专利名称：一种丹参的提取方法
技术领域：
本发明涉及一种中药提取的方法，具体涉及一种丹参的提取方法。
背景技术：
丹参，《雷公炮制药性解》,I曰“其味苦，性微寒，无毒，入心经。养神定志，破结除俊，清痈散肿，排脓止痛，生肌长肉，治风邪留热，眼赤狂闷，四肢不遂，破宿血，补新血，安生胎，落死胎，理妇人经脉不调，血崩带下，诸般血证。”焦树德《用药心得十进》，2谓活瘀血，生新血，凉血，安神。有“一味丹参饮，功同四物汤”之说。现将其临床应用报告如下。
丹参是传统中药，主要用于胸肋胁痛，风湿痹痛，症瘕结块，疮疡肿痛，跌仆伤痛，月经不调，经闭痛经，产后瘀痛等。治疗胸肋疼痛、症瘕结块，以及月经不调、经闭经痛具有良效，常与川芎配伍应用。在治疗胸腹疼痛属于气滞血瘀方面，往往配合砂仁、檀香等药同用。丹参成分很多，水溶性成份有丹参素、丹酚酸等，脂溶性成份有丹参酮2A、隐丹参酮、次甲基丹参酮、丹参酮等，根据自己的目标成分不同，方法不同，常规的是乙醇提取，柱层析分离。
发明内容
为了确保丹参提取时有效成分的流失，本发明的目的在于一种丹参的提取方法，本发明提取方法简单，提取得到的有效成分丹酚酸B由三分子丹参素与一分子咖啡酸缩合而成，是目前研究较多的丹酚酸之一，对心、脑、肝、肾等器官均具有重要药理作用。为了实现上述目的本发明采用如下技术方案
丹参的提取方法，其特征在于包括以下步骤
(1)丹参药材粉碎，置提取罐中，第一次加4.5-5. 5倍量乙醇，确保乙醇浓度> 92%，先浸泡2. 8-3. 2小时，测罐内含醇度彡90%，加热回流提取I. 3-1. 8小时，汽压0. 03-0. 05Mpa,温度 70-80°C ；
(2)第二次加4.5-5. 5倍量浓度45-55%的乙醇加热回流提取I. 3-1. 8小时，汽压
0.03-0. 05Mpa，温度75-85°C，药渣再加4-5倍量的水煎煮I. 8-2. 2小时，放液，滤液浓缩，收膏相对密度I. 20-1. 24 ；
(3)第一次醇液浓缩时，每2小时以内出一次药液，浓缩结束后进行总混；第二次醇液浓缩时，每2小时以内出一次药液，浓缩比重I. 22-1. 26，浓缩结束后进行总混；
(4)一遍液、二遍液和水提膏按23-25:30-35:5比例混合，进行喷雾干燥，控制喷雾干燥参数进口温度180-210°C，出口温度90-110°C，粉碎整粒，混合即得。本发明提取物的功效
I、抗氧化作用
丹酚酸B具有很强的抗氧化作用，体内外实验证明，丹酚酸B能清除氧自由基、抑制脂质过氧化反应，其作用强度高于维生素C、维生素E、甘露醇，是目前已知的抗氧化作用最强的天然产物之一.药理学研究表明，注射用丹参酚酸具有明显的抗氧化作用，抑制血小板聚集，及抑制血栓形成的作用，并能延长缺氧条件下动物的存活时间。试验表明，注射用丹参酚酸(60 15mg/kg)能明显改善脑缺血再灌损伤大鼠的神经功能缺陷，表现为改善行为障碍，明显缩小脑梗死面积，高、中剂量(60、30mg/kg)有统计学差异；注射用丹参酚酸在药后I、 2、24hr明显改善FeC13所致的大鼠脑缺血造成的动物神经功能损伤，表现为行为障碍的改善，并能缩小脑梗死面积；注射用丹参酚酸40mg/kg明显抑制ADP、花生四烯酸、胶原诱导的家兔血小板的聚集反应，抑制率分别为81. 5%,76. 7%,68. 9%。注射用丹参酚酸60、30mg/kg明显抑制大鼠血栓的形成；注射用丹参酹酸60、30mg/kg明显延长小鼠在缺氧条件下的存活时间。2、对心脏的保护作用
2.I对心肌缺血再灌注损伤的保护作用
急性心肌缺血后正常血液的再灌注可导致缺血心肌的进一步损害，其表现为再灌注后的早期可出现严重的细胞损害、顽固性心律失常和明显的心功能减退，成为急性心肌缺血再灌注损伤。心肌缺血再灌注时，大量自由基产生，细胞膜脂质过氧化反应增强，膜流动性和通透性发生变化，导致电生理活动异常，诱发和促进心律失常的产生；心肌细胞脂质过氧化反应增强，致使心肌缺血区的过氧化产物丙二醛(MDA)含量增多、冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CPK)升高、心肌组织中超氧化物岐化酶(SOD)减少。动物实验研究显示丹酚酸B能减轻缺血再灌注损伤模型动物的心肌缺血程度，减小心肌梗死范围，减少LDH、CPK从胞体的溢出、降低缺血心肌组织中MDA的含量，提高SOD的活力，对抗氧自由基对心肌细胞的毒害作用，保护心肌细胞.
2.2对心脏微血管内皮细胞的延迟保护作用
心肌预先反复缺血后，可增强对后续较长时间缺血的耐受性，称为缺血预处理，是一种内源性保护机制，其心肌保护作用在预处理后即刻出现，持续2 4小时消失，24小时后重现，持续数日，后者称为延迟保护作用。心肌缺血预处理的发生机制主要是机体内源性物质激活中间环节，引发终末效应物质的活化进而产生保护作用。内皮细胞除在血管内外物质交换、维持凝血和抗凝血的平衡中起着重要作用外，并可产生和分泌多种生物活性物质，在调节血管舒缩运动及维持血细胞的正常功能方面具有无可替代的生物学效应，冠状动脉内皮细胞还有调节心肌收缩力的作用.
肿瘤坏死因子a(TNF_a)是由激活的巨噬细胞分泌的一类具有多种生物学效应的细胞因子。病理状态下TNF-a可损伤心功能，诱导心肌细胞凋亡，而且TNF-a血清水平的变化与多种心脏疾病有关。心脏缺血缺氧时，心脏微血管内皮细胞首先和最易损伤。实验研究表明丹酚酸B预处理可抑制大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中的钙离子超载、减少内皮素(ET)及肿瘤坏死因子a(TNF-a)的释放、改善血栓素/前列环素(TXA2 / PGI2)系统的平衡状态、降低缺氧/复氧损伤后内皮细胞细胞间粘附分子的表达，起到保护内皮细胞的作用. 预处理保护心肌的过程涉及多种因素的参与，蛋白激酶C(PKC)作为一种细胞内信息传递的主要物质和媒介，在心脏预处理保护心肌过程中起着关键作用。PKC的激活可引发底物蛋白质磷酸化、细胞内钙稳态、离子通道、腺苷、缓激肽、受体的信息传递等一系列变化，调控着预处理过程。通过对大鼠缺氧/复氧的心脏微血管内皮细胞损伤模型，采用分子生物学方法，观察到丹酚酸B预处理能增强蛋白激酶CmRNA、热休克蛋白70 mRNA的表达，具有与缺氧预适应相类似的细胞保护效应，可增强细胞对随后较长时间缺氧/复氧损伤的耐受性，这可能是丹酚酸B预处理的细胞保护机制。2. 3对动脉粥样硬化的防治作用
低密度脂蛋白(LDL)氧化修饰是动脉粥样硬化发生的一个重要原因，氧化修饰的LDL(OX-LDL)具有细胞毒性作用，易于被巨噬细胞识别并大量摄取形成泡沫细胞，影响单核细胞的迁移，从而促使动脉粥样硬化的发生发展。实验研究发现丹酚酸B能有效抑制Cu抖诱导的LDL氧化修饰，对防治动脉粥样硬化有重要意义，其作用机制可能与清除自由基、整合Cu有关。泡沫细胞是动脉粥样硬化斑块内出现的特征性病理细胞。血管内皮生长因子(VEGF)也称血管通透性因子(VPF)，是一种高度特异的、强烈的血管内皮促分裂因子和血管生成因子。体内的动脉粥样硬化斑块中VEGF表达显著升高，以斑块中泡沫细胞的表达最为明显。在体外培养的U937泡沫细胞模型中，丹酚酸B和银杏叶提取物一样可呈剂量依赖性的抑制泡沫细胞VEGF的表达，对动脉粥样硬化有预防和治疗作用.
溶血磷脂酰胆碱(LPC)是由OX-LDL或质膜的磷脂酰胆碱(PC)经磷脂酶A2(PLA2)水解或脂质氧化而来，是OX-LDL的主要活性成分，能模拟OXLDL的主要作用，因此LPC与动脉粥样硬化的发生密切相关。丹酚酸B能抑制LPC刺激内皮细胞产生基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、抑制内皮细胞表达血管内皮生长因子，防治动脉粥样硬化。另有研究显示丹酚酸B能减少动脉粥样硬化家兔血浆血栓素(TXB2)、ET浓度，增加前列腺素Fla(6-keto-PGFD浓度，具有明确的内皮细胞保护效应.
2.4对细胞凋亡的影响
在血管成形术的兔子模型中，丹酚酸B能诱导新血管内膜细胞凋亡，而凋亡在再狭窄中对细胞的数量起到稳定作用。为考察抗氧化剂能否影响血管细胞的凋亡，Hung HH等测定了动脉粥样硬化和胆固醇喂养的兔子再狭窄损害模型中凋亡细胞死亡的频率。结果发现用丹酚酸B处理的一组兔子的凋亡细胞的百分率显著高于其他组，同时丹酚酸B能显降低新血管内膜的厚度，这与凋亡细胞的数量一致，这些结果表明，丹酚酸B能诱导新血管内膜细胞的凋亡，从而可以防止新血管内皮的增厚。2. 5预适应的心脏细胞保护作用。3、对脑的保护作用
3.I对脑缺血损伤的保护作用 血管内皮生长因子(VEGF)是内皮细胞特异性的有丝分裂原，具有促进内皮细胞增殖，提高血管通透性等生物学特性。脑缺血后，低氧可激活VEGF及其受体(VEGFR)系统，促使半影区VEGF表达，VEGF诱导大量新生血管形成，促进血管增生，增加受累组织的血流灌注和供氧量，减少神经元的凋亡和死亡，减轻脑损伤程度。实验研究显示丹酚酸B与冰片、三七等配伍可显著提高VEGFmRNA表达，促进新生血管形成，并能较好地抑制VEGF诱导血管通透性增加的作用，这些作用对缺血性中风的治疗具有非常重要的积极意义。丹酚酸可通过血脑屏障，具有改善脑血流量而无窃血，抗血小板聚集，抗血栓，抑制细胞内钙含量增高，清除自由基，促进脑血管生成等作用，可以认为丹参总酚酸是一个比较理想的有抗脑缺血作用的药物，3.2对学习记忆功能的影响
采用大鼠、小鼠等动物脑缺血实验模型研究证明，丹酚酸B静脉注射对大鼠、小鼠脑缺血和缺血再灌注引起的脑损伤具有保护作用，可缩小缺血区面积，减少脑组织中MDA〃含量，缓解由于脑缺血引起的行为学障碍，对由此引起的记忆功能障碍有明显的改善作用。作用机制可能与丹酚酸B的抗氧化作用有关。4、抗肝脏纤维化作用
肝星状细胞(HSC)的激恬是肝纤维化形成的核心环节，转化生长因子-131 (TGF-131)是最重要的促HSC活化与肝纤维化形成的细胞因子。肝贮脂细胞(FSC)是一种肝脏实质细胞，在病理条件下被激活后大量增殖，同时产生细胞外基质的能力增长数十倍，因此，FSC在肝纤维化形成过程中也起到了重要作用。丹酚酸B能抑制TGF-I的HSC胞内信号转导及其受体蛋白的表达，从而拮抗TGF-Bl的促HSC活化，并能抑制活化FSC增殖，抑制FSC生成细胞外基质而减少胶原纤维在肝内的沉积。另有研究表明，丹酚酸B镁盐具有抗脂质过氧化抗肝损害的作用，有减轻肝组织纤维化程度的功能，临床用于治疗慢性乙型肝炎肝纤维化取得满意效果.
肝纤维化是肝脏对各种慢性损伤的修复应答过程，HSC获得增殖能力并活化为肌成纤维细胞样细胞，被认为是肝纤维化形成的关键，丹酚酸的抗肝纤维化效果与Y干扰素的结果相似，体外研究发现它可抑制传一代培养的HSC的增殖，抑制转化生长因子I(TGF-^ I)在HSC中的信号转导。5、抗肿瘤作用
研究证明丹酚酸B不仅可以通过抗氧化作用保护神经细胞，而且可以通过减少NO的释放，改善J3-淀粉样蛋白对神经元的毒性作用，并能增强老化红细胞提高T淋巴细胞分泌IL-238，具有抗衰老、抗肿瘤作用。体内、体外实验表明丹酚酸B镁盐对多种肿瘤细胞株的生长具有较好的抑制作用。体外MTT实验中，丹酚酸B镁盐对人肾癌(786-0)、小鼠乳腺癌(C127)、人乳腺癌(MCF-7)、人肝癌(Ifep G2)、小鼠黑色素瘤(B16)、人胃癌(SGC-7901，AGS)、人食管癌(Eca-109)等细胞株的最大抑制率皆达到40%以上，其中对肝癌细胞株H印G2的最大抑制率可达到90%以上。中空纤维实验进一步证实丹酚酸B镁盐对于裸鼠体内生长的H印G2细胞也具有较好的抑制率，其最大抑制率可达到30. 11%。丹酚酸B(500ii g/ml)具有抗前列腺肿瘤的作用，其作用从6h左右变得非常明显，台盼蓝拒染实验和MTT结果均显示细胞活力大大减少，P〈0. 01;流式细胞仪检测到丹酚酸B作用12、24h的BPH1-C5细胞的凋亡率分别高到46. 23%和57. 87%，在流式细胞图中形成明显的凋亡峰。据此推测，丹酚酸B可能通过诱导前列腺肿瘤细胞的凋亡起到抗肿瘤的作用。6、其他作用
骨髓基质细胞是一类具有多向分化潜能的组织干细胞，体外培养的骨髓基质细胞已被广泛应用于组织损伤疾病的治疗。取大鼠股骨及胫骨骨干骨髓基质细胞培养，保留贴壁细胞进行传代纯化，一组加入诱导剂(5-氮胞苷)，一组在加入诱导剂基础上加入丹酚酸B，诱导骨髓基质细胞向心肌样细胞转化。结果显示加入丹酚酸B组与未诱导组及加入5-氮胞苷诱导组比较，长方形及多角形细胞增多，细胞凋亡数量减少，证明丹酚酸B能促进体外诱导骨髓基质细胞向心肌样细胞转化，可作为细胞外科的一种良好细胞来源，为细胞性心肌成形术探索一条新的途径。 影响钠钾ATP酶、H+、K+-ATP酶活性
此外，丹酚酸B镁盐还可用于预防或治疗肾炎、肾衰竭、脉管炎、静脉栓塞、老年性痴呆疾病、抗衰老、影响钠钾ATP酶、H+、K+-ATP酶活性等。本发明具有活血化瘀，通经活络之功效，主治因瘀血阻滞经络所致缺血性中风，症见半身肢体麻木，虚弱无力，拘挛疼痛，或运动不遂，口眼歪斜等。
I、血证
临床对治疗血证，尤其是冠心病、心肌缺血，其滴丸、注射液、草药均有明显改善其临床心悸、胸闷、气短诸症的作用。2、老年性痴呆
因动脉硬化致心、脑、肾诸脏器供血不足，尤其是脑动脉硬化与老年性痴呆症的发生有着密切的关系。经临床辨证，配以“丹参”疗效显著。3、乙肝治疗
丹参与黄芪配伍能起到较快持续的疗效。知肝之病必先实脾，方中黄芪、党参、白术、茯苓、山药、焦三仙补中益气，温土健脾。久病必瘀，丹参养血、凉血、祛瘀。4、讨论
现代研究证明，丹参内含有丹参酮、异丹参酮等呋喃并菲醌类和丹参新酮，丹参新醌、鼠尾草酚等菲醌、菲酚类以及维生素E等。丹参注射液能降低血压，增加冠脉血流量，减慢心率，缩短实验性心肌缺血的持续时间，还有抑制血小板聚集及抗凝作用。对中枢神经系统具有镇静、安定作用。对小鼠实验性结核病有治疗效果，能降低兔血糖。对晚期肝炎及血吸虫病的肝、脾肿大，有促进肝脏生理机能好转，并使肿大的肝、脾缩小变软的作用。丹参含有碘的成分，故对缺碘引起的甲状腺肿大有一定疗效。丹参，其味苦，其性微寒，具有养神定志，祛瘀血，生新血，凉血之功，配伍得当，内、夕卜、术后，一切血证均可随证施用。本发明的有益效果
本发明提取方法简单，水提、醇结合，可以提取丹参中水溶性与酯溶性成分，提取率提高，提取得到的有效成分丹酚酸B由三分子丹参素与一分子咖啡酸缩合而成，是目前研究较多的丹酚酸之一，对心、脑、肝、肾等器官均具有重要药理作用。
具体实施例方式实施例I :丹参的提取方法，包括以下步骤
(1)丹参药材粉碎，置提取罐中，第一次加4.5-5. 5倍量乙醇，确保乙醇浓度> 92%，先浸泡2. 8-3. 2小时，测罐内含醇度彡90%，加热回流提取I. 3-1. 8小时，汽压0. 03-0. 05Mpa,温度 70-80°C ；
(2)第二次加4.5-5. 5倍量浓度45-55%的乙醇加热回流提取I. 3-1. 8小时，汽压
0.03-0. 05Mpa，温度75-85°C，药渣再加4-5倍量的水煎煮I. 8-2. 2小时，放液，滤液浓缩，收膏相对密度I. 20-1. 24 ；
(3)第一次醇液浓缩时，每2小时以内出一次药液，浓缩结束后进行总混；第二次醇液浓缩时，每2小时以内出一次药液，浓缩比重I. 22-1. 26，浓缩结束后进行总混；
(4)一遍液、二遍液和水提膏按23-25:30-35:5比例混合，进行喷雾干燥，控制喷雾干 燥参数进口温度180-210°C，出口温度90-110°C，粉碎整粒，混合即得。
权利要求
1.一种丹参的提取方法，其特征在于包括以下步骤 (1)丹参药材粉碎，置提取罐中，第一次加4.5-5. 5倍量乙醇，确保乙醇浓度> 92%，先浸泡2. 8-3. 2小时，测罐内含醇度彡90%，加热回流提取I. 3-1. 8小时，汽压0. 03-0. 05Mpa,温度 70-80°C ； (2)第二次加4.5-5. 5倍量浓度45-55%的乙醇加热回流提取I. 3-1. 8小时，汽压0. 03-0. 05Mpa，温度75-85°C，药渣再加4-5倍量的水煎煮I. 8-2. 2小时，放液，滤液浓缩，收膏相对密度I. 20-1. 24 ； (3)第一次醇液浓缩时，每2小时以内出一次药液，浓缩结束后进行总混；第二次醇液浓缩时，每2小时以内出一次药液，浓缩比重I. 22-1. 26，浓缩结束后进行总混； (4)一遍液、二遍液和水提膏按23-25:30-35:5比例混合，进行喷雾干燥，控制喷雾干燥参数进口温度180-210°C，出口温度90-110°C，粉碎整粒，混合即得。
全文摘要
本发明公开了一种丹参的提取方法，包括以下步骤取丹参药材粉碎，进行两次醇取，制成水提膏，然后和两次的遍液进行混合，进行喷雾干燥，最后粉碎整粒，混合即得。本发明提取方法简单，提取得到的有效成分丹酚酸B由三分子丹参素与一分子咖啡酸缩合而成，是目前研究较多的丹酚酸之一，对心、脑、肝、肾等器官均具有重要药理作用。
文档编号A61P1/16GK102614254SQ20121008403
公开日2012年8月1日 申请日期2012年3月27日 优先权日2012年3月27日
发明者宋杏花, 李宏良, 王守旭 申请人:安徽华佗国药股份有限公司