献。GAG是细胞外基质的组分并且提供更年轻的皮肤特征性的机械特性(例如改善的弹性)以及提供改善的皮肤水合。较老的皮肤中GAG含量的减少可能是较老的皮肤在美学上显得劣于较年轻皮肤的原因。相信刺激GAG的合成可提供提供缓解不希望的皮肤老化特征或延迟其出现。根据本发明的包含攀援鱼藤提取物的局部组合物通过这三种独立机制中的至少一种而减少老化的迹象，例如皱纹形成，皮肤变色和减少的弹性。术语“皱纹”或“皱纹形成”是指细小皱纹形成和粗皱纹形成二者。细小皱纹形成或细纹是指皮肤表面上的浅表纹和皱纹。粗皱纹形成是指深沟，特别是面部和眼睛周围的深纹/皱纹，这包括表情纹，例如眉间纹和皱纹，抬头纹和皱纹，鱼尾纹和皱纹，法令纹及木偶纹和皱纹。抬头纹和皱纹是指前额皮肤上的浅表纹和/或深沟。鱼尾纹和皱纹是指眼睛区域周围的皮肤上的浅表纹和/或深沟。木偶纹和皱纹是指嘴周围皮肤上的浅表纹和/或深沟。可就纹路的数目、长度和深度评估皱纹。皮肤变色包括离散的色素沉着(其通常已知为色素斑点或“老年斑”)和斑驳的色素沉着。离散的色素沉着是更深的色素的明显的均一区域并且可显示为皮肤上的棕色斑点或雀斑。斑驳的色素沉着是在大小和形状方面比离散的色素沉着更大且更不规则的暗色斑点。斑驳的色素沉着的区域倾向于随着日光照射而变得更深。
皮肤的弹性是指皮肤在变形后重获其原始形状和大小的能力的弹性和弹力。皮肤的弹性可通过能够通过拉伸或挤压皮肤引起变形的掐捏测试来评估。鉴于这些和其它发现，料想包含攀援鱼藤提取物的局部组合物可用于对抗皮肤损伤和皮肤老化的迹象，这包括减少细纹和皱纹，色素斑点，皮肤松弛，丧失弹性，斑驳的皮肤外观以及皮肤中相关的老化迹象。料想的是，包含攀援鱼藤提取物的局部组合物可被应用于任何皮肤表面，包括但不限于面部、颈部和/或手的皮肤。本发明提供了用于局部应用的组合物，其包含有效量的攀援鱼藤提取物以治疗、 逆转、减轻和/或预防皮肤损伤或皮肤老化的迹象。此类益处包括而不限于下列(a)治疗，减少和/或预防细纹或皱纹，(b)减少毛孔大小，(c)改善皮肤厚度，丰满度和/或紧固度；(d)改善皮肤的柔韧度和/或柔软性；(e)改善皮肤色调，光泽和/或澄清度；(f)改善前胶原和/或胶原生产；(g)改善弹性蛋白的维持和重塑； (h)改善皮肤质地和/或促进重质构化；(i)改善皮肤屏障修复和/或功能；(j)改善皮肤轮廓的外观；(k)恢复皮肤光彩和/或明亮度；(1)补充皮肤中必需的营养和/或组成成分；(m)改善由老化和/或更年期而降低的皮肤外观；(η)改善皮肤水分和/或水合；(ο)增加皮肤弹性和/或弹力；(ρ)减少色素斑点的出现；
(q)治疗，减少和/或预防皮肤松弛；和/或(r)治疗，减少和/或预防斑驳的皮肤外观。本发明的组合物可被应用于需要处理的皮肤。即，患有任意上述特性的缺乏或丧失的皮肤或者将从任意上述皮肤特性的改善受益的皮肤。备选地，本发明的组合物可被应用于任何皮肤表面(优选面部、颈部、胸部和/或手的皮肤)以防止任意前述特性的不足或丧失。在某些优选的实施方案中，本发明的组合物和方法针对的是预防、治疗和/或减轻皮肤中的细纹和/或皱纹。在这种情形中，所述组合物被应用于需要所述治疗的皮肤，这是指具有皱纹和/或细纹的皮肤。优选地，所述组合物被直接应用于细纹和/或皱纹。所述组合物和方法适于处理任何皮肤表面上(包括而不限于，面部、颈部和/或手的皮肤)的细纹和/或皱纹。本发明的一个组分是源自攀援鱼藤植物的植物组分，优选直接源自攀援鱼藤植物。所述植物组分可以是纯的形式，半纯的形式，或未纯化的形式。所述攀援鱼藤植物组分可以是通过溶剂提取而获得的提取物的形式。优选地，所述攀援鱼藤植物组分是通过有机溶剂提取而获得的。特别地，可使用极性有机溶剂。更优选地，所述攀援鱼藤植物组分是通过含水有机溶剂提取获得的。合适的有机溶剂包括但不限于醇(例如甲醇，乙醇，丙醇，丁醇等)；乙二醇；醚 (例如二乙醚，二丙醚等)；酯(例如乙酸丁酯，乙酸乙酯等)；酮(例如丙酮，乙基甲基酮等)；有机酸包括乙酸等；二甲亚砜；乙腈；异丙醇；二氯甲烷；氯仿；己烷；二甲苯； 石油醚；其它有机溶剂；以及它们的组合。其它合适的溶剂包括水，生理盐水，磷酸缓冲液和磷酸缓冲盐水等。溶剂提取包括从含有所需组成成分的攀援鱼藤植物收集原料，例如种子，针叶，叶子，根，皮，球果，莲，根状茎，愈伤组织细胞，原生质体，器官和器官系统，以及分生组织。优选地，所述提取物可从攀援鱼藤植物的茎获得。在某些实施方案中，从攀援鱼藤植物收集的原料可被干燥以减少原料的水含量。可通过许多不同的手段来干燥所述原料，例如风干，烘干，在真空下旋转蒸发或冻干。在优选的实施方案中，所述原料包含干燥的攀援鱼藤植物的茎。简要地，有机溶剂提取方法包括使用有机溶剂清洗和提取所述原料。可使用提取机器来进行溶剂提取，如本领域中所熟知的。在某些实施方案中，将攀援鱼藤植物材料研磨为小的颗粒大小，然后通过可测量的加注机，经过原料入口将其放入提取机器中。所述植物原料被推进器推到提取机器中，所述推进器缓慢地将植物原料向前移动。可通过废料排放出口顶部的溶剂入口将溶剂加入机器中。由于重力和平衡方面的差异，溶剂流向原料入口， 浸泡原料并从溶剂入口的相反一侧流出。因为原料和溶剂持续地以相反的方向相对于彼此移动，原料被持续地浸在含有低浓度提取物的溶液中。作为平衡的结果，可通过持续地相对于低浓度溶液提取植物材料而实现植物组成成分的高产率。使用了适于提取植物组成成分的提取时间，通常约1-12小时是合适的，且更优选为约2-8小时，最优选为约3-6小时。提取的温度为约25°C -90°C，优选约35°C _70°C，更优选约50°C-60°C。然后精细过滤所收集的提取物以去除碎片，并且其可被直接使用，或者被浓缩(例如通过蒸馏所述溶剂或通过其它常规的过程)。所述提取物活性成分的溶液可在真空下被旋转蒸发或被冻干。典型的提取物活性成分含量为约25%以上，优选50%以上，且所述提取物还可以粉末的形式被提供，包括冻干的粉末。类似地，含水有机溶剂提取包括起初从含有所需组成成分的植物收集原料(例如植物的种子，针叶，叶子，根，皮，球果，蓬，根状蓬，愈伤组织细胞，原生质体，器官和器官系统，以及分生组织)，其可被研磨为小的颗粒大小。将经研磨的植物材料浸泡在酸性或碱性的含水溶液中(取决于所需提取物在酸性或碱性(basic)条件下的溶解度和稳定性)。对于在酸性条件下提取，将酸(例如盐酸或硫酸)加入水中，例如以约3%(w/v)的浓度。对于在碱性条件下提取，可向水中加入碱(例如氢氧化钠或碳酸钠)。提取时间和提取温度通常与在上面描述的有机溶剂提取方法中所使用的相似。优选地，攀援鱼藤提取物是通过用水、乙醇或其混合物提取攀援鱼藤的茎而获得的。优选的溶剂系统将包含约10% (按体积)至约90% (按体积)的乙醇和约10% (按体积) 至约90% (按体积)的水。更通常地，所述溶剂系统将包含约25% (按体积)至约75% (按体积)的乙醇和约25% (按体积)至约75% (按体积)的水。用包含约45% (按体积)至约55% (按体积)的乙醇和约45% (按体积)至约55% (按体积)的水的溶剂系统获得了特别好的结果，其中优选的是乙醇和水50:50混合物(按体积)。
然后收集所述提取物并精细过滤以去除碎片。可向所述提取物中加入碱试剂(例如氨)或酸化试剂(例如硫酸)以通过调节PH来中和所述溶液，这取决于所收集的提取物的酸性或碱性。可直接使用所述含水提取物，将其浓缩或干燥。备选地，然后可向经中和的溶液中加入有机溶剂以将所述提取物从含水相转移到有机相。此类有机溶剂的示例包括但不限于乙醇，异丙醇，丁醇，戊醇，己醇和ニ甲苯。包含溶解在有机溶剂中的经转移的提取物活性成分的提取物可被直接使用，作为浓缩物使用，或被干燥。提取物活性成分的溶液可在真空下被旋转蒸发或被冻干。所述提取物可作为液体或固体被提供，优选以干燥的粉末形式，包括冻干的粉末。合适的提取方法在下列中被公开PCT公开W003/079816(描述了用于制备具有高含量番茄红素的番茄提取物的方法)，W004/014404(描述了用于制备松果菊提取物的方法)和W004/014958(描述了提取松果菊根的多糖)，所有这些都在此以其全部通过引用而并入。含有不同組成成分的不同植物可与攀援鱼藤植物物质混合并一起提取。这种混合提取的方法可优选被用提取含有的組成成分在用于提取的溶剂(例如乙醇)中具有与攀援鱼藤中的組成成分相似的溶解度的那些植物。提取物的混合物可被浓缩并储存在适当的溶剂中。根据本发明的組合物可被配制为用于局部应用的各种形式并且将包含约0. 0001% (按重量)至约90%(按重量)的攀援鱼藤提取物。在此范围中，相信所述组合物将刺激LOXLl 的活性和/或表达，抑制钙神经素活性，和/或刺激GAG的合成。所述组合物可包含约 0. 001% (按重量)至约25% (按重量)的攀援鱼藤提取物。优选地，所述组合物包含约0.01% (按重量)至约10% (按重量)的攀援鱼藤提取物。在优选的范围内，所述组合物可包含的攀援鱼藤提取物在约0. 1%，0. 25%，0. 5%，0. 75%或1% (按重量)直至5%，7. 5%或10% (按重量) 的总组合物的范围内。上述量是指攀援鱼藤提取物的“有活性的量”。术语“有活性的量”是指不含稀释剂、溶剂或为了体积而加入的任何其它成分吋，攀援鱼藤提取物的量。向皮肤提供特定抗老化益处的“有效的量”或“有效量”是指当应用足以在皮肤老化的特定表现方面提供临床上可测量的改善的时间吋，在皮肤老化的特定表现方面提供临床上可测量的改善所需的提取物的“有活性的量”。在另ー个实施方案中，如本文中所使用的攀援鱼藤提取物也包括“合成的”提取物，即已知攀援鱼藤植物组分和/或組成成分的各种组合，所述已知攀援鱼藤植物组分和/ 或組成成分被组合以基本上模拟天然来源的攀援鱼藤植物提取物的組成和/或活性。最优选地，所述合成的提取物与天然的攀援鱼藤植物材料具有基本上相同数目的活性组分。合成的提取物与天然攀援鱼藤植物材料之间的活性物质的数值发生率的对应也可被描述为 “百分比共同性”。合成的提取物与植物或天然提取物的化学組成具有约50%或更多的共同性。換言之，合成的提取物具有在植物或天然提取物中发现的活性成分的约50%或更多。 更优选地，合成提取物的化学組成与植物或天然提取物的化学組成具有约70%或更多的共同性。最佳地，合成的提取物与植物或天然提取物的化学組成具有约90%或更多的共同性。所述组合物可以被配制为各种产品形式，例如洗液，霜剂，乳菜，喷雾，气溶胶，饼， 软膏，精华，凝胶，膏剂，贴剂，笔，湿巾，面膜，棒，泡沫，酏剂，浓缩物等，特別是用于局部施用。优选地，所述组合物被配制为洗液，霜剂，软膏，凝胶和棒。更优选地，所述组合物被配制为洗液或霜剂。此外，可通过电离子透入法而实现靶向递送和/或滲透的提高。前述产品形式将优选地包含乳剂和除所述提取物和媒介之外的ー种或多种成分，例如在皮肤上具有有益效果的ー种或多种成分。所述组合物可包括化妆品上可接受的媒介。此类媒介可采取本领域中已知的任何适于向皮肤应用的形式，并且可包括水(例如去离子水)；植物油；矿物油；酷，例如棕榈酸辛酷，肉豆蔻酸异丙酯和棕榈酸异丙酯；醚，例如ニ辛基醚和异山梨醇ニ甲醚；醇，例如乙醇和异丙醇；脂肪醇，例如鲸蜡醇，鲸蜡硬脂醇，硬脂醇和联苯醇；异链烷烃，例如异辛烷，异十二烷和十六烷；硅油，例如环甲基聚硅氧烷，ニ甲基聚硅氧烷，ニ甲基聚硅氧烷交联聚合物，聚硅氧烷和它们的衍生物，优选经有机修饰的衍生物；烃油，例如矿物油，矿脂， 异二十烷和聚异丁烯；多元醇，例如丙ニ醇，甘油，丁ニ醇，戊ニ醇和己ニ醇；蜡，例如蜂蜡和植物蜡；或者前述的任何組合或混合物。在一个实施方案中，本发明的組合物包含化妆品上可接受的媒介(稀释剂或载体)，这是指其与人类皮肤相客。所述组合物可包含含水相，油相，醇，有机硅相或它们的混合物。所述化妆品上可接受的媒介可包含乳剤。合适的乳剂的非限制性实例可包括油包水乳剤，水包油乳剤，水包有机硅乳剤，有机硅包水乳剤，水包蜡乳剤，水包油包水三重乳剂等，其具有霜剂，凝胶或微乳剂的外观。所述乳剂可包括乳化剤，例如非离子，阴离子或两性的表面活性剤。所述乳剂的油相优选具有一种或多种有机化合物，这包括润滑剂；保湿剂(例如丁ニ醇，丙ニ醇，甲基葡糖醇聚醚-20和甘油)；其它水可分散的或水溶性组分，包括增稠剂例如硅酸镁铝或羟基烷基纤维素；胶凝剂，例如高MW聚丙烯酸，即卡波姆934;以及它们的混合物。所述乳剂可具有一种或多种能够乳化組合物中存在的各种组分的乳化剤。适合用于所述油相中的化合物包括而不限干，植物油；酷，例如棕榈酸辛酷，肉豆蔻酸异丙酯和棕榈酸异丙酯；醚，例如ニ辛基醚；脂肪醇，例如鲸蜡醇，硬脂醇和山嵛醇； 异链烷烃，例如异辛烷，异十二烷和异十六烷；硅油，例如ニ甲基聚硅氧烷，环有机硅和聚硅氧烷；烃油，例如矿物油，矿脂，异二十烷和聚异丁烯；天然或合成的蜡；等等。合适的疏水性烃油可以是饱和的或不饱和的，具有脂肪族的特征以及可以是直链或支链的或含有脂环或芳香环。含油相可由単一的油或不同油的混合物构成。烃油包括具有6-20个碳原子、更优选10-16个碳原子的那些。代表性的烃包括癸烷，十二烷，十四烷，十三烷，和C8_2(1异链烷烃。链烷烃可从Exxon获得，在IS0PARS商标之下，以及从PermethylCorporation获得。此外，C8_2Q链烷烃(例如Permethyl Corporation制造的C12异链烷(异十二烷)，具有的商品名为Permethyl 99ATM)也被料想是合适的。各种商业上可得的Q6异链烷，例如异十六烷(具有商品名Permethyl RTM)也是合适的。优选的挥发性烃的实例包括聚癸烷，例如异十二烷和异癸烷，包括例如Permethyl-99A (Presperse Inc.)；和C7-C8至C12-C15异链烷，例如可从Exxon Chemicals获得的Isopar系列。代表性的烃溶剂是异十二烷。油相可包含一种或多种蜡，这包括例如稻麸蜡，巴西棕榈蜡，ouricurry wax,小烛树蜡，蒙丹蜡，甘蔗蜡，石蜡，聚乙烯蜡，Fischer-Tropsch蜡，蜂蜡，微晶蜡，有机硅蜡，氟化的赌，以及它们的任意組合。
非限制性的乳化剂包括乳化性蜡，乳化性多羟基醇，聚醚多元醇，聚醚，多元醇的单酯或ニ酷，乙ニ醇硬脂酸单酷，单硬脂酸甘油酷，ニ硬脂酸甘油酷，含有有机硅的乳化剤， 大豆固醇，脂肪醇例如鲸蜡醇，丙烯酸酷，脂肪酸例如硬脂酸，脂肪酸盐，以及它们的混合物。优选的乳化剂包括大豆固醇，鲸蜡醇，硬脂酸，乳化性蜡，丙烯酸酷，含有有机硅的乳化剂以及它们的混合物。可被用于本发明的組合物中的其它具体的乳化剂包括但不限干，下列的ー种或多种例如，山梨坦酯；聚甘油-3- ニ异硬脂酸酯；Cich3ci烷基丙烯酸酯交联聚合物；二甲基聚硅氧烷PEG-7异硬脂酸酷，丙烯酰胺共聚物；矿物油；山梨坦单硬脂酸酷， 山梨坦三硬脂酸酷，山梨坦倍半油酸酷，山梨坦单油酸酯；甘油酷，例如单硬脂酸甘油酯和单油酸甘油酯；聚氧乙烯酚类，例如聚氧乙烯辛基酚和聚氧乙烯壬基酚；聚氧乙烯醚，例如聚氧乙烯鲸蜡基醚和聚氧乙烯硬脂醇醚；聚氧乙烯乙ニ醇酯；聚氧乙烯山梨坦酯；ニ甲聚硅氧烷共聚醇；聚甘油酷，例如聚甘油-3-ニ异硬脂酸酯；甘油月桂酸酷；硬脂醇聚醚_2， 硬脂醇聚醚-10和硬脂醇聚醚-20。其它的乳化剂在INCI成分字典和手册，第11版2006 中提供，其公开在此通过引用而并入。这些乳化剂通常将以下列量存在于所述組合物中约0. 001%至约10% (按重量)， 特別是约0. 01%至约5% (按重量)的量，更优选约0. 1%至约3% (按重量)。所述油相可包含一种或多种挥发性和/或非挥发性硅油。挥发性有机硅包括环形和线性的挥发性ニ甲基硅氧烷有机硅。在一个实施方案中，所述挥发性有机硅可包括环ニ甲聚硅氧烷，这包括四聚体(D4)，五聚体(M)和六聚体(D6)环甲基聚硅氧烷，或者其混合物。可特别提及的是挥发性环甲基聚硅氧烷-六甲基环三硅氧烷，八甲基-环四硅氧烷，和十甲基-环五硅氧烷。合适的ニ甲聚硅氧烷可从Dow Corning获得，名称为Dow Corning 200 液体，且具有的粘度范围为约0.65至600000厘沲或更高。合适的非极性、挥发性液体硅油在美国专利号4，781，917中公开，在此以其全部通过引用而并入。其它的挥发性有机硅材料被描述于iTodd等人，“Volatile Silicone Fluids for Cosmetics, "Cosmetics and Toiletries, 91:27-32 (1976)中，其在此以其全部通过引用而并入。线性的挥发性有机硅通常在25°C时具有的粘度小于约5厘沲，而环形有机硅在25°C 时具有的粘度小于约10厘沲。各种粘度的挥发性有机硅的实例包括Dow Corning 200， Dow Corning244, Dow Corning 245, Dow Corning 344 禾ロ Dow Corning 345, (DowCorning Corp.) ； SF-1204 和 SF-1202 硅油(G. Ε. Silicones)，GE 7207 和 7158 (General Electric Co.)；以及SWS-03314(SWS SiliconesCorp.) 0线性、挥发性有机硅包括低分子量聚ニ甲基硅氧烷化合物，例如六甲基ニ硅氧烷，八甲基三硅氧烷，十甲基四硅氧烷和十二甲基五硅氧烷。非挥发硅油将通常包含聚烷基硅氧烷，聚芳基硅氧烷，聚烷基芳基硅氧烷，或它们的混合物。聚ニ甲基硅氧烷是优选的非挥发性硅油。所述非挥发性硅油在25°C时，将通常具有的粘度为约10至约60，000厘沲，优选约10至约10，000厘沲，更优选约10至约500 厘沲；且在大气压カ下的沸点大于250°C。非限制性的实例包括ニ甲基聚硅氧烷(ニ甲聚硅氧烷)，苯基三甲基聚硅氧烷，和ニ苯基ニ甲聚硅氧烷。挥发性和非挥发硅油可任选地以各种官能团进行取代，例如烷基，芳基，氨基，乙烯基，羟基，卤代烷基，烷基芳基，以及丙烯酸酷基团。可用非离子表面活性剂(乳化剂)使有机硅包水乳剂乳化，例如聚ニ有机硅氧烷-聚氧化烯构造块共聚物，这包括美国专利号4，122，029中所描述的那些，其公开在此通过引用而并入。这些乳化剂通常包含聚ニ有机硅氧烷主链(通常是聚ニ甲基硅氧烷)， 具有包含-(EO)m-和/或-(PO)n-基团的侧链，其中EO是乙烯氧基且PO为1，2-丙烯氧基，所述侧链通常用氢或低级烷基(例如，Cp6，通常为C1J加帽或封端。其它合适的有机硅包水乳化剂被公开于美国专利号6，685，952中，其公开在此通过引用而并入。商业上可得的有机硅包水乳化剂包括可从Dow Corning获得的那些，交易名称为3225C和 5225CF0RMULATI0N AID;有机硅 SF-1528，可从 General Electric 获得；ABIL EM 90 和 EM 97，可从 Goldschmidt Chemical Corporation (Hopewell，VA)获得；以及 SILWET 乳化剂系列，由 OSI Specialties (Danbury，CT)出售。有机硅包水乳化剂的实例包括但不限于ニ甲基聚硅氧烷PEG10/15交联聚合物， ニ甲基聚硅氧烷共聚醇，鲸蜡基ニ甲基聚硅氧烷共聚醇，PEG-15月桂基ニ甲基聚硅氧烷交联聚合物，月桂基甲基聚硅氧烷交联聚合物，环甲基聚硅氧烷和ニ甲基聚硅氧烷共聚醇，ニ 甲基聚硅氧烷共聚醇(和)辛酸/癸酸甘油三酷，聚甘油-4异硬脂酸酯(和)鲸蜡基ニ甲基聚硅氧烷共聚醇(和)月桂酸己酷，和ニ甲基聚硅氧烷共聚醇(和)环戊硅氧烷。有机硅包水乳化剂的优选实例包括但不限于PEG/PPG-18/18 ニ甲聚硅氧烷(商品名称5225C，Dow Corning)，PEG/PPG-19/19 ニ甲聚硅氧烷(商品名称 BY25_337，Dow Corning)，鲸蜡基 PEG/ PPG-10/1 ニ甲聚硅氧烷(商品名称 Abil EM-90，Goldschmidt Chemical Corporation), PEG-12 ニ甲聚硅氧烷(商品名称 SF 1288, General Electric)，月桂基 PEG/PPG-18/18 甲基聚硅氧烷(商品名称5200F0RMULATI0N AID，Dow Corning)，PEG-12 ニ甲聚硅氧烷交联聚合物(商品名称9010和9011有机硅弾性体掺合物，Dow Corning)，PEG-IO ニ甲聚硅氧烷交联聚合物(商品名称KSG-20，Siin-Etsu)，ニ甲聚硅氧烷PEG-10/15交联聚合物(商品名称KSG-210，Shin-Etsu)和ニ甲基聚硅氧烷PEG-7异硬脂酸酷。所述有机硅包水乳化剂通常将以下列量存在于所述組合物中约0. 001%至约10% (按重量)，特別是约0. 01%至约5% (按重量)的量，更优选1% (按重量)以下。所述乳剂的含水相可包括一种或多种其它的溶剂，这包括低级醇，例如乙醇、异丙醇等。所述挥发性溶剂也可以是化妆品上可接受的酯例如乙酸丁酯或乙酸乙酯；酮，例如丙酮或乙基甲基酮；等等。所述含油相将通常构成约10%至约99%，优选约20%至约85%，更优选约30%至约 70% (按重量)，基于所述乳剂的总重量，而含水相将通常构成约1%至约90%，优选约5%至约 70%，更优选约20%至约60% (按重量)的总乳剤。所述含水相将通常包含约25%至约100%， 更优选约50%至约95% (按重量)的水。所述组合物可包括脂质体。脂质体可包含其它添加剂或物质和/或可被修饰以在施用后更特异性地到达或保留在位点处。在一个实施方案中，本发明的組合物包含的攀援鱼藤提取物可具有的pH为约1至约8。在某些实施方案中，所述组合物的pH将是酸性的，即小于7. 0，且优选将在约2至约 7之间，更优选在约3. 5至约5. 5之间。所述组合物可任选地包含其它美容或皮肤活性成分和/或赋形剂。优选地，所述其它的美容活性成分和赋形剂不是强的氧化剂并且不具有强的氧化潜力。更优选地，所述組合物不包括有机或无机的过氧化物。
合适的其它美容或皮肤活性成分和赋形剂包括，例如填充剂，精油，乳化性试剂， 抗氧化剂，抗炎剂，表面活性剤，成膜剂，螯合剂，胶凝剂，增稠剂，润滑剤，保湿剂(例如，丁 ニ醇，丙ニ醇，甲基葡糖醇聚醚-20和甘油)，湿润剂，维生素，矿物质，成形剂，粘性和/或流变性修饰剂，防晒剂，角质软化剂，退色剂，类视黄醇，激素化合物，α-羟基酸，α-酮酸， 抗分枝杆菌剂，抗真菌剂，抗微生物剂，抗病毒剂，止痛剂，脂质化合物，抗过敏剂，Hl或Η2 抗组胺剂，抗炎剂，抗刺激物，抗肿瘤药，免疫系统加强剂，免疫系统抑制剂，抗痤疮剂，麻酔剂，防腐剤，驱虫剂，皮肤冷却化合物，皮肤保护剂，皮肤渗透增强剂，去角质剂，润滑剤，香料，着色剂(包括色素和珠光剂)，退色剂，去色素剂，PH调节剂，防腐剂(例如，DMDM乙内酰服/碘代丙炔基碳酸丁酷)，稳定剂，药剂，光稳定剂，中和剂(例如三乙醇胺)以及它们的混合物。除了前述之外，本发明的化妆品组合物可含有用于治疗皮肤病症的任何其它活性成分或化合物。着色剂可包括例如，有机和无机色素和珠光剂。合适的无机色素包括但不限于氧化钛，氧化锆和氧化铈，以及氧化锌，氧化铁，氧化铬和铁蓝。合适的有机色素包括钡，锶，钙和铝色淀以及碳黒。合适的珠光剂包括用氧化钛，氧化铁或天然色素涂覆的云母。可加入各种填充剂和其它组分。填充剂通常以约0重量％至约20重量％(基于组合物的总重量)，优选约0. 1重量％至约10重量％的量存在。合适的填充剂包括滑石，ニ氧化硅，硬脂酸锌，云母，高岭土，尼龙(特別是orgasol)粉末，聚乙烯粉末，Tef lon，淀粉，氮化硼，共聚物微球，例如 Expancel (Nobel Industries), Polytrap (Dow Corning)以及有机硅树脂微珠(Tospearl，来自 Toshiba)。在本发明的一个实施方案中，包含攀援鱼藤提取物的組合物可包括皮肤活性成分，例如但不限于植物成分，角质软化剂，去屑剂，角蛋白形成細胞增殖增强剂，胶原酶抑制剂，弾性蛋白酶抑制剂，退色剂，抗炎剂，类固醇，抗痤疮剂，抗氧化剂，水杨酸，水杨酸盐，和晩期糖化作用终产物(AGE)抑制剂。在具体的实施方案中，所述组合物可包含至少ー种其它的植物成分，例如植物提取物，精油或植物本身。合适的植物成分包括而不限于来自下列的提取物印度冷杉、儿茶、 宽叶榆绿木、Asmundajaponica、印楝、紫铆、紫矿属、雪松、余甘子、孟加拉榕树、洋甘草、冬青、总状土木香、Ligusticum chiangxiong、女贞、粗糠柴、牛油果、海巴戟、辣木、补血草、夹竹桃、补骨脂、乌蕨、红果榄仁、番茄糖脂，以及它们的混合物。所述组合物可包含具有抗老化益处的其它活性成分，所料想的是以这种组合可获得协同的改善。其它合适的抗老化成分包括而不限于例如某些植物成分(例如紫铆提取物)，硫代ニ丙酸(TDPA)，类视黄醇，羟酸(包括α-羟酸和β-羟酸)，水杨酸，水杨酸盐和
羟乙酸。合适的羟酸包括，例如羟乙酸，乳酸，苹果酸，酒石酸，柠檬酸，2-羟基烃酸，苦杏仁酸，水杨酸及其烷基衍生物，包括5 —正辛酰水杨酸，5-正十二酰水杨酸，5-正癸酰水杨酸， 5-正辛基水杨酸，5-正庚基氧基水杨酸，4-正庚基氧基水杨酸和2-羟基-3-甲基苯甲酸或其烷氧基衍生物，例如2-羟基-3-甲基氧基苯甲酸。示例性的类视黄醇包括而不限于维A酸(例如，全反式或13-顺式)及其衍生物， 视黄醇(维生素Α)及其酷，例如视黄醇棕榈酸酷，视黄醇乙酸酯和视黄醇丙酸酷，以及它们的盐。
在另ー个实施方案中，本发明的局部組合物还可包括下列的ー种或多种皮肤渗透增强剂，润滑剤，皮肤丰盈剂，光学漫射剂，防晒剂，去角质剂和抗氧化剂。润滑剂提供增强皮肤光滑性和减少细纹和粗皱纹的出现的功能性益处。实例包括肉豆蔻酸异丙酷，矿脂，羊毛脂酸异丙酷，有机硅(例如甲基聚硅氧烷，ニ甲基聚硅氧烷)， 油，矿物油，脂肪酸酷，鲸蜡醇乙基己酸酷，C12_15烷基苯酸酷，异硬脂酸异丙酷，ニ聚体ニ亚油酸ニ异丙酷，或它们的任何混合物。所述润滑剂可优选地以约0. lwt%至约50wt%的組合物的总重量存在。皮肤丰盈剂作为皮肤的胶原增强剂。合适的且优选的皮肤丰盈剂的实例是棕榈酰寡肽。其它的皮肤丰盈剂是胶原和/或其它糖胺聚糖(GA(i)增强剂。当存在吋，所述皮肤丰盈剂可构成约0. lwt%至约20wt%的组合物的总重量。光学漫射剂是改变皮肤的表面视光学的颗粒，其引起例如纹和皱纹的视觉模糊和柔化。可用于本发明中的光学漫射剂的实例包括但不限于，氮化硼，云母，尼龙，聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)，聚氨酯粉末，绢云母，ニ氧化硅，有机硅粉末，滑石，聚四氟乙烯，ニ氧化钛， 氧化锌，或它们的任何混合物。当存在吋，所述光学漫射剂可以约0. 01wt%至约20wt%的组合物的总重量存在。还可包括保护皮肤免受紫外线损伤的防晒剂。优选的防晒剂是具有广谱UVB和 UVA保护的那些，例如氰双苯丙烯酸辛酷，阿伏苯宗(Parsol 1789)，甲氧肉桂酸辛酷，水杨酸辛酷，氧苯酮，胡莫柳酷，ニ苯甲酮，樟脑衍生物，氧化锌以及ニ氧化钛。当存在吋，所述防晒剂可构成约0. 01wt%至约70wt%的所述组合物。合适的去角质剂包括例如，α羟酸，β羟酸，氧杂酸，氧杂ニ酸，以及它们的衍生物，例如它们的酷，酐和盐。优选的去角质剂是羟乙酸。当存在吋，所述去角质剂可构成约 0. lwt%至约80wt%的所述组合物。抗氧化剂的作用特别是从皮肤上清除自由基，以保护皮肤避免环境的攻击者。可被用于本发明的組合物中的抗氧化剂的实例包括具有酚羟基官能的化合物，例如抗坏血酸及其衍生物/酷；α-羟酸；β -胡萝卜素；儿茶素；姜黄素；阿魏酸衍生物(例如阿魏酸乙酷，阿魏酸钠)；没食子酸衍生物(例如，没食子酸丙酯)；番茄红素；还原酸；迷迭香酸；鞣酸；四氢姜黄色素；生育酚及其衍生物(例如生育酚乙酸酷)；尿酸；或它们的任何混合物。其它合适的抗氧化剂是具有一个或多个巯基官能(-SH)(以还原或非还原的形式)的那些，例如谷胱甘肽，硫辛酸，硫羟乙酸，和其它含巯基化合物。所述抗氧化剂可以是无机的，例如亚硫酸氢盐，焦亚硫酸盐，亚硫酸盐类，或者含有硫的其它无机盐和酸。本发明的组合物可包含的抗氧化剂优选为约0. 001wt%至约10wt%，更优选约0. 01wt%至约5wt%的所述组合物的总重量。提供了减少皮肤损伤或老化的可见迹象(例如皮肤中的细纹、皱纹、斑点和皮肤变色的出现)的方法，所述方法包括向有需要的个体的皮肤局部应用有效量的攀援鱼藤提取物。所述方法提供了刺激L0XL-1活性(例如増加L0XL-1的表达)，抑制钙神经素活性，和/ 或刺激GAG的合成。还提供了治疗皮肤弾性降低的症状的方法，所述方法包括向有需要的个体的皮肤局部应用有效量的攀援鱼藤提取物。通常，攀援鱼藤提取物是以包含化妆品上可接受的媒介組合物的形式提供的，化妆品上可接受的媒介是指与向人类皮肤应用相容(例如安全)的媒介。降低的皮肤弹性被认为是由于皮肤中弾性蛋白纤维的丧失。所述方法提供了維持皮肤完整性并减少细纹和皱纹的出现，例如减少细纹和皱纹的深度，改善皮肤色调和显色， 减少皮肤松弛和萎縮，改善的弾力和充盈度(这是指皮肤密度或垫层，并且可通过缓动皮肤且观察多少组织上升而被评估)。宿主通常患有这些症状中的ー种或多种。所述组合物对于细纹和皱纹的形成或出现的作用可被定性地评估(例如通过视觉检查)，或被定量地评估(例如通过显微镜或计算机辅助的，对皱纹形态的测量)。优选地，皱纹形态被定量地分析，例如，測量了皱纹的数目，深度，长度，面积，体积和/或宽度/単位面积的皮肤。所述组合物理想地増加皮肤中的LOXLl活性，抑制钙神经素并刺激皮肤成纤维细胞中的GAG合成。可以本发明的組合物改善或治疗的皮肤损伤包括降低的皮肤弹性的任何迹象(例如细纹和/或皱纹)，脆弱或变薄的皮肤，松弛的皮肤，缺乏光彩的皮肤，疲乏的皮肤，干燥的皮肤，皮肤敏感，黑眼圈，浮肿的皮肤，不规则的皮肤色素沉着以及黒斑病。向皮肤局部应用本发明的組合物可增强和改善皮肤的美学外观。这种方法可特別用于治疗皮肤的光老化和内在老化的迹象，这包括细纹和皱纹，皮肤色调和显色，皮肤松弛和萎縮，扩大的毛孔，皮肤变薄，减少的弾力和充盈度。向皮肤局部应用本发明的組合物可增强和改善皮肤的美学外观，在其它改善中， 这特别是通过减少皮肤脆弱性；防止和逆转弹性蛋白的劣化；防止皮肤萎縮；促迸/加速細胞更新；改善皮肤紧实度/丰满度；改善皮肤质地；减少细纹和皱纹的长度和/或深度；防止细纹和皱纹的形成；改善皮肤色调；增强皮肤厚度；恢复皮肤光彩；使疲乏的迹象最小化；减少皮肤干燥；减少皮肤瘙痒；减少皮肤发红；减少对于化学、机械或辐射影响的敏感性；减少皮肤潮红和脸红的倾向；减少眶周眼睛区域中的黑圈和浮肿；减少前额上的眉间纹和嘴周围的笑纹；增加细胞增殖；减少物理创伤后可见的淤伤的程度和/或持续时间；减少斑点和不规则的皮肤色素沉着；治疗或减轻黒斑病；治疗或减轻皮肤色素过度；治疗或减轻毛囊炎和向内生长的毛结(hair bumps)以及剃须后切口和刺激；治疗或减轻皮炎，银屑病和与急性、亚急性或亚慢性炎症有关或由其引起的其它皮肤病况；以及增强总体的皮肤健康。本发明还提供用于治疗老化皮肤的方法，这是通过在受影响的区域上局部应用包含本发明的組成的組合物，应用的时间段足以减少、治疗或减轻皮肤弾性减少的皮肤病学迹象。在一个实施方案中，是治疗皮肤(例如面部、颈部、手上的皮肤)皱纹的方法，所述方法包括向皱纹局部应用包含攀援鱼藤提取物的化妆品组合物，所应用的有效量和时间足以减少皱纹的严重性和深度。在另ー个实施方案中，是防止皮肤(例如面部、颈部、手上的皮肤)损伤的方法，所述方法包括以延迟皮肤损伤或皮肤老化的有效量向未损伤的皮肤局部应包含攀援鱼藤提取物的化妆品组合物。所述皮肤损伤可包括，例如细纹和皱纹的形成，色素斑点，皮肤松弛， 弹性的丧失和斑驳的皮肤外观。在另ー个实施方案中，是治疗皮肤(例如面部或颈部上的皮肤)松弛的方法，所述方法包括向松弛的皮肤局部应用包含攀援鱼藤提取物的化妆品组合物，所应用的有效量和时间足以降低松弛的程度。在另ー个实施方案中，是治疗薄皮肤的方法，所述方法包括向薄皮肤局部应用包含攀援鱼藤提取物的化妆品组合物，所应用的有效量和时间足以增厚所述皮肤。“薄皮肤”意在包括由时序性老化，更年期或光损伤引起的变薄的皮肤。在ー些实施方案中，所述治疗是对于男性中的薄皮肤，而其它的实施方案治疗女性(更年期前或更年期后)中的薄皮肤，因为相信在男性和女性中(特別是在不同生命阶段的女性中)皮肤随着年齢变薄是不同的。可预防性地采用本发明的方法来预先阻止老化，包括在未表现出皮肤老化迹象的患者中，最常见的是在年龄为25岁以下的个体中。所述方法也可以逆转或治疗老化的迹象 (一旦显现)，如在年龄超过25岁的患者中所常见的。所述组合物可被应用于皮肤足以改善皮肤的美学外观的时间段。每天可将所述組合物应用于皮肤1次，2次，3次，4次，5次，6次或更多次，只要是实现所希望的结果所需的。治疗方案可包括每天应用、进行至少一周，至少两周，至少四周，至少八周，或至少十二周。备选地，治疗方案可包括向皮肤长期应用所述组合物。所述方法包括治疗与内在皮肤老化和由暴露于外部损伤引起的皮肤老化二者相关的皮肤变化。料想所述方法可用于治疗 UV损伤的皮肤。
实施例实施例1.攀援鱼藤(“Derris”)提取物的制备攀援鱼藤的茎被用于提取。将250g攀援鱼藤的茎斩碎为大约5cm长的块并于 60° C、在电炉中干燥2-3天。用溶剂(Et0H/H2050/50v/v)提取经干燥的材料三次。例如， 1升所述溶剂可被用于在37° C下、以150rpm提取12hrs。在旋转蒸发仪中，在真空浓缩下、于40-50° C去除挥发性化合物(即乙醇)。例如，三升的总提取物在蒸馏的最后被减少至150ml并用纯浄水稀释至1500ml，且允许其在 4° C下被放置12hrs。然后离心稀释液以去除残渣和不可溶的物质。然后使溶液经受用己烷じ1 0.5体积)进行的提取以去除可能的痕量毒素(例如杀虫剂)。例如，在分液漏斗中用750ml的己烷处理1500ml的提取溶液。将所述过程重复2次。丢弃己烷层并保留含水层用于进ー步的提取步骤。通过取样和冻干检查了均相溶液中的干物质含量。之后，将木炭加入脱脂的溶液中以对其脱色和除臭。以10% (按重量)VS溶液的总干物质含量加入木炭。例如，对于含有 170g总干物质含量的1500ml溶液，需要加入17g的木炭，随后在50° C下搅拌lhr，并通过滤纸进行双重过滤。然后，用水饱和的正丁醇(3x 0.5体积)进行提取而使所述溶液分级。例如，对于 1500ml经脱色的澄清溶液，制备2250ml水饱和的丁醇并分为三部分，每部分750ml。然后在分液漏斗中用这些部分处理所述经脱色的澄清溶液三次。如果分层不清楚，则允许分离继续进行10-12小时并可在最后用热空气稍稍加热。将丁醇提取物汇集到一起，加入水(相同的体积)并在真空下、在旋转蒸发仪上使溶液浓縮。当蒸馏停止吋，再次加入水并使混合物再次浓縮。然后第三次重复所述过程并冻干。通过在真空下进行旋转蒸发而浓缩含水层，以去除丁醇。当蒸馏停止时，冻干含水溶液。所获得的干燥粉末为“提取物”。如说明书的其它部分所述的，有可能对这ー提取过程进行修饰和调整，特别是在扩大至更大的体积用于生产的过程中。实施例2 LOXLl活性的刺激使用荧光素酶-报告物系统研究了施用攀援鱼藤提取物对于人成纤维細胞中 LOXLl的表达的影响。载体构建，转染和表达分离LOXLl基因的启动子区域井根据生产商的说明将其克隆到PGL3荧光酶报告物质粒(Promega)中。使用LipofectAMINE LTX试剂 (Invitrogen)，根据生产商的指导，将L0XLl/pGL3载体和对照载体pRL-NULL (ftOmega)共转染到人成纤维肉瘤系HTI080中。允许经转染的细胞恢复Mh。然后用含有各种浓度的攀援鱼藤提取物的新鮮培养基替代所述培养基，并将经转染的細胞再培养Mh。随后用磷酸盐缓冲盐水(PBS)清洗培养物并使其暴露于100 μ 1細胞裂解缓冲液/25cm2培养物面积，并在室温下轻柔摇动30min。然后，将含有細胞裂解物的培养瓶立即置于-80° C。 确定报告物活性根据生产商的说明(Diml-Luciferase 报告物測定系统，
Promega)确定了报告基因萤火虫荧光素酶的活性。简要地，相对于编码第二个荧光素酶基因(来自海肾)的对照载体，确定了所述报告基因的活性。比较了来自测试和对照培养物的基因的相对活性，用于确定调控序列活性的修饰百分比。结果因为pGL3载体缺少必要的启动子区域来调控荧光素酶基因，此基因的表达是由所克隆的调控元件控制的，在此例中是LOXLl基因的调控元件。在一式三份的测试中， 发现加入0. 004wt%的攀援鱼藤提取物以50%増加报告基因的表达(p<0. 05，与媒介对照相比)，表明LOXLl基因的调控元件的増加的表达。因此，攀援鱼藤被显示是LOXLl表达的正调控因子，暗示着对于弹性蛋白更新的继发效应。实施例3:钙神经素活性的抑制使用了离体磷酸酶测定来评价攀援鱼藤提取物调节钙神经素活性的能力。离体磷酸酶测定使用DiFMUP (6,8- ニ氟_7_羟基_4_甲基香豆素磷酸盐)磷酸酶测定(见例如，Wegner等人，2007，Methods Mol. Biol. 365 61-69，在此以其全部通过引用而并入)来监测对于钙神经素活性的调节。DiFMUP的去磷酸化引起形成高度荧光和稳定的产物Di4MU。向反应缓冲液中加入不同浓度的提取物，所述反应缓冲液通常由下列组成50mM Tris-HCl, pH 7. 4，0. 0125% 牛血清白蛋白(BSA)，0. ImM CaCl，400U/ml 钙调蛋白和ImM NiCl。将反应缓冲混合物在37° C下孵育30min。然后加入DiFMU底物至10 μ M的浓度，使混合物返回到37° C再孵育15min。在分光光度计上測定荧光强度。结果发现攀援鱼藤提取物以剂量依赖性的方式抑制钙神经素活性，在1%重量 /体积的浓度时显示出103%的抑制效果，而在0. 1%浓度时显示出49%的抑制效果。当以 0.01%重量/体积的浓度进行测试时，攀援鱼藤提取物没有显示出任何效果。化合物的IC5tl 被评估为0. 106%重量/体积。结果表示，局部应用包含攀援鱼藤提取物的組合物将引起与炎性皮肤病况相关的症状的改善。实施例4:糖胺聚糖合成的測量研究了施用攀援鱼藤提取物对于人成纤维細胞中GAG的合成的影响。一般地，Barbosa,等人 ロ00；3)Glycobiology 13:647 一 653 描述了测量糖胺聚糖合成的技木。简要地，将成纤维细胞铺板(例如在对孔板中)，并在补充了 10%胎牛血清(FBS)、IxAAS和各种浓度的(即50 μ g/ml, 100 μ g/ml和200 μ g/ml)攀援鱼藤提取物的 Dulbecco' s Modified Eagle培养基(DMEM)中培养。取出培养物的样品，用PBS清洗細胞并使其胰蛋白酶化(80ml/孔)。使用含有10%FBS和Ix AAS的DMEM(400ml/孔)来灭活胰蛋白酶，将此溶液转移到1.5mlEppendorf管中并以2000r.p.m.在微量离心机中离心anin。 去除了上清液之后，在56° C下用蛋白酶K(50mg/ml在IOOmM K2HP04pH 8. 0中；400ml/管) 过夜消化細胞。在90° C下，将蛋白酶K灭活lOmin。将所制备的样品存储在-20° C，直至根据生产商的说明用于硫酸化GAG的定量(用Blyscan测定进行)和DNA測量(用PicoGreens 定量分析试剂)。结果将在成纤维细胞样品中的GAG定量结果与对照样品(其中培养基不含攀援鱼藤提取物)进行了比较，并表示为对照样品的百分比，如图1中所示。结果表明攀援鱼藤提取物刺激成纤维細胞中GAG的合成。如图1中所示，随着提取物的浓度增加，成纤维細胞所合成的GAG的量稳定地増加。实施例6 示例性组合物表1中提供了用于向皮肤局部应用的包含攀援鱼藤提取物的化妆品组合物。表 权利要求
1.向皮肤提供抗老化益处的方法，所述方法包括向特征在于一种或多种皮肤老化迹象的皮肤区域应用化妆品上可接受的媒介中的局部组合物，其包含攀援鱼藤的提取物，所述提取物的含量有效向皮肤提供抗老化益处。
2.权利要求1的方法，其中所述提取物所存在的量足以增加LOXLl的表达，抑制钙神经素活性或刺激糖胺聚糖合成。
3.权利要求1的方法，其中所述提取物所存在的量为0.0001重量％至90重量％，基于组合物的总重量。
4.权利要求3的方法，其中所述提取物所存在的量为0.001重量％至25重量％，基于组合物的总重量。
5.权利要求4的方法，其中所述提取物所存在的量为0.01重量％至10重量％，基于组合物的总重量。
6.根据权利要求1的方法，其中所述一种或多种皮肤老化的迹象包括皱纹和/或细纹。
7.根据权利要求5的方法，其中所述一种或多种皮肤老化的迹象包括皮肤松弛或萎缩。
8.根据权利要求1的方法，其中所述一种或多种皮肤老化的迹象包括皮肤变色。
9.根据权利要求1的方法，其中所述一种或多种皮肤老化的迹象包括丧失皮肤弹性。
10.预防，治疗或减轻皮肤中的皱纹或细纹的方法，所述方法包括向所述皱纹或细纹局部应用包含攀援鱼藤的提取物和化妆品上可接受的媒介的组合物。
11.用于向皮肤提供抗老化益处的局部组合物，其包含 含量有效向皮肤提供抗老化益处的攀援鱼藤提取物；和化妆品上可接受的媒介；所述局部组合物是以洗液，霜剂，软膏，凝胶或棒的形式。
12.权利要求11的组合物，其中所述提取物所存在的量足以增加LOXLl的表达，抑制钙神经素活性，或刺激糖胺聚糖合成。
13.权利要求11的组合物，其中所述提取物所存在的量为0.0001重量％至90重量％， 基于组合物的总重量。
14.权利要求13的组合物，其中述提取物所存在的量为0.001重量％至25重量％，基于组合物的总重量。
15.权利要求14的组合物，其中所述提取物所存在的量为0.01重量％至10重量％，基于组合物的总重量。
16.权利要求11的组合物，其中所述提取物与至少一种其它皮肤活性成分相组合。
17.权利要求11的组合物，其中所述提取物与至少一种其它植物成分相组合。
18.权利要求17的组合物，其中所述其它植物成分包括来自紫铆的提取物。
全文摘要
提供了用于治疗降低的皮肤弹性的症状的局部组合物和使用方法，其包含攀援鱼藤植物的提取物。这些组合物在皮肤细胞中有效刺激LOXL-1活性，抑制钙神经素活性，并刺激糖胺聚糖的合成，并且可因此减少与年龄相关的皮肤损伤并改善细纹，皱纹，皮肤松弛和皮肤老化和/或皮肤损伤的其它症状的外观。
文档编号A61K8/97GK102596171SQ201080050791
公开日2012年7月18日 申请日期2010年10月14日 优先权日2009年12月4日
发明者D·S·普特彻林特瑟夫, 罗小纯 申请人:雅芳产品公司