专利名称：一种防治甲流的中药组合物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种防治甲流的中药组合物及其应用。
背景技术：
流行性感冒，简称流感，是由流行性感冒病毒引起的一种人兽共患的急性呼吸道传染病。主要通过空气飞沫经呼吸道传播，具有高度的传染性，发病时出现急起高热、恶寒、 全身酸痛、乏力和呼吸道症状。其以病程短、传染性强、发病率高为特点，是对人类健康威胁最大和人类至今尚不能有效控制的世界性传染病之一。对流感病毒的预防和治疗主要有疫苗和化学合成药。由于流感病毒的抗原变异能力极强且相当频繁，使得疫苗效果不稳定，对易感人群的保护率不高；况且疫苗只对已知的流感病毒亚型有预防作用，对由于抗原性漂移或转换所产生的新型流感病毒无效。现有抗病毒药离子通道阻断剂和神经氨酸酶抑制剂正式应用于临床，但耐药性及严重毒副作用的产生限制了其在临床上的广泛应用；流感病毒吸附抑制剂、细胞-病毒膜融合抑制剂和反义核苷酸等还处于实验室研究阶段，至今尚缺乏理想的抗病毒药物。因此开发安全有效的抗流感病毒新药是当前医学界面临的重要课题。
发明内容
本发明目的即是为了提供一种疗效肯定、性效稳定，质优价廉、应用广泛的防治甲流的中药组合物及其应用。本发明采用的技术方案是一种防治甲流的中药组合物，由质量配比如下的组分组成荆芥1 5份；防风 1 5份；板蓝根1 5份；大青叶1 5份；前胡1 5份；杏仁1 5份；白芷1 5份； 陈皮1 5份；生甘草1 5份。优选的，所述组合物质量配比如下荆芥5份；防风5份；板蓝根5份；大青叶5份； 前胡5份；杏仁5份；白芷5份；陈皮5份；生甘草5份。方中荆芥和防风辛散气香，均长于发表散风，且微温不烈，药性和缓，表寒表热皆可用之，《本草纲目》载荆芥“其功长于祛风邪，散瘀血，破结气，消疮毒”；《本草汇言》“用防风辛温轻散，润泽不燥，能发邪从毛窍出”。两者相须为用，其效益彰，《本草求真》指出“用
以防风之必兼用荆芥者，以其能入肌肤宣散故耳-------糜不藉其轻扬，以为宣泄之具”。更
有白芷芳香浓烈，味辛力厚，善通肌肤、透毛窍，祛风散寒，为解表通腠之良药，《本草汇言》 “白芷，上行头目，下抵肠胃，中达肢体，遍通肌肤以至毛窍，而利泄邪气”。上述三药相伍为用，解表散邪之力尤著。板蓝根、大青叶苦寒，既清肺胃心经实火，又善解瘟疫时毒，并能凉血消斑，《本草便读》“板蓝根功用性味与靛青叶同，能入肝胃血分，不过清热、解毒、辟疫、杀虫四者而已。 但叶主散，根主降，此又同中之异耳”。生甘草得中和之性，能调和药性，又可缓和脾胃，也有清热解毒之功，《药品化义》“甘草，生用凉而泻火，主散表邪，消痈肿，利咽痛，解百药毒，除胃积热”。五药合用，使疫毒得清、里热得解，以截断疾病传变之路，防止外邪化热造成种种变证。前胡苦辛微寒，能开宣肺气、降气化痰，《本草纲目》“前胡乃手足太阴、阳明之药，
其功长于下气-------气下则火降，痰亦降矣”。杏仁主入肺经，味苦能降，且兼疏利开通之
性，降肺气之中兼有宣肺之功而达止咳平喘之能，《长沙药解》“杏仁疏利开通，破壅降逆， 善于开痹而止喘，消肿而润燥，调理气分之郁，无以易此”。陈皮辛行苦泄而能宣肺止咳，《本草求真》“陈皮有散痰、开痰理气之功”。上述九味药物联合应用，清热解毒，宣肺解表，则邪去正安，诸症尽除。从抗病毒药物的传统功效分布来看，具有直接抗病毒感染活性的单味中草药以清热解毒类药物居多，现代药理和临床实践证明，大青叶、板蓝根、鱼腥草、金银花、连翘、野菊花、黄芩、黄连、柴胡、黄柏、甘草等几十种单味中药具有显著的抗流感病毒作用，并从这些中药当中已经提取分离得到抗流感病毒的活性成分。板蓝根长期以来一直用于预防和治疗流感、流脑、肝炎、腮腺炎、丹毒等病证，尤其是在预防和治疗流感方面效果显著。试管和鸡胚实验证明，50%板蓝根注射液对流感病毒 PR8株及京科68-1株有明显的抑制作用，100%板蓝根煎剂有延缓京科68-1株和腺病毒-T 型所致细胞病变作用。以鸡胚法考察15个种质的板蓝根对甲型流感病毒的抑制作用，血凝滴度实验显示，板蓝根的水提醇沉液对病毒的直接作用、治疗作用、预防作用有效率分别为 100%、60%、70%。在对板蓝根抗病毒有效部位的筛选实验中，表明板蓝根抗流感病毒有效部位为阳离子树脂吸附部分，并进一步证实有效部位为结合氨基酸。板蓝根生物碱成分中的4 (邪)-喹唑酮经药理实验证明具有抑制流感病毒、柯萨奇病毒的活性。在对板蓝凝集素粗提液抗流感病毒的研究中发现，板蓝根凝集素对流感病毒具有显著的直接杀灭作用和预防作用及良好的治疗作用，而且抑制流感病毒的效果与板蓝根凝集素血凝活性的高低有关。大青叶和板蓝根一样都是优良的广谱抗病毒中草药，对多种病毒有直接抑制作用，试验证实大青叶在抗甲型流感病毒方面疗效显著，与大青叶抗病毒作用相关的化学成分主要是4(3H)喹唑酮。目前对其抗病毒作用机制尚无定论，一般认为大青叶是通过多种有效成分，多环节、多途径地发挥协同作用而表现出抗病毒功效。早在1979年Pompei等就发现甘草酸有抗病毒活性，能抑制很多不相关的DNA、RNA 病毒的生长，并且不影响正常细胞的活性。对甘草酸影响感染A2型流感病毒小鼠存活率的研究表明实验组小鼠存活都超过了 21天，而对照组小鼠没有存活超过21天的(平均存活时间10. 5天)，在肺组织实变程度及被感染小鼠肺组织病毒值方面，实验组也明显低于对照组。现代药理试验证实，荆芥、防风、白芷和陈皮等药物亦有一定的抗病毒活性和抗病原微生物作用，能够保护细胞不受病毒侵袭。本发明还涉及所述中药组合物在制备防治甲流的药物中的应用。所述药物可制成下列之一的剂型(1)颗粒剂、(2)片剂、(3) 口服液、(4)胶囊剂， 可由所述中药组合物经提取后添加合适的辅料制成。优选的，所述药物为颗粒剂，制备所述颗粒剂的中药原料质量组成为荆芥1 5 份；防风1 5份；板蓝根1 5份；大青叶1 5份；前胡1 5份；杏仁1 5份；白芷1 5份；陈皮1 5份；生甘草1 5份；所述颗粒剂由如下方法制得将配方量的中药原料加水浸没浸渍0. 5 1小时，煎煮2次，每次1 2小时，合并两次煎液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1. 08 1. 12，冷却后加乙醇至乙醇体积含量为60%，充分搅拌，冷藏静置12 小时以上，取醇沉上清液，过滤，滤液减压回收乙醇，继续浓缩至相对密度为1. ；34 1. 40清膏，取清膏加入质量为清膏质量1. 5 2. 0倍的淀粉，搅勻、制粒、干燥、整粒，混勻，即得所述颗粒剂。本发明依据祖国中医传统理论对时疫流行感冒的致病机理和治疗原则的论述和理解，结合现代医学成果，精选具有清热解毒，宣肺解表功效的纯中草药，经科学炮制，制成药物制剂，用于抑制和消除流感病毒。本发明所述的中药组合物的有益效果主要体现在本发明组合物处方精简、配伍合理，不仅疗效肯定，弥补了中、西药治疗甲流的不足，而且稳定性高、使用方便，制成颗粒冲剂体积小，重量轻，解决了临床中汤剂的制备麻烦、携带不便、不易保存、服用困难等问题，并且药物含量成分明确，避免了中药汤剂组分不明的缺点，保障了用药安全，实为一种有效、应用前景良好的新型药物。
图1为含药血清体外抑制甲型流感病毒作用研究；其中a为正常MDCK细胞，b为病毒对照孔CPE，c为空白血清对照孔CPE，d为防感颗粒低剂量孔CPE，e为防感颗粒中剂量孔CPE，f为防感颗粒高剂量孔CPE，g为达菲血清对照孔CPE。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此实施例1 处方
荆芥
防风83
板蓝根
大青叶幻3g
前胡83
杏仁
白芷83
陈皮83
生甘草
工艺将以上诸药加水过药面浸渍0. 5小时，煎煮二次，第一次1. 5小时，第二次1小时， 合并两次煎液，过滤，滤液经单效外循环浓缩器浓缩至相对密度为1.08(60°C )，冷却后加乙醇至含醇量(ν/ν)达60%，充分搅拌，冷藏静置12小时；次日取醇沉上清液，过滤，滤液减压回收乙醇，继续浓缩至相对密度约为1. 38 (600C )的清膏；按质量为清膏质量1. 8倍加入淀粉搅勻、制粒、干燥(80°C以下)、整粒，混勻制成600g (即每g含处方药材1. 66g)，包装即得颗粒剂，即防感颗粒。实施例2 含药血清体外抑制甲型流感病毒作用研究一、材料与方法(一 )实验材料1.各组大鼠血清取清洁级SD大鼠36只，雌雄各半，体重200士20g，按体重分层随机分为正常(空白)对照组、防感颗粒低剂量组、中剂量组、高剂量组、达菲对照组，每组6只，雌雄分笼喂养。按体型系数换算法( 进行实验动物与人用药量的换算，防感颗粒(按实施例1方法制得)低剂量组给药剂量为10. 21g/kg，相当于临床等效剂量；中剂量组给药量为低剂量组的2倍，即20. 42g/kg ；高剂量组为低剂量组的5倍，即51. 05g/kg ；达菲对照组给药剂量0. 02g/kg,分别灌胃给药，正常对照组以生理盐水灌胃，每天2次，每次 lml/100g,连续给药共3天，末次给药后Ih腹主动脉无菌采血。大鼠以3 %戊巴比妥腹腔麻醉后，用75%酒精腹部浸泡消毒5分钟，沿腹正中线皮肤剪开腹腔，使腹主动脉暴露，用无菌注射器吸取血液，血样置于无菌离心管中，静置2h以上，待血块收缩良好后，3000r/min 15min在超净工作台上无菌分离血清，经56°C、30min灭活处理，_20°C冰箱冻存备用。2.单层MDCK细胞制备MDCK细胞由浙江省疾病预防与控制中心病毒所提供。 RPMI1640生长液含10%胎牛血清、100Iu/ml双抗；RPMI1640维持液不含胎牛血清、其它同生长液。3.病毒甲1型流感病毒株A/PR/8/34 (HlNl)，由浙江省疾病预防与控制中心病毒所提供，在9日龄鸡胚中增殖复壮，收集尿囊液，-70°C超低温冰箱冻存备用。4.主要试剂
RPMI1640批号 8108008美国GIBCO公司；
胎牛血清批号080412杭州四季青生物工程材料有限公司；
双抗批号274564美国GIBCO公司；
0. 25%胰酶-0. 02% EDTA 批号 08061201杭州吉诺生物医药技术有限公司
PBS (PH7. 2 士 0.1)批号 08070302GIB00杭州吉诺生物医药技术有限公司；
MTT批号13對劭7Amersco上海生工生物工程有限公司；
DMSO批号0记41；345Amersco杭州荧光泰生物技术有限公司
乳酸脱氢酶(LDH-L)试剂盒批号11342德国prodia diagnostics公司；
1.2%豚鼠红细胞悬液自备°
5.主要设备
倒置相差显微镜(Leica DC-300) Made in Germany ；
超低温冰箱(Forma 8525) Made in USA ；
生物安全柜(FormaClassII)CO2 恒温培养箱(Forma ClasslOO)25cm2 细胞培养瓶(Corning Flask)96孔细胞培养板(Becton)酶标仪(BioiTekELX808)微孔板震荡仪(MH-I)
Made in USA ； Made in USA ； Made in USA ； Made in USA ； Made in USA ；
海门市其林贝尔仪器制造有限公司；AER0SET 全自动生化分析仪系统(Abbott) Made in USA ；( 二 )实验方法1.甲型流感病毒半数组织细胞感染量(TCID50)测定以不含胎牛血清的RPMI1640维持液将病毒10倍递增稀释为10—1、10_2、10_3、10_4、 IO-5UO-6UO-7UO-8 8个不同稀释度，分别加至长满单层MDCK细胞的96孔细胞培养板上， 每个浓度病毒稀释液接种6孔，每孔lOOul，同时设正常细胞对照孔，37°C、5% CO2恒温培养箱中孵育2h，弃病毒液，用PBS洗板2次，然后各孔再加入IOOul维持液，每日倒置显微镜下观察细胞病变情况，连续3天，采用Reed-Muench法计算病毒的半数组织细胞感染量 (TCID50)。2.含药血清对甲型流感病毒增殖抑制作用(治疗给药方式，先感染病毒再给含药血清)预先用96孔细胞培养板将MDCK细胞培养成单层，每孔接种100TCID50甲1型流感病毒液100ul，于37°C、5% CO2培养箱中吸附池感染细胞，弃病毒液，用PBS洗板2次。 取已制备好的终浓度均为1 8的正常(空白)对照组、各剂量组防感颗粒、达菲对照组血清分别加入已经感染的细胞板中，每孔lOOul，每份血清平行测定2孔，同时设正常细胞和病毒对照孔，37°C,5% CO2恒温培养箱中孵育2h，弃血清，用PBS洗板2次，然后各孔再加入 IOOul维持液，每日到置显微镜下观察细胞病变效应(CPE)进展情况。当病毒对照孔出现 +++以上病变时(图1)，每孔加入MTT (终浓度0. 5mg/ml)20ul,37°C>5% CO2孵育4h，弃去上清液，每孔加入DMS0150ul并以微孔板震荡机振荡作用lOmin，待颗粒完全溶解后，酶标仪490nm测吸光度值(0D值)，空白孔调零，计算病毒抑制率。病毒抑制率<% =(各实验组平均OD值-病毒对照孔平均OD值)/ (正常细胞对照孔平均OD值-病毒对照孔平均OD值)χ100%3.含药血清对甲型流感病毒吸附细胞的影响(预防给药方式，先给含药血清后感染病毒)将已制备好的正常(空白)对照组、各剂量组防感颗粒、达菲对照组血清(终浓度均为1 8)加入已经长成单层细胞的培养板中，每份血清2孔，每孔lOOul，同时设正常细胞和病毒对照孔，恒温培养箱中孵育池，弃去血清，再接入100TCID50甲1型流感病毒液每孔lOOul，同2.法培养与检查。4.含药血清对甲型流感病毒的直接杀灭作用(含药血清与病毒同时作用)将正常(空白)对照组、各剂量组防感颗粒、达菲对照组血清(终浓度均为1 8) 分别与100TCID50甲1型流感病毒液等量混合，恒温培养箱中作用池，将混合液加至已长满单层MDCK细胞的培养板上，同2.法培养与检查。5.含药血清对甲型流感病毒感染MDCK细胞膜通透性的影响
另外取96孔细胞培养板将MDCK细胞培养成单层后，同上法将各组血清以上述3 种不同给药方式分别作用于细胞，当病毒对照孔出现+++以上病变时，从实验各孔取50ul 上清液到1. 5ml Eppendorf管中，在Eppendorf管中先加入含缓冲基质液的检测试剂1. Oml 37°C混合反应5min、再加入含辅酶I溶液的试剂0. 5ml混合延迟lmin，AER0SET全自动生化分析仪系统检测乳酸脱氢酶活性，于340nm处分别读取吸光度A值至2min，计算LDH值。 LDH (U/L) = ( Δ A/min 样品 _ Δ A/min 空白)/ ( Δ A/min 标准-Δ A/min 空白)X 标准液浓度。6.含药血清对甲型流感病毒血凝效价的影响从2. 5.实验各孔另取25ul上清液到96孔u型微量反应板中，在反应板中加入已配制好的1. 2%豚鼠红细胞悬液25ul，轻轻混勻后室温放置45min，观测血凝活性。各孔出现红细胞凝集程度以++++、+++、++、+、-表示，红细胞呈细砂粒状均勻铺于孔底者为++++， 即100%凝集；红细胞均勻铺于孔底，但边缘不整而稍向孔底集中者为+++，即75%凝集；红细胞于孔底形成一个环状，四周有小凝集块者为++，即50%凝集；红细胞于孔底形成圆团， 但边缘不够光滑，四周稍有凝集块者为+，即25%凝集；红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，将板倾斜片刻，就可见红细胞滑动象人的眼泪滴样者为_，即无凝集。血凝效价以++ 为终点，即以能够使50%红细胞凝集的病毒液的最高稀释度的倒数作为该病毒血凝素的血凝效价。7.统计学处理以SpSS13. 0软件进行统计分析，描述指标采用均数士标准差表示，血凝效价经数据转换为对数值后计算均数士标准差，多组样本均数间
的比较采用单因素方差分析F检验法，两两比较用q检验。二、结果(一 )甲型流感病毒半数组织细胞感染量(TCID50)测定病毒攻击MDCK细胞后Mh，10—1浓度孔即有2孔发生+的CPE，其余各孔未见CPE。 病变持续进展，到第3天时，ΙΟ"1浓度孔6孔均发生+++ ++++的CPE，10_2有5孔、10_33 孔、10_42孔、10_51孔、10_61孔发生细胞病变，10人ΙΟ"8及正常细胞对照孔没有细胞病变。根据细胞的病变情况，采用Reed-Muench法计算得出TCID50为10_3_47l00ul，含药血清药效实验中选用病毒攻击量为100TCID5(1/100ul。见表1。表1 甲型流感病毒对MDCK细胞CPE的影响
权利要求
1.一种防治甲流的中药组合物，由质量配比如下的组分组成荆芥1 5份；防风1 5份；前胡1 5份；板蓝根1 5份；大青叶1 5份；杏仁1 5份；白芷1 5份；陈皮1 5份；生甘草1 5份。
2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述组合物质量配比如下荆芥1份； 防风1份；前胡1份；板蓝根1份；大青叶1份；杏仁1份；白芷1份；陈皮1份；生甘草1 份。
3.如权利要求1所述中药组合物在制备防治甲流的药物中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述药物制成下列之一的剂型(1)颗粒剂、 ⑵片剂、(3) 口服液、(4)胶囊剂。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述药物为颗粒剂，制备所述颗粒剂的中药原料质量组成为荆芥1 5份；防风1 5份；前胡1 5份；板蓝根1 5份；大青叶 1 5份；杏仁1 5份；白芷1 5份；陈皮1 5份；生甘草1 5份；所述颗粒剂由如下方法制得将配方量的中药原料加水浸没浸渍0. 5 1小时，煎煮2次，每次1 2小时， 合并两次煎液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1. 08 1. 12，冷却后加乙醇至乙醇体积含量为60%，充分搅拌，冷藏静置12小时以上，取醇沉上清液，过滤，滤液减压回收乙醇，继续浓缩至相对密度为1. 34 1. 40清膏，取清膏加入质量为清膏质量1. 5 2. 0倍的淀粉，搅勻、 制粒、干燥、整粒，混勻，即得所述颗粒剂。
全文摘要
本发明涉及一种防治甲流的中药组合物，由质量配比如下的组分组成荆芥1～5份；防风1～5份；前胡1～5份；板蓝根1～5份；大青叶1～5份；杏仁1～5份；白芷1～5份；陈皮1～5份；生甘草1～5份。本发明所述的中药组合物的有益效果主要体现在本发明组合物处方精简、配伍合理，不仅疗效肯定，弥补了中、西药治疗甲流的不足，而且稳定性高、使用方便，制成颗粒冲剂体积小，重量轻，解决了临床中汤剂的制备麻烦、携带不便、不易保存、服用困难等问题，并且药物含量成分明确，避免了中药汤剂组分不明的缺点，保障了用药安全，实为一种有效的、应用前景良好的新型药物。
文档编号A61P31/16GK102198192SQ201110139259
公开日2011年9月28日 申请日期2011年5月26日 优先权日2011年5月26日
发明者宋康, 曹羽, 汪玉冠, 陈芳, 骆仙芳 申请人:浙江省中医院