专利名称：多烯磷脂酰胆碱治疗肥胖和胰岛素抵抗综合征(代谢综合征)的药物新用途的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，涉及一种已上市药物的新的药物作用，具体是多烯磷脂酰胆碱治疗肥胖和胰岛素抵抗综合征(代谢综合征)的药物新用途。
背景技术：
肥胖症作为一种常见的慢性内分泌代谢疾病，发病率呈逐年上升的趋势，已成为全球性的公共健康难题。肥胖的病因十分复杂，涉及到遗传、环境、心理、行为等多种因素的相互作用。肥胖的发生是由于机体的能量摄入长期高于机体的能量消耗，多余的能量以脂肪形式贮存从而导致肥胖。肥胖症通常采用综合措施治疗，包括饮食疗法、运动疗法、行为疗法、外科疗法和药物疗法。药物疗法是前几种疗法效果不佳或复发率高时的常用选择。减肥药的种类很多，多数还处于临床或临床前研究阶段。其中主要有四类:①作用于中枢的拟儿茶酚胺和拟5-轻色胺的食欲抑制剂。如西布曲明(Sibutramine);②增加能量消耗的药物。如中枢兴奋药、β 3-肾上腺素受体激动剂和激素类药物；③作用于外周胃肠脂酶和胰脂酶的抑制齐U，如赛尼可(Orlistat) 其他治疗肥胖的药物，包括胰岛素增敏剂和瘦素(Ieptin)。这些药物均因为不同程度的副作用而难以在临床上推广使用，因此，寻找一种安全有效的减肥药物是目前临床治疗所急需的。胰岛素抵抗(Insulin Resistance, IR)是指胰岛素作用的祀器官对胰岛素作用的敏感性下降，即正常剂量的胰岛素产生低于正常生物学效应的一种状态。目前认为，IR不仅是II型糖尿病的发病基础，更是贯穿多种代谢相关疾病的主线，是这些疾病的共同病理生理基础。大量流行病学资料显示，胰岛素抵抗在糖尿病及心血管疾病发病之前就可存在，常常与肥胖、高血压、高脂血症相伴随。而肥胖是引起胰岛素抵抗最常见的原因，换句话说肥胖症者几乎都存在胰岛 素抵抗。目前将胰岛素抵抗、中心性肥胖、糖耐量降低或糖尿病、高血压、血脂代谢紊乱等多种疾病的组合，统称为“代谢综合征”或“胰岛素抵抗综合征”，并且认为胰岛素抵抗是促使糖尿病、高血压、高血脂等疾病发生发展的最重要和最根本原因。而胰岛素抵抗与葡萄糖转运体4(GLUT4)蛋白功能有关。GLUT4是一种膜蛋白，分子量约45-55ku，其基本结构由12个跨膜片段(M1-M12)组成。GLUT4仅存在于胰岛素敏感的骨骼肌、心肌和脂肪细胞中。在没有胰岛素刺激时主要位于细胞内的储存囊泡内。当胰岛素与受体结合后，激发一系列级联效应，导致GLUT4向细胞外膜移动并发生结构改变，将葡萄糖转运至细胞内后恢复原来结构。这一过程很容易被逆转，当循环胰岛素水平下降时，GLUT4通过吞饮作用从细胞外清除并回到储存囊泡中。因此胰岛素敏感组织可迅速对循环胰岛素水平做出反应，保持血糖平衡。目前能够降低胰岛素抵抗的药物主要有双胍类药物二甲双胍、血管紧张素转换酶抑制剂、胰岛素增敏剂等，但三者均存在不同程度的不良反应。
本发明是在细胞分子水平对多烯磷脂酰胆碱进行深入研究的结果，旨在提供一种治疗肥胖和胰岛素抵抗综合征(代谢综合征)的药物新用途。发明人经国内外专利文献检索和公开发表的期刊论文检索，未发现多烯磷脂酰胆碱用于肥胖和胰岛素抵抗(代谢综合征)的治疗，也未发现与本发明相关的报道或文献。
发明内容
本发明的目的是提供常用保肝药物(多烯磷脂酰胆碱)一种新的用途，即多烯磷脂酰胆碱治疗肥胖和胰岛素抵抗综合征(代谢综合征)的药物新用途，或者说提供了多烯磷脂酰胆碱一种新的治疗适应症。肥胖是脂肪细胞数量增多和体积增大的结果。SW872脂肪细胞是从人的脂肪肉瘤细胞建立的一种新的脂肪细胞系，是体外研究糖、脂代谢和相关药物作用机制的重要细胞模型。因此，选择了 SW872细胞作为研究用细胞模型。本发明证实了多烯磷脂酰胆碱能显著抑制脂肪细胞的增殖，因而可降低肥胖的程度。多烯磷脂酰胆碱使脂肪细胞G1/S期的比例显著增加，S期细胞的比例显著降低，显示药物多烯磷脂酰胆碱使脂肪细胞停止在Gl期，从而起到减肥的作用。胰岛素抵抗与葡萄糖转运体4(GLUT4)蛋白功能有关。多烯磷脂酰胆碱作用于脂肪细胞，能使其细胞膜GLUT4蛋白表达显著增加，且呈剂量相关性，证明了多烯磷脂酰胆碱能明显改善胰岛素抵抗，可以用于胰岛素抵抗综合征(代谢综合征)的治疗。本发明首次提供了多烯磷脂酰胆碱用于肥胖和胰岛素抵抗综合征(代谢综合征)治疗的新用途。本发明的目的是开发常用保肝药物多烯磷脂酰胆碱用于治疗肥胖和胰岛素抵抗综合征(代谢综合征)的新用途。多烯磷脂酰胆碱具有价格适中、毒副作用小的优点。
图1:多烯磷脂酰胆碱的分子结构图。图2:不同浓度多烯磷脂酰胆碱对脂肪细胞的抑制率图3:多烯磷脂酰胆碱对脂肪细胞生长周期的影响图4:多烯磷脂酰胆碱对脂肪细胞细胞膜Glut4蛋白表达量的影响
具体实施方式
:下面结合附图和实施例对本发明进行详细说明，应理解，这些实施方式仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲述的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1:多烯磷脂酰胆碱显著抑制脂肪细胞的增殖。采用MTT法，将脂肪细胞按1X 104个细胞/孔接种于96孔，用DMEM+10%胎牛血清培养，隔日换液，待细胞达60-70 %汇合，加不同浓度的多烯磷脂酰胆碱，使其终浓度为
0.54mmol/L,2.70mmol/L, 13.50mmol/L,同时设空白对照组，作用 12，24，48，72 小时(每组12复孔)后，与5g/L的MTT共孵育4h，吸去孔内培养液，每孔加150ul 二甲基亚砜，置摇床上震摇20min使沉淀完全溶解，在酶联免疫监测仪上570nm处测得各孔的吸光度值。通过对吸光度值的分析统计可得出不同浓度的药物多烯磷脂酰胆碱在不同时间段对细胞增殖的抑制率(图2)，可以看到多烯磷脂酰胆碱显著抑制脂肪细胞的增殖，因此可降低肥胖的程度，可用于肥胖的治疗。实施例2:多烯磷脂酰胆碱使脂肪细胞的生长停止在Gl期，从而抑制其增殖。脂肪细胞按I X IO4个细胞/孔接种于6孔板，用DMEM+10%胎牛血清培养培养，隔日换液，待细胞达60-70 %汇合，加不同浓度的多烯磷脂酰胆碱，使其终浓度为0.54mmol/L,2.70mmol/L, 13.50mmol/L,同时设空白对照组，作用24小时后，PBS冲洗，0.25%胰酶消化，4°C IOOOrpm离心5min后收集，细胞沉淀用70 %乙醇4°C固定24小时，PBS洗2次，重悬于含有50g/L的RNase A和50mg/L碘化吡啶的PBS中，悬液在37°C孵育30min，200 μ m尼龙过滤网滤过后，流式细胞仪分析。可以看到多烯磷脂酰胆碱使脂肪细胞G1/S期的比例显著增加，S期的细胞比例显著降低，使脂肪细胞的生长停止在Gl期，从而抑制其增殖(图3)。实施例3:多烯磷脂酰胆碱使脂肪细胞细胞膜GLUT4蛋白表达显著增加，且呈剂量相关性。脂肪细胞按IXlO4个细胞/孔接种于24孔板(预先放置无菌小玻片)，用DMEM+10%胎牛血清培养培养，隔日换液，待细胞达60-70%汇合，加不同浓度的多烯磷脂酰胆碱，使其终浓度为0.54mmol/L,2.70mmol/L, 13.50mmol/L,同时设空白对照组，作用24小时；0.25胰酶消化细胞，PBS洗涤离心，加入GLUT4抗体，室温避光孵育30分钟，PBS洗涤细胞，加入FITC标记的GLUT4 二抗，室温避光孵育30分钟，洗涤细胞2次，将细胞重悬于PBS液中，混匀，上流式细胞仪测 定，以不加GLUT4 —抗作为阴性对照。可以看到多烯磷脂酰胆碱能使脂肪细胞细胞膜GLUT4蛋白表达显著增加，且呈剂量相关性(图4)，说明多烯磷脂酰胆碱通过增加脂肪细胞细胞膜GLUT4蛋白表达从而提高基础状态糖转运，改善胰岛素抵抗，可以用于胰岛素抵抗综合征(代谢综合征)的治疗。
权利要求
1.多烯磷脂酰胆碱治疗肥胖和胰岛素抵抗综合征(代谢综合征)的药物新用途。
2.根据权利要求1所述多烯磷脂酰胆碱治疗肥胖和胰岛素抵抗综合征(代谢综合征)的药物用途，其特征在于:多烯磷脂酰胆碱具有治疗肥胖和胰岛素抵抗综合征(代谢综合征)的作用。
全文摘要
本发明提供了一种多烯磷脂酰胆碱治疗肥胖和胰岛素抵抗综合征(代谢综合征)的药物新用途。采用临床上常用的保肝药多烯磷脂酰胆碱作为治疗肥胖、胰岛素抵抗(代谢综合征)的新药物。细胞实验证明，多烯磷脂酰胆碱使脂肪细胞G1/S期的比例显著增加，S期细胞的比例显著降低，使脂肪细胞的生长停止在G1期，从而抑制其增殖，因此可降低肥胖的程度，可用于肥胖的治疗。同时，多烯磷脂酰胆碱使脂肪细胞细胞膜GLUT4表达增加，从而起到改善胰岛素抵抗的作用，可以用于胰岛素抵抗综合征(代谢综合征)的治疗。多烯磷脂酰胆碱是一种价格适中、副作用小、安全可靠的药物，可用于肥胖和胰岛素抵抗综合征(代谢综合征)的治疗。
文档编号A61P3/04GK103202849SQ20121000800
公开日2013年7月17日 申请日期2012年1月12日 优先权日2012年1月12日
发明者周巧霞, 张经硕 申请人:苏州九龙医院有限公司