专利名称：一种用于治疗畜禽肠道厌氧菌感染的纳米乳及其制备方法
技术领域：
本发明属于兽药领域，涉及一种可以用于畜禽因厌氧菌感染引起的肠炎的药物，具体涉及一种用于治疗畜禽肠道厌氧菌感染的纳米乳及其制备方法。
背景技术：
厌氧菌是广泛存在于自然界的其代谢过程不需要氧参与既能生长和繁殖的一类微生物菌群。主要包括革兰氏阴性杆菌、革兰氏阳性球菌、革兰氏阴性球菌等。厌氧菌是机体肠道内主要菌群，可占所有细菌总数的99%以上，正常情况下，由于受到不同菌群之间的相互制约和肠道环境的影响，一般和机体处于互利共生状态，机体不会发病，但当机体免疫力低下或肠道环境改变时，厌氧菌便会伺机大量繁殖，造成细菌性肠炎而对健康造成威胁。当畜禽发生厌氧菌感染而引起肠炎时，动物表现食欲降低或废除，拉恶臭粪便，有 时粪便中带血，动物表现消瘦，喜卧伏，不愿走动，精神萎靡，常常脱离群体。本病若不及时治疗，病情容易加重，最后因脱水而死亡。同时，由于肠壁粘膜被破坏，病原菌可伺机经肠壁进入血液，引起菌血症和败血症而加速动物死亡。有些病原菌具有产气特征，比如产气荚膜梭菌等，这些细菌产出的气体在正常情况下可由肠道有节律的蠕动而排除，但当肠道发生炎症时，一方面肠道螺动规律被破坏，造成气体排出障碍，另一方面由于病原菌的大量繁殖，产出的总气体量比正常状况下大大增加，最终会使动物出现肠鼓气而死亡。本病具有一定的传染性，主要经消化道传染，养殖过程中，一旦发现有动物有拉稀的症状，立即将其隔离观察，对粪便进行清理，对环境进行彻底消毒，杜绝隐患。对发病动物进行有针对性治疗，目前常用的有微生态疗法和药物疗法。微生态疗法是利用微生物菌群间的排他性，利用益生菌的优势而抑制病原菌的繁殖，但本方法目前技术还不成熟，尤其是动物的十二指肠和空肠前段，肠液环境很难适合微生物生长，一般口服微生态制剂在到达此段时，益生菌会大量死亡，很难有效到达患部肠段；药物疗法是目前养殖业的主要疗法，主要是使用抗生素，虽然有效，但引起了很多社会问题和食品安全问题。过多的使用抗生素不但会使养殖成本上升，同时还会对耐药性菌群进行选择，久而久之，菌群的耐药性逐渐增强，病愈发难治。由于我国的制度目前还不完善，有相当一部分养殖场盲目追求利益，不遵循药物休药期，使药物通过肉、蛋、奶等食品进入人体，对人体健康造成威胁，我国的肉类食品也多次因抗生素残留超标而影响出口，造成了一系列社会问题。目前治疗畜禽厌氧菌感染性肠炎的药物剂型以原粉、散剂和注射剂为主，但原粉和散剂在拌料时因用量少容易出现搅拌不均匀现象，有些原粉在饮水给药时药物溶解度低或溶解慢，造成畜禽用药量不足或堵塞引水管等情况。注射给药费时费力，动物应激大，不利于大群操作，在治疗消化道肠炎方面不如口服疗效快。因此，有必要研发一种药物新剂型来代替传统剂型，改进原有剂型的不足，满足市场需求。
发明内容
本发明针对上述问题和现有技术的缺陷，提供一种生物利用度好，稳定性高的用于畜禽肠道厌氧菌感染引起的肠炎的治疗的纳米乳剂。实验证明该纳米乳安全、无副作用且疗效显著。实现上述发明目的的技术方案是该用于治疗畜禽肠道厌氧菌感染的纳米乳，由下列质量百分比的原料组成
沉香油O. 1% 8. 0%
香芹酚O. 1% 7. 0%
甲硝唑O. 01% O. 7%
表面活性剂19. 0% 35. 0%
助表面活性剂O 5. 0%
余量为蒸馏水
上述原料的质量百分比之和为100% ；
在表面活性剂的选择上，本发明选用无毒性和生物相容性好的非离子型表面活性剂。非离子型表面活性剂在溶液中比较稳定，不易受强电解质、无机盐类的影响，也不易受酸碱的影响，并且与其他表面活性剂的相容性好，溶血作用较小。理论上，0/W型纳米乳状液的制备需要表面活性剂的HLB值介于8 18之间，考虑到制备工艺的简单性，即纳米乳的易形成性和制备出来的纳米乳的稳定性，本发明选用HLB介于10 15之间的液态非离子型表面活性剂。本发明选择吐温-80、聚氧乙烯醚蓖麻油(EL-40)和聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油(RH-40)三种。本发明以沉香油、香芹酚和甲硝唑作为组合，是因为沉香油主要成分为石竹烯氧化物、桉油醇等萜类化合物，这些化合物为沉香挥发油的主要成分，其含量高低直接与药效相关，具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘等功效，可治疗脘腹胀痛、呕吐呃逆等，对胃肠道具有调理和保健作用；香芹酚具有高效的杀菌活性，可作用于细菌细胞壁结构蛋白，使其变性和凝固，迅速穿透病原微生物细胞膜，使细胞内容物流失，破坏细胞内关键代谢过程最终使病原菌死亡；甲硝唑为硝基咪唑类抗菌药物，其所含的硝基在无氧环境中可还原成氨基而显示抗厌氧菌作用，其抗菌谱包括拟杆菌属、梭状芽孢杆菌属、产气芽孢杆菌、消化球菌属、真杆菌和粪链球菌等，具有理想的治疗效果；上述药物组合后，无配伍禁忌，疗效增强。本发明的助表面活性剂不是本纳米乳液形成的必要条件，在助表面活性剂为零的情况下也可以形成一种用于治疗畜禽肠道厌氧菌感染的纳米乳。本发明经透射电子显微镜检测，液滴直径分布在I IOOnm之间，外观为无色或淡黄色的透明液体，具有较好的稳定性
I、经时稳定性
本发明的纳米乳在室温自然变化条件下储藏3个月后，经检验外观持久澄清透明，未发现浑浊、分层、药物析出等破乳情况，说明经时稳定性良好。2、热贮稳定性
将本纳米乳分装于几个玻璃瓶中，密封之后置于50°C恒温箱中贮存15d，每隔5d取样观察。结果表明，该纳米乳热贮后检验外观仍保持澄清透明的外观，未发现浑浊、分层、药物析出等破乳情况，说明热贮稳定性良好。3、抗冷冻稳定性
将本纳米乳在冰箱中-10°c保存一周后。恢复至室温。该纳米乳会由固态融化为液态，经稀释检验后外观仍澄清透明，放置一周后继续检验，未发现浑浊、分层、药物析出等破乳情况，表明抗冷冻性良好。4、加速稳定性
将本纳米乳置于试管，密封，在15000r/min的转速下离心20分钟，经稀释检验后外观仍澄清透明，未发现浑浊、分层、药物析出等破乳情况。5、光稳定性实验
将部分该纳米乳装于玻璃瓶中，密封置于日光下，室温光照10d，于ld、3d、5d、10d分别取样。经稀释检验表明该纳米乳液保持澄清透明，无浑浊、分层、药物析出等破乳情况，表明光稳定性良好。本发明的一种用于治疗畜禽肠道厌氧菌感染的纳米乳具有治疗因肠道厌氧菌感 染而引起的肠炎的功效。用法口服或饮水。本发明的一种用于治疗畜禽肠道厌氧菌感染的纳米乳与现有技术相比，具有以下优点
1)水溶性好。可以在水中无限稀释而不会破乳，使用时溶解均匀，不堵塞管道，动物用药量整齐；
2)热力学稳定性高。本纳米乳组合物在一10°C和50°C之间储存不分相、不沉淀，不浑池，储存时间长，稳定性提闻；
3)生物利用度高。该纳米乳乳滴粒径在fIOOnm之间，很容易通过细胞膜而进入病原菌菌体内而发挥疗效；与普通剂型相比，降低了药物用量，大大缩短了休药期，药物无残留或残留量少；
4)提高了甲硝唑在水中的溶解度；
5)方法工艺简单，适合规模化生产。
具体实施例方式以下通过药物安全性试验和药效对比试验来进一步阐述本发明所述药物的安全性和有益效果。试验例I 本发明的纳米乳药物安全性试验
本实验采用改良寇氏法测动物的LD5tl，实验动物为I月龄蛋雏鸡，实验期限为两周。将70只一月龄健康蛋雏鸡随机分为7组，每组10只，其中第一组为实验对照组，第二组为本发明的纳米乳原液组、第三组为O. 6倍稀释的纳米乳原液，依次类推，每一组药液的浓度为前一组浓度的O. 6倍(即本急性毒性实验设计的组距为O. 6)。将各组动物分别称重，各组分别按照10g/kg体重的剂量灌服相对应的纳米乳液，对照组灌服等量的生理盐水，施药后各组动物饲养于同一环境下14天，期间观察动物的精神状态、饮食状况和活动情况等，实验结束后将未死亡的动物处死，观察各个器官病变情况，并记录。结果表明各组鸡群活动情况和健康状态均正常，剖检后各脏器也无异常病变，各组之间无差异，LD5tl > 10g/kg体重，属实际无毒范围，该结果表明本发明纳米乳液安全性良好。试验例2本发明的纳米乳与甲硝唑治疗家兔梭菌性腹泻效果对比试验梭菌性腹泻是家兔常见胃肠道传染病，病原体为产气荚膜梭菌，本病在天气突变时多发，发病兔群多为4月龄以下的幼兔，症状主要表现为精神萎靡、食欲不振、粪便稀软变形或呈胶冻状，有时带血，若不及时治疗患兔肠道内病原菌将大量繁殖，不断产气造成腹部膨大，敲击有鼓音，体重锐减，吹毛眼观皮肤呈黑紫色，进入此期一般很难治疗。选取临诊上自然发病梭菌性腹泻初期的患兔18只，体重在I.扩2. Ikg之间，将其随机分为对照组、甲硝唑组和本纳米乳组3组，每组6只。对照组每只灌服生理盐水10ml，甲硝唑组每只口服甲硝唑50mg、本纳米乳组灌服IOg本纳米乳液(载药量为O. 5%)，每日一次，连续用药3天，期间观察患兔饮食、活动和死亡情况，并作记录。疗效判断标准
无效患兔腹部膨大、体重锐减、食欲未改善、症状加重或死亡；
显效患兔食欲改善、粪便成形、精神良好、行为恢复；
治愈患兔粪便成形，行为表现、饮食状况和活动情况和健康兔无差别；
总有效率=显效率+治愈率
表1本纳米乳与甲硝唑治疗家兔梭菌性腹泻效果对比试验
权利要求
1.一种用于治疗畜禽肠道厌氧菌感染的纳米乳，其特征在于，由下列质量百分比的原料组成 沉香油O. 1% 8. 0%、香芹酚O. 1% 7. 0%、甲硝唑O. 01% O. 7%、表面活性剂19. 0% 35. 0%、助表面活性剂O 5. 0%、余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100% ； 所述的表面活性剂是非离子表面活性剂吐温-80、聚氧乙烯醚蓖麻油和聚氧乙烯40氢化蓖麻油中的一种或几种混合物； 所述的助表面活性剂是无水乙醇和1，2-丙二醇中的任意一种。
2.根据权利要求I所述的一种用于治疗畜禽肠道厌氧菌感染的纳米乳，其特征在于，该纳米乳的粒径在I IOOnm之间。
3.根据权利要求I所述的一种用于治疗畜禽肠道厌氧菌感染的纳米乳制备方法，其特征在于，包括以下步骤 1)按配方准确称取沉香油、香芹酚、甲硝唑、表面活性剂、助表面活性剂和蒸馏水，备用； 2)将所述量的甲硝唑溶于所述量的香芹酚中，并加入所述量的沉香油，搅拌均匀后作为油相； 3)将所述量的表面活性剂和助表面活性剂加入到步骤2)制备的油相中，快速搅拌均匀； 4)将蒸馏水作为水相慢慢加入到步骤3)制备的混合物中，边加边搅拌，该体系会出现由稀变粘稠再由粘稠变稀的过程，最终体系澄清透明即得。
全文摘要
本发明公开了一种用于治疗畜禽肠道厌氧菌感染的纳米乳，由下列质量百分比的原料组成沉香油0.1%～8.0%、香芹酚0.1%～7.0%、甲硝唑0.01%～0.7%、表面活性剂19.0%～35.0%、助表面活性剂0～5.0%、余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%。本发明对大多数专性厌氧菌具有较强的抑制和杀灭作用，主要用于治疗畜禽因厌氧菌感染引起的肠炎的治疗，包括拟杆菌属、梭状芽孢杆菌属、产气芽孢杆菌、消化球菌属、真杆菌和粪链球菌等。本发明的药物生物利用度高，抗菌作用明显，疗效显著，在兽药领域有广阔的市场前景。
文档编号A61K31/05GK102631474SQ20121013440
公开日2012年8月15日 申请日期2012年5月4日 优先权日2012年5月4日
发明者欧阳五庆, 沈巧艳, 郭建军 申请人:西北农林科技大学