安全和功能性的人源化抗β-淀粉样蛋白抗体的制作方法

专利名称：安全和功能性的人源化抗β-淀粉样蛋白抗体的制作方法
安全和功能性的人源化抗β-淀粉样蛋白抗体本发明主张2010年7月30日提交的美国临时专利申请N0.61/400，650的优先权，该专利以其全部内容并入本文作为参考。1.引言本发明涉及用于淀粉样变性的安全和功能性治疗的方法和组合物，淀粉样变性是一种与淀粉样蛋白有关的一组疾病和病症，如阿尔茨海默病。
2.
背景技术：
淀粉样变性不是单一的疾病实体，而是一组以被称为淀粉样蛋白的蜡状、淀粉样蛋白的胞外组织沉积为特征的不同的进行性疾病过程，所述沉积在一种或多种器官或身体系统中积累。随着淀粉样蛋白沉积的积累，它们开始干扰器官或身体系统的正常功能。至少有15种不同类型的淀粉样变性。其主要形式为无已知前兆的原发性淀粉样变性、在一些其他病况后的继发性淀粉样变性和遗传性淀粉样变性。在慢性感染或炎性疾病(如肺结核、称为家族性地中海热的细菌感染、骨感染(骨髓炎)、类风湿性关节炎、小肠炎(肉芽肿性回肠炎)、何杰金病和麻疯病)期间发生继发性淀粉样变性。淀粉样蛋白沉积包括淀粉样蛋白P (五边形)组分(ΑΡ，与正常血清淀粉样蛋白P(SAP)有关的糖蛋白)和硫酸化糖胺聚糖(GAG，结缔组织的复合碳水化合物)。占淀粉样蛋白材料约90%的淀粉样蛋白纤丝包括几种不同类型蛋白质中的一种。这些蛋白质能够折叠成所谓的“β-褶状”片状纤丝，它是对导致淀粉样蛋白独特染色性质的刚果红表现出结合位点的独特蛋白质构型。多种老化疾病 是基于淀粉样蛋白样蛋白质或与之有关的，并且部分地以有助于病理发生和疾病发展的淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样材料的细胞外沉积的积累为特征。这些疾病包括(但不限于)神经障碍，如阿尔茨海默病(AD)、路易体痴呆症、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)；关岛型肌萎缩侧索硬化-帕金森综合征-痴呆复合征。基于淀粉样蛋白样蛋白质或与之有关的其他疾病为进行性核上麻痹、多发性硬化、海绵状脑病、帕金森氏病、HIV相关性痴呆病、ALS (肌萎缩性侧索硬化症)、成年型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性；内分泌肿瘤以及其他疾病，包括眼部病症，如黄斑变性。尽管这些疾病的病理发生可以是多样的，但是它们的特征性沉积通常含有多种共有的分子成分。在显著的程度上，这可以归因于促炎途径的局部激活作用，其借此导致激活的补体组分、急性期反应物、免疫调节剂及其他炎性介体的同时沉积(McGeer等人，1994)。阿尔茨海默病(AD)是神经障碍，其被认为主要是通过作为蛋白质异常沉积在脑中的累积的淀粉状斑所引起的。在受影响的个体的脑中所发现的最常见的淀粉样蛋白类型主要是由Αβ纤丝组成的。科学证据显示在斑中β_淀粉样蛋白的产生和积累的增加导致神经细胞死亡，这有助于AD的发生和发展。反过来，策略性脑区域中神经细胞的损失导致神经递质的减少和记忆损伤。主要负责斑块形成的蛋白质包括淀粉样蛋白前体蛋白(APP)和两种早老素(早老素I和早老素II)。在大多数细胞中通过酶β和Y分泌酶组成性表达和分解代谢的淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的连续分解导致39至43位氨基酸Aβ肽的释放。APP的降解作用有可能提高它们在斑块中聚集的倾向。特别地，由于处于其C末端的两个极疏水性氨基酸残基，Αβ (1-42)片段具有较高的形成均聚物的倾向。因此，据信Aβ (1-42)片段主要参与并负责在AD中引起神经炎性斑块形成，并因此具有较高的病理潜能。因此，需要在AD患者中预防淀粉状斑和/或已有弥散性斑形成的治疗剂。具体地，需要能够抵制所述疾病生理表现的试剂，所述生理表现如与淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样肽的纤维的聚集有关的斑块形成。对β-淀粉样蛋白的被动免疫已成为AD治疗性治疗的日益所期望的策略。已在转基因AD动物模型中证明了被动免疫的有效性，其中抗Ab疗法已显示降低了斑块负荷并逆转了行为缺陷。尽管克服了作为使用Ab的自动免疫风险的细胞毒性T细胞的超激活作用，但被动免疫仍具有Fg受体介导的小神经胶质细胞的过度激活和补体激活的风险，这可能有助于不适当的促炎反应和血管源性水肿。已在(例如)2007年6月21日公开的WO 2007/068412 ;2008年5月22日公开的 TO 2008/060364 ；2007 年 6 月 21 日公开的 W 2007/068412 ；2007 年 6 月 21 日公开的WO 2007/068412 ;2007 年 6 月 21 日公开的 W02007/068412 ;2007 年 6 月 21 日公开的 WO2007/068412 ；2008 年 12 月 24 日公开的 WO 2008/156621 ；2008 年 12 月 24 日公开的 WO2008/156621 ;2008年12月24日公开的WO 2008/156621 (另外参见表2)中描述了抗淀粉样蛋白β抗体。在使用抗β淀粉样蛋白抗体的淀粉样变性(如AD)患者的治疗期间所观察到的副作用包括炎症性副作用，如脑膜炎和脑膜脑炎，以及脑中的液体积累(脑水肿)。需要减少或消除与淀粉样变性有关的并发症的疗法。
3.

发明内容
本发明所述的新型组合物和方法为淀粉样变性如阿尔茨海默病(AD)的被动免疫疗法提供了更安全的治疗性替代选择。本发明部分基于以下发现:与先前已知的Αβ单克隆抗体(mAb)治疗剂相比，抗Αβ抗体具有有效的中和能力和降低的效应子功能，其降低Αβ毒性并同时避免了有害的副作用。尤其是，发明人发现被称为MABT的IgG4同种型的人源化抗Αβ单克隆抗体(mAb)能降低小神经胶质细胞的Fcy-受体介导的过度激活的风险并且避免补体激活。MABT与多种形式的Aβ 1-42和Αβ 1-40高亲合力结合，保护不受Αβ 1-42寡聚体诱导的细胞毒性，调节小神经胶质细胞对神经毒性A β的体外和体内吸收。当与含有相同抗原结合可变结构域并且对Αβ具有相同结合亲和力的人IgGl野生型亚型相比时，MABT表现出小神经胶质细胞中降低的胁迫激活的ρ38有丝分裂原激活的蛋白激酶(Ρ38ΜΑΡΚ)的激活作用，并且诱导促炎介体的较少释放。
本发明还部分基于小神经胶质细胞中ρ38ΜΑΡ激酶对AD中抗Αβ抗体介导的神经保护的激活的意外作用。通常认为Ρ38ΜΑΡ激酶活性是促炎性的并因此将认为会有助于淀粉样变性(如AD)的病原性炎症状态。然而，出人意料的是，小神经胶质细胞中的中间体Ρ38ΜΑΡ激酶的激活有助于抗A β抗体介导的神经保护而不会产生病原性炎症状态。本文提供了用于淀粉样变性的安全治疗和/或预防的方法和组合物，所述淀粉样变性包括，但不限于阿尔茨海默病。淀粉样变性包括但不限于神经障碍，如阿尔茨海默病(AD)、路易体痴呆症、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛型肌萎缩侧索硬化-帕金森综合征-痴呆复合征(the Guam Parkinson-Dementia complex)以及基于淀粉样蛋白样蛋白质或与之有关的其他疾病，如进行性核上麻痹、多发性硬化、海绵状脑病、帕金森氏病、HIV相关性痴呆病、ALS (肌萎缩性侧索硬化症)、成年型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤和其他疾病，其包括眼部病症，如黄斑变性、皮层视觉障碍、青光目艮、视神经玻璃疣、视神经病、视神经炎、白内障、眼部淀粉样变性和角膜网状营养不良。尤其是，本文提供了具有已被选择或修饰以触发小神经胶质细胞中P38MAP激酶的中间体激活的效应区的抗Αβ抗体。本文还提供了用于淀粉样变性(包括但不限于阿尔茨海默病)的治疗和预防的方法，其中选择了剂量和/或给药方案从而使得Ρ38ΜΑΡ激酶在小神经胶质细胞中以中等水平激活。在具体的实施方式中，安全和功能性的抗Αβ抗体具有IgG4抗体的效应区。在某些更具体的实施方式中，安全和功能性的抗Αβ抗体具有IgG4抗体的CH2区。 在某些具体的实施方式中，P38MAP激酶激活作用的中等水平是高于仅有毒性β -淀粉样蛋白寡聚体的Ρ38ΜΑΡ激酶激活作用水平但低于IgGl抗A β抗体与毒性β -淀粉样蛋白寡聚体共同的Ρ38ΜΑΡ激酶激活作用水平的水平。在某些实施方式中，修饰抗Αβ抗体的效应区从而降低了其效应子功能。在某些实施方式中，所述修饰可以是导致氨基酸取代和/或缺失的任何遗传变化。进一步提供了用于改善抗A β抗体安全性的方法。在一种实施方式中，提供了改善非IgG4抗Αβ抗体的安全性的方法,包括用来源于IgG4抗体的恒定区替代所述非IgG4抗Αβ抗体的恒定区。在另一种实施方式中，提供了改善非IgG4抗Αβ抗体的安全性的方法，包括用来源于非IgGl抗体的恒定区替代所述非IgG4抗体的恒定区。一种具体的实施方式中，用于改善非IgG4抗β-淀粉样蛋白抗体的安全性的方法是用于改善IgGl抗Αβ抗体的安全性。本文还提供了基于细胞培养物的测定系统，以测试抗Αβ抗体治疗和/或预防淀粉样变性(包括但不限于阿尔茨海默病)的安全性和功能性。在某些实施方式中，将小神经胶质细胞与毒性淀粉样蛋白寡聚体和测试抗Aβ抗体一起培育。小神经胶质细胞中抗Αβ抗体介导的β淀粉样蛋白的吸收表明了所述抗体在例如介导β淀粉样蛋白的清除中的功能性。小神经胶质细胞中抗A β抗体介导的p38 MAP激酶激活作用的中等水平表明抗体是功能性的和安全的。在某些实施方式中，P38 MAP激酶激活作用的中等水平是高于仅有毒性β-淀粉样蛋白寡聚体的p38 MAP激酶激活作用水平但低于具有野生型(即，未修饰的IgGl恒定区)的效应子功能水平的IgGl抗Αβ抗体的p38 MAP激酶激活作用水平的水平。这种基于细胞培养物的测定系统可以用于测试抗Αβ抗体保护神经元不受Αβ的神经毒性影响的能力。另外，这种基于细胞培养物的测定系统可以用于测试抗Αβ抗体以中等水平触发p38 MAP激酶激活作用的能力。在某些实施方式中，所述基于细胞培养物的测定系统还包括神经元。神经元与毒性β_淀粉样蛋白寡聚体、测试抗Αβ抗体和小神经胶质细胞的共培育的存活率表明了测试抗Αβ抗体的功能性。在某些实施方式中，所述基于细胞培养物的测定系统是原代皮层细胞培养物。所述原代皮层细胞培养物与毒性β_淀粉样蛋白寡聚体和测试抗Aβ抗体一起培育。小神经胶质细胞中抗Αβ抗体介导的β淀粉样蛋白的吸收表明了抗体在(例如)介导β淀粉样蛋白清除中的功能性。小神经胶质细胞中抗Αβ抗体介导的p38 MAP激酶的中等水平的激活作用表明了抗体的功能性和安全性。本文还提供了用于淀粉样变性的治疗和/或预防的功能性抗体，所述淀粉样变性包括但不限于阿尔茨海默病。在某些实施方式中，与Αβ结合的非IgG4人源化抗体的可变区与人IgG4抗体的恒定区结合。在其他实施方式中，与Αβ结合的IgGl人源化抗体的可变区与人IgG4抗体的恒定区结合。在某些实施方式中，用人IgG4抗体的CH2区替代与Αβ结合的非IgG4人源化抗体的CH2区。在其他实施方式中，用人IgG4抗体的CH2区替代与Αβ结合的IgGl人源化抗体的CH2区。在某些实施方式中，所述恒定区的恒定区来源于IgGl抗体，其中修饰所述IgGl抗体的恒定区从而使得所述修饰的恒定区具有降低或消除的效应子功能。在其他实施方式中，提供了治疗和/或预防淀粉样变性(包括但不限于阿尔茨海默病)的方法，其中将IgGl抗Αβ抗体与抗炎剂联合给药从而使p38 MAP激酶在小神经胶质细胞中以中等水平被激活。在某些具体的实施方式中，P38MAP激酶激活作用的中等水平是高于仅有毒性β -淀粉样蛋白寡聚体的Ρ38ΜΑΡ激酶激活作用的水平但低于在仅存在寡聚体而无抗炎剂的情况下具有正常水平的效应子功能的IgGl抗Αβ抗体的ρ38ΜΑΡ激酶激活作用的水平的水平。3.1 术语如本文所使用的，术语“多肽”、“肽”和“蛋白”是可互换的并且定义以表示由氨基酸通过肽键连接的生物分子。如本文所使用的，术语“一个”和“所述”定义以表示“一个或多个”并且除非在不适合的情况下，否则包含复数。术语“淀粉样变性”是指由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质所引起的或与之有关的一组疾病和病症，并且其包括但不限于由处于单体、纤丝或聚合物状态的或所述三种状态的任意组合的淀粉样蛋白样蛋白质的存在或活性所引起的疾病和病症，其包括通过淀粉状斑所引起的。这些疾病包括但不限于继发性淀粉样变性和年龄有关的淀粉样变性，如疾病，其包括但不限于神经障碍，如阿尔茨海默病(AD)，以认知性记忆能力丧失为特征的疾病或病况，例如轻度认知障碍(MCI)、路易体痴呆症、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛型帕金森综合征-痴呆-肌萎缩侧索硬化复合征和基于淀粉样蛋白样蛋白质或与之有关的其他疾病，如进行性核上麻痹、多发性硬化、海绵状脑病、帕金森氏病、HIV相关性痴呆病、ALS (肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年型糖尿病、内分泌肿瘤和老年性心脏淀粉样变性；和多种眼部疾病，其包括黄斑变性、脉络膜小疣相关性视神经病和由于淀粉样蛋白沉积的白内障。如本文所使用的，术语“检测”表示使用用于检测生物分子的已知技术(如免疫化学或组织学方法)并且是指定性或定量确定研究中生物分子的存在或浓度。“淀粉样蛋白β ”、“Αβ ”或“β_淀粉样蛋白”是本领域承认的术语并且是指淀粉样蛋白β蛋白和肽及其修饰、片段和任何功能等价物，其可以通过淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的蛋白水解破裂产生并且包括涉及淀粉样蛋白病理学或与之有关的那些APP片段，其包括(但不限于)Αβ 1-38, Aβ 1-39, Aβ 1-40, Aβ 1_41、Αβ 1-42 和 Αβ 1-43

如上所述的淀粉样蛋白β肽的结构和序列对于本领域的技术人员是公知的并且在例如 Glenner 和 Wong, Biochem Biophys Res Comml29, 885-890 (1984)中描述了产生所述肽或从脑和其他组织中提取它们的方法。此外，淀粉样蛋白β肽还是以多种形式可商购的。术语“分离的”表示不含至少一些与其天然存在的组分的生物分子。如本文所使用的，术语“抗体”是本领域承认的术语并且应理解为表示与已知抗原结合的分子或分子的活性片段，并且与术语“免疫球蛋白”或“免疫球蛋白分子”和免疫球蛋白分子的免疫活性部分(即，含有特异性结合抗原的结合位点的免疫球蛋白部分)可互换使用。免疫球蛋白是包含基本上由免疫球蛋白K和λ、α、Υ、δ、ε和μ恒定区基因以及种种免疫球蛋白可变区基因所编码的一个或多个多肽的蛋白质。轻链分为K或λ。重链分为Y、μ、α、δ或ε，其反过来分别定义了免疫球蛋白类型IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。还已知重链的亚型。例如，人中的IgG重链可以是任何IgGl、IgG2、IgG3和IgG4亚型。如本文所使用的，与抗体有关的“特异性结合”表示抗体以比对结构不同的抗原更大的亲合力与其靶标抗原结合。已知典型的免疫球蛋白结构单元包含四聚物。每个四聚物由相同的两对多肽链组成，每对具有一条“轻”链(约25kD)和一条“重”链(约50-70kD)。每条链的N末端定义了主要负责抗原识别的约100至110个或更多个氨基酸的可变区。术语可变轻链(VL)和可变重链(VH)分别表示轻链和重链的这些部分。抗体作为全长的完整抗体存在或者作为通过用多种肽酶或化学试剂酶切消化所产生的多个良好鉴定的片段存在。因此，例如，胃蛋白酶酶切消化铰链区中二硫键以下的抗体以产生f (ab’)2，即本身是通过二硫键结合到VH-CHl上的轻链的Fab的二聚物。可以在温和条件下还原f(ab’)2以断裂铰链区中的二硫键，借此将f(ab’)2 二聚物转化为Fab’单体。Fab’单体主要是具有部分铰链区的Fab片段(有关其他抗体片段更详细的描述，参见，Fundamental Immunology, W.Ε.Paul 编著，Raven Press, N.Y.(1993))。尽管就完整抗体的酶切消化而言定义了多种抗 体片段，但是本领域的技术人员将理解可以通过化学方法或通过使用重组DNA方法从头合成任意多种抗体片段。因此，如本文所使用的术语抗体还包括通过完整抗体的修饰所产生的或从头合成的抗体片段或者通过使用重组DNA方法获得的抗体和片段。术语“抗体”包括单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、猴源化抗体、人抗体和人源化抗体及它们的其活性片段。与已知抗原结合的分子的活性片段的实例包括分离的轻和重链、Fab、Fab/c、Fv、Fab’和f (ab’)2片段，其包括Fab免疫球蛋白表达文库中的产物和如上所述的任何抗体和片段的表位结合片段。可以通过多种技术获得这些活性片段。例如，可以用酶(如胃蛋白酶)切割单克隆抗体并进行HPLC凝胶过滤。然后，可以收集含有Fab片段的适合部分并通过膜过滤等浓缩。有关抗体活性片段分离的一般技术的进一步说明，参见，例如，Khaw, B.A.等人,J.Nucl.Med.23:1011-1019 (1982) ；Rousseaux 等人，Methods Enzymology, 121:663-69, Academic Press,1986。重组制备的抗体可以是常规全长抗体、已知来源于蛋白水解酶切消化的活性抗体片段、独特的活性抗体片段(如Fv或单链Fv (scFv))、结构域缺失抗体等。Fv抗体的大小为约50kd并且包含轻链和重链的可变区。单链Fv (“scFv”)多肽是共价连接的VH::VL杂二聚物，其可以由包含直接连接或通过肽编码接头连接的VH-和VL-编码序列的核酸所表达。参见 Huston 等人，(1988)Proc.Nat.Acad.Sc1.USA, 85:5879-5883。多种结构用于将天然聚集的但化学分离的轻和重多肽链从抗体V区转化为将折叠成与抗原结合位点的结构基本类似的三维结构的scFv分子。参见，例如，美国专利N0.5，091, 513,5, 132，405和4，956，778。结合位点是指参与抗原结合的抗体分子的部分。通过重链(“H”)和轻链(“L”)的氨基末端可变(“V”)区的氨基酸残基形成了抗原结合位点。抗体可变区包括三种称为“高变区”或“互补决定区”(CDR)的高度分歧的延伸，其插入到被称为“框架区”(FR)的更保守的侧翼延伸之间。在抗体分子中，轻链的三种高变区(IXDR1、IXDR2和IXDR3)和重链的三种高变区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)在三维空间中彼此相对布置以形成抗原结合面或口袋。因此，抗体结合位点代表组成抗体CDR的氨基酸和组成结合位点口袋的任何框架残基。可以使用本领域中熟知的方法确定组成结合位点的特定抗体中氨基酸残基的类型。例如，可以将抗体⑶R鉴别为最初由Kabat等人所定义的高变区(参见，"Sequencesof Proteins of Immunological Interest, 〃E.Kabat 等人，U.S.Department ofHealth and Human Services;Johnson, G and ffu,TT (2001)Kabat Database and itsapplications: future directions.Nucleic Acids Research, 29:205-206;http://immun0.bme.nwa.edu)。还可以将⑶R的位置鉴别为最初由Chothia等人所描述的结构性环结构(参见，Chothia and Lesk, J.Mol.Biol.196，901 (1987)，Chothia 等人，Nature342, 877 (1989)和 Tramontano 等人，J.Mol.Biol.215，175 (1990))。其他方法包括作为Kabat和Chothia之间的折中的“AbM定义法(AbM definition)”并且它是使用牛津分子 AbM 抗体模型软件(Oxford Molecular’s AbM antibody modeling software,现为 Accelrys)获得的，或者 Macallum 等人(“Antibody-antigen interactions:contactanalysis and binding site topography,，，J Mol Biol.1996 Oct 11; 262 (5): 732-45)的CDR “接触定义法(contact definition)”。嵌合抗体是其中所述抗体的一个或多个区域来自于来源于第一生物种的抗体并且所述抗体的一个或多个区域来自于来源于第二不同生物种的抗体那些抗体。在一种实施方式中，嵌合抗体是包括来自灵长类免疫球蛋白的区域的抗体。通常应理解用于人临床使用的嵌合抗体具有来自非人动物(例如，啮齿动物)的可变区和来自人抗体的恒定区。相反，人源化抗体使用来自非人抗体的CDR和来自人抗体的大部分或全部可变框架区和全部恒定区。通常应理解人嵌合抗体具有来自啮齿动物抗体的可变区。典型的人嵌合抗体具有人重链恒定区和人轻链恒定区以及来源于啮齿动物抗体的重链和轻链可变区。嵌合抗体可以包括对人恒定区的天然氨基酸序列和天然啮齿动物可变区序列的一些改变。可以通过本领域中公知的方法(包括CDR接枝法)制备嵌合和人源化抗体(参见，例如，美国专利N0.5,843，708 ;6，180，370 ;5，693762 ;5，585,089 ；5, 530, 101 )、链更替策略(参见，例如，美国专利 N0.5，565，332 ；Rader 等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA (1998) 95:8910-8915)、分子模型策略(美国专利N0.5，639，641)等。对于两条或更多条链抗体来说，如本文所使用的“人源化抗体”是其中至少一条链是人源化的抗体。人源化抗体链具有其中一个或多个框架区为人的可变区。单链的人源化抗体是其中所述链具有其中一个或多个框架区为人的可变区的抗体。人源化抗体链的可变区的非人部分或其片段来源于非人来源， 具体地，非人抗体，通常为啮齿动物来源的。非人来源对人源化抗体的作用通常以至少一个CDR区的形式提供，所述CDR区布置在来源于一个(或多个)人免疫球蛋白的框架区之间。另外，可以改变框架支持残基(frameworksupport residue)以保持结合亲合力。“人源化抗体”还可以包含恒定区(例如，对于轻链来说至少一个恒定区或其部分，和在一些实施方式中，对于重链来说三个恒定区)。如果存在，人源化抗体的恒定区通常为人来源的。获得人源化抗体的方法对于本领域的技术人员来说是公知的。(参见，例如，Queen 等人,Proc.Natl Acad SciUSA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson 等人,Bio/Technology, 9:421 (1991))。还可以通过能够在大型动物(例如，兔和小鼠)中产生亲合力成熟的人样多克隆抗体的新型基因工程方法获得人源化抗体。参见，例如，美国专利N0.6，632，976。如本文所使用的，术语“恒定区”或缩写“CR”是指免疫球蛋白的恒定区基因。所述恒定区基因编码赋予效应子功能的抗体分子部分。用人恒定区取代嵌合人抗体和人源化抗体，通常非人(例，鼠类)恒定区。本文提到的嵌合或人源化抗体的恒定区通常来源于人免疫球蛋白。重链恒定区可以选自以下五种同种型中的任一种、δ、ε、Υ或μ。另外，各种亚型的重链(如IgG的重链亚型)负责不同的效应子功能并因此通过选择所需的重链恒定区可以产生具有所需效应子功能的抗体。可以在本发明的范围内使用的恒定区为Yl(IgGl)，具体地，Y I (IgGl)同种型、γ3 (IgG3)并且特别是y 4 (IgG4)的Fe区，所述轻链恒定区可以是K或λ型，优选K型。在一种实施方式中，所述轻链恒定区是人K恒定链(Heiter等人，(1980) Cell22:197-207)并且恒定重链是人IgG4恒定链。术语“单克隆抗体”在本领域中也是公知的，并且是指作为单个克隆抗体产生细胞的产物的抗体。通常通过将常规的短寿命的产生抗体的B细胞融合至快速生长细胞(如癌细胞(有时称为“永生”细胞))来制备单克隆抗体。所得的杂交细胞或杂交瘤快速增殖，从而获得了产生抗体的克隆。出于本发明的目的，“单克隆抗体”还应理解为包含通过尚未达到完全单克隆性的母本克隆所产生的抗体。根据本发明所述的抗体可以是免疫球蛋白或抗体，其将理解为其每个结合位点都是相同的(如果为多价)，或者作为另外一种选择，可以是双重特异性抗体或多重特异性抗体。“双重特异性”或“双功能抗体”是具有两个不同的重链/轻链对和两个不同的结合位点的人工杂交抗体。可以通过多种方法(包括杂交瘤融合或Fab’片段连接)产生双重特异性抗体。参见，例如，Songsivilai & Lachmann, Clin.Exp.1mmunol.79:315-321 (1990)；Kostelny等人，J.1mmunol.148，1547-1553(1992)。“多重特异性”或“多功能抗体”是具有两对以上不同的重链/轻链对和两个以上不同的结合位点的人工杂交抗体。可以使用与双重特异性抗体相同的多种方法产生多重特异性抗体。术语“片段”是指包含比完整或完全抗体或抗体链更少的氨基酸残基的抗体或抗体链部分。可以通过完整或完全抗体或抗体链的化学或酶促处理获得片段。还可以通过重组方法获得片段。示例性片段包括Fab、Fab’、F (ab’)2、Fabc和/或Fv片段。术语“抗原结合片段”是指结合抗原或与完整抗体(即它们所来源的完整抗体)竞争抗原结合(即特异性结合)的免疫球蛋白或抗体的多肽片段。可以通过重组DNA技术，或通过完整免疫球蛋白的酶促或化学切割产生结合片段。结合片段包括Fab、Fab’、F (ab’)2、Fabc、Fv、单链和单链抗体。“片段”还是指包含另一个多肽的氨基酸序列的至少5个连续氨基酸残基、至少10个连续氨基酸残基、至少15个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个连续氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少100个连续氨基酸残基、至少125个连续氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基、至少200个连续氨基酸残基、至少250个连续氨基酸残基的氨基酸序列的肽或多肽。在具体的实施方式中，多肽片段保留了所述多肽的至少一种功能。术语“抗原”是指可以结合至抗体的实体(entity)或其片段。免疫原是指可以在生物(具体地，动物，更具体地，哺乳动物，包括人)中引起免疫应答的抗原。术语抗原包括被称为抗原决定簇的区域或表示负责抗原性的抗原部分(其是接触的或者其在支持所述抗原中所存在的接触中起显著作用)的表位。如本文所使用的，术语“可溶的”表示在水溶液中部分或完全溶解的能力。还如本文所使用的，术语“免疫原性的”是指引起针对免疫原抗原的抗体、T细胞及其他反应性免疫细胞的产生的物质。如本文所使用的术语免疫原性是指当施用于受体时，抗原引起免疫应答(体液或细胞)的能力的量度。当个体针对所施用的本发明的免疫原性组合物产生足够的抗体、T细胞及其他反应性免疫细胞以缓解或减轻待治疗病症时，发生免疫应答。具有“降低的免疫原性”的人源化抗体是指相对于亲本抗体(例如，鼠抗体)表现出降低的免疫原性的人源化抗体。“基本保留了 亲本抗体的结合性能”的人源化抗体是指保留了特异性结合用于产生该人源化抗体的亲本抗体所识别的抗原的能力的人源化抗体。在一些实施方式中，人源化抗体将显示出与亲本抗体相同或基本相同的抗原结合亲和力(affinity)和亲合力(avidity)。在某些实施方式中，抗体的亲和力将不小于亲本抗体亲和力的10%,不小于亲本抗体亲和力的约30%或不小于亲本抗体亲和力的50%。用于测定抗原结合亲和力的方法在本领域中是公知的并且包括半最大结合测定、竞争测定和斯卡查德分析。在本专利申请中描述了适合的抗原结合测定。如本文所使用的，“保守变化”是指基本上构象或抗原性中性的变化，从而与天然蛋白质相比，分别在突变体多肽的三级结构中产生最小的变化或在突变体多肽的抗原决定簇中产生最小的变化。当提及本发明所述的抗体和抗体片段时，保守变化是指不会使所述抗体不能与本主题受体结合的氨基酸取代。本领域那些技术人员将能够预测在维持作为构象和抗原性中性的较高概率的同时可以做出的氨基酸取代。例如，在Berzofsky, (1985)Science229:932940 和 Bowie 等人，(1990) Science247:13061310 中提供了这种指导。需要考虑的影响维持构象和抗原性中性的概率的因素包括(但不限于):(a)疏水性氨基酸的取代不太可能影响抗原性，这是因为疏水性残基更可能位于蛋白质内部；(b)生理化学相似的氨基酸的取代不太可能影响构象，这是因为取代的氨基酸在结构上模拟天然氨基酸；(c)进化保守序列的改变可能会不利地影响构象，因为这种保守表明氨基酸序列可以具有功能重要性。本领域的技术人员将能够使用熟知的测定评价蛋白质构象的变化，如，但不限于，微量补体结合法(Wasserman 等人,(1961) J.1mmunol.87:290295 ；Levine 等人,(1967)Meth.Enzymol.11:928936)和使用构象依赖性单克隆抗体的结合研究(Lewis等人，(1983)Biochem.22:948954)。术语“治疗功能性的量”是指当向人或动物给药时，足以在所述人或动物中导致产生治疗效果的抗体的量。本领域的技术人员按照常规程序能够容易地确定功能性的量。如本文所使用的，术语“治疗”和“预防”是指在受试者中由于预防剂或治疗剂的施用所导致的病症的一种或多种症状的复发或发生的预防。

在抗β淀粉样蛋白抗体的情况下，“安全和功能性的量”是指当施用给阿尔茨海默病患者时，抗β淀粉样蛋白抗体的量在该患者中减少或预防新的淀粉状斑的形成，减少该患者中淀粉状斑的负荷和/或减少或预防该患者认知能力的恶化或改善该患者的认知能力，并且其中未观察到副作用，如炎症副作用，例如，脑膜炎和脑膜脑炎，并且未观察到脑中的液体积累(脑水肿)或者其中任何副作用均未严重到必须中断患者治疗的程度。在某些实施方式中，相对于未处理的对照，新的淀粉状斑的形成减少了至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%或100%。在某些实施方式中，相对于未处理的对照，淀粉状斑的负荷减少了 至少 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99% 或 100%。在某些实施方式中，相对于未处理的对照，所述患者认知能力的恶化减少了至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%或100%。在某些实施方式中，相对于未处理的对照，所述患者的认知能力改善了至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99% 或 100%ο术语“非IgGl抗体”是指具有以下同种型IgA、IgD、IgE、IgG和IgM之一的任何恒定区的抗体，除了非IgGl抗体不具有保留其野生型效应子功能的IgGl恒定区。在具体的实施方式中，非IgGl抗体是IgG4抗体。在其他具体的实施方式中，非IgGl抗体具有来源于已突变从而使所得抗体的效应子功能相对于野生型IgGl抗体降低或消除的IgGl抗体的恒定区。 在p38MAP激酶激活作用的情况下，术语“中等水平”是指高于在不存在人源化非IgGl抗β淀粉样蛋白抗体的情况下的ρ38ΜΑΡ激酶激活作用水平但低于在存在相同浓度的IgGl抗β淀粉样蛋白抗体的情况下的ρ38ΜΑΡ激酶激活作用水平的ρ38ΜΑΡ激酶激活作用水平，所述IgGl抗β淀粉样蛋白抗体以与人源化非IgGl抗β淀粉样蛋白抗体相同的Kd与β淀粉样蛋白结合。
4.


本专利或专利申请文件包含至少一幅彩图。通过索取并付出必要的费用，办公室将提供带有彩图的本专利或专利申请公开的副本。图1提供了对应于实施例6.1和6.2中所述的实验的图和免疫组织化学图片。抗Αβ MABT单克隆抗体以高亲合力与不同的Αβ肽结合并且具有抗聚集体性能。将Αβ ELISA用于比较与人和鼠Αβ 1-42和人Αβ 1-40结合的mMABT (A)和MABT (B)。还测试了 MABT与不同的A β 1-42组装状态(C)的结合。MABT结合存在于来自转基因APP小鼠的脑切片(D上半部分)和人AD颞叶神经皮层切片(D下半部分)中的Αβ斑。通过MABT阻止Aβ 1-42聚集并且掩饰预先形成的A β 1-42聚集物的能力显示了体外功能性。在ThT基测定中使用10:1的摩尔比(Α β 1-42比单克隆抗体)证明了 Αβ 1-42聚集的抑制和预先形成的A β 1-42聚集物的解聚(Ε)。作为对照，使用了具有N-末端表位的抗A PIgG单克隆抗体。结果显示了三个独立实验的平均值(±SD)。*P〈0.05，#P〈0.01。还在A β 1-42自组装测定中测试了 ΜΑΒΤ，一旦与多聚体A β组装物结合，则所述测定不依赖于ThT荧光，如方法中所述(F)。显示了两个测定的平均值(土SEM)。图2提供了对应于实施例6.3中所述的实验的图和免疫组织化学图片。MABT抑制原代混合皮层培养中A β 1-42寡聚体的细胞毒性。用具有或不具有100 μ g/mL MABT或IgG对照单克隆抗体的2.5μ M或5μ M Αβ 1-42寡聚体处理来自Pl大鼠的混合皮层细胞。如方法一节中所述，使用MTT测定确定细胞存活力。显示了五个独立实验的平均值(土SEM)。*Ρ〈0.05，**Ρ〈0.01。在类似的测定(但以测量ATP产生作为代谢活性的标志物)中，用具有或不具有200 μ g/mL MABT的10 μ M A β 1_42寡聚体处理细胞(B)。结果显示了两个独立测定的平均值(土SEM)。通过形态分析测试了延长的A β 1-42寡聚体处理后的神经毒性(C)。用具有或不具有50 μ g/mL MABT的10 μ M A β 1_42寡聚体处理如上的细胞4天，然后用TuJl和DAPI染色。图3提供了对应于实施例6.4中所述的实验的图和免疫组织化学图片。抗Αβ IgG4单克隆抗体降低了 Αβ 1-42寡聚体与轴突的结合。将来自Pl大鼠的混合的皮层细胞用具有或不具有100 μ g/mL MABT或IgG对照的2 μ MA β 1-42寡聚体处理30分钟(已显示)或18小时(未示出)。附图从左至右显示了:使用缓冲对照、A β 1-42寡聚体以及A β 1-42寡聚体结合MABT的处理(A)。将DAPI用于标记细胞核；将抗神经元特异性微管蛋白的抗体TuJl用于标记神经元；并且将抗A β抗体(克隆6Ε10)用于标记β-淀粉样蛋白。底端行显示了所有三种标志物，而顶行仅显示A β和DAPI。两幅插图显示了 Αβ 1-42寡聚体与轴突(左)的结合以及MABT单克隆抗体对这种结合的抑制(右)。示出了 30分钟处理和18小时处理的荧光定量测量(B)。显示了两个实验的平均结果(土SEM)。用HyLite Fluor_488标记的Αβ 1-42验证了 MABT抑制Αβ 1-42与轴突的结合。除了使用了用HyLiteFluor-488标记的Αβ 1-42以外，如对(A)所述的，处理了来自Pl大鼠的皮层培养(C)。在上半部分显示了Αβ 1-42标记的样品，而在下 半部分显示了 DAPI染色的样品。示出了一个代表性实验。用所示出的两个独立实验的平均值(土SD)定量Αβ 1-42荧光(D)。如方法(C)中所述的，通过在胰蛋白酶消化的细胞上对A β 1-42进行ELISA测定了 Αβ 1-42的胞内累积。显示了三个实验的平均结果(土 SEM)。一旦用MABT处理，A β 142寡聚体似乎被与小神经胶质细胞类似的细胞吸收，如(F)中所示。将DAPI用于标记细胞核；并且将抗Αβ抗体用于标记β-淀粉样蛋白。图4提供了对应于实施例6.5中所述的实验的图和共聚焦图片。一旦MABT处理，通过FcR介导的机制，将Αβ 1-42寡聚体吸收到小神经胶质细胞中。将共聚焦图片用于显示与MABT复合的Αβ 1-42寡聚体被吸收到小神经胶质细胞中。DAPI用于标记细胞核以显示小神经胶质细胞本身；并且将抗Αβ抗体用于标记Αβ 1-42寡聚体(Α)。从通过Z堆叠(Z-stacks)呈现的立体图像中获得了顶端-至-远端的切片。如在实施例部分中材料和方法下所述的，对标记了 Αβ (外周)并且用DAPI染色(中心)的混合皮层细胞进行了共聚焦成像。鉴别了小神经胶质细胞并通过代表胞内位置的一系列共聚焦堆叠对小神经胶质细胞扫描最大荧光强度(B)，并且定量了高于最小阈值的荧光信号的总面积(C)。该图上的每个标记代表单个细胞内染色的A β的总面积。对于每个处理条件，分析了最少20个细胞。使用单向ANOVA并随后通过图基(Tukey)事后多重比较来比较数据。显示了平均值(土SEM)。验证了小神经胶质细胞(Ibal+)作为吸收与MABT复合的Αβ 1-42的细胞类型。将Ibal用作小神经胶质细胞的标志物，将HyLiteFluor-488标记的Αβ 1-42用于显示A β 1-42Α,并且将DAPI用于显示细胞核。显示了 Ibal和Αβ 1-42的共定位。通过不同IgG单克隆抗体的Αβ 1-42寡聚体内化与Fe Y R结合相关。在结合测定中验证了与FcYRIIIa-V158的差异结合(E)。抗Αβ单克隆抗体需要Fe Y R结合对Aβ 1-42寡聚体毒性具有完全的保护作用。用具有或不具有 MABT、MABT-1gGl-D265A、MABT-1gGl 或 IgGl 对照 mAb 的 Αβ 142 寡聚体处理来自Pl大鼠的混合的皮层细胞。该图显示了与Αβ 1-42寡聚体处理的细胞相比得自5个独立实验的细胞存活率的平均值(土SEM) %增加。使用单向ANOVA并随后通过图基(Tukey)事后多重比较来进行统计分析。图5提供了对应于实施例6.6中所述的实验的图和免疫组织化学图片。当与Αβ 1-42寡聚体复合时，与对于Aβ 1-42寡聚体处理的小神经胶质细胞所显示的相比，用野生型主链加入IgGl 显著提高了 ρ38激活作用。将来自Pl大鼠的混合的皮层细胞用具有或不具有 100 μ g/mL MABT、MABT_IgGl_D265A 或 MABT-1gGl 野生型的 10 μ M Αβ 1-42 寡聚体处理30分钟。将未与Αβ结合的IgGl单克隆抗体用作对照。如方法(A)中所述，用磷酸特异性ELISA测量ρ38ΜΑΡΚ的活性。显示了 4个独立实验的平均值(土SEM)。使用单向ANOVA并随后通过图基(Tukey)事后多重比较来进行统计分析。使用与单克隆抗体复合的A β 1-42寡聚体的ρ38ΜΑΡΚ的激活作用对小神经胶质细胞特异(B)。如上所述处理细胞，然后用Ibal (小神经胶质细胞)和用DAPI (细胞核)对磷酸Ρ38ΜΑΡΚ染色。附图从左至右显示了:使用缓冲对照、Αβ 1-42寡聚体和具有MABT的Αβ 1-42寡聚体的处理。右侧插图中显示了磷酸Ρ38ΜΑΡΚ和Ibal的共定位。将来自CX3CR1-GFP小鼠的纯化的小神经胶质细胞用于验证小神经胶质细胞特异性ρ38活性(C)。在上半部分中显示了仅对磷酸ρ38的染色，而在下半部分中显示了对CX3CR1-GFP信号(小神经胶质细胞)连同磷酸ρ38 —起的染色。对于MABT对Αβ 1-42寡聚体毒性的完全保护作用来说需要ρ38ΜΑΡΚ活性。在存在或不存在I μ M SB239063 (ρ38特异性抑制剂)的情况下，仅用10 μ M Αβ 1-42寡聚体或使用10 μ M A β 1-42寡聚体连同100yg/ml MABT或MABT_IgGl_D265A处理来自Pl大鼠的混合的皮层细胞(D)。24h后，实施了使用MTT读数的细胞毒性测定。显示了 4个实验的平均值(土SEM)。使用单向ANOVA并随后通过图基(Tukey)事后多重比较来进行统计分析。图6提供了对应于实施例6.6中所述的实验的图。IgGl对Fe Y Rs的高亲合力使其对降低通过小神经胶质细胞的Aβ 1-42介导的促炎释放不太有效。处理24小时后，测量了通过富集的小神经胶质细胞的TNFa释放(参见方法)。示出了 3个独立实验的平均值(土SEM)。使用单向ANOVA并随后通过图基(Tukey)事后多重比较来进行统计分析。图7提供了对应于实施例6.1中所述的实验的图。在APP小鼠模型中出现了降低的斑负荷和改善的非空间记忆。在使用mMABT (小鼠MABT单克隆抗体)的慢性被动免疫后，在APP/PS1双重转基因小鼠中测量了百分比斑负荷(A)和平均斑个数(B)将注射PBS的动物用作对照(PBS)。将硫磺素S (ThS)用于对致密的斑染色(参见方法)。施用mMABT两次后，在单一转基因hAPP突变小鼠中证明了功能性(C)。使用新型物体识别测试(参见方法)研究了作为对回忆的量度的认知指数(RI)将注射PBS的动物用作对照(PBS)。该图上的每个圆圈表示单一小鼠。显示了平均值(土SD)，*P〈0.01。图8提供了对应于实施例6.1中所述的实验的免疫印迹。神经毒性A β 1-42是低分子量和高分子量的寡聚体的混合物。制备了神经毒性A β 1-42寡聚体(参见方法)并用于测定单克隆抗体处理对Aβ 1-42寡聚体介导的神经毒性的影响的体外实验。将Αβ 1-42寡聚体在SDS/PAGE4-12%梯度凝胶上测试，转移到硝化纤维素膜上，并用抗Αβ抗体(克隆6Ε10)印迹。图9提供了对应于实施例6.2中所述的实验的图。针对MABT的中间域抑制A β 1-42与ΑροΕ4的相互作用。使用ELISA评价抗A β N末端(克隆6Ε10和W02)、C末端(克隆G2-11)或中间域(MABT)单克隆抗体对Αβ 1-42与重组人ΑροΕ4结合的影响。显示了无IgG单克隆抗体的信号抑制百分比。图10提供了对应于实施例6.5中所述的实验的图和免疫组织化学图片。当与IgGl野生型相比时，交联的MABT IgG4单克隆抗体具有降低的结合活性。交联的抗APIgGl野生型以与阳性非Αβ结合IgGl对照类似的活性与所有FcR Y受体结合。与MABT-APIgGl和非Αβ结合IgGl阳性对照相比，MABT和MABT-1gGl-D265A与全部Fe y Rs的结合均显著降低。这些发现与对于人IgG4抗体(Gessner等人，1998)和具有D265A突变的IgGl抗体(Shields等人，2001)的发表数据一致。图11提供了用抗β淀粉样蛋白抗体处理的APP/PS1小鼠中的Αβ斑的体内图像。MABT的全身剂量施用体内调节了各个淀粉状斑。用腹膜内注射的甲氧基-Χ04标记APP/PSI动物中的淀粉状斑，通过体内双光子显微镜显像并追踪多个星期(Α)。将斑体积随时间的相对变化作为从初始成像期开始的成倍增加来作图(B)。平均来说，在MABT全身剂量施用后各个斑的体积减小(X斑块，2只动物)。4.1序列说明SEQ ID NO:1MABT人源化重链可变区的氨基酸序列(⑶Rl)SEQ ID NO: 2ΜΑΒΤ人源化重链可变区的氨基酸序列(⑶R2)SEQ ID NO: 3ΜΑΒΤ人源化重链可变区的氨基酸序列(⑶R3)SEQ ID NO: 4ΜΑΒΤ人源化轻链可变区的氨基酸序列(⑶Rl)SEQ ID NO: 5ΜΑΒΤ人源化轻链可变区的氨基酸序列(⑶R2)SEQ ID NO: 6ΜΑΒΤ人源化轻链可变区的氨基酸序列(⑶R3)SEQ ID Ν0:7ΜΑΒΤ人源化轻链可变区的氨基酸序列SEQ ID NO:8ΜΑΒΤ人源化轻链的氨基酸序列SEQ ID NO:9人源化MABT轻链恒定区的氨基酸序列SEQ ID NO: 10ΜΑΒΤ人源化重链可变区的氨基酸序列SEQ ID NO:1lMABT人源化重链的氨基酸序列SEQ ID NO: 12:1G Y _4链C区的氨基酸序列-修饰的SEQ ID NO: 13:MABT人源化重链可变区的⑶R2的核苷酸序列SEQ ID NO: 14:MABT人源化重链可变区的⑶R3的核苷酸序列

SEQ ID NO: 15:MABT人源化轻链可变区的⑶Rl的核苷酸序列SEQ ID NO: 16:MABT人源化轻链可变区的核苷酸序列SEQ ID NO: 17:MABT人源化轻链的核苷酸序列
SEQ ID NO: 18:MABT人源化轻链恒定区的核苷酸序列SEQ ID NO: 19:MABT人源化重链可变区的核苷酸序列SEQ ID NO:20:MABT人源化重链的核苷酸序列SEQ ID NO:21:MABT人源化重链恒定区的核苷酸序列SEQ ID N0:22:HCDR2之前的典型氨基酸序列5.发明详述以下描述了用于测试抗淀粉样蛋白β抗体的基于细胞的测定系统以及使用抗淀粉样蛋白β抗体监测和调节患者治疗的方法。以下还说明了用于测试神经保护性试剂的安全性和效力的细胞基测定系统以及使用神经保护性试剂监测和调节患者治疗的方法。以下还说明了安全和功能性抗体以及使用这类安全和功能性抗体用于治疗阿尔茨海默病的方法。还说明了药物制备和施用形式。5.1细胞基测定系统本文提供了体外基于细胞的测定系统以测试抗体或其他试剂对于淀粉样变性治疗的安全性和功能性。在某些实施方式中，在存在和不存在测试抗体的情况下培育受淀粉样变性(处于其病理形式的淀粉样蛋白)影响的细胞(“靶细胞”)和免疫效应细胞(例如，自然杀伤细胞、巨噬细胞，如小神经胶质细胞、中性粒细胞和肥大细胞)。可以测量以测试抗体的安全性和功能性的参数包括靶细胞的存活率、淀粉样蛋白向免疫效应细胞的内化和免疫效应细胞中Ρ38ΜΑΡ激酶途径的激活作用。在某些实施方式中，安全和功能性的抗体导致最大内化和Ρ38ΜΑΡ激酶途径的中间体激活。在更具体的实 施方式中，所述淀粉样变性为阿尔茨海默病，所述淀粉样蛋白为β淀粉样蛋白，并且所述免疫效应细胞为小神经胶质细胞，并且所述靶细胞为神经元。在具体的实施方式中，所述细胞得自现有的细胞系以产生混合培养物。在其他实施方式中，所述混合细胞培养物为原代皮层培养物(Meberg&Miller2003, Methods Cell Biol71:111-127)。在某些实施方式中，所述混合细胞培养物为来自大鼠、小鼠或黑猩猩的原代皮层培养物。在某些实施方式中，通过来自人患者的皮层活组织检查或脊柱活组织检查获得所述原代皮层培养物。将包括神经元和小神经胶质细胞的混合细胞培养物与β淀粉样蛋白一起培育。在一种实施方式中，作为β淀粉样蛋白寡聚体提供了 β淀粉样蛋白。可以在本测定系统中测量下列参数:(I)可以通过(例如)代谢更新确定神经元存活率，所述代谢更新可以通过(例如)3-[4，5- 二甲基噻唑-2-基]-2，5- 二苯基溴化四氮唑(MTT)的线粒体氧化或ATP释放确定；(2)可以通过(例如)对β淀粉样蛋白的免疫细胞化学或标记和直接测量和/或β淀粉样蛋白的可视化来确定β淀粉样蛋白寡聚体向小神经胶质细胞的内化；和(3)可以通过(例如)对磷酸化的Ρ38ΜΑΡΚ (“磷酸-ρ38”)的ELISA来确定ρ38ΜΑΡΚ途径的激活作用。在某些实施方式中，与在不存在安全和功能性的抗体的情况下的神经元存活率相比，在存在β淀粉样蛋白以及安全和功能性的抗体的情况下神经元存活率提高了至少 10%、20%、30%、40%、50%、75%、100%、125%、150%、175%、200%、225%、250%、275%、300%、325%、350%、375%、400%、425%、450%、475% 或至少 500%。在某些实施方式中，与在不存在安全和功能性的抗体的情况下的内化率相比，在存在安全和功能性的抗体的情况下β淀粉样蛋白向小神经胶质细胞的内化提高了至少 10%、20%、30%、40%、50%、75%、100%、125%、150%、175%、200%、225%、250%、275%、300%、325%、350%、375%、400%、425%、450%、475% 或至少 500%。在某些实施方式中，与存在β淀粉样蛋白但不存在安全和功能性的抗体的情况下的Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用相比，在存在β淀粉样蛋白以及安全和功能性的抗体的情况下小神经胶质细胞中Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用提高了 5%-15% ;10%-20% ；15%-25% ；20%-30% ；35%-45%;40%-50%;或45%-55%。在更具体的实施方式中，与存在β淀粉样蛋白但不存在安全和功能性的抗体的情况下的Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用相比，在存在β淀粉样蛋白以及安全和功能性的抗体的情况下小神经胶质细胞中Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用提高了 10%-30%。此夕卜，在存在β淀粉样蛋白以及安全和功能性的抗体的情况下小神经胶质细胞中Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用增加了比在存在IgGl同种型抗β淀粉样蛋白抗体的情况下激活Ρ38ΜΑΡ激酶小的 5%-15% ；10%-20% ；15%-25% ；20%-30% ；35%-45% ；40%-50% ;或 45%_55%。在某些实施 方式中，培育β淀粉样蛋白的病理形式(例如，寡聚β淀粉样蛋白)、测试抗体和小神经胶质细胞以确定抗体的安全性和功能性。可以在本测定系统中测量下列参数:(I)可以通过(例如)对β淀粉样蛋白的免疫细胞化学或β淀粉样蛋白的标签来确定β淀粉样蛋白寡聚体向小神经胶质细胞的内化；和(2)可以通过(例如)对磷酸-Ρ38的ELISA来确定ρ38ΜΑΡΚ途径的激活作用。为了确定ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用，可以使用本领域的技术人员所知的任何方法。在某些实施方式中，将ELISA、免疫印迹或使用与磷酸化ρ38ΜΑΡ激酶特异性结合的抗体的免疫细胞化学用于确定磷酸化(即激活)的Ρ38ΜΑΡ激酶的水平。在某些实施方式中，通过使用与Ρ38ΜΑΡ激酶特异性结合以确定Ρ38ΜΑΡ激酶的核定位程度的抗体的免疫细胞化学来确定ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用。Ρ38ΜΑΡ激酶核定位程度越高，则ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用水平越闻。在某些实施方式中，可以测量Ρ38ΜΑΡ激酶信号通路中其他组分的激活作用。在某些实施方式中，可以测量Ρ38ΜΑΡ激酶的下游靶标的表达水平以确定Ρ38ΜΑΡ激酶在患者中的激活作用。这些下游靶标包括(但不限于)90kDa核醣体S6激酶(pp90rsk);(RSK)家族:RSKl、RSK2、MNKl/2 和 MSK1/2 ;和核翻译因子，如 Elk_l、ATF2、STAT3 和 CREB。可以通过本领域的技术人员所知的任何方法来确定下游靶标的表达水平，如(但不限于)RNA印迹、免疫印迹或聚合酶链反应。5.2治疗的监测和调节在某些实施方式中，在正用与淀粉样蛋白(如β淀粉样蛋白)特异性结合的安全和功能性的抗体治疗的患者的免疫效应细胞(如小神经胶质细胞)中监测Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用。可以通过本领域的技术人员所知的任何方法从患者获得免疫效应细胞。在具体的实施方式中，通过皮层活组织检查或脊柱活组织检查获得小神经胶质细胞。可以通过本领域的技术人员所知的任何方法将免疫效应细胞维持在培养中。在某些实施方式中，在正用试剂(如神经保护性试剂)治疗的患者的免疫效应细胞(如小神经胶质细胞)中监测Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用。在某些更具体的实施方式中，治疗患者的淀粉样变性，如阿尔茨海默病。在某些更具体的实施方式中，用他克林(COGNEX, MorrisPlains, NJ)、多奈哌齐(ARICEPT，Tokyo, JP)、利凡斯的明(EXELON, East Hanover, NJ)、加兰他敏(REMINYL, New Brunswick, NJ)或美金刚(NAMENDA, NewYork, NY)治疗患者。
在某些实施方式中，对患者调整施用剂量和/或施用方案从而使小神经胶质细胞中p38MAP激酶的激活作用处于中等水平，即，比不存在所述抗体时的更高，但比在存在IgGl抗体的情况下的更低,所述IgGl抗体在存在β淀粉样蛋白寡聚体的情况下与β淀粉样蛋白特异性结合。如果Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用高于中等水平，则降低剂量和/或降低施用频率。如果Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用低于中等水平，则增加剂量和/或提高施用频率。在某些实施方式中，将ρ38ΜΑΡ激酶信号通路的调节剂与安全和功能性的抗体共施用以调节Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用至中等水平。如果ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用高于中等水平，则可以共施用Ρ38ΜΑΡ激酶信号通路的抑制剂。如果Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用低于中等水平，则可以共施用Ρ38ΜΑΡ激酶信号通路的激活剂。Ρ38ΜΑΡ激酶信号通路的示例性抑制剂包括4_ [4_ (4_氟苯基)_5_ (4_吡啶基)-1Η-咪唑-2-基]苯酚(“SB202190”)；4-[5-(4_氟苯基)-2-[4-(甲磺酰基)苯基]-1H-咪唑-4-基]吡啶(“SB203580”);和反式-4- [4- (4-氟苯基)-5- (2-甲氧基-4-嘧啶基)-1H-咪唑-1-基]环己醇(“SB239063”)及它们的可药用衍生物。ρ38ΜΑΡ激酶信号 通路的示例性激活剂包括茴香霉素、MKK、Rac, Cdc42和PAK1、IL-1、IL-1-受体、TNF、LPS、TRAF6 和 TAB1/2。在某些实施方式中，P38MAP激酶的中间激活水平比在不存在安全和功能性的抗体的情况下所述患者的小神经胶质细胞中的P38MAP激酶的激活作用高5%-15% ;10%-20% ；15%-25% ；20%-30% ；35%-45% ；40%-50% ;或 45%_55%。为了确定p38MAP激酶的激活作用，可以使用本领域的技术人员所知的任何方法。在某些实施方式中，将ELISA、免疫印迹或使用与磷酸化p38MAP激酶特异性结合的抗体的免疫细胞化学用于确定磷酸化(即激活)的P38MAP激酶的水平。在某些实施方式中，通过使用与P38MAP激酶特异性结合以确定P38MAP激酶的核定位程度的抗体的免疫细胞化学来确定p38MAP激酶的激活作用。P38MAP激酶核定位程度越高，则p38MAP激酶的激活作用水平越闻。在某些实施方式中，可以测量P38MAP激酶信号通路中其他组分的激活作用。在某些实施方式中，可以测量p38MAP激酶的下游靶标的表达水平以确定p38MAP激酶在患者中的激活作用。这些下游靶标包括但不限于90kDa核醣体S6激酶(pp90rsk)；(RSK)家族:RSKl、RSK2、MNKl/2 和 MSK1/2 ;和核翻译因子，如 Elk-1、ATF2、STAT3 和 CREB0可以通过本领域的技术人员所知的任何方法来确定下游靶标的表达水平，如(但不限于)RNA印迹、免疫印迹或通过(例如)RT-PCR的基因转录本的检测。此外，本文提供了用于评价抗β_淀粉样蛋白抗体对于患者中阿尔茨海默病的治疗的安全性和功能性的方法。在某些实施方式中，小神经胶质细胞可以得自患者。在具体的实施方式中，在开始使用抗β_淀粉样蛋白抗体治疗患者之前可以从所述患者获得小神经胶质细胞。可以使用本领域已知的标准技术将来自所述患者的小神经胶质细胞维持在细胞培养中。在某些实施方式中，将来自所述患者的小神经胶质细胞与抗β淀粉样蛋白抗体和β淀粉样蛋白寡聚体一起培育。可以确定下列参数:抗体淀粉样蛋白复合物与小神经胶质细胞的结合；抗体淀粉样蛋白复合物向小神经胶质细胞的内化；和/或小神经胶质细胞中Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用。
可以通过将来自患者的小神经胶质细胞仅与抗β_淀粉样蛋白抗体(即无淀粉样蛋白寡聚体)；和/或仅与β_淀粉样蛋白寡聚体(即，无所述抗体)；和/或在存在β淀粉样蛋白寡聚体的情况下与IgGl抗β_淀粉样蛋白抗体一起培育来实施对照。在某些实施方式中，如果Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用比在存在β -淀粉样蛋白寡聚体但不存在安全和功能性的抗体的情况下所述患者的对照小神经胶质细胞中的Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用高 5%-15% ；10%-20% ；15%-25% ；20%-30% ；35%-45% ；40%-50% ;或 45%_55%，则抗 β -淀粉样蛋白抗体是安全和功能性的。在某些实施方式中，如果β淀粉样蛋白向小神经胶质细胞的内化比单克隆抗体 MABT 高或低 5%-15% ;10%-20% ；15%-25% ；20%-30% ；35%-45% ；40%-50% ;或45%-55%，则抗β淀粉样蛋白抗体是安全和功能性的(参见第6节)。5.3安全和功能性的抗体在某些实施方式中，可以修饰或替换与待治疗的淀粉样变性的淀粉样蛋白特异性结合的抗体的恒定区以提供安全和功能性的抗体。在某些实施方式中，所得抗体的恒定区以中等活性与免疫效应细胞(如自然杀伤细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和肥大细胞)表面上的Fe受体结合。在某些实施方式中，所得抗体以中等水平激活免疫效应细胞中的Ρ38ΜΑΡΚ途径，即高于不存在所述抗体时的Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用但低于在存在相同浓度的具有相同结合特异性的IgGl抗体的情况下的ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用。在某些实施方式中，还可以修饰互补决定区(“CDR”)之外的可变区以提供安全和功能性的抗体。本文还提供了用于产生该抗体和包含该抗体的药物组合物的方法。通过分别嵌入在抗体轻链和重链的可变区中的互补决定区(“⑶R”)提供抗原结合特异性。围绕可用于本文所提供的安全和功能性的抗体的构建的CDR的抗体恒定区和框架区包括5.3.1节中所述的那些。在某些实施方式中，可用于安全和功能性的抗体的构建的CDR或可变区可以来源于表2中所列的抗体。在某些实施方式中，特异性结合人β淀粉样蛋白的已知抗体的CDR (参见下表2)与人IgG4的恒定区结合并且用人IgG (如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的框架区替换所述抗体的CDR之间的框架区。在某些实施方式中，已知的人源化抗β淀粉样蛋白抗体(例如，巴匹珠单抗(Bapineuzumab)或苏兰珠单抗(Solanezumab))的可变区与人IgG4的恒定区结合 ο5.3.1 恒定区用于产生本文所提供的安全和功能性的抗体的抗体恒定区可以来源于任何同种型，包括IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。在某些实施方式中，用于产生本文所提供的安全和功能性的抗体的抗体恒定区可以来源于亚型IgAl、IgA2、IgGl、IgG2、IgG3和IgG4。类似地，用于产生本文所提供的安全和功能性的抗体的抗体重链区的框架区可以来源于任何同种型，包括IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。在某些实施方式中，用于产生本文所提供的安全和功能性的抗体的抗体框架区可以来源于亚型IgAl、IgA2、IgGl、IgG2、IgG3和IgG4。在具体的实施方式中，用于产生本文所提供的安全和功能性的抗体的恒定区可以来源于同种型IgG。在更具体的实施方式中，用于产生本文所提供的安全和功能性的抗体的恒定区可以来源于同种型IgG4。在具体的实施方式中，用于产生本文所提供的安全和功能性的抗体的框架区可以来源于同种型IgG。在更具体的实施方式中，用于产生本文所提供的安全和功能性的抗体的框架区可以来源于同种型IgG4。在某些实施方式中，安全和功能性的抗体的重链的恒定区是来自不同同种型或亚型的嵌合恒定区。在具体的实施方式中，重链恒定区是负责IgG4效应子功能的IgG4重链恒定区部分和不同IgG亚型之间的嵌合体。在具体的实施方式中，重链恒定区是人IgG4重链恒定区的CH2结构域和不同IgG亚型之间的嵌合体。在某些实施方式中，嵌合恒定区对如下所述的Fe Y具有中等结合活性。在某些实施方式中，嵌合恒定区介导向免疫效应子细胞(如小神经胶质细胞)的内化从而使P38MAP激酶途径活性处于中等水平，如通过5.1节中所述的基于细胞的测定系统所确定的。在某些实施方式中，通过引入突变优化恒定区。可以利用DNA重组技术将突变引入到恒定区中。在某些实施方式中，所得抗体促进β淀粉样蛋白以较高水平向小神经胶质细胞内化，而Ρ38ΜΑΡ激酶途径的激活作用处于中等水平。可以利用5.1节中所述的基于细胞的测定系统来确定内化速率和Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用。在某些实施方式中，具有突变恒定区的抗体对如下所述的Fe受体具有中等结合活性。在某些实施方式中，通过改变糖基化类型优化恒定区。可以通过其中合成抗体和/或使糖基化氨基酸(例如，Asn297)突变来改变糖基化类型。在某些实施方式中，所得抗体促进β淀粉样蛋白以较高水平向小神经胶质细胞内化，而Ρ38ΜΑΡ激酶途径的激活作用处于中等水平。可以利用5.1节中所述的基于细胞的测定系统来确定内化速率和ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用。在某些实施方式中，具有糖基化类型改变的恒定区的抗体对如下所述的Fe受体具有中等结合活性。在某些实施方式中，所述恒定区对其Fe受体具有中等结合活性。表I中列出了示例性Fe受体及其各自的主要抗体配体。可以使用本领域的技术人员所知的任何方法确定抗体配体和Fe受体之间的结合活性。测量结合亲合力的示例性方法包括但不限于ELISA测定和BIAC0RE分析。在某些更 具体的实施方式中，Fe受体是介导抗体抗原复合物向免疫效应细胞内化的Fe受体。在某些更具体的实施方式中，Fe受体是在小神经胶质细胞上表达的Fe Y受体。表1:示例性抗体同种型或亚型及其各自的Fe受体
权利要求
1.一种用于监测患者中淀粉样变性如阿尔茨海默病的治疗过程的方法，其中，所述方法包括测量所述患者的小神经胶质细胞中P38MAP激酶激活作用的程度。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，用抗β_淀粉样蛋白抗体治疗所述淀粉样变性。
3.一种用于测试试剂神经保护性活性的方法，其中，所述方法包括 a.将小神经胶质细胞与神经毒性Aβ 1-42寡聚体以及所述抗β淀粉样蛋白抗体一起培育；和 b.测量小神经胶质细胞对β淀粉样蛋白肽的吸收。
4.一种用于测试试剂安全性的方法，其中，所述方法包括 a.将小神经胶质细胞与神经毒性Aβ1-42寡聚体和抗β淀粉样蛋白抗体一起培育；和 b.测量小神经胶质细胞中P38MAP激酶激活作用。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其中，所述试剂是抗β淀粉样蛋白抗体。
6.一种用于治疗淀粉样变性如阿尔茨海默病的方法，包括向对其有需要的患者给予安全和功能性的量的人源化非IgGl抗β淀粉样蛋白抗体，其中，所述安全和功能性的量使得所述患者的小神经胶质细胞中Ρ38ΜΑΡ激酶以高于不存在所述人源化非IgGl抗β淀粉样蛋白抗体时Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用水平但低于存在以与所述人源化非IgGl抗β淀粉样蛋白抗体相同Kd与β淀粉样蛋白结合的相同浓度的IgGl抗β淀粉样蛋白抗体的情况下Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用水平的水平激活。
7.根据权利要求5所述的方法，其中，所述患者的小神经胶质细胞中的Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用比不存在人源化非IgGl抗β淀粉样蛋白抗体时所述患者的小神经胶质细胞中Ρ38ΜΑΡ 激酶激活作用高 5%-15% ；10%-20% ；15%-25% ；20%-30% ；35%-45% ;40%_50% 或 45%_55%之间。
8.一种用于治疗淀粉样变性如阿尔茨海默病的方法，包括在剂量方案中向对其有需要的患者给予人源化非IgGl抗β淀粉样蛋白抗体，其中，所述剂量方案使得所述患者的小神经胶质细胞中Ρ38ΜΑΡ激酶以高于不存在所述人源化非IgGl抗β淀粉样蛋白抗体时Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用水平但低于存在以与所述人源化非IgGl抗β淀粉样蛋白抗体相同Kd与β淀粉样蛋白结合的相同浓度的IgGl抗β淀粉样蛋白抗体的情况下ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用水平的水平激活。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述患者的小神经胶质细胞中的Ρ38ΜΑΡ激酶的激活作用比不存在人源化非IgGl抗β淀粉样蛋白抗体时所述患者的小神经胶质细胞中Ρ38ΜΑΡ 激酶激活作用高 5%-15% ;10%-20% ；15%-25% ；20%-30% ；35%-45% ;40%_50% 或 45%_55%之间。
10.一种用于产生安全和功能性的人源化抗β-淀粉样蛋白抗体的方法，包括用来源于IgG4抗体的恒定区替换具有在功能上结合β-淀粉样蛋白的可变区氨基酸序列的非IgG4抗体中的恒定区。
11.一种用于测试抗β淀粉样蛋白抗体的神经保护性活性的方法，包括 a.获得原代混合皮层细胞培养物； b.将所述细胞培养物与神经毒性Aβ1-42寡聚体和抗β淀粉样蛋白抗体一起培育；和C.测量神经元的存活率。
12.根据权利要求6所述的方法，其中，通过代谢更新测量神经元的存活率，代谢更新通过MTT的线粒体氧化确定。
13.根据权利要求11所述的方法，其中，通过ATP释放来测量神经元的存活率。
14.根据权利要求2、3、4、6、8或10中任一项所述的方法，其中，所述抗β淀粉样蛋白抗体包括: a.具有表2中所列的抗β淀粉样蛋白抗体的轻链可变区CDRl的氨基酸序列的轻链可变区CDRl ； b.具有表2中所列的抗β淀粉样蛋白抗体的轻链可变区CDR2的氨基酸序列的轻链可变区⑶R2 ;和 c.具有表2中所列的抗β淀粉样蛋白抗体的轻链可变区CDR3的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。
15.根据权利要求2、3、4、6、8或10中任一项所述的方法，其中，所述抗β淀粉样蛋白抗体包括: a.具有表2中所列的抗β淀粉样蛋白抗体的重链可变区CDRl的氨基酸序列的重链可变区CDRl ； b.具有表2中所列的抗β淀粉样蛋白抗体的重链可变区CDR2的氨基酸序列的重链可变区⑶R2 ;和 c.具有表2中所列的 抗β淀粉样蛋白抗体的重链可变区CDR3的氨基酸序列的重链可变区CDR3。
16.根据权利要求14所述的方法，其中，所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3和所述重链可变区的⑶R1、⑶R2和⑶R3均来源于表2中所列的相同抗β淀粉样蛋白抗体。
17.一种人源化抗β_淀粉样蛋白抗体，具有i)来源于非IgG4人源化抗体的与β淀粉样蛋白结合的可变区的氨基酸序列和ii)来源于IgG4抗体的恒定区的氨基酸序列。
18.根据权利要求17所述的人源化抗β淀粉样蛋白抗体，其中，所述非IgG4人源化抗体选自表2中所列的抗β淀粉样蛋白抗体。
19.一种人源化抗β -淀粉样蛋白抗体，具有i)来源于IgGl人源化抗体的与β淀粉样蛋白结合的可变区的氨基酸序列和ii)来源于IgG4抗体的恒定区的氨基酸序列。
20.一种药物组合物，包含安全和功能性的量的根据权利要求17或19所述的人源化抗体和可药用载体。
21.根据权利要求17或19所述的抗体，其中，所述抗β淀粉样蛋白抗体包括: a.具有表2中所列的抗β淀粉样蛋白抗体的轻链可变区CDRl的氨基酸序列的轻链可变区CDRl ； b.具有表2中所列的抗β淀粉样蛋白抗体的轻链可变区CDR2的氨基酸序列的轻链可变区⑶R2 ;和 c.具有表2中所列的抗β淀粉样蛋白抗体的轻链可变区CDR3的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。
22.根据权利要求17或19所述的抗体，其中，所述抗β淀粉样蛋白抗体包括: a.具有表2中所列的抗β淀粉样蛋白抗体的重链可变区CDRl的氨基酸序列的重链可变区CDRl ； b.具有表2中所列的抗β淀粉样蛋白抗体的重链可变区CDR2的氨基酸序列的重链可变区⑶R2 ;和 c.具有表2中所列的抗β淀粉样蛋白抗体的重链可变区CDR3的氨基酸序列的重链可变区CDR3。
23.根据权利要求21所述的方法，其中，所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3和所述重链可变区的⑶R1、⑶R2和⑶R3均来源于表2中所列的相同抗β淀粉样蛋白抗体。
24.一种人源化抗β -淀粉样蛋白抗体，具有i)来源于IgGl人源化抗体的与β淀粉样蛋白结合的可变区的氨基酸序列和ii)来源于非IgGl抗体的恒定区的氨基酸序列。
25.一种用于改善非IgG4抗β淀粉样蛋白抗体的安全性的方法，包括用来源于IgG4抗体的恒定区替换所述非IgG4抗体的恒定区。
26.一种用于改善非IgG4抗β淀粉样蛋白抗体的安全性的方法，包括用来源于非IgGl抗体的恒定区替换所述非IgG4抗体的恒定区。
27.一种用于改善根据权利要求25或26的非IgG4抗β淀粉样蛋白抗体的安全性的方法，其中，所述非IgG4抗体为IgGl抗体。
28.根据权利要求15所述的方法，其中，所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3和所述重链可变区的⑶R1、⑶R2和⑶R3均来源于表2中所列的相同抗β淀粉样蛋白抗体。
29.根据权利要求22所述的方法，其中，所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3和所述重链可变区的⑶R1、⑶R2和⑶R3均来源于表 2中所列的相同抗β淀粉样蛋白抗体。
全文摘要
本发明涉及在淀粉样变性的治疗中用于治疗和诊断性用途的安全和功能性抗体，淀粉样变性是与淀粉样蛋白有关的一组疾病和病症，如阿尔茨海默病。
文档编号A61K39/00GK103179981SQ201180047312
公开日2013年6月26日 申请日期2011年7月29日 优先权日2010年7月30日
发明者A·普法伊费尔, A·穆斯, 奥斯卡·阿道夫松, R·沃茨 申请人:Ac免疫有限公司, 健泰科生物技术公司