专利名称：一种冻干免疫佐剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种冻干免疫佐剂的制备方法，特别是涉及一种聚肌胞冻干制剂的制备方法。
背景技术：
聚肌胞(PolyIC或PIC)是由人工合成的聚肌苷酸(PolyI)和聚胞苷酸(PolyC) 配对合成的双链核苷酸(RNA)，是一种高效干扰素诱生剂。目前酶法合成的核苷酸原料均为酵母提取物，含有大量的内毒素、残留DNA及菌体蛋白，这些物质都能够导致PIC产品在临床中产生发热等副作用。我公司进行了精制聚肌胞的纯化与合成工艺探索。精制聚肌胞是在原聚肌胞制备工艺的基础上通过三步层析技术进行精制，最大限度地去除内毒素、残留 DNA及残余宿主菌体蛋白等杂质，从而大大地提高了纯度和有效成分的含量，远远高于原聚肌胞注射液的纯度；该精制聚肌胞制备是在-40°C冷冻干燥的，低温可以最大限度地保持了有效成分及其活性。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种冻干免疫佐剂的制备方法，目的之二是提供一种保质期较长的新城疫冻干免疫佐剂。一种冻干免疫佐剂的制备方法，包括聚肌胞原液及冷冻干燥添加剂，所述冷冻干燥添加剂基本上由葡萄糖酸钙和甘露醇组成。为了更好地维持和保护原液生物的活性， 所述冷冻干燥添加剂中还含有抗坏血酸钠、精氨酸。所述冷冻干燥添加剂各组分的百分比为单硫酸卡那霉素500 5000单位/ml精氨酸0.5% 2.0%抗坏血酸钠 0.1% 0.3%甘露醇2.0% 8.0%一种冻干免疫佐剂的制备方法，包括以下步骤(1)聚肌胞原液制备取聚肌苷酸和聚胞苷酸纯化液，于40°C 60°C水浴中混合， 搅拌30min 120min，聚肌苷酸和聚胞苷酸纯化液加入比例为1 0. 5 1 1. 5 ；(2)将聚肌胞原液用0. 45 μ m滤芯过滤，用Millipore超滤系统300KD的膜包浓缩成浓度为0. 8mg/ml 4. Omg/ml，加入冷冻干燥添加剂混勻，无菌过滤，分装于西林瓶中，半加塞，其中所述冷冻干燥添加剂基本上由葡萄糖酸钙、甘露醇组成；(3)待西林瓶放入冷冻干燥器内，分别在4.8 5.2 °C、 0. 2 -0. 2°C、_5. 8 -6. 2°C各平衡 1 小时；(4)快速冻结，将制品温度降至-48 -52°C维持3. 5 2. 5小时；(5)真空干燥；(6)加热干燥，在制品温度达到25. 5 37. 5°C条件下持续3. 5 2. 5小时；
(7)全部加塞，压封铝盖。本发明由于采用了上述技术方案，因此具有以下优点1.在冻干制剂的减压一升温一干燥过程中，适宜的升温程序对维持生物制品的生物活性、制剂的外观形态是重要的。将升温干燥的终点控制在30°C并持续3小时，使制品中的残余水分以定量非共价键形式存在，以维持原液的形态、活性的稳定，减少成品冻干制剂在保存过程中的效价急速回落，并延长保存时间。2、本发明的冷冻干燥添加剂与聚肌胞原液具有极佳的生物相容性。甘露醇，既是一种很好的脱水剂，又是一种很好的冻干赋形剂；精氨酸是一种很好的生物保护物质；抗坏血酸钠是抗细胞膜氧化的维生素；单硫酸卡那霉素是一种稳定剂。3、液体冻结过程中，即液体降温一结冰一形成玻璃化晶态的过程中会发生从宏观到微观的适应性变形，以保持其生物活性。在冻干制剂生产的冻结过程中采用5°C、 0°c, -6°c各平衡1小时，有利于原液对温度的适应性变形，对维持冻干制剂的生物效价是必要的。4、本发明的冻干制剂中聚肌胞原液经过了过滤、浓缩处理，使杂质减少。5、本发明的冻干制剂，半成品最终通过过滤除菌，代替了传统的高压灭菌，使生产
工艺简单化。下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
具体实施例方式实施例1取聚肌苷酸和聚胞苷酸纯化液(1 0.5)，于40°C水浴中混合，搅拌45min，用 0. 45 μ m滤芯过滤，用Millipore超滤系统300KD的膜包浓缩成浓度为0. 8mg/ml的液体，加入单硫酸卡那霉素500单位/ml，精氨酸0.5%，抗坏血酸钠0.15%，甘露醇2.0%，混勻，无菌过滤，分装冷冻干燥。实施例2取聚肌苷酸和聚胞苷酸纯化液(1 1)，于50°C水浴中混合，搅拌60min，用 0. 45 μ m滤芯过滤，用Millipore超滤系统300KD的膜包浓缩成浓度为2. Omg/ml的液体，力口入单硫酸卡那霉素3000单位/ml，精氨酸1. O抗坏血酸钠0.2%，甘露醇3.8%，混勻，无菌过滤，分装冷冻干燥实施例3取聚肌苷酸和聚胞苷酸纯化液(1 1. 5)，于50°C水浴中混合，搅拌90mi η,用 0. 45 μ m滤芯过滤，用Millipore超滤系统300KD的膜包浓缩成浓度为4. Omg/ml的液体，加入单硫酸卡那霉素5000单位/ml，精氨酸1.0%，抗坏血酸钠0.3%，甘露醇6.0%，混勻，无菌过滤，分装冷冻干燥成品冻干制剂按《标准》所列方法检定，合格。
权利要求
1.一种冻干免疫佐剂的制备方法，其特征是包括聚肌胞原液制备及冷冻干燥添加齐U，其特征在于所述冷冻干燥添加剂基本上由葡萄糖酸钙和甘露醇组成。
2.一种冻干免疫佐剂的制备方法，根据权利要求1所述，其特征在于所述冷冻干燥添加剂中还含抗坏血酸钠、精氨酸。
3.一种冻干免疫佐剂的制备方法，根据权利要求2所述，其特征在于所述冷冻干燥添加剂各组分的百分比为单硫酸卡那霉素500 5000单位/ml精氨酸0.5% 2.0%抗坏血酸钠0.1% 0.3%甘露醇2.0% 8.0%
4.一种冻干免疫佐剂的制备方法，根据权利要求1所述，其特征在于所述聚肌胞原液的浓度为0. 8mg/ml 4mg/ml。
5.一种冻干免疫佐剂的制备方法，根据权利要求1所述，其特征在于包括以下步骤(1)聚肌胞原液制备取聚肌苷酸和聚胞苷酸纯化液，于40°C 60°C水浴中混合，搅拌 30min 120min，聚肌苷酸和聚胞苷酸纯化液加入比例为1 0. 5 1 1. 5 ；(2)将聚肌胞原液用0.45 μ m滤芯过滤，用Millipore超滤系统300KD的膜包浓缩成浓度为0. 8mg/ml ％ig/ml，加入冷冻干燥添加剂混勻，无菌过滤，分装于西林瓶中，半加塞， 其中所述冷冻干燥添加剂基本上由葡萄糖酸钙、甘露醇组成；(3)待西林瓶放入冷冻干燥器内，分别在4.8 5. 2°C、0. 2 -0. 2°C、-5. 8 -6. 2 V 各平衡1小时；(4)快速冻结，将制品温度降至-48 -52°C维持3.5 2. 5小时；(5)真空干燥；(6)加热干燥，在制品温度达到25.5 37. 5°C条件下持续3. 5 2. 5小时；(7)全部加塞，压封铝盖。
全文摘要
本发明公开了一种冻干免疫佐剂的制备方法。涉及领域为冻干制剂及其制备方法。本发明的目的是提供一种冻干免疫佐剂的制备方法。本发明的技术方案是一种冻干免疫佐剂的制备方法，包括聚肌胞原液及冷冻干燥添加剂，所述冷冻干燥添加剂基本上由甘露醇、抗坏血酸钠、精氨酸、单硫酸卡那霉素组成。制备上述冻干免疫佐剂的方法，包括以下步骤(1)聚肌胞原液制备；(2)聚肌胞原液过滤、浓缩；(3)加入冷冻干燥添加剂混匀，无菌过滤，分装于西林瓶中；(4)将西林瓶放入冷冻干燥器内，分别在5℃、0℃、-6℃备平衡1小时；快速冻结，将制品温度降至-50℃维持3小时；(5)真空干燥；(6)加热干燥，在制品温度达到30℃条件下持续3小时；(7)加塞，封口。
文档编号A61P31/14GK102488897SQ20111042012
公开日2012年6月13日 申请日期2011年12月15日 优先权日2011年12月15日
发明者侯本晶, 沈丽丽, 焦月, 王国新 申请人:天津济命生生物科技有限公司