专利名称：遍地金有效部位的抗抑郁作用及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及中草药技术领域，具体地说是涉及到中药遍地金有效部位的提取分离，更具体地说，涉及到遍地金有效部位的抗抑郁作用及应用。
背景技术：
抑郁症是一种最普遍的精神疾病，在西方工业发达国家终身抑郁症的发病率在 6% 8%之间。随着社会经济的发展和竞争压力的加剧、抑郁症状的发生率和抑郁症患病率将会越来越高，特别在城市人群中有明显上升。中国的抗抑郁药物市场的总体规模还相当小，并且占医药市场总额的比例很低。目前，中国的抑郁症发病率为4. 6 %，和世界水平相当，考虑到精神类疾病呈上升趋国即将进入老龄化社会，抗抑郁药物市场的潜力会相当大。抗抑郁药市场巨大，而抗抑郁中药制剂并不多。目前研究的较深入，抗抑郁效果较好的中药要数藤黄科金丝桃属植物，但作为制剂上市方面，国外仅有为数不多的贯叶连翘类制剂上市，国内基本尚无此属植物药的成品制剂上市。遍地金(Hypericum wightianum)是藤黄科金丝桃属植物，又名对叶草、对月草 (四川、云南)、蚂蚁草，全草入药，具有重要的药用价值。其主要成分有苯并二蒽类、黄酮及间苯三酚类等，遍地金在我国西南地区贮量较大，遍地金具有与贯叶连翘相似的化学成分， 含有金丝桃素及类似物质，有抗抑郁作用。
发明内容
本发明的目的之一是提供遍地金的有效部位，目的之二是提供该有效部位的方法，目的之三是提供该有效部位的作用及用途。通过对遍地金的脱脂，然后用含醇量为0-80%的水与甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇配成的水醇液提取，浓缩液用树脂柱层析分离，对各分离部位进行抗抑郁药效学筛选，发现了抗抑郁效果较好的一分离组分。在具体的实施例中发现该组分可以显著缩短悬尾实验中小鼠的不动时间及强迫游泳实验中小鼠的不动时间，可以明显抑制利血平所致小鼠体温降低，显著增加小鼠获得性无助实验中的逃避次数，这些充分显示，该组分的抗抑郁效果较好。本发明发现的遍地金经一定的提取分离方法制备的有效组分，具有明显的抗抑郁作用，可以用于制备抗抑郁制剂，或用于研究该组分内的具体化合物，开发抗抑郁单体化合物制剂。
具体实施例方式(一 )遍地金有效部位的制备方法(1)将遍地金干燥药材粉碎，按常规方法脱脂，用脱脂后的药材用含醇量为 0-80%的水与甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇配成的水醇液提取，将浸膏中加入2-5倍量的乙醇进行沉淀。
(2)滤除浸膏中的醇沉淀物后，将滤液浓缩成浓缩液。(3)浓缩液用树脂柱层析分离，先用水冲洗掉杂质，再用含醇量10-95%的水醇液梯度洗脱，合并洗脱液，浓缩，减压干燥得有效部位。( 二)通过小鼠悬尾实验、小鼠强迫游泳实验、利血平所致体温下降实验、获得性无助实验，证实遍地金的该分离部位具有明显的抗抑郁作用，可以采用本领域公知的方法制成各种剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂等，用于抗抑郁症的治疗，或者可以用于研究该组分内的具体化合物，开发抗抑郁单体化合物制剂。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。下面描述的实施例仅用于更好的阐述本发明，而不是用来限制本发明的范围。实施例1 遍地金分离组分的制备将遍地金干燥药材2kg粉碎，用6倍量石油醚脱脂，用6倍量的80%乙醇回流提取2h，回流温度88-90°C，提取3次，过滤，合并提取液。减压回收溶剂，得总提物浸膏，将浸膏中加入3倍量的乙醇，滤除浸膏中的醇沉淀物后，将滤液浓缩成浓缩液，浓缩液用D-101 型大孔树脂进行分离，用0-95 %的乙醇梯度洗脱，各梯度为水、30 %乙醇、50 %乙醇、70 %乙醇、95%乙醇，去除水部分，将其它部分收集合并洗脱液减压回收溶剂，残留物真空干燥，得量41. 5g，即为该分离部分。实施例2 遍地金分离组分小鼠悬尾实验(1)试验动物KM小鼠，雄性，体重(20士2)g。(2)阳性对照药盐酸氟西汀胶囊。(3)雄性昆明小鼠18_22g，140只，随机分为14组，每组10只动物，分别为正常对照组、氟西汀组及受试药大、中、小剂量组。各组动物灌胃给药，正常对照组给予等量生理盐水灌胃。各组小鼠每天灌胃1次，连续7天，饮食饮水不限。于末次给药后lh，将小鼠距尾尖2cm处粘水平木板上(距地面高60cm)，两面用板挡住小鼠视线，适应Imin后记录5min 内累积不动时间。结果用t检验，两两对比。结果显示，与常水组比较，水提取物大剂量组有极显著性差异(P <0.01)，水提取物中、小剂量组、正丁醇提取物大、中、小剂量组、合成剂I大、中剂量组有显著性差异(P < 0. 05)。与阳性药组比较，水提取物大剂量组有显著性差异(P < 0. 01)，各给药组间无显著性差异，各给药组各剂量之间比较无显著性差异。提示A (水层)、B (正丁醇层)各个剂量，可以显著减少小鼠悬尾不动时间，有较好的改善小鼠行为绝望抑郁状态，且作用优于阳性药。实施例3、遍地金分离组分的强迫游泳实验(1)试验动物=KM小鼠，雄性，体重(20士2)g。(2)阳性对照药盐酸氟西汀胶囊。(3)实验方法雄性昆明小鼠，2346g，140只，随机分为14组，每组10只动物，分别为正常对照组、氟西汀组及受试药大、中、小剂量组。各组动物灌胃给药，正常对照组给予等量生理盐水灌胃。各组小鼠每天灌胃1次，连续7天，末次给药前禁食不禁水16h。末次灌胃后lh，将小鼠放入玻璃水缸中游泳(水深10cm，水温23士2°C )，适应^iin后记录細in内游泳累积不动的时间。结果用t检验，两两对比。结果显示与常水组比较，水提取物大、中剂量组、正丁醇提取物大、中剂量组、乙酸乙酯提取物大、小剂量组有极显著性意义
4(P < 0. 01)，合成剂I大、中剂量组有显著性意义(P < 0. 05)。与阳性药组比较，各给药组无显著性差异，各给药组各剂量之间比较无显著性差
已提示A(水层)、B(正丁醇层)大、中剂量，C(乙酸乙酯)大、小剂量，可以显著减少小鼠游泳不动时间，有较好的改善小鼠行为绝望抑郁状态，且作用优于阳性药。实施例4 遍地金分离组分抑制利血平所致体温下降实验(1)试验动物KM小鼠，雄性，体重(20士2)g。(2)阳性对照药盐酸氟西汀胶囊。利血平注射液上海复旦复华药业有限公司，批号040901。(3)实验方法雄性昆明小鼠140只，随机分为14组，每组10只动物，分别为正常对照组、氟西汀组及受试药大、中、小剂量组。各组动物灌胃给药，正常对照组给予等量生理盐水灌胃。各组小鼠每天灌胃1次，连续7天，饮食饮水不限。于末次灌胃给药前，用电子体温计测定小鼠肛温作为正常体温值，测体温后即刻腹腔注射利血平注射液5mg · kg-1，计时Ih灌胃给药，给药Ih后再次测定各组小鼠肛温，记录给药前后体温差值。结果用t检验， 两两对比。结果显示，上述各剂量及阳性药与常水组比较，对利血平所致小鼠体温降低无显著影响。利血平引起体温降低主要是干扰了去甲肾上腺素(NA)的功能，提示各提取物及化合物抗抑郁作用可能与体内去甲肾上腺素表达无关。实施例5 遍地金分离组分抑制阿朴吗啡所致体温下降实验(1)试验动物KM小鼠，雄性，体重(20士2)g。(2)阳性对照药盐酸氟西汀胶囊。实验方法昆明小鼠140只，雌雄各半，随机分为14组，每组10只动物，分别为正常对照组、氟西汀组及受试药大、中、小剂量组。各组动物灌胃给药，正常对照组给予等量生理盐水灌胃。各组每天灌胃1次，连续7天，饮食饮水不限。于末次灌胃给药后30min测定各组小鼠肛温1次，药后Ih皮下注射阿朴吗啡16mg · kg-1，于皮下注射阿朴吗啡后30min 用电子体温计测定各组小鼠肛温1次，记录给药前后体温差值。结果用t检验，两两对比。结果显示，与常水组比较，阳性药能显著升高阿扑吗啡所致小鼠体温降低(P < 0. 01)，各筛选药物剂量组对体温降低均无显著影响；与阳性药组比较，A、B各个剂量及C 中剂量差异有显著性意义。阿朴吗啡为多巴胺(DA)受体激动剂，能直接刺激突触后的多巴胺受体，提示各提取物及化合物抗抑郁作用可能与体内多巴胺受体的功能无关。实施例6 遍地金分离组分的获得性无助实验(1)试验动物=Wistar大鼠，雄性，体重QOO士20) g。(2)阳性对照药盐酸氟西汀胶囊。(3)试验器材大鼠穿梭箱(自制)有两室，每室30CmX20CmX30Cm，中间通路 7cmX7cm，可以人为开闭，箱底为不锈钢栅条，条间距1cm，两室栅条可以分别通电，其中一室与刺激器接通时，另一室为安全室。电刺激器(自制)；交流电变压器；万用电表；秒表；电铃。(4)实验方法=Wista雄性大鼠208只，随机分为14组，每组8只动物，分别为正常对照组、氟西汀组及受试药大、中、小剂量组。遍地金提取物灌胃小剂量组、中剂量组、 大剂量组、盐酸氟西汀胶囊组给药，正常对照组给予等量生理盐水灌胃。第1天，进行不可逃避的电休克，将穿梭箱的中间通路关闭，将大鼠放入箱内，通过底部的金属栅条接受 0. 8mAX 15s的足部电流刺激，每分钟1次，15s/次，共进行60次，总刺激时间为15min。第 2天各组大鼠开始灌胃给药，连续7天，进食进水不限。末次给药后Mh，进行条件回避试验，将动物放入穿梭箱内适应^，然后进行试验，条件刺激为铃声，非条件刺激为足部电流刺激(0. 8mA)，在铃声3s后开始刺激，当动物逃到安全室停止铃声和刺激，如未能逃避则刺激达30s时停止，每分钟1次，共进行30次，刺激间隔为27s。如果在铃声开始的3s内逃到安全室即回避成功，记录30次刺激内成功回避的次数。结果用t检验，两两对比。结果显示，A(水层)大、中、小剂量组大鼠成功逃避次数与常水组比较显著增加，均有显著性意义 (分别？<0.011<0.051<0.01) ；B(正丁醇层)中、小剂量组大鼠成功逃避次数与常水组比较显著增加，均有显著性意义(均P <0.05) ；C(乙酸乙酯)中、小剂量组大鼠成功逃避次数与常水组比较显著增加，均有显著性意义(均P <0.05)；各剂量组与阳性药组比较，差异无显著性意义；各给药剂量组之间无显著性差异。 试验提示，A(水层)B(正丁醇层)、C(乙酸乙酯)中、小剂量可以显著增加大鼠成功逃避次数，有较好的改善大鼠学习无助抑郁状态，且作用优于阳性药。
权利要求
1.一种中药遍地金的有效部位的提取方法，其特征具体描述如下述步骤(1)将药材粉碎后，按常规方法脱脂。(2)脱脂后的药材用含醇量为(Γ80%的水与甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇配成的水醇液提取。(3)提取液经过滤常压、减压或薄膜蒸发浓缩成浸膏。(4)将浸膏中加入2-5倍量的乙醇进行沉淀。(5)滤除浸膏中的醇沉淀物后，将滤液浓缩成浓缩液。(6)浓缩液用树脂柱层析分离，先用水冲洗掉杂质，再用含醇量10-95%的水醇液梯度洗脱，合并洗脱液，浓缩，减压干燥得有效部位。
2.根据权利要求1所述的常规方法脱脂，脱脂溶剂采用石油醚、乙醚、汽油或其混合液。
3.根据权利要求1的遍地金的有效部位，用于抗抑郁症的治疗。
4.根据权利要求1的遍地金的有效部位，用于制备抗抑郁药物原料和制剂中的应用。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，用于分离单体化合物，研究具体化合物的抗抑郁效果和新药开发。
6.根据权利要求3的遍地金的有效部位在制备抗抑郁药物中的应用，其特征在于，所述的遍地金的有效部位的原料是遍地金全草、全草的地上部分或其它部位中的一种。
全文摘要
通过对遍地金的脱脂，然后用含醇量为0-80％的水与甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇配成的水醇液提取，浓缩液用树脂柱层析分离，对各分离部位进行抗抑郁药效学筛选，发现了抗抑郁效果较好的一分离组分。在具体的实施例中发现该组分可以显著缩短悬尾实验中小鼠的不动时间及强迫游泳实验中小鼠的不动时间，可以明显抑制利血平所致小鼠体温降低，显著增加小鼠获得性无助实验中的逃避次数。遍地金经一定的提取分离方法制备的有效组分，具有明显的抗抑郁作用，可以用于制备抗抑郁制剂，或用于研究该组分内的具体化合物，开发抗抑郁单体化合物制剂。
文档编号A61K36/185GK102204941SQ20111013007
公开日2011年10月5日 申请日期2011年5月19日 优先权日2011年5月19日
发明者刘媛, 夏超, 孙兴华, 张桂森, 石金城, 祁超 申请人:南京工业大学, 江苏恩华药业股份有限公司, 江苏省药物研究所有限公司