用于治疗胰腺癌的方法

专利名称：用于治疗胰腺癌的方法
用于治疗胰腺癌的方法I.相关申请的交互引用本申请在35U. S. C. § 119(e)下要求2010年I月8日提交的临时申请号61/293,612号的权益，该临时申请的内容完整引入作为参考。2.序列表、表格或计算机程序的引用序列表在此同时提交。
3.发明领域 本公开尤其涉及通过施用组合物至患有原发性和/或转移性胰腺癌的受试者来治疗该受试者的方法，所述组合物包含对胃泌素原特异的抗体。
4.
背景技术：
尽管数十年的基础及临床研究，癌症仍是人类的最大祸患之一。根据世界卫生组织收集的统计数据，癌症是世界范围主要死亡原因之一，在2004已经杀死七百四十万人或占这年全部死亡人数的约13 %。尽管对于什么造成癌症和在分子水平上癌症如何运作已经了解甚多，然而癌症死亡率的最大降低仍归功于公共卫生介入，如反吸烟运动和因成像技术和分子诊断术进步而变得可能的更早期诊断。然而，当提及实际杀死癌细胞的努力工作时，临床医生仍依赖于前一代肿瘤学家们已经熟悉的治疗模式如手术、辐射和化疗。虽然全部这些疗法的功效已经改进多年，但是治愈率的改善和寿命的增加已经是递增的。甚至，因分子肿瘤学革命产生的新的靶向疗法在大多数情况下仅适度地改善结局。胰腺癌(胰的一种恶性肿瘤)是对于治疗而言特别有挑战性的癌症形式，因为它在不再可治疗之前一般检测不到((Jemal等，2008，CA CancerJ. Clin. 58(2) :71_96))。预后不良-少于5%的诊断患有胰腺癌的那些人在诊断后5年仍活着((Jemal等，2010，CA Cancer J. Clin. 60(5) :277-300))，并且完全缓解是罕见的((Ghaneh 等，2007，Gut56(8) :1134-1152))。从诊断伊始的中位存活期仅是3-6个月((Stathis和Moore，2010，Nat. Rev. Clin. Oncol. 7(3) : 163-172))。在 2010 年已经估计，仅美国约 43，000 位个体将诊断患有胰腺癌，并且约36，800位死于本病(见，www. cancer, gov/cancertopics/types/pancreatic)。虽然胰腺癌仅占每年诊断的新癌症病例的2. 5%，但是它导致6%的年度癌症死亡((Jemal等，2007，Cancer J. Clin. 57(1) :43_46))，代表全部癌症的最高致死率之一。实际上，在美国，胰腺癌是男性和女性中第四高的癌杀手。防治癌症的另一个富有挑战性的方面是治疗来自原发性(原始)肿瘤的细胞已经破裂四散并且在身体内通过称作“转移”过程一般经淋巴液或血液移行至另一个位置以形成另一个转移性(或继发)肿瘤的患者。继发或转移性肿瘤一般与原始肿瘤是相同类型，无论其新位置在哪里，从而这种疾病称作转移性癌症，并且不称作新居留组织的癌症。例如，已经扩散至肝脏的胰腺癌是转移性胰腺癌，不是肝癌。由于原发性胰腺癌在晚期之前经常得不到诊断，转移的发病率高。实际上，大约80%的患者在诊断时已经存在转移((Sohn等，2000, J. Gastrointest. Surg.4(6) :567_579))。
转移限制了治疗选项，因为切除或去除原发性肿瘤不再是充分的治疗选项。基于吉西他滨的化疗目前代表用于任何转移性疾病患者的标准治疗法。用吉西他滨治疗的转移性疾病患者的存活期仅是约6个月(范围从4. O至7. I个月，根据这项研究)。采用联合治疗的当前试验(例如吉西他滨连同化疗(奥沙利钼、5-FU或依立替康)或吉西他滨连同靶向疗法(厄洛替尼、贝伐单抗或西妥昔单抗))报道存活期增加仅I至2个月((Sathis和Moore, 2000, Nat. Rev. Clin. Oncol. 7 (3) 163-172))。尽管近年来原发性胰腺癌和转移性胰腺癌的治疗选项取得适度进展(见上文)，但是仍迫切需要备选的和/或更有效的疗法。
5.发明概述胃泌素是刺激胃酸分泌的肠肽激素。在成年哺乳动物中，它主要由胃窦中和某种程度在上部小肠和胰中的G细胞产生。参照

图1，胃泌素基因翻译为101个氨基酸的多肽(称为前胃泌素原(pre-progastrin)),其包含被切除从而产生胃泌素原(“PG”)(80个氨基酸残基的多肽)的信号序列(加下划线)。胃泌素，主要以三种形式G34、G17和G14(未显示)存在，自胃泌素原加工产生。已经在胰腺肿瘤中观察到酰胺化胃泌素的存在((Goetze等，2000，Cancer88(11) :2487-2494))并且研究者已经尝试使用抗胃泌素手段来治疗胰腺肿瘤(见，例如，Chau 等，2006, Br. J. Cancer 94 :1107-1115 ；Brett 等，2002, J. Clin. Oncol. 20 4225-4231)。还观察到患有胰腺癌的患者在其胰腺肿瘤中具有可检测水平的胃泌素原((Caplin等，2000，Br J Surg. 87 (8) :1035-1040))。现在已经发现，抗胃泌素原手段可以用来诊断、监测和治疗原发性和转移性胰腺癌。如本文首次所示，原发性和转移性胰腺癌患者具有升高的胃泌素原血浆和/或血清水平，并且源自原发性和转移性胰腺肿瘤的细胞系的增殖在用特异性结合胃泌素原的抗体处理时被抑制，而这些细胞系在低黏附条件下形成癌球的能力也被抑制。这些发现为诊断、治疗、阻止胰腺癌复发和监测胰腺癌进展的过程和/或治疗提供强有力的新工具。因此，在一个方面，本公开提供了治疗胰腺癌(其可以是原发性胰腺癌或转移性胰腺癌)的方法，所述方法包括施用有效提供治疗益处的量的特异性结合胃泌素原的抗体(“抗PG抗体”)至诊断患有原发性或转移性胰腺癌的受试者。抗PG抗体可以作为单药治疗单独施用或组合或从属于其他治疗模式(如肿瘤切除法、辐射疗法、化疗法等)来施用。在组合或从属于肿瘤切除法使用时，抗PG抗体可以在去除肿瘤之前和/或之后施用，并且可以在肿瘤去除后继续施用指定的时间段，直至实现低于指定阈值水平的血浆和/或血清胃泌素原水平，或直至实现血浆和/或血清胃泌素原水平在指定时间段的下降。组合或从属于化疗法使用时，抗PG抗体可以在化疗之前、与化疗法同时或在化疗法之后施用。再次，可以将抗PG抗体施用指定的时间段，直至实现低于指定阈值水平的血浆和/或血清胃泌素原水平，或直至实现血浆和/或血清胃泌素原水平在指定时间段的下降。如下文将以更多细节讨论，诊断患有原发性和/或转移性胰腺癌的患者具有升高的PG血浆和/或血清水平。例如，参照图4，健康个体中的胃泌素原血清和/或血浆水平一般是可忽略的。患有胰腺癌的个体具有约50pM的可测量水平。这种发现在诊断和医治胰腺癌方面产生几种有用和重要的新工具。
首先，由于胰腺癌可以难以诊断，测量的PG血浆和/或血清水平可以与其他诊断试验组合地使用以证实胰腺癌的诊断或有助于初步诊断。例如，通常已知当存在胰腺癌时，胰腺癌的迹象与许多其他疾病的迹象相似。常见症状包括在上半腹部内放射至背部的疼痛、食欲丧失和/或恶心和呕吐、明显体重减轻和无痛性黄疸。较少见的症状包括远端静脉血栓形成和肺栓塞、糖尿病和胰腺炎。由于早期检测提供更多的治疗选项和更好的预后，因此可以在表现胰腺癌的这些和/或其他症状的患者中测量血浆和/或血清PG水平以辅助诊断，其中升高的水平，例如约50pM或高于约50pM的血浆和/或血清水平将提示患者患有胰腺癌。
测量血浆和/或血清PG水平以辅助诊断可以特别用于显示胰腺癌风险因素的受试者中，包括但不限于吸烟、膳食和环境因素、幽门螺杆菌(H. pylori)感染、代谢综合征(例如，肥胖症、糖耐量受损、长期糖尿病)和家族史的受试者，这占据大约5-10%的胰腺癌患者((Maisonneuve 和 Lowenfels, 2010, Dig. Dis. 28 (4-5) :645-656))。在显不此类或其他风险因素的受试者中的血浆和/或血清PG水平可以定期监测，观察到随时间推移增加或观察到在阈值约50pM或之上的水平表示该个体可能形成胰腺癌。这种对风险个体的监测可能有助于本病的早期检测，从而提供更好的治疗选项。其次，测量的血浆和/或血清PG水平可以用来监测任何胰腺癌疗法(包括本文所述的抗PG疗法)的有效性和/或潜在复发或转移。尽管不意图受任何具体操作理论约束，预期当肿瘤在治疗期间缩小时，血浆和/或血清PG水平将下降并且可以返回至正常。因而，在另一个方面，本公开提供了用于诊断和/或监测受试者中胰腺癌(无论是原发性胰腺癌或转移性胰腺癌)的治疗功效和/或复发的方法。这种方法总体上包括在不同时间点或在某个时间段测量相关受试者中的血浆和/或血清PG水平并且确定该水平是否高于或低于阈值水平或随时间推移增加或下降。在存在形成胰腺癌的风险的受试者中或在显示一个或多个与胰腺癌相关的症状的受试者中高于阈值水平的水平或随时间推移增加的水平表示该受试者患有胰腺癌。低于阈值水平的水平或随时间推移下降的水平表示特定疗法是有效的。考虑到胰腺癌患者的短存活时间，测量应当合理地经常进行，例如每两周或甚至以更短的间隔期测量一次。6.附图简述图I提供信号肽序列加下划线的人前胃泌素原(SEQ ID NO :100)，人成熟胃泌素原(SEQ ID NO 20)和胃泌素原加工的某些产物(包括G34(SEQ ID NO : 102)、G34_Gly (SEQID NO :103)、G17 (SEQ ID NO :104)、G17_Gly (SEQ ID NO :105)和 CTFP (SEQ ID NO :106))
的氨基酸序列。图2提供某些示例性鼠抗hPG单克隆抗体的可变轻链和可变重链的多核苷酸序列和氨基酸序列。在每种情况下，3个CDR以粗体加下划线的字体显示。具体而言图2A提供鼠抗hPG MAb3的Vh链的多肽序列(SEQ ID NO 12)和编码它的多核苷酸序列(SEQ ID NO 16)；图2B提供鼠抗hPG MAb3的\链的多肽序列(SEQ ID NO 13)和编码它的多核苷酸序列(SEQ ID NO : 17);图2C提供鼠抗hPG MAb4的Vh链的多肽序列(SEQ ID NO 14)和编码它的多核苷酸序列(SEQ ID NO 18)；
图2D提供鼠抗hPG MAb4的Vl链的多肽序列(SEQ ID NO 15)和编码它的多核苷酸序列(SEQ ID NO 19)；图2E提供鼠抗hPG MAb8的Vh链的多肽序列(SEQ ID NO 59)和编码它的多核苷酸序列(SEQ ID NO 67)；图2F提供鼠抗hPG MAb8的\链的多肽序列(SEQ ID NO 63)和编码它的多核苷酸序列(SEQ ID NO : 71);图2G提供鼠抗hPG MAbl3的Vh链的多肽序列(SEQ ID NO 60)和编码它的多核苷酸序列(SEQ ID NO 68)； 图2H提供鼠抗hPG MAbl3的Vl链的多肽序列(SEQ ID NO 64)和编码它的多核苷酸序列(SEQ ID NO 72)；图21提供鼠抗hPG MAb 16的Vh链的多肽序列(SEQ ID NO 61)和编码它的多核苷酸序列(SEQ ID NO 69)；图2J提供鼠抗hPG MAb 16的\链的多肽序列(SEQ ID NO 65)和编码它的多核苷酸序列(SEQ ID NO 73)；图2K提供鼠抗hPG MAb 19的Vh链的多肽序列(SEQ ID NO 62)和编码它的多核苷酸序列(SEQ ID NO 70);和图2L提供鼠抗hPG MAb 19的\链的多肽序列(SEQ ID NO 66)和编码它的多核苷酸序列(SEQ ID NO 74)；图3提供了本文所述选择的抗hPG单克隆抗体的人源化可变重链和轻链的突出的(projected)多肽序列。在每种情况下，3个⑶R以粗体加下划线的字体显示。具体而言图3A提供人源化MAb3的Vh链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 21)；图3B提供人源化MAb3的\链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 22)；图3C提供人源化MAb4的Vh链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 23)；图3D提供人源化MAb4的\链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 24)；图3E提供人源化MAb8 (a)的Vh链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 75)；图3F提供人源化MAb8 (a)的\链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 76)；图3G提供人源化MAb8 (b)的Vh链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 77)；图3H提供人源化MAb8 (b)的\链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 78)；图31提供人源化MAb8 (c)的Vh链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 79)；图3J提供人源化MAb8 (c)的\链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 76)；图3K提供人源化MAbl3 (a)的Vh链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 80)；图3L提供人源化MAbl3 (a)的\链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 81)；图3M提供人源化MAb13(b)的Vh链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 82)；图3N提供人源化MAb13(b)的Vl链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 83)；图30提供人源化MAbl6 (a)的Vh链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 84)；图3P提供人源化MAbl6 (a)的\链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 85)；图3Q提供人源化MAbl6 (b)的Vh链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 86)；图3R提供人源化MAb 16(b)的Vl链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 87)；图3S提供人源化MAbl6 (c)的Vh链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 88)；
图3T提供人源化MAbl6 (c)的\链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 89)；图3U提供人源化MAbl9 (a)的Vh链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 90)；图3V提供人源化MAbl9 (a)的\链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 91)；图3W提供人源化MAbl9 (b)的Vh链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 92)；图3X提供人源化MAbl9 (b)的\链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 93)；图3Y提供人源化MAbl9 (c)的Vh链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 94);和 图3Z提供人源化MAbl9 (c)的\链的突出氨基酸序列(SEQ ID NO 95)。图4提供与健康对照相比，说明在来自原发性(M-)或转移性(M+)胰腺癌患者的血浆或血清中的胃泌素原浓度的图。图5提供了说明胃泌素原在多种类型的原发性和转移性胰腺癌细胞系中表达水平的图。图6提供了说明由多种类型的原发性和转移性胰腺癌细胞系分泌的胃泌素原的图。图7提供了与阴性对照单克隆抗体相比，在Capan I细胞(转移性胰腺肿瘤细胞)上比较示例性抗hPG MAb3的抗增殖特性的图。图8提供了与阴性对照单克隆抗体相比，在BxPC-3细胞(原发性胰腺肿瘤细胞)上比较示例性抗hPG MAb8的抗增殖特性的图。图9提供了与阴性对照单克隆抗体相比，在MIA PaCa2细胞(原发性胰腺肿瘤细胞)上比较示例性抗hPG MAb8的抗增殖特性的图。图10提供这样的图，其显示与未处理的对照细胞相比，示例性抗hPGMAb3对CapanI细胞(转移性胰腺肿瘤细胞)在低黏附条件下形成癌球的长期能力的抑制特性。图11提供这样的图，其显示与未处理的对照细胞相比，示例性抗hPG MAbS,MAbl3、MAb 16和MAbl9对SU. 86. 86细胞(转移性胰腺肿瘤细胞)在低黏附条件下形成癌球的长期能力的抑制特性。
7.具体实施方案7. I胰腺癌胰是一个约6英寸长的薄腺体，具有两个主要功能产生帮助消化食物的胰液和产生帮助控制血糖水平的激素，如胰岛素和胰高血糖素。消化液由外分泌胰细胞产生，并且激素由内分泌胰细胞产生。大约95%或更多的胰腺癌源自外分泌细胞((Yao等，2007，Oncology 14(12) :3492-3450))。在外分泌胰腺癌中，大约95%是腺癌，而剩余5 %包括腺鳞状癌、指环状细胞癌、肝样癌、胶质癌、未分化癌和具有破骨细胞样巨细胞的未分化癌(见，http://pathology, jhu. edu/pancreas/BasicTypesl. php)。早期胰腺癌经常不引起症状((Jemal等，2008，CA Cancer J. Clin. 58⑵71-96))，并且由晚期胰腺癌引起的症状通常是不同的并且不是特定的((Stathis和Moore, 2010, Nat. Rev. Clin. Oncol. 7(3) :163-172))。因此，胰腺癌在它成为晚期之前经常诊断不到((Jemal等，2008，CA Cancer J. Clin. 58(2) :71-96))。常见症状包括但不限于上腹部和背部疼痛、食欲丧失和/或恶心和呕吐、明显体重减轻和无痛性黄疸、远端静脉血栓形成、肺栓塞以及糖尿病和/或胰腺炎。
多种风险因素与胰腺癌相关，并且包括但不限于吸烟；长期糖尿病；慢性胰腺炎；和某些遗传病，如遗传性胰腺炎、多内分泌性腺瘤I型综合征、遗传性非息肉性结肠癌(HNPCC ;林奇综合征)、希佩尔-林道(von-Hippel-Lindau)综合征、毛细管扩张性运动失调和家族性非典型多痣黑素瘤综合征(FAMMM)。用来诊断胰腺癌的诊断方法包括成像研究如计算机断层成像(CT)扫描、磁共振成像(MRI)、正电子发射断层摄影(PET)扫描、内窥镜超声术(EUS)、腹腔镜检查术、内窥镜逆行胰胆管造影术(ERCP)和经皮经肝胆管镜检查术(PTC)，但是通过内镜针活组织检查或手术切除放射学疑似组织作出确诊。这些多样的诊断技术还用来对癌症分期，这影响治疗选项。以下分期通常用来评估胰腺癌O期(原位癌)在本期，在胰的衬层内发现异常细胞。这些异常细胞可以是癌性的并扩散至周围的组织。
I期在本期，癌已经形成并且仅存在于胰中。取决于肿瘤的尺寸，I期进一步划分为两个亚期IA期(肿瘤是2cm或更小)和IB期(肿瘤大于2cm)。II期在本期，癌已经扩散至附近的组织和器官，并且可能已经扩散至淋巴结。基于癌已扩散至何处，这个期进一步划分为亚期。IA期(扩散至附近的组织和器官但是不扩散至淋巴)；和IIB期(扩散至淋巴并且可能扩散至其他的附近组织和器官)。III期在本期，癌已经扩散至胰附近的主要血管，并且也可能已经扩散至附近的淋巴结。IV期在本期，癌可以是任何大小的，并且已经扩散至远处组织和器官，如肝、肺和腹腔(即，癌症已经转移)。存在依照分期而变动的三种主要治疗选项(手术、辐射疗法和化疗)。I期和II期原发性胰腺癌的治疗可以包括手术，伴以基于吉西他滨或基于5-FU方案的辅助化疗，伴以或不伴以辐射疗法。经常地，原发性胰腺癌在治疗后复发(称作复发性胰腺癌)。基于吉西他滨的化疗也通常用于复发性和局部进展的胰腺癌患者，有时随后给予放疗法或放化疗法。7. 2 转移如背景部分指出，转移指癌症扩散的过程。简而言之，肿瘤细胞离开原发性肿瘤，经血液循环或淋巴液系统行进至新组织部位并且形成继发性肿瘤。在新组织部位的肿瘤称作转移性肿瘤，并且一般地鉴定原发性肿瘤的来源。例如，已经扩散至其他组织的胰腺癌称作“转移性胰腺癌”，无论继发性、转移性肿瘤的组织位置在哪里。癌细胞经常扩散至原发性肿瘤附近的淋巴结，这称作淋巴结累及或区域性疾病。转移由众多不同的步骤组成侵入和移行、进入血管、循环、外渗和定居、增殖和血管生成。在侵入和移行期间，各个细胞从原发性肿瘤脱离并侵入相邻的健康组织。为实现这一点，肿瘤细胞必须变得能动，并且推定经历表型转化，称作上皮至间质转变。Kalluri等，2009，J. Clin. Invest. 119(6) :1420_28。此外，此类细胞经常产生降解胞外基质的酶，从而促进从原发性肿瘤移行出来并进入周围健康组织。在肿瘤细胞遇到血管或淋巴管时，它将自身插入内衬脉管的内皮细胞之间并且渗入血流或淋巴系统中。异常的肿瘤细胞随后经循环系统或淋巴系统行至新的器官或行至淋巴结。肿瘤细胞随后可以寄宿在器官如肝脏、肺或其他组织或器官的毛细血管或淋巴管中，并且随后通过渗透内皮而外渗至组织间隙中。最后，在定居、增殖和血管生成期间，肿瘤细胞在它们的新宿主组织中占据居所并且开始生长。当新的转移性肿瘤达到足够尺寸时，它可以分泌生长因子，如VEGF，以刺激新血管生长至肿瘤中，从而供应氧和营养给快速生长的肿瘤。肿瘤可以通过转移作用扩散至身体的几乎任何部分。局部复发、肝转移和腹腔扩散是切除胰腺肿瘤后最常见的复发部位。常见的局部-区域侵入存在于胰腺后神经组织、十二指肠、门静脉(PV)和肠系膜上静脉(SMV)或局部淋巴结中。胰腺癌中最寻常的远距离转移部位是肝和腹腔。其他较不常见的部位是肺、骨和脑。不寻常的部位如肌肉、皮肤、心脏、胸膜、胃、脐、肾、盲肠、精索和前列腺也已经报道((Howard，1996,Curr. Prob. ICancer20(5) :281-328 ;Borad 等，2009，Yale J. Biol. Med. 82(1) :1-6))。7. 3原发性和转移性胰腺癌的治疗诊断患有胰腺癌的患者一般具有不良预后，部分是因为胰腺癌通常在早期不引起症状，导致诊断时局部进展的疾病或转移性疾病。上文讨论的治疗选项取决于诊断时疾病 的分期。 7. 4抗hPG抗体和它们对原发性和转移性胰腺癌的效果如本文公开，已经报道了患有胰腺癌的受试者在其胰腺肿瘤中具有可检测水平的胃泌素原((Caplin等，2000，Br J Surg. 87 (8) : 1035-1040))。本文报道和在实施例部分中讨论的数据表明，胰腺癌细胞系BxPC-3、MIAPaCa-2、Capan I和SU. 86. 86表达胃泌素原编码基因(GAST)的mRNA(实施例7)，并且还表明胰腺癌细胞系分泌胃泌素原(实施例8)。现在已经发现，原发性和转移性胰腺癌患者具有升高的胃泌素原血浆和/或血清水平(实施例6)，源自原发性和转移性胰腺肿瘤的细胞系的生长因采用特异性结合人胃泌素原(“hPG”)的抗体处理而抑制(实施例9、10和11)，并且胰腺癌细胞在低黏附培养条件下生长为肿瘤球的能力也在用抗hPG抗体预处理后被显著抑制(实施例12)。基于这些令人惊讶和令人鼓舞的发现，预期这类抗hPG抗体可以用来辅助胰腺癌的诊断、监测胰腺癌治疗方案的功效、治疗处于任何发展阶段的胰腺癌，包括原发性和转移性胰腺癌，和阻止胰腺癌的复发。如Hollande等最近所不，胃泌素原通过抑制ICAT ( β -联蛋白/Tcf_4 /[目号传导的负向调节物)而刺激结肠直肠癌细胞的β -联蛋白/Tcf-4途径(见WO 2007/135542)。β_联蛋白/Tcf-4信号传导引起细胞增殖。在缺乏这种信号传导的情况下，它们分化和经历正常细胞周期，包括程序性细胞死亡或凋亡。Hollande等还已经显示，使此类细胞暴露于抗hPG抗体阻断了 β_联蛋白/Tcf-4诱导的增殖并且CRC细胞的生长或增殖被抑制(见，例如,WO 2007/135542)。应答于胃泌素原处理或暴露于胃泌素原(无论胃泌素原内源或外源产生)而增殖和其中在用抗PG抗体处理或暴露于抗PG抗体时抑制增殖的细胞在本文中称作“胃泌素原敏感的”。如上文指出，已经发现原发性肿瘤细胞和转移性肿瘤细胞均是胃泌素原敏感的，并且应答于用抗PG抗体处理或暴露于抗PG抗体。虽然不意图受任何操作理论约束，但认为，抗PG抗体通过以下方式发挥它们的抗增殖特性结合PG并且阻断PG与其推定性受体相互作用，转而阻抑因ICAT表达增加产生的β_联蛋白/Tcf-4诱导的增殖。抗PG抗体可以干扰原发性和/或转移性癌细胞的存活和/或生长的其他机制也是可能的，并且不意图限制本文中公开的本发明范围。
7. 5治疗方法因此，在一个方面，本公开提供治疗患有或诊断患有胰腺癌的受试者的方法。这种方法包括将有效提供治疗益处的量的一种或多种抗PG抗体施与受试者。在稍后部分总体地描述抗PG抗体和用于所述方法中的特定抗PG抗体。治疗的受试者可以是任何动物，例如，哺乳动物如家畜(例如，奶牛、猪、马等)或家养宠物(例如，犬、猫等)或人。施用的抗PG抗体应当是对正在治疗的动物的物种特异的。对于治疗人受试者，抗PG抗体应当特异性结合人胃泌素原(在本文中称作“抗hPG抗体”，下文更详细地描述)。正在治疗的胰腺癌可以处于任何发展期，从O期至I期、II期、III期、或甚至IV期。实际上，本文所述的抗PG疗法的显著优点在于，预期它有效对抗转移性胰腺 肿瘤以及原发性胰腺肿瘤，从而为患有甚至处于发展晚期的胰腺癌提供益处。还预期它阻止胰腺癌的复发。抗PG疗法可以单药疗法单独使用，或组合或从属于常用来治疗特定分期的胰腺癌的其他疗法来使用。此类常见的疗法在上文提到，并且包括采用例如吉西他滨、5-FU或其他化疗剂的化疗法；和靶向疗法，如用贝伐单抗治疗。在一个具体实施方案中，抗PG疗法与采用靶向肿瘤细胞的其他抗体(如贝伐单抗)治疗组合或从属于这种疗法应用。在与其他疗法组合使用时，抗PG抗体和其他疗法可以同时、相继或分别施用。如本文所使用，如果将抗hPG抗体和第二治疗剂在同一日(例如在同一次患者就诊期间)施与患者，则称它们相继施用。相继施用可以间隔1、2、3、4、5、6、7或8小时或更多小时发生。相反地，如果将抗hPG抗体和第二治疗剂在不同日施与患者，则称它们分别施用。例如，抗PG抗体和第二治疗剂可以按I日、2日、3日、4日、5日、6日、I周、2周或每月间隔期施用。抗PG抗体的施用可以先于或晚于第二治疗剂的施用。备选地，抗PG抗体和第二治疗剂可以同时施用一段时间，然后在第二段时间中交替施用抗PG抗体和第二治疗剂。类似地，如果可能，抗PG抗体可以与手术去除肿瘤组合或从属于这种疗法施用。抗PG抗体可以在去除肿瘤之前、期间或之后施用。7. 6药物组合物抗PG抗体将一般以药物制剂或组合物的形式施用。此类制剂或组合物可以任选地包括额外的活性物质和/或治疗药，如本领域已知。制剂一般地将包括可药用载体、赋形剂或稀释剂。使用的具体载体、赋形剂和/或稀释剂取决于所需的施用模式。组合物可以是任意适合的形式，这取决于所需的施用它至患者的方法。抗PG抗体可以通过多种途径，一般肠胃外地施与受试者，例如，通过皮下、静脉内、腹膜内或肌内注射。施用可以作为一个或多个快速浓注(bolus)或作为一个或多个输注实施。根据本领域普通技术人员的知识，其他施用途径也是可能的。在任意给定的情况下最合适的施用途径将取决于具体的抗体、受试者和正在治疗的胰腺癌的分期。药物组合物可以便利地以每剂量含有预定量的抗PG抗体的单位剂量形式提供。这种单位可以包含例如但不限于5mg至5g,例如IOmg至Ig或20至50mg。可以通过将具有希望的纯度的抗体与可选的本领域中通常利用的可药用载体、赋形剂或稳定剂(在本文中全都称为“载体”)(即缓冲剂、稳定剂、防腐剂、等渗剂(isotonifier)、非离子型去垢剂、抗氧化剂和其他多种混合添加物)混合，将药物组合物制备为冻干制剂或水溶液进行保存。见Remington' s Pharmaceutical Sciences,第16版(Osol编辑1980)。这类添加物应当在所用的剂量和浓度对接受者无毒。缓冲剂帮助维持pH在接近生理条件的范围内。它们可以按约2mM至约50mM的范围内的浓度存在。适合用于本公开的缓冲剂包括有机和无机酸及其盐二者，如柠檬酸缓冲液(例如柠檬酸单钠-柠檬酸二钠混合物、柠檬酸-柠檬酸三钠混合物、柠檬酸-柠檬酸单钠混合物等)、琥珀酸缓冲液(例如琥珀酸-琥珀酸单钠混合物、琥珀酸-氢氧化钠混合物、琥珀酸-琥珀酸二钠混合物等)、酒石酸缓冲液(例如酒石酸-酒石酸钠混合物、酒石酸-酒石酸钾混合物、酒石酸-氢氧化钠混合物等)、延胡索酸缓冲液(例如延胡索酸-延胡索酸单钠混合物、延胡索酸-延胡索酸二钠混合物、延胡索酸单钠-延胡索酸二钠混合物等)、葡糖酸缓冲液(例如葡糖酸-葡糖酸钠混合物、葡糖酸-氢氧化钠混合物、葡糖酸-葡糖酸钾混合物等)、草酸缓冲液(例如草酸-草酸钠混合物、草酸-氢氧化钠混合物、草酸-草酸钾混合物等)、乳酸缓冲液(例如乳酸-乳酸钠混合物、乳酸-氢氧化钠混合物、乳酸-乳酸钾混合物等)和乙酸缓冲液(例如乙酸-乙酸钠混合物、乙酸-氢氧化钠混合物等)。此 夕卜，可以使用磷酸缓冲液、组氨酸缓冲液和三甲胺盐(如Tris)。可以添加防腐剂来延缓微生物生长，且可以按O. 2% -1% (w/v)的范围内的量添力口。适合用于本公开的防腐剂包括酚、苄醇、间甲酚、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、十八烷基二甲基苄基氯化铵、苄烷铵卤化物(例如氯化物、溴化物和碘化物)、氯己双铵和尼泊金烷基酯(如尼泊金甲酯或丙酯)、邻苯二酚、间苯二酚、环己醇和3-戊醇。可以加入等渗剂(有时称为“稳定剂”)来确保本公开的液体组合物的等渗性，其包括多元糖醇，例如三元糖醇或高级糖醇，如丙三醇、赤藓醇、阿糖醇、木糖醇、山梨醇和甘露醇。稳定剂指一大类赋形剂，其功能可以从填充剂至稳定治疗剂或帮助防止变性或黏附于容器壁的添加剂。常见的稳定剂可以是多元糖醇(上文所列)；氨基酸，如精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丙氨酸、鸟氨酸、L-亮氨酸、2-苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸等；有机糖或糖醇，如乳糖、海藻糖、水苏糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、核糖醇、肌醇(myoinisitol)、半乳糖醇、丙三醇等,包括环多醇,如肌醇(inositol);聚乙二醇；氨基酸聚合物；含硫还原剂，如尿素、谷胱甘肽、硫辛酸、巯基乙酸钠、硫代甘油、α-硫代甘油和硫代硫酸钠；低分子量多肽(例如10个残基或更少残基的肽)；蛋白质，如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；单糖，如木糖、甘露糖、果糖、葡萄糖；二糖，如乳糖、麦芽糖、蔗糖；三糖，如蜜三糖；和多糖，如葡聚糖。稳定剂可以以每份重量的活性蛋白质0. I至10，000重量存在。可以添加非离子型表面活性剂或去垢剂(也称为“湿润剂”)来帮助溶解治疗剂，以及保护治疗性蛋白质免受搅拌诱导的聚集，其还允许制剂暴露于应力剪切表面而不导致蛋白质变性。适宜的非离子型表面活性剂包括聚山梨醇酯(20、80等)、Polyoxamer(184、188等)、多聚醇、聚氧乙烯山梨糖醇酐单醚(TWEEN -20、TWEEN -80等)。非离子型表面活性剂可以以约O. 05mg/ml至约I. Omg/ml,例如约O. 07mg/ml至约O. 2mg/ml的范围存在。然而，表面活性剂具有与抗体结合的倾向性并且可以损害抗体的构象。因此，在使用表面活性剂时，起稳定作用的浓度应当是低的并且实验地断定。其他的多种赋形剂包括螯合剂(例如EDTA)、抗氧化剂(例如抗坏血酸、甲硫氨酸、维生素E)和共溶剂。7. 7有效剂量
将抗PG抗体以足够或有效提供治疗益处的量施与受试者。在治疗原发性和/或转移性胰腺癌的情形时，如果实现以下一个或多个情况，则可以推断有治疗益处停顿或减缓肿瘤生长、减少患者内肿瘤的数目和/或尺寸、缩减不可手术的肿瘤至可以手术去除它们的尺寸和位置、增加寿命和/或改善患者生活质量。对于治疗益处存在而言，不要求完全治愈，尽管完全治愈是所希望的。实际上，因为从胰腺癌诊断伊始的中位存活期仅是3-6个月((Stathis和Moore，2010，Nat. Rev. Clin.Oncol. 7 (3) :163-172))，个体的存活期超出这个中位数增加额外3个月提供了巨大的治疗益处。见，例如，Philip 等，2009，J. Clin. Oncol. 24(33) :5660_5669。在一些情况下，根据本领域普通技术人员的知识，治疗益处可以与一个或多个代用终点相关。例如且不限于如下情形，可以在受试者中随时间推移测量血浆和/或血清PG浓度，而PG水平的下降或低于阈值水平例如低于约50pM、40pM、30pM、20pM、10pM或5pM的水平指示治疗益处。肿瘤尺寸、数目和代谢可以使用多种扫描技术，如但不限于，(1\1 1、功能1 1、SPECT和PET以及本领域普通技术人员已知的其他方法测量。不要求结合全部游离PG以实现治疗功效，虽然这可以是合乎需要的。游离PG意指通过抗PG抗体结合可获得的PG。相反地，降低游离PG在肿瘤内部或周围的浓度、全身浓度、尤其体液或其他地方的浓度至更有限的程度也可以是有效的。其中可以通过施用抗PG抗体组合物降低游离PG浓度的示例性组织和体液包括但不限于从患者去除的肿瘤样品、腹水、来自胸膜渗出液、脑脊液、淋巴、血液、血浆、血清等。PG在这些组织或体液的一种或多种中的浓度可以使用本领域普通技术人员熟悉的ELISA技术或其他技术定量。根据本领域普通技术人员的知识，可以在患者中用滴定法测量抗PG抗体的剂量，从而在施用后在预定时间降低目的组织或体液中的游离PG浓度至少约10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或 100%、或约 5% -10%、约 10% -15%、约 15% -20%,约 20% -25%、约 25% -30%、约 30% -35%、约 35% -40%、约 40% -45%、约 45% -50%,约 50% -55%、约 55% -60%、约 60% -65%、约 65% -70%、约 70% -75%、约 75% -80%,约80% -85%、约85% -90%、或约90% -95%、或范围在任何前述值之间的游离PG浓度降低百分数。所施用的抗PG抗体的量将取决于多种因素，包括正在治疗的胰腺癌的性质和分期，施用的形式、途径和部位，治疗方案(例如是否使用第二治疗剂)，正在治疗的具体受试者的年龄和病症，正在治疗的患者对抗PG抗体的敏感性。本领域技术人员可以容易地测定适宜剂量。最终，临床医生将决定待使用的适当剂量。可以根据需要重复此剂量。如果出现副作用，可以按照正常临床实践改变或降低剂量的量和/或频率。适当的剂量和治疗方案可以通过用本领域普通技术人员已知的常规技术监测治疗进展来建立。最初可以从体外测定法估计有效剂量。例如，可以配制用于动物的起始剂量以达到抗PG抗体的循环血液浓度或血清浓度，该浓度处于或高于体外测量的特定抗PG抗体的结合亲和常数。考虑具体抗体的生物利用率来计算达到这类循环血液或血清浓度的剂量良好地处于技术人员的能力范围之内。对于指导，读者可参考第I部分总原则(General Principles),弓丨自"Goodman and Gilman' s The Pharmacological Basis ofTherapeutics”,第 11 版，Hardman, J. G.等，编著，McGraw-Hill Professional 及其中引用的参考文献。也可以从体内数据(如动物模型)估计起始剂量。用于测试药剂治疗胰腺癌的功效的动物模型是本领域熟知的。技术人员可以常规地改编这类信息来确定适合用于人施用的剂量。在具体实施方案中，可以通过以下方式确定个体受试者的静脉内剂量；在治疗之前一些日至一些周测量该个体的血清或血浆PG浓度若干次并且计算将具有饱和作用的抗PG抗体量，即，足以结合全部PG的量。如技术人员将理解，对给定PG血清或血浆浓度实现饱和作用所需要的任何特定抗体的量将部分地取决于特定抗体的亲和常数。用于计算特定目的抗PG抗体的饱和量的方法是熟知的。
为确保饱和，可以施用大于计算饱和量的量，例如，可以施用大于计算饱和量至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或甚至10倍的量。对于除静脉内施用之外的施用模式，如本领域熟知，可以基于药物代谢动力学和生物利用率调整这个量。取决于正在治疗的胰腺癌的分期、施用途径及受试者的年龄、体重和状态，抗PG抗体的有效剂量预期是每个单次施用(例如，快速浓注)、多次施用或持续施用(例如，输注)从约0. 001mg/kg至约250mg/kg或其中任意有效范围或值。在某些实施方案中，每个剂量可以是从约0. lmg/kg至约0. 5mg/kg ;约0. 25mg/kg至约0. 75mg/kg ;约0. 5mg/kg至约lmg/kg ;约 2mg/kg ;约 I. 5mg/kg 至约 2. 5mg/kg ;约 2mg/kg 至约 3mg/kg ;约 2. 5mg/kg 至约3. 5mg/kg ;约 3mg/kg 至约 4mg/kg ;约 3. 5mg/kg 至约 4. 5mg/kg ;约 4mg/kg 至约 5mg/kg ;约5mg/kg 至约 7mg/kg ;约 6mg/kg 至约 8mg/kg ;约 7mg/kg 至约 9mg/kg ;约 8mg/kg 至约 IOmg/kg ;约 10mg/kg 至约 15mg/kg ;约 12. 5mg/kg 至约 17. 5mg/kg ;约 15mg/kg 至约 20mg/kg ；约 17. 5mg/kg 至约 22. 5mg/kg ;约 20mg/kg 至约 25mg/kg ;约 22. 5mg/kg 至约 27. 5mg/kg ;约25mg/kg 至约 30mg/kg ;约 30mg/kg 至约 40mg/kg ;约 35mg/kg 至约 45mg/kg ;约 40mg/kg 至约 50mg/kg ;约 45mg/kg 至约 55mg/kg ;约 50mg/kg 至约 60mg/kg ;约 55mg/kg 至约 65mg/kg ；约 60mg/kg 至约 70mg/kg ;约 65mg/kg 至约 75mg/kg ;约 70mg/kg 至约 80mg/kg ;约 75mg/kg至约 85mg/kg ;约 80mg/kg 至约 90mg/kg ;约 85mg/kg 至约 95mg/kg ;约 90mg/kg 至约 IOOmg/kg 44 95mg/kg 至约 105mg/kg ;约 100mg/kg 至约 150mg/kg ;约 125mg/kg 至约 175mg/kg ;约150mg/kg 至约 200mg/kg ;约 175mg/kg 至约 225mg/kg ;约 200mg/kg 至约 250mg/kg。其他剂量范围也是可能的。施用的量、频率和持续时间将取决于多种因素，如患者年龄、体重和疾病状态。因而，在非限制性实例中，治疗性施用方案可以持续I日或更长、2日或更长、3日或更长、4日或更长、5日或更长、6日或更长、I周或更长、2周至无限期、2周至6个月、3个月至5年、6个月至I年或2年、8个月至18个月等。可选地，提供治疗方案用于反复施用，例如每日一次、每日两次、每两日、三日、五日、一周、两周或一个月。可以按相同的剂量或按不同的剂量反复施用。可以反复施用一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次或更多次。可以作为单次剂量或在治疗方案的过程内(例如在一周、两周、三周、一个月、三个月、六个月、一年或更长的过程内)施用治疗有效量的抗PG抗体。7. 8诊断和监测患者以确定治疗功效的方法
如上文指出，诊断患有原发性和/或转移性胰腺癌的患者具有升高的PG血浆和/或血清水平。参照图4，PG在健康个体中的基线水平是可忽略的，一般地处于检测限。在患有原发性和/或转移性胰腺癌的患者中，PG血浆和/或血清水平是可测量的并且是约50pM。基于这种观察结果，PG的血浆和/或血清水平可以用来辅助原发性或转移性胰腺癌的诊断或监测原发性或转移性胰腺癌治疗的有效性。因而，本公开还提供诊断原发性或转移性胰腺癌或监测其治疗过程的功效的方法。为辅助诊断，来自接受诊断的个体的血浆或血清样品的PG水平可以与阈值相比进行测量，其中高于阈值的水平表示有胰腺癌，尤其在其他诊断试验表示该个体可能正患有胰腺癌的情况下。在一些实施方案中，至少约50pM的血浆或血清PG浓度表示有胰腺癌，尤其与其他阳性试验结果组合时。为了监测疗法功效，可以在指定时间点测量血液、血浆或血清PG水平。浓度随时间推移下降和/或在特定时间点低于阈值的测量水平表示有功效。阈值可以是上文讨论的阈值，或可以是在疗法启动之前或在一轮治疗期间的某些早期时点从正在治疗的受试者中 获得的受试者特定的值。不希望受任何具体的操作理论约束，认为随着患者中肿瘤的数目和/或尺寸因本轮治疗而缩减，由肿瘤产生的PG的总量也下降。相反地，在一轮治疗结束后没有明显变化或PG水平上升可能表明该疗法不是有效的。这种信息可以由护理提供者用来决定是否应当启动新一轮治疗。PG水平可以是使用本领域普通技术人员熟悉的分析技术(如但不限于RIA和ELISA)测量。在稍后部分中描述用于测量人受试者的PG水平的抗hPG抗体。在一个具体实施方案中，可以使用夹心ELISA测量PG水平，其中所述夹心ELISA采用一个靶向胃泌素原N端的抗PG抗体和一个靶向胃泌素原C端的第二抗PG抗体。在稍后部分中描述用于这种夹心测定法的示例性N端和C端抗PG抗体。在这种测定法中，制备了与已知量的第一“捕获” N端或C端抗PG抗体结合的表面，如96孔板中的孔。随后将测试样品施加至该表面，随后是孵育时期。随后将表面洗涤并且施加含有第二“检测”抗PG抗体的溶液，其中检测抗体结合PG的不同表位(例如，如果捕获抗体是C端抗PG抗体，则使用N端抗PG抗体作为检测抗体，并且反之亦然)。然后直接(如果例如将检测抗体与可检测标记缀合)或间接(通过结合检测抗PG抗体的标记第二抗体)测量PG水平。对于这种测定法，应当过量使用抗体，从而结合和定量全部PG。在实施例I中提供用于测量血浆和/或血清PG水平的具体夹心测定法。可以在治疗结束后以不同间隔期取得多个量值，并且随后绘图以确定趋势是否存在。在非限制性实例中，可以在一轮治疗结束后的头六个月每周或每月测定PG水平。其他时间间隔也是可能的。在包括使用抗PG抗体的一轮治疗的一个实施方案中，也可以在治疗过程期间取得一个或多个量值，从而可以估计抗体对PG水平的影响。在其他此类实施方案中，如果治疗有效的话，在残余抗PG抗体在采样期间存在于患者中的情况下，数据可以显示为PG水平因PG被抗体阻隔而降低，随后因这种作用削弱而升高，然后接着下降。在其他实施方案中，可以在估计抗PG抗体已经从患者中清除，从而此类抗体对PG的结合不影响测量PG浓度的准确度后取得治疗后量值。
可以使用与患者中检测到的PG水平相比较的不同基线。在一些实施方案中，由来自相同患者的先前量值建立基线，所述量值可以按预定的间隔期取得。在非限制性实例中，可以在治疗结束后头六个月每周或每月、随后每三个月直至治疗结束第二年并且随后每6个月或一年测定PG水平。其他时间间隔也是可能的。在其他实施方案中，可以在与接受监测的那些患者具有相似特征的患者群体中从平均PG水平建立基线。此类特征可以包括，但是不必然地限于性别、年龄、原发性癌症类型、暴露于某些类型的治疗、这些特征的任何组合等。在其他实施方案中，可以在监测特定患者时使用多于一条基线。例如，可以使用患者特异性基线以及群体衍生基线。在一些实施方案中，在事先治疗过的癌症患者中的平均PG浓度处于正在与该患者相比较的相关群体的正常范围内并且保持稳定时，该患者将评定为没有转移和因而不需要新治疗。相反地，在事先治疗过的癌症患者中观察到PG浓度经过一段时间上升的情况下，并且在某些实施方案中，超过源自群体数据的阈值，则该患者可以是评定为可能具有转移，并且因而是针对转移性癌症的新治疗的候选人。 因为进食通常增加胃泌素合成和分泌，所以它也可以造成血液PG水平的短暂增力口，这可以干扰在正就治疗功效和转移存在进行监测的患者中精确测量PG水平。为避免这种影响，尤其待测定血样中的PG浓度的情况下，可以从禁食后的患者取得样品。7. 9 抗 PG 抗体用于本文公开的方法中的抗体是这些抗体，它们与人胃泌素原特异性结合胜过与胃泌素基因的其他产物的结合。参照图1，胃泌素基因翻译为101个氨基酸的多肽(称为前胃泌素原(pre-progastrin)),其包含被切除从而产生胃泌素原(80个氨基酸的多肽)的信号序列(加下划线)。胃泌素原转而经切割以产生在序列上与胃泌素原的残基38-71相应的34个氨基酸的产物，所述产物然后在其羧基端用甘氨酸残基延长，产生甘氨酸延长的G34( “G34-Gly”)。这种切割的副产物是一种6个氨基酸的肽(称为C端侧翼肽或CTFP)，其在序列上与胃泌素原的残基75-80相对应。G34-Gly然后经进一步切割以产生一种17个残基的多肽，该多肽在序列上与胃泌素原的残基55-71相对应，称为G17-Gly。去除G34-Gly和G17-Gly的C端甘氨酸，然后C端酰胺化，分别产生G34和G17，二者都是C端酰胺化的。如本文所用，如在标准结合测定法中测量的那样，如果一种抗体结合于全长胃泌素原但是完全不结合于CTFP、酰胺化胃泌素或甘氨酸延长的胃泌素，则它是“对hPG高度特异的”或“高度特异性结合” hPG，并且如果该抗体显示与hPG的结合至少约5倍高于CTFP和胃泌素基因的其他产物，则它是“对hPG特异的”或“特异性结合”hPG。实施例2中提供可以用来评估特定抗hPG抗体的特异性的具体ELISA测定法。此类高度特异性和/或特异性抗hPG抗体(在本文中称作“抗hPG抗体”)可以是多克隆的(“抗hPG PAb")或单克隆的(“抗hPG MAb”)，不过对于治疗性用途并且在一些情况下，对于诊断或其他体外用途，单克隆抗体是优选的。被抗hPG抗体结合的表位不是关键的。有用的抗hPG抗体可以结合hPG的N端区域、hPG的C端区域或hPG的不同区域。最近，已经发现，至少对于单克隆抗hPG抗体，用来产生抗hPG抗体的抗原的选择可能是重要的(见，2010年10月15日提交的国际申请号PCT/EP2010/006329和2010年10月15日提交的美国申请号12/906，041，所述公开及其具体公开的抗hPG抗体通过引用方式并入本文；下文分别称作‘329申请和‘041申请)。如‘329申请和‘041申请中所公开，并非所有衍生自hPG的抗原均在生理条件下刺激特异性结合hPG的单克隆抗体的产生。实际上，已经用来成功产生多克隆抗hPG抗体的某些抗原(如全长重组hPG (见例如Singh的WO 08/076454)和与hPG的C端最后十个氨基酸相对应的肽(见例如Hollande的WO 07/135542))未能产生抗hPG单克隆抗体。如在‘329申请和‘041申请中所指出，已经在hPG序列内鉴定出可以用来产生特异性结合hPG的单克隆抗体的抗原性N端和C端序列。令人感兴趣的是，抗原性序列不需要限于对其独特的hPG序列区域。与胃泌素基因的其他产物(例如G17、G34和CTFP)具有共同序列区域的肽抗原产生了不但结合hPG，而且特异性结合hPG的单克隆抗体。可用具有对应于hPG N端区域的序列的肽抗原获得和/或与hPG N端区域结合的抗hPG抗体在本文中称为“ N端抗PG抗体”。可以用来构建适于获得对hPG特异的多克隆和单克隆抗体的免疫原的具体示例性hPG抗原区对应于hPG的残基I至14 :SffKPRSQQPDAPLG (SEQ ID NO :25)。在下表IA中和实施例部分中提供用于获得N端抗hPG抗体的示例性免疫原以及用这些示例性免疫原获得的N端抗hPG单克隆抗体的CDR和Vh和 Vl序列
权利要求
1.用于治疗受试者中胰腺癌的方法，包括将足以提供治疗益处的量的抗PG抗体施与诊断患有胰腺癌的受试者。
2.权利要求I的方法，其中受试者是人并且抗PG抗体是抗hPG单克隆抗体。
3.权利要求2的方法，其中抗hPG单克隆抗体是人源化抗hPG单克隆抗体。
4.权利要求2的方法，其中抗PG抗体是N端抗hPG单克隆抗体。
5.权利要求4的方法，其中N端抗hPG单克隆抗体结合表位，所述表位包含选自 DAPLG(SEQ ID NO :28)、PDAPLG(SEQ ID NO:29)、PRSQQPD(SEQ ID NO :30)、WKPRSQQPD(SEQ ID NO 31)和 WKPRSQQPDAPLG(SEQ ID NO 32)的序列。
6.权利要求4的方法，其中针对包含具有序列SWKPRSQQPDAPLG(SEQID NO 25)的肽的免疫 原产生N端抗hPG单克隆抗体。
7.权利要求4的方法，其中N端抗hPG单克隆抗体包含在序列上与MAb3、MAb4、MAbl5、 MAb 16或MAbl9的VhCDR相对应的3个VhCDR和在序列上与MAb3、MAb4、MAbl5、MAb 16或 MAb 19的'CDR相对应的3个八CDR。
8.权利要求4的方法，其中N端抗hPG单克隆抗体包含在序列上与MAb3、MAb4、MAbl5、 MAb 16或MAbl9的CDR相对应的CDR。
9.权利要求4的方法，其中抗hPG单克隆抗体与选自MAb3、MAb4、MAbl5、MAbl6和MAbl9 的参考抗体竞争结合hPG。
10.权利要求2的方法，其中抗PG单克隆抗体是C端抗hPG单克隆抗体。
11.权利要求10的方法,其中C端抗hPG单克隆抗体结合表位,所述表位包含选自 FGRR(SEQ ID NO :33)、MDFGR(SEQ ID NO :34)、AEDEN(SEQ ID NO 35)和 GWMDFGRR(SEQ ID NO 36)的序列。
12.权利要求10的方法，其中针对包含具有序列QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN(SEQ ID NO 27)的肽的免疫原产生C端抗hPG单克隆抗体。
13.权利要求10的方法，其中C端抗hPG单克隆抗体包含在序列上与MAb5、MAb6、MAb7、 MAb8、MAblI、MAbl2 或 MAbl3 的 CDR 相对应的 3 个 VhCDR 和在序列上与 MAb5、MAb6、MAb7、 MAb8、MAbll、MAbl2 或 MAbl3 的 CDR 相对应的 3 个'CDR。
14.权利要求10的方法，其中C端抗hPG单克隆抗体包含在序列上与MAb5、MAb6、MAb7、 MAb8、MAbll、MAbl2 或 MAbl3 的 CDR 相对应的 CDR。
15.权利要求10的方法，其中C端抗hPG单克隆抗体与选自MAb5、MAb6、MAb7、MAb8、 MAbll、MAbl2和MAbl3的参考抗体竞争结合hPG。
16.权利要求2的方法，其中胰腺癌是原发性胰腺癌。
17.权利要求2的方法，其中胰腺癌是转移性胰腺癌。
18.权利要求2的方法，其中抗hPG单克隆抗体辅助手术切除肿瘤而施用。
19.权利要求2的方法，其中抗hPG单克隆抗体辅助化疗法而施用。
20.抑制胰腺肿瘤细胞增殖的方法，其包括使细胞暴露于足以抑制其增殖的抗PG抗体量。
21.权利要求20的方法，其在体外实施。
22.权利要求20的方法，其在体内实施。
23.权利要求20方法，其中抗PG是抗hPG单克隆抗体。
24.权利要求20的方法，其中抗PG抗体是N端抗hPG单克隆抗体。
25.权利要求20的方法，其中抗PG抗体是C端抗hPG单克隆抗体。
26.在显示胰腺癌的至少一个症状的受试者中诊断胰腺癌的方法，其包括确定该受试者是否具有约50pM或高于约50pM的血浆或血清胃泌素原浓度，其中当与胰腺癌的至少一个症状联合时，这种浓度表示该受试者可能患有胰腺癌。
27.监测胰腺癌治疗的有效性的方法，包括确定因胰腺癌而治疗的受试者是否具有低于约IOpM的血浆或血清胃泌素原浓度，其中这种浓度表示治疗是有效的。
28.监测胰腺癌治疗的有效性的方法，包括监测因胰腺癌而治疗的受试者的血浆或血清胃泌素原浓度作为时间的函数，其中血浆或血清胃泌素原浓度随时间推移下降表示这种胰腺癌疗法是有效的。
全文摘要
本公开涉及使用与胃泌素原特异性结合的抗体治疗受试者中胰腺癌的方法。
文档编号A61K39/395GK102933603SQ201180013036
公开日2013年2月13日 申请日期2011年1月7日 优先权日2010年1月8日
发明者L·扈胡, D·朱伯特, F·霍兰德 申请人:拜若提, 健康和医学国家研究院, 科学研究国家中心