一种改良的注射用胎盘多肽的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种生物制剂的制备方法，具体为一种改良的胎盘多肽的制备方法。该方法使用健康产妇足月分娩的胎盘中的胎盘血，进行病菌灭活、离心分离、澄清过滤、超滤、除菌过滤和冻干等步骤，简化了工艺，提高了生产效率，减少了产品批次间组分的差异，提高了产品的活性等质量指标。
【专利说明】一种改良的注射用胎盘多肽的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种生物制剂的制备方法，具体为一种改良的胎盘多肽的制备方法。【背景技术】
[0002]目前市场上的胎盘制剂，如胎盘组织注射液，主要生产工艺沿袭传统中药炮制方法，采用高温煮沸提取，减压浓缩等工艺制备；另外，也有单位使用HBVM-AgB阴性、HbsAb阳性胎盘作为原料，采用低温提取工艺制备胎盘制剂，用于乙型肝炎的治疗。
[0003]前者容易做到将产品中可能残留的病毒灭活，从而保障产品的安全，但由于是在高温下操作，因此，也极为容易出现将产品中的活性减少或者活性降低的情况。后者则恰好与前者相反，由于是低温操作，虽然可以较好的保持产品的活性，以保证其效力，但却容易出现有些病毒不能被去除或灭活，从而使产品的安全性受到影响的情况。
[0004] 申请人:于2006年申请了 “注射用胎盘多肽制备方法”200610150755.5的发明专利，该方法可有效保持产品中有效成分的活性，又可较为彻底的杀灭病原微生物，是一种新型的胎盘制剂工艺。
[0005]但在生产实践过程中，技术人员发现注射用胎盘多肽制备方法制备得到的胎盘多肽虽然较传统工艺(高温煮沸、减压浓缩等)有了极大的提高，但是仍然存在批次间产品成分差异等一些不足。
[0006]技术人员通过对原料、辅料、生产工艺等进行深入的研究，对注射用胎盘多肽制备方法工艺路线进行了改 良，大大的简化了工艺步骤，同时还可以减少产品批次间的成分差异、提高生产效率、使产品的活性组分的含量得到了提高。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种改良的胎盘多肽的制备方法，在原有工艺路线基础上对原、辅材料、关键工艺等进行改良，减少了工艺步骤、提高了生产效率、减少了产品批次间组分的差异、提高了产品的活性等质量指标。
[0008]本发明的技术方案如下:一种改良的胎盘多肽的制备方法，包括如下步骤:
[0009](I)收集健康产妇足月分娩的胎盘作为原料；
[0010](2)将合格的胎盘组织去掉筋膜后，充分挤压或揉捏，收集胎盘血，使用注射用水对胎盘组织反复进行冲洗；充分洗净后，将胎盘血与冲洗水装入容器混匀后分装入冻融容器内；
[0011](3)将冻融容器在低温条件及高温条件下进行多次冻融；
[0012](4)冻融后的物料在60±2°C条件下进行病原微生物灭活处理，并不断搅拌，以提高灭活效果；
[0013](5)对灭活处理后的物料以2000-5000rpm离心分离10-60分钟后取上清液，先经
0.3-1.0 μ m孔径的膜深层过滤，在用截留分子量为10000D的超滤膜超滤，获得超滤液；
[0014](6)向超滤液中加入占滤液重量百分比为5-10%的赋形剂,然后使用0.22 μ m的膜进行除菌过滤后分装；
[0015](7)将分装后的样品进行真空冷冻干燥。
[0016]进一步，如上所述的改良的胎盘多肽的制备方法，步骤(1)中对收集的胎盘进行病毒检测，筛选病毒检验结果为阴性的胎盘作为原料。
[0017]进一步，如上所述的改良的胎盘多肽的制备方法，步骤(3)中多次冻融的温度条件为-20°C~30°C。
[0018]进一步，如上所述的改良的胎盘多肽的制备方法，步骤(7)中进行真空冷冻干燥的具体操作为:先将样品温度迅速降至_40°C~-55°C，维持2~3h，抽真空至IOpa以下，经过20h缓慢升温至25°C~30°C维持3h左右；冻干完成后充医用氮气压盖。
[0019]本发明的有益效果如下:本发明使用健康产妇足月分娩的胎盘中的胎盘血，胎盘结缔组织不再进入工艺流程，由于不使用胎盘结缔组织，因此简化了胶体磨研磨工艺；本发明由于需要对胎盘组织中的血液进行冲洗，因此不再需要进一步添加稀释用水，有利于进一步提高单位产品的活性成分含量；本发明经过病毒灭活工艺处理后的物料不再使用酸化水解工艺。本发明对已有的注射用胎盘多肽制备方法工艺路线进行了改良，大大的简化了工艺步骤，同时还可以减少产品批次间的成分差异、提高生产效率、使产品的活性组分的含量得到了提高。
【具体实施方式】
[0020]下面结合具体实施例对本发明进行详细描述。
[0021]本发明所提供的改良的胎盘多肽的制备方法，是对“注射用胎盘多肽制备方法”200610150755.5的一种改进，包括如下步骤:
[0022](1)收集健康产妇足月分娩的胎盘中的胎盘，经乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒等病毒检测后，筛选病毒检验结果为阴性的胎盘作为原料；
[0023](2)将合格的胎盘组织去掉筋膜后，充分挤压或揉捏，收集胎盘血，使用注射用水(根据胎盘组织的大小确定冲洗水的用量)对胎盘组织反复进行冲洗；充分洗净后，将胎盘血与冲洗水装入容器混匀后分装入冻融容器内；
[0024](3)将冻融容器在低温条件及高温条件下进行多次冻融，温度条件范围可为-20°C~30°C ；
[0025](4)冻融后的物料在60±2°C条件下加热保温10h，进行病原微生物灭活处理，并不断搅拌，以提高灭活效果；
[0026](5)对灭活处理后的物料以2000-5000rpm离心分离10-60分钟后取上清液，先经
0.3-1.0 μ m孔径的膜深层过滤，在用截留分子量为10000D的超滤膜超滤，获得超滤液；
[0027](6)向超滤液中加入占滤液重量百分比为5-10%的赋形剂,然后使用0.22 μ m的膜进行除菌过滤后分装；赋形剂可采用甘露醇或其他常用的赋形剂；
[0028](7)将分装后的样品进行真空冷冻干燥，具体操作为先将样品温度迅速降至-40~-55°C，维持2~3h，抽真空至IOpa以下，经过20h缓慢升温至25~30°C维持3h左右；冻干完成后充医用氮气压盖。
[0029]成品检验方法与原方法相同，请参阅中国发明专利“注射用胎盘多肽制备方法”200610150755.5。[0030]本发明与原有发明的主要差异存在以下几点:
[0031]1.原有发明使用健康产妇足月分娩的胎盘，本发明使用健康产妇足月分娩的胎盘中的胎盘血，胎盘结缔组织不再进入工艺流程；
[0032]2.由于不使用胎盘结缔组织，因此简化了胶体磨研磨工艺；
[0033]3.原发明中使用等重生理盐水对胎盘的匀浆液进行稀释，本发明由于需要对胎盘组织中的血液进行冲洗，因此不再需要进一步添加稀释用水，有利于进一步提高单位产品的活性成分含量； [0034]4.经过病毒灭活工艺处理后的物料不再使用酸化水解工艺。
[0035]显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其同等技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
【权利要求】
1.一种改良的胎盘多肽的制备方法，包括如下步骤: (1)收集健康产妇足月分娩的胎盘作为原料； (2)将合格的胎盘组织去掉筋膜后，充分挤压或揉捏，收集胎盘血，使用注射用水对胎盘组织反复进行冲洗；充分洗净后，将胎盘血与冲洗水装入容器混匀后分装入冻融容器内； (3)将冻融容器在低温条件及高温条件下进行多次冻融； (4)冻融后的物料在60±2°C条件下进行病原微生物灭活处理，并不断搅拌，以提高灭活效果； (5)对灭活处理后的物料以2000-5000rpm离心分离10-60分钟后取上清液，先经0.3-1.0 μ m孔径的膜深层过滤，在用截留分子量为10000D的超滤膜超滤，获得超滤液； (6)向超滤液中加入占滤液重量百分比为5-10%的赋形剂,然后使用0.22 μ m的膜进行除菌过滤后分装； (7)将分装后的样品进行真空冷冻干燥。
2.如权利要求1所述的改良的胎盘多肽的制备方法，其特征在于:步骤(1)中对收集的胎盘进行病毒检测，筛选病毒检验结果为阴性的胎盘作为原料。
3.如权利要求1所述的改良的胎盘多肽的制备方法，其特征在于:步骤(3)中多次冻融的温度条件为_20°C~30°C。
4.如权利要求1或2或3`所述的改良的胎盘多肽的制备方法，其特征在于:步骤(7)中进行真空冷冻干燥的具体操作为:先将样品温度迅速降至_40°C~-55°C，维持2~3h，抽真空至IOpa以下，经过20h缓慢升温至25°C~30°C维持3h左右；冻干完成后充医用氮气压盖。
【文档编号】A61P1/16GK103784935SQ201210424109
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2012年10月31日 优先权日:2012年10月31日
【发明者】赵怀璞, 安全, 李炜宾, 田宇, 刘云霞, 崔梅兰, 贾雪, 张继荣 申请人:中国辐射防护研究院