专利名称：治疗艾滋病的中药组合物及其制备的制作方法
技术领域：
本发明属于中药組合物、制备方法以及用途的技术领域。尤其涉及应用于治疗艾滋病、抑制Hiv病毒复制和増加CD4+細胞数量，及其制备方法。
背景技术：
自1981年发现第一例艾滋病(AIDQ患者以来，三十年来艾滋病一直严重威胁着人类的生命健康，因而引起了全世界各国的极大关注。在我国，艾滋病防治形势十分严峻。 其流行经历了传染期、扩散期，目前已开始进入快速增长期，疫情蔓延之势不断扩大，疫情从高危人群向一般人群传播，发病和死亡数量日益增多严重，截至2010年我国现存艾滋病毒感染者和病人约74万人，在亚洲居第二位。其中性传播途径占第一位，高达75%。目前在药物治疗艾滋病的领域中，HAART(高效抗逆转录病毒疗法)的临床疗效得到了肯定。十多年来，HAART以其良好的抑制病毒效果，被作为治疗艾滋病的最主要手段在全世界范围内广泛应用。但是，HAART疗法虽能在体内很快降低HIV的载量，甚至可以做到测不出病毒，但该疗法尚不能彻底清除患者体内的HIV。有的病人HAART治疗可以测不到 HIV病毒，但⑶/细胞不上升，最终死亡，而中药有利于提高⑶/細胞数。目前在用的药物多具有较大的毒副作用，造成患者服药的依从性差。加上由于HIV-I极易发生突变，病毒产生耐药性，从而导致药物失效。另外HAART中所用药物多价格昂贵，多数患者无カ承担。以上众多现状成为HAART面临的主要问题和抗病毒治疗失败的主要原因。因此不断寻找新的 HIV/AIDS药物，刻不容缓。当前国际上有30余种抗病毒药物，而我国仅有6种ー线治疗药物，而且其中没有包括蛋白酶抑制剂。而ニ线治疗药物则全部依靠进ロ，价格比一线药高6 7倍。而对于治疗失败的患者，如果不能早期更换ニ线药物，则将使患者病情更严重，甚至导致死亡。因此加速国产抗HIV创新药物包括中药和西药新药的开发，迫不及待。
发明内容
中医中药是祖国伟大的宝库，自古以来为我国人民的健康做出了巨大的贡献。上世纪七十年代初，我国从中药青蒿中发现的青蒿素是当今国际上治疗疟疾最有效的药物。 本专利的发明人之一李泽琳教授就是參与青蒿素的研发的主要成员。本发明目的在于提供一种中药組合物，能有效抑制HIV-I的复制，増加CD4+細胞的数量，以及增强免疫功能。为实现此目的，本发明设计了中药组合物组方及配比如下处方总处方量以100份计连翘45 55份，虎杖27 33份，白芍9 11份，淫羊藿9 11份药物特性1、连翘清热解毒、消痈散结。具有抗菌、抗病毒、抗肝损伤等作用。2、虎杖活血祛瘀、清热、利湿。具有抗菌、抗病毒、抗癌、升高白細胞等作用。3、白芍养血和营，敛阴平肝。具有镇痛、鎮静、调节免疫功能，抗菌，保肝等作用。
4、淫羊藿补肾强筋，祛风除湿。具有增强非特异免疫功能作用，调节体液免疫和細胞免疫的作用，亦具抗病原体，抗炎作用。制备方法(1)按照上述处方量称取四味药材，分別粉碎，混合，加适量乙醇浸渍后渗漉，收集渗漉液。(2)渗漉液放置，滤过，滤液减压浓缩干燥。(3)浓缩液稀释得ロ服液；浓缩液干燥成粉装胶囊；干粉制颗粒成颗粒剂；干粉与适当辅料混合压片成片剂。
附图为本发明提供的中药组合物的制备方法流程图。处方量的药材经渗漉提取得到提取液，或提取液干燥成提取物粉末，与药学可接受辅料适当混合制成ロ服液、片剂、胶囊剂和颗粒剂。
具体实施例方式实施例1、中药组合物的組成和配比。处方按100份计连翘45 55份，虎杖27 33份，白芍9 11份，淫羊藿9 11份。实施例2、中药组合物的制备エ艺流程见附图1。本发明的中药组合物可与药学上可接受的载体，例如填充剂如淀粉、微晶纤维素等；粘合剂如维生素衍生物、淀粉；崩解剂如羧甲基纤维素、羧甲基淀粉钠等；通过ロ服液、 颗粒剂、胶囊剂、片剂ロ服给药方式应用。按照实施例1中的处方量称取4味药材，分別粉碎，混合后加入3 6倍量体积的 40 70%乙醇浸渍6 10h，參照《中国药典》2010版附录流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法 (附录I 0)以每Kg药材2 5mL/min的速度缓缓渗漉，收集处方量9 14倍(Kg/L)量的渗漉液(即投料IKg药材则收集9 14升渗漉液)。渗漉液放置，普通医用纱布过滤除去粗滤渣，减压旋转蒸发浓缩至相对密度为1. 11-1. 14(50°C )，或继续喷雾干燥成粉或65°C 减压烘干成粉。浓缩液按照IKg处方量稀释得IOOOmL药液稀释得ロ服液(即每mL ロ服液含生药Ig)；干燥粉末用60 80%乙醇湿法制粒，干燥后，按每袋4 5g装袋即得颗粒剂； 亦可干燥粉末以60 80%乙醇湿法制粒，按照每粒0. 47g装入空胶囊得胶囊剂；或每400g 干燥粉末加淀粉50g，羧甲基淀粉钠5g，为辅料混勻制颗粒后压片，包衣即得片剂。以下实施实例中用到的是本发明提供的中药组合物颗粒剂。实施例2、中药组合物体外能明显抑制HIV-I病毒的复制试验采用了 ffl~4、Hela-CD4-LTR- β -gal及H9共三种细胞株，分別被HIV-1感染， 加入本組合物颗粒溶液，观察其对病毒复制的抑制作用。方法1 :HIV-1 NL4. 3株感染的ffl~4细胞HIV-I NL4. 3病毒株(本实验室保存，參见两种HIV非核苷类逆转录酶抑制剂耐药病毒株的体外选择和鉴定，刘思扬等，药学学报，2010，45 (2) =241-246)，为单ー生活周期报告病毒模型(Single life-cycle reporter virus)，由HIV质粒克隆表达、转染而得。细胞实验在96孔培养板中进行，于接种M4細胞(本实验室保存，參见AP0BEC3G对HIV-I 及其Vif缺失株的抑制作用，李岚等，首都医科大学学报，2011,32 ) :177 181)的各孔加入100 μ L四倍比稀释浓度的药液，自最大无毒剂量(19. lmg/mL)起依次四倍比稀释5个浓度，即4. 8mg/mL、l. ang/mL、298 μ g/mL、74 μ g/mL、19 μ g/mL，每个浓度至少设两个复孑し， 37°C,5% CO2培养箱备用。另以离心管取新鲜培养的MT4細胞5X IO6Cells,离心去上清， 加HIV-I NL4. 3病毒lX104TCID5Q/mL，混勻，37°C，5% CO2培养箱中培养，两小时后离心，弃去上清，再用RPMI 1640培养基洗一次，去除游离的病毒，加含20%血清的培养基到总体积为10mL。于加有药液的96孔板，每孔中加入此感染HIV-I的细胞悬液100 μ L，并设细胞对照、病毒对照及AZT(阳性治疗药物)对照孔，37°C，5% CO2培养箱中培养。第三天换药，从每孔中吸出100 μ L上清，加入100 μ L与本孔相同浓度的新鲜药液，細胞及病毒对照组加入 100 μ L培养基。继续培养至第六天，各孔取上清祥品待测，采用市售瑞典Microelisa试剂盒，按其要求做标准曲线，測定PM抗原量(pg/mL)，所测PM抗原量按下列公式计算抑制卓。
抑制去-_ヌ寸臉24杭願-纖组P24抗願X100 病毒対照 LP24抗原量计算抑制率及半数抑制浓度IC5tl，结果IC5tl = 102 μ g/mL。方法2、HIV-I BHlOwt感染的H9细胞需要说明的是，此方法与方法1使用的病毒株不同，是因为基于两种不同細胞株和两种不同病毒株的抗HIV活性实验所针对的病毒对细胞的感染阶段的不同，HIV-I NL4. 3 感染M4细胞是在急性感染期发挥作用，而后者是慢性感染毒株。而且抗病毒活性实验要求是需要用不同細胞株和不同病毒株对样品活性进行反复验证的，故此处病毒株的不同是试验方法的需要，也从另一角度表明了本发明要保护的组方对病毒感染的不同阶段都有抑制作用。H9細胞(本实验室保存，參见AP0BEC3G对HIV-I及其Vif缺失株的抑制作用，李岚等，首都医科大学学报，2011，32 O) :177 181)中加入含有HIV-I BHlOwt病毒株(本实验室保存，參见AP0BEC3G对HIV-I及其Vif缺失株的抑制作用，李岚等，首都医科大学学报，2011,32 ) :177 181)的RPMI 1640培养液，37°C，5% CO2孵箱孵育2h。离心，洗涤铺96孔板，自最大无毒剂量(19. lmg/mL)起依次四倍比稀释5个浓度，即4. 8mg/mL、l. 2mg/ mL、298 μ g/mL、74 μ g/mL、19 μ g/mL,，每个浓度4个复孔，同时设立病毒对照组、細胞对照組。于37°C，5%C02孵箱培养，3天更换药液。第5天，收获培养上清，以测定各孔PM杭原含量。将给药组与病毒对照组进行比较，计算药物的抑制率，公式同方法1中所述。最并
计算ic50结果显示本中药组合物在Η9細胞体外试验中对HIV-I BHlOwt具有较明显的抑制作用。IC50 = 124 μ g/mLO方法3 =HIV-I NL4. 3 感染的 Hela-CD4_LTR-β -gal 细胞试验(MAGI TEST)所用HIV-I NL4. 3病毒同方法1。以4X 104cells/0. 25mL/孔的浓度将 Hela-CD4-LTR-0 -gal细胞(本实验室保存，參见AP0BEC3G对HIV-I及其Vif缺失株的抑制作用，李岚等，首都医科大学学报2011,32(2) :177 181)接种于M孔板，放置于37°C，5% CO2培养箱中Mh，使之吸附，贴壁。第二天，吸去各孔中上清，加IOOyL四倍比稀释浓度的药液(单味药物60%乙醇提取物)，选用自白芍和淫羊藿的最大无毒剂量19. 2mg/ mL和4. 8mg/mL开始四倍比稀释5个浓度，分别为白芍4. 8mg/mL、l. 2mg/mL、300 μ g/mL、 75 μ g/mL 和 18. 8 μ g/mL,淫羊藿:1. 2mg/mL、300 μ g/mL、75 μ g/mL、18. 8 μ g/mL 禾ロ 4· 7 μ g/ mL。每个浓度至少设两个复孔。加入孔前，每100 μ L药液内加入定量HIV-I NL4. 3使病毒对照孔产生蓝斑数在200个为宜，空白对照孔加入培基(Mock)，37°C，5% CO2培养两小时后，各孔再加入200 μ L相同药液或培基，培养4 后，各孔吸去上清加入固定液ImL再以 K4[Fe (CN)6] · 3H20, K3 [Fe (CN)6] R X-gal染色，病毒颗粒被染成蓝色。用Elaspot扫描计
数每孔蓝色病毒颗粒，按如下公式计算抑制率，再计算IC5(I。
权利要求
1.一种药物合物，其組成及配比如下处方总量按100份计，其中连翘45 55份，虎杖27 33份，白芍9 11份，淫羊藿9 11份。
2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述的药物组合物是ロ服液、颗粒剂、胶囊剂或片剂。
3.根据权利要求1或2所述的中药组合物的制备方法是(1)按照权利要求1所述的处方量称取四味药材分別粉碎，混合，加适量乙醇浸泡后渗漉，收集渗漉液。(2)渗漉液放置后滤过，滤渣弃去，滤液减压浓縮，干燥。(3)浓缩液稀释得ロ服液；浓缩液干燥成粉，湿法制粒成颗粒剂；干粉制粒装胶囊成胶囊，或干粉制粒压片成片剂。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述的乙醇为40 70%的乙醇。
5.根据权利要求1 3所述的药物組合物，在制备具有抑制HIV病毒复制的药物中的用途。
6.根据权利要求1 3所述的药物組合物，在制备具有増加CD4+細胞数量作用的药物中的用途。
7.根据权利要求1 3所述的药物組合物，在制备治疗艾滋病人或艾滋病未发病者 (即带毒者)，以及其他病毒性疾病的药物中的用途。
8.根据权利要求1 3所述的药物組合物，在制备既可以单独给药，又可以与HAART药物联合应用治疗艾滋病的药物中的用途。
全文摘要
本发明目的在于提供一种中药组合物及其制备方法。该组合物能有效治疗艾滋病，抑制艾滋病毒(HIV)的复制，同时能够增加CD4+细胞的数量。涉及的中药组合物组方及配比如下处方总量按100份计，其中连翘45～55份，虎杖27～33份，白芍9～11份，淫羊藿9～11份。
文档编号A61K36/71GK102552437SQ201210011908
公开日2012年7月11日 申请日期2012年1月16日 优先权日2012年1月16日
发明者兰贵东, 曾欣, 曾毅, 李泽琳, 李霄, 王小利, 艾萍, 马洪涛 申请人:李泽琳