专利名称：一种栽培菊苣提取物用于肝保护或治疗剂的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种栽培菊苣提取物用于肝保护或治疗剂的用途。
背景技术：
栽培菊苣(Cichorium endivia L.)是菊科菊苣属植物，又称苦苣，或苦菊。其同属植物菊苣和腺毛菊苣作为中药材被列入我国药典，它们具有清肝利胆的功效，可用于湿热黄疸等症状的治疗。现代药理学研究发现它们具有护肝的作用(Ahmed B， et al. Antihepatotoxic activityof seeds of Cichorium intybus. Journal of Ethnopharmacology, 2003,87 (23) :237-240和艾尼瓦尔 塔利甫，等.维药菊苣对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用.中药药理与临床，2006，22 (5) :34-35)。栽培菊苣含有许多与其同属植物菊苣和腺毛菊苣相类似的活性成分，并具有很好的抗氧化活性，因此推断栽培菊苣也可应用于肝保护或治疗的用途。
发明内容
公开号CN 101869348A已经公开了栽培菊苣提取物(KJ-I)提取方法及其在抗氧化领域的应用。本发明人对其生物活性进行进一步的研究，发现KJ-I可用于肝保护或治疗，并由此完成本发明。本发明的目的是提供肝保护或治疗剂，本发明是通过以下技术方案来实现的(I)将栽培菊苣于阴凉处晾干，粉碎后，加入浓度为20 100%的乙醇溶液进行提取，提取比例I : 5 I : 30，提取I 4h，重复浸提4次，过滤。(2)提取液浓缩后，混悬于30 95%乙醇溶液中，用石油醚萃取I 6次(石油醚与混悬液的比例是I : I I : 10)。(3)将石油醚萃取后的水层挥干至无醇味，加水混悬，用乙酸乙酯萃取I 4次 (乙酸乙酯与混悬液的比例是I : I I : 10)。(4)乙酸乙酯萃取后的水层过大孔吸附树脂，用水和20 95%乙醇洗脱，其中乙
醇层经浓缩，真空干燥得到抗氧化活性物质。本发明栽培菊苣提取物能有效抑制叔丁基过氧化氢(t-BHP)、过氧化氢(H2O2)和 2，2’ -偶氮-双- (2-脒基丙烷)氯化二氢(AAPH)对人肝癌细胞系H印G2细胞的损伤，同时，KJ-I安全无毒，适合作为肝保护或治疗剂的使用。
具体实施例方式I栽培菊苣提取物对t-BHP、H2O2和AAPH诱导的H印G2细胞损伤的保护作用采用含10%小牛血清的DMEM培养基培养HepG2细胞，每2天换液I次，6天传代 I次。取对数生长期的H印G2细胞，用0. 25%的胰酶消化液消化细胞后，用含血清的培养基将细胞悬液的浓度调至IX IO5个/ml，接种于96孔板内，每孔IOOul。每组4个复孔，置于 37°C,5% CO2培养箱中培养。培养24h后换液，每孔加入液体的总体积为100 μ I。其中，空白对照组加人无血清DMEM培养液；模型组加入含t-BHP (终浓度为O. ImmoI/L) ,H2O2 (终浓度为lmmol/L)或AAPH(终浓度为lOmmol/L)的无血清培养基；模型加药组为在加入相应浓度的t-BHP、H2O2和AAPH后，再添加不同浓度的KJ-I。各组均置于37' C,5% CO2培养箱中培养。！fepG2细胞处理4h后加入MTT (终浓度为5mg/ml)，继续培养4h，随后弃上清加入 200 μ I DMSO,吹打均匀，在酶标仪于波长545nm处测定OD值。细胞的存活率=试验组OD 值/空白对照组OD值X 100% (试验组即除空白对照组以外的其他各组)。结果栽培菊苣提取物有效抑制t-BHP、H202和AAPH诱导的H印G2细胞损伤，具有很好的肝保护作用。具体结果见表I表I.栽培菊苣提取物对t-BPH、H2O2和AAPH诱导的HepG2细胞毒性的保护作用
权利要求
1.一种栽培菊苣提取物用于肝保护或治疗剂的用途，其特征在于其提取方法的步骤如下(1)粉碎干燥的栽培菊苣于，加入20 100%的乙醇溶液浸泡，提取比例I: 5 I 30，提取I 4h，重复浸提4次，过滤。(2)提取液浓缩后，混悬于30 95%乙醇溶液中，用石油醚萃取I 6次(石油醚与混悬液的比例是I : I I : 10)。(3)将石油醚萃取后的水层挥干至无醇味，加水混悬，用乙酸乙酯萃取I 4次(乙酸乙酯与混悬液的比例是I : I I : 10)。(4)乙酸乙酯萃取后的水层过大孔吸附树脂，用水和20 95%乙醇洗脱，其中乙醇层经浓缩，真空干燥。
2.如权利要求I所述的苦菊提取物，其用途为肝损伤的保护与治疗。
全文摘要
本发明涉及一种栽培菊苣提取物用于肝保护或治疗剂的用途。该栽培菊苣提取物的制备方法是采用乙醇提取、石油醚和乙酸乙酯萃取纯化、大孔吸附树脂洗脱、浓缩干燥而成。栽培菊苣提取物能有效抑制叔丁基过氧化氢(t-BHP)、过氧化氢(H2O2)和2，2’-偶氮-双-(2-脒基丙烷)氯化二氢(AAPH)对人肝癌细胞系HepG2细胞的损伤。同时，ICR小鼠灌胃栽培菊苣提取物的最大耐受量MTD＞5000g/kg，可认为栽培菊苣安全无毒。
文档编号A61K36/28GK102600223SQ201110026208
公开日2012年7月25日 申请日期2011年1月25日 优先权日2011年1月25日
发明者王爱平, 王英明, 秦海林, 陈超杰, 靳洪涛, 魏金锋 申请人:北京协和建昊医药技术开发有限责任公司, 王爱平, 秦海林