在早期青光眼中恢复正常视觉功能的基于pacap（垂体腺苷酸环化酶活化多肽）的眼用制剂的制作方法
【专利摘要】本发明涉及基于PACAP（垂体腺苷酸环化酶活化多肽）的滴眼液形式的眼用制剂，其在视网膜营养不良/视网膜病变和视神经病变（尤其涉及青光眼）中恢复正常视觉功能。该制剂可以对完整眼表局部施用，且用于治疗多种形式的视网膜营养不良/视网膜病变和视神经病变，如青光眼。
【专利说明】在早期青光眼中恢复正常视觉功能的基于PACAP(垂体腺苷酸环化酶活化多肽)的眼用制剂
【技术领域】
[0001]本发明涉及滴眼液形式的眼用制剂，其包含在中枢神经系统的许多区域(包括视网膜)中表达的多肽，即PACAP (垂体腺苷酸环化酶活化多肽)。
[0002]该制剂用于在视网膜营养不良/视网膜病变和视神经病变，如青光眼(先天性青光眼、婴儿青光眼、青少年青光眼、成人青光眼、慢性原发性开角型青光眼、慢性原发性闭角型青光眼和继发性青光眼，包括色素性青光眼、医源性青光眼和急性青光眼)中恢复正常视觉功能。具体而言，本发明设计用于在青光眼病的早期阶段，在导致视网膜神经节细胞丢失的系列事件仍然可逆时恢复正常视觉功能。
现有技术
[0003]鉴于其生物学作用，PACAP (隶属于VIP (血管活性肠肽)/胰高血糖素/促胰液素家族的肽)被认为是最有趣的肽之一。因此，在脊椎动物范围内保守的结构和因此保守的功能特性暗示PACAP涉及多种重要功能；实际上，实验发现已证明它涉及多种器官的发育，内分泌系统、心血管系统、呼吸系统、生殖系统和神经系统的功能，及免疫反应和昼夜节律。它在CNS的不同区域(包括视网膜)中合成，具有多效性作用，作为神经递质、神经调质或神经营养因子发挥作用。PACAP以两种形式表达:较长的38个氨基酸的肽(PACAP38)和较短的27个氨基酸的肽(PACAP27)，较长的形式是主要在神经系统中表达的形式。两种基本类型的受体能够结合PACAP27和38 二者:1类受体(PAC1，具有高亲和力)和2类受体(对PACAP和VIP具有等同的亲和力；可以区分两种类型的2类受体=VPACl和2)。与PACl结合后，PACAP诱导腺苷酸环化酶和磷脂酶C的活化，导致环AMP (cAMP)水平的提高。PACAP还可以视为g蛋白偶联受体(GPCR)的配体，g蛋白偶联受体是能够在缺乏它们的特异性配体(分别为NGF和BDNF)的情况下活化酪 氨酸激酶A和B (分别为TrkA和TrkB)，导致多个胞内革巴标的磷酸化的受体家族(Lee和Chao, 2002 ；Rajagopal等，2004)。
[0004]能够合成和释放PACAP的视网膜细胞的分布似乎限于神经节细胞、无长突细胞和水平细胞的亚组(Seki等2000 ；Hannibal和Fahrenkrug2004);除神经节细胞外，特异性PACl受体的分布包括一些类型的无长突细胞和MUller细胞(Seki等1997;2000;D’ Agata和 Cavallarol998;Kubrusly 等 2005)。
[0005]因此，已提出PACAP应视为能够结合存在于视网膜中的两种类型的受体(PAC1和PAC2)的物质，这两种类型的受体对表达它们的视网膜细胞(尤其是神经节细胞)以及无长突细胞和MUller细胞发挥神经保护作用；在这种具体情况下，“神经保护作用”指具有药理学活性的分子对抗许多视网膜病变的细胞死亡特征的能力。例如，已证明PACAP (PACAP38和27)能够作为神经保护剂发挥作用，在诸如缺血性视网膜病变的多种血管障碍中预防对视网膜细胞的损伤，并预防视神经损伤后神经节细胞的死亡；PACAP还预防兴奋性神经毒素(如谷氨酸和红藻氨酸)处理导致的视网膜细胞死亡，及紫外线照射引起的细胞死亡(Silveira 等,2002 ；Seki 等 2006 ；Atlasz 等 2007 ；Atlasz 等,2010)。[0006]这些研究证明，PACAP已用于神经保护领域，更具体而言，用于在多种动物视网膜病变模型中预防视网膜细胞的死亡。此外，从未描述过PACAP对受影响的视网膜的直接作用来恢复其正常功能性，尤其是在细胞死亡之前的早期神经变性阶段期间。
[0007]已知在患有青光眼的患者中及在实验性青光眼模型中，神经节细胞的变性/死亡及随后其视网膜密度的降低代表青光眼的晚期(Quigley等1989 !Buckingham等2008 ；Boland和Quigley2011)。但是,在青光眼的早期，神经节细胞尚未损伤至接近死亡，但开始异常发挥功能，导致视力降低；可以通过在神经节细胞的水平记录结构化视觉刺激(其来源在内核层中)产生的视网膜电图(图像ERG、P-ERG)来检测这些功能改变(Maffei和Fiorentini, 1982 ；Maffei和Fiorentini, 1985)。已证明P-ERG对在实验动物模型和患有高压眼或青光眼的患者中检测内核层的早期损伤都有用(Domenici等，1991 ；Ventura和Porciatti2006 ；Parisi 等,2006 ；Falsini 等,2008)。
[0008]关于施用PACAP的方法，最近的数据表明，PACAP38和27能够跨过血脑屏障，铺平了它们在全身性治疗中可能的药理学应用的道路(Nonaka等，2002 ；Dogrukol-Ak等，2009)。但是，应避免PACAP的全身性使用(通过静脉内、肌内或腹膜内注射)，因为它可以引起副作用，如对昼夜节律的调节的作用(Kawaguchi等，2010);实际上，PACl受体敲除的小鼠显示昼夜节律的变化(Hannibal等2008)。此外，与PACAP的玻璃体内注射(其直接将分子释放入视网膜)不同，PACAP全身性治疗不能在动物模型中完全预防视网膜细胞的变性(Babai等2006 ;Kiss等2006)。因此，目前存在对鉴定新的PACAP制剂的需要，该制剂可以通过非侵入性技术来将PACAP运送至视网膜，因此避免了诸如眼内注射、视网膜下注射或眼球后注射(由于例如引起眼球穿孔、感染或出血的相关风险而不适合用于慢性长期治疗的高侵入性方法)的施用技术。
[0009]US2008/0300182描述了用于在多种视网膜病变模型中预防视网膜细胞死亡的含有PACAP (PACAP27和38)的眼用制剂。已通过药物诱导视网膜细胞死亡的实验模型中的玻璃体内注射在体内证明了 PACAP的神经保护活性；但是，滴眼液形式的局部施用和体内青光眼模型的施用都未曾报道过。视网膜细胞死亡的预防归因于表达PACl受体的MUller视网膜细胞释放炎症细胞因子白细胞介素-6 (IL-6)。但是，如文献中所报道，PACl受体主要集中在内核层，即神经节细胞中。此外，与涉及炎症过程的其他细胞因子一样，视网膜中IL-6的提高产生可以用闪光视网膜电图(闪光ERG ；0zawa等，2008)测量的视网膜对光的反应的改变；因此，IL-6的提高可以诱导而不是治疗进一步的视觉损伤。
[0010]此外，青光眼中的细胞死亡代表对神经节细胞和视神经的损伤的晚期；那时，视觉功能已严重受损，难以恢复。
[0011]US62242563提出用于在哺乳动物中预防细胞死亡的PACAP类似物和多种类型的障碍(诸如帕金森病和阿尔茨海默病的神经变性疾病、心血管疾病、糖尿病、视网膜病变和肾病)的治疗。据称，细胞死亡的预防负责在该障碍中的治疗活性，其中仅一般性地提到视网膜病变。因此适用上文针对US2008/0300182报道的评论。
[0012]JP10-505863公开了 PACAP在多种类型的脑疾病中预防神经元死亡的用途。此处的目的同样是预防神经元死亡，所以适用关于2008/0300182所作的评论。
[0013]EP1752158公开了 PACAP或 其类似物在促进角膜细胞的发生来提高角膜活性及治疗患有“干眼病”和角膜上皮的创伤性损伤的患者中的用途。[0014]W0200823717公开了通过作用于PACl受体来促进眼泪分泌的含有PACAP的眼用制剂，因此不涉及视网膜病变。
[0015]EP1546198公开了 PACAP在提高基底前脑的干细胞的增殖和分化能力，使得该细胞可以用于治疗神经变性障碍中的用途。
[0016]EP1507551公开了 PACAP在加强存在于成人脑中的神经元祖细胞的增殖/分化能力，用于治疗神经系统的多种改变中的用途。
[0017]US20020182729公开了基于PACAP调节正在发育的神经元中的环状细胞及在倍增阶段治疗神经系统的多种障碍的用途的方法。
[0018]虽然已在一些影响CNS的其他区域的视网膜病变和/或神经变性障碍中显示了PACAP在减少和/或预防细胞死亡中的作用，但PACAP或其类似物恢复青光眼患者的正常视力的治疗性用途尚未描述，也不能从现有技术推断。
[0019]青光眼是影响眼睛的一系列进行性障碍之一，如果得不到适宜的治疗，其将导致由神经节细胞的丢失和视神经纤维的进行性萎缩引起的失明。青光眼，尤其是其最频发的称为原发性开角型青光眼(P0AG ;青光眼病例的70-80%)的形式在大多数患者中表征为提高的眼内压(Ι0Ρ)，房水引流通道逐渐变窄；如果不迅速诊断和治疗此慢性障碍，它可以在晚期导致神经节细胞死亡及对视神经的损伤，且这些改变几乎不可逆。在进行性阶段，除视网膜外，青光眼可以影响视觉中心，如外侧膝状体，最终涉及视皮质，在此阶段治疗是无用的。近年来，药物治疗以降低IOP为目的，虽然相当大数目的患者对目前的药物治疗具有抗性并患有进行性、不可逆的视觉功能丧失。
[0020]上文报道的青光眼的药物治疗必然需要避免副作用(全身施用)及眼球穿孔、感染或出血(玻璃体内和视网膜下施用)的风险的局部眼施用的方法。
[0021]视网膜是中枢神经系统的部分分开的部分；存在多种类型的屏障，包括血-视网膜屏障，其防止诸如大分子的化合物非特异性扩散至视网膜。局部应用的药物活性化合物的眼内渗透受定位在角膜和结膜、巩膜、脉络膜和脉络膜血管中的屏障及通过存在于那些组织中的酶实现的全身吸收和代谢降解调节。一旦滴注(instill)，药物活性化合物必须跨过复杂的屏障系统(包括血-视网膜屏障)来渗透下层组织，直至视网膜。
[0022]此外，通过从其发出视神经纤维的神经节细胞，视网膜通过视神经与视觉中心(如外侧膝状体的背侧部分(dLGN))连接。
[0023]因此，有必要鉴定可以局部应用的分子(如PACAP)，以避免与侵入性方法的使用相关的风险，以有效浓度到达视网膜，该有效浓度不仅在神经节细胞和视神经死亡之前，在神经节细胞和视神经中抑制由青光眼诱发的障碍的进展，还尤其在视觉改变变得不可逆之前，将视觉改变恢复至正常。
[0024]发明概述
[0025]现已发现，在青光眼中通过局部眼施用施用时，PACAP (或其类似物)恢复视网膜细胞，尤其是神经节细胞的正常功能性。因此，PACAP在发生神经节细胞死亡之前，消除(counteract)早期青光眼的视觉损伤特征。
[0026]本发明基于以下论证:在青光眼的自发性鼠模型中用PACAP处理恢复内核层(神经节细胞)的正常功能性，导致通过P-ERG评价的视力的恢复；此发现发生在表征为通过分析其视网膜密度评价的神经节细胞死亡的阶段之前的疾病阶段。[0027]因此，本发明涉及设计用于在青光眼中恢复正常视力的含有PACAP的眼用制剂。
[0028]本发明的眼用制剂优选采用含有PACAP (垂体腺苷酸环化酶活化多肽，PACAP27或PACAP38)的滴眼液的形式。
[0029]本发明还涉及PACAP (27和38)在制备为了在早期恢复正常视力的目的而用于治疗视网膜、视神经和外侧膝状体的神经变性障碍的滴眼液形式的医疗产品中的用途。
[0030]附图简述
[0031]图1-局部应用PACAP38后视网膜中cAMP水平的测定。
[0032]图2-自发性青光眼的实验模型(DBA/2J小鼠)中多种年龄的眼压(IOP)水平的测量。
[0033]图3-青光眼中的神经节细胞的密度，在与提高的眼压相关的不同年龄测量；研究在自发性青光眼的实验模型(DBA/2J小鼠)中进行。
[0034]图4-不同年龄的鼠青光眼模型(DBA/2J小鼠)中的图像视网膜电图(P-ERG)。
[0035]图5-PACAP38的局部应用在神经节细胞密度降低之前的青光眼阶段显著减少衍生自内核层中的神经节细胞的视网膜反应的改变；研究在自发性青光眼的实验模型(DBA/2J小鼠)中进行。
[0036]图6-用PACAP局部处理后在自发性青光眼的实验模型(DBA/2J小鼠)中记录闪光ERG来证明光感受器和外核层的功能改变的完全缺乏。
[0037]发明详述
[0038]本发明的组合物优选采用以0.2至50 μ g/ μ I之间(优选1_10 μ g/μ I )的浓度包含PACAP的溶液剂、混悬剂、凝胶剂或软膏剂的形式。治疗日剂量约在4至10000 μ g (优选20-2000 μ g)之间，且可以以每天两次或多次施用达到局部滴注入结膜的10-100 μ I眼用溶液。
[0039]PACAP (27和38)可以单独或与其他活性组分(如β -阻断剂、前列腺素和碳酸酐酶抑制剂)组合施用。
[0040]制剂将包含可药用、与活性成分相容且眼睛耐受的适宜载体。
[0041]该载体的实例包括优选包含0.9%氯化钠的盐溶液和/或含有诸如羧甲基纤维素、聚羧乙烯、羟丙基纤维素、多糖、糖胺聚糖及其混合物和衍生物(如盐)的黏度控制剂的溶液。
[0042]黏度控制剂的使用可以改善生物利用率，保证PACAP比在盐溶液(其更快地从结膜洗去)中施用时更慢和更平缓的通过。
[0043]黏度控制剂优选ΕΡ0892636中公开的罗望子种子多糖(TSP)，其是从罗望子植物(Tamarindus indica)的种子中提取的多糖。
[0044]TSP含量可以不同，优选0.05至2% (重量/体积-w/ν)之间，且更优选0.25至0.5% (w/v)之间。
[0045]TSP在溶液中是透明的。溶液是黏的和无菌的，且用来保护角膜和结膜。TSP还在眼表形成持久的膜，其润滑和湿润角膜和结膜。
[0046]根据另一优选方面，黏性溶液以0.01至2% (w/v)之间，优选0.2至0.4% (w/v)之间的百分比包含羧甲基纤维素钠。羧甲基纤维素钠是无毒和惰性的，且在溶液中具有稳定的pH。此外，约1%的浓度具有类似于眼泪的折射率。[0047]另一优选方面是，黏性溶液包含透明质酸，更优选与TSP组合的透明质酸。
[0048]透明质酸含量可以在0.05%至0.8% (w/v)之间，更优选0.2至0.4% (w/v)之间。
[0049]根据优选实施方案，制剂在含0.9%NaCl的盐溶液中按2mg/mL的浓度包含PACAP。
[0050]根据另一优选实施方案，制剂在含0.2%羧甲基纤维素钠的盐溶液中按2mg/mL的浓度包含PACAP。
[0051]根据另一优选实施方案，制剂在含0.25%TSP的盐溶液中按lmg/mL的浓度包含PACAP。
[0052]可以局部直接对整个眼表，即通过非侵入性技术施用滴眼液制剂，避免使用诸如眼内注射、视网膜下注射和眼球后注射的侵入性技术。具体而言，制剂可以施用入结膜囊。制剂还可以配制为眼罩或在隐形眼镜中。
[0053]如实验部分所证明，在按照本发明局部施用时，PACAP运送至视网膜，在视网膜细胞中诱导第二 cAMP信使的视网膜浓度的提高，如对现有技术的介绍中所报道，其是PACAP受体的活化的胞内靶标之一。这些结果表明，PACAP不仅能够在局部处理后穿过多种组织屏障并散布至视网膜，还保持结构，该结构使得它能够结合并活化其表达在多种视网膜细胞(包括神经节细胞)中的特异性受体。
[0054]本发明的制剂可以用于预防和/或治疗视网膜、视神经和外侧膝状体的神经变性障碍，尤其是多种形式的青光眼(先天性青光眼、婴儿青光眼、青少年青光眼、成人青光眼、慢性原发性开角型青光眼、慢性原发性闭角型青光眼和继发性青光眼，包括色素性青光眼、医源性青光眼和急性青光眼)。
[0055]下文给出的实施例进一步说明本发明。
[0056]实施例1-用基于PACAP的制剂局部处理眼6小时后视网膜中cAMP水平的测定
[0057]使用包含PACAP38的基于盐溶液(0.9%NaCl)的制剂。
[0058]在小鼠(C57BL-6J，Harlan,意大利)上进行测试；局部应用PACAP38，滴注入一只眼的结膜囊，而另一只眼仅用盐溶液(“安慰剂”)处理作为对照。
[0059]视网膜中cAMP水平的测定
[0060]局部应用6小时后，在已通过腹膜内氨基甲酸乙酯注射(20%)诱导深度麻醉时处死动物。然后去除眼睛，测量用PACAP处理的眼睛和仅用盐水处理的另一只眼睛(对照眼)的视网膜匀楽中的 cAMP 水平。用 Cyclic AMP EIA KIT (Cayman Chemicon Company)通过cAMP测定来进行测量。图1的图表中所示的结果用含PACAP (50 μ M ;0.226 μ g/μ I)的盐溶液(0.9%NaCl)和乙酸(5%)获得，并表示为与对照眼相比的相对值(％)。用斯氏t检验进行统计学分析，将PACAP处理的眼与对照眼相比较:在所有情况下，处理的眼中的cAMP水平显著高于对照眼的cAMP水平(*，p〈0.05)。
[0061]这些结果表明，PACAP能够在局部应用于结膜囊后跨过多种屏障，并到达视网膜；PACAP似乎还能够活化其引起cAMP提高的细胞受体。
[0062]实施例2-在鼠青光眼模型中在多种年龄反复局部应用PACAP诱导的作用
[0063]已知称为PACl的PACAP受体在神经节细胞中表达(Seki等1997; 2000; D’Agata和Cavallarol998 ;Hannibal 和 Fahrenkrug2004 ;Kubrusly 等 2005)。在自发性青光眼的最常见的实验模型(称为DBA/2J的双突变小鼠)中验证了 PACAP的活性(John等，1998 ； Chang等，1999)。DBA/2J小鼠存在两个分开的基因的纯合突变；第一个是编码黑素体蛋白质的酪氨酸相关蛋白质(Tyrpl-/-)，第二个是膜糖蛋白(Gpnmb-/-);类似于色素性青光眼的形式，色素颗粒累积在小梁网中，随后小梁变性，虹膜萎缩，房水流出进行性受损(导致IOP提高)。
[0064]此小鼠的特征在于IOP的进行性提高，依赖于内核层/神经节细胞的对结构化视觉刺激(其可以是白条与黑条交替形成的格子，或具有不同对比度和大小的棋子)的视网膜反应进行性丧失；在人类中和在动物模型中，此视网膜反应称为图像视网膜电图(P-ERG;Domenici 等,1991 ;Ventura 和 Porciatti, 2006 ；Falsini 等,2008)。神经节细胞的功能紊乱在后期跟随神经节细胞的变性，伴随其密度的降低，及视神经的进行性萎缩(Ventura等，2006 Buckingham等，2008)。如图2中所示，在此鼠青光眼模型(DBA/2J)中，IOP在出生后5个月和6个月之间开始提高:在61/2个月，DBA/2J小鼠中的IOP已经显示显著高于在正常小鼠(C57bl/6J)中及在5月龄的DBA/2J小鼠中(即在该障碍开始之前)测量的IOP(t检验；*p〈0.05)。在11月龄，IOP进一步上升；因此可以推断与发生在人患者中的进展相似的障碍进展。
[0065]我们评价了 IOP的提高是否对应于细胞死亡和随后的神经节细胞(其密度降低)丢失。图3中的图表显示通过共焦显微镜分析用能够检测突触核蛋白(Surgucheva等，2008)的荧光抗体标记的神经节细胞的分布测量的神经节细胞的密度；图表显示从周边视网膜开始神经节细胞的密度的轻微降低，仅在11月高龄时开始出现。这些结果证明，在青光眼的鼠模型(DBA/2J小鼠)中，神经节细胞的死亡在11月高龄开始显现，即IOP开始提闻后的约5个月！Buckingham等(2008)提出，在DBA/2J小鼠中，细胞死亡的最大水平发生在16个月后。之前在患有青光眼的患者上进行的研究与在鼠模型中报道的那些一致，表明视觉损伤在神经节细胞的密度降低和视神经纤维萎缩之前的早期开始显现(Quigley, 1989 ；Harwerth, Quigley, 2006)。
[0066]可容易地通过记录图像视网膜电图(P-ERG)来在患者和动物模型中测量由视网膜神经节细胞(尤其是它们的突触)异常执行功能引起的早期视觉损伤，视网膜电图是甚至能够在初始阶段检测内核层尤其是神经节细胞的功能改变的非侵入性方法(Ventura等2006 ；Falsini等，2008; 2009)。图4显示通过连接至放大器并与计算机连接用于在线分析的角膜电极记录的由结构化视觉刺激(用作刺激物的视力格是水平格，其亮度谱的特征在于0.05,0.1和0.2周/度的空间频率和按2Hz的时间频率反转的90%对比度)产生的P-ERG。如图4中所示，与提高的IOP (图2)相对应，P-ERG在7月龄DBA/2J小鼠中已经改变(通过空间频率为0.05和0.2周/度的视觉刺激产生的P-ERG振幅的显著降低；斯氏t检验*p〈0.05)。在8月龄，即在IOP已在稳定的基础上提高(图2)但神经节细胞的密度未降低(图3)时，在一只眼中提供两周的反复局部应用含PACAP的盐溶液的处理(每48小时一次处理)，在另一只眼(对照眼)中提供载体(盐溶液)处理。使用三种不同的PACAP浓度(每组N=3 只 DBA/2J 小鼠):500nM (0.0022 μ g/μ I )、I μ M (0.0045 μ g/μ I )、50 μ M (0.226 μ g/μ I);仅最高浓度(50μΜ，0.226μ8/μ I)证明有效。图5中的柱状图显示在8至8.5个月之间按50 μ M (0.226 μ g/μ I)的浓度用PACAP局部处理2周(每48小时一次应用)在DBA/2J小鼠中防止了 P-ERG的改变，阻断了障碍的进展(将处理眼的数据与对照眼的数据相比较；斯氏t检验，*p〈0.05)，并将内核层的神经节细胞的视觉反应恢复至正常。
[0067]另一种类型的视网膜电图(闪光ERG，其测量光感受器和外核层对光的反应)在青光眼中似乎完全未受损，进一步支持这是一类至少在早期影响内核层(即神经节细胞)的障碍的理论。图6显示外核层(光感受器和感受器后细胞)对光的反应的振幅(闪光ERG)，其表明在未处理的DBA/2J小鼠中，外核层对光的反应存在，且完全正常。图6中显示的第二个结果尤其重要:用含PACAP (50μΜ)的盐溶液局部处理(两周，每48小时一次处理)的DBA/2J小鼠的眼睛存在正常的闪光ERG。此第二结果表明，PACAP未能修饰包含在光感受器的外侧区段中的光色素，因此未能改变光感受器对光的反应(闪光ERG)，如这类处理在视网膜水平诱导IL-6提高时将预期(Ozawa等2008)，如US2008/0300182中所提出。
[0068]所报道的数据导致这样的结论，在早期，在实验性青光眼模型中，按有效浓度用PACAP反复局部处理防止神经节细胞的功能改变，并恢复视网膜视力。能够对神经节细胞功能发挥保护作用的PACAP的最小有效浓度为0.226 μ g/ μ I。
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【权利要求】
1.含有载体和PACAP(垂体腺苷酸环化酶活化多肽)的局部眼用制剂，其用于治疗青光眼相关的视觉缺陷。
2.权利要求1的制剂，其中PACAP是PACAP27或PACAP38。
3.权利要求1或2的制剂，其中所述视觉缺陷与神经节细胞死亡开始之前的早期青光眼相关。
4.权利要求1至3中任一项或多项的制剂，其是溶液剂、混悬剂、凝胶剂或软膏剂的形式，且以0.2至50 μ g/μ I的范围内的浓度包含PACAP。
5.权利要求1至4中任一项或多项的制剂，其中所述载体是可选地包含增黏剂的盐溶液，所述增黏剂选自羧甲基纤维素、聚羧乙烯、羟丙基纤维素、多糖、糖胺聚糖，及其混合物和衍生物。
6.权利要求5的制剂，其中所述增黏剂是罗望子种子多糖(TSP)。
7.权利要求6的制剂，其中TSP以0.05至2% (重量/体积-w/v)的浓度存在。
8.权利要求5的制剂，其中所述增黏剂是百分比在0.01至2% (w/v)范围内的羧甲基纤维素钠。
9.权利要求5的制剂，其中所述增黏剂是浓度为0.05%至0.8% (w/v)的透明质酸，所述透明质酸可选地与TSP混合。
10.PACAP在制备滴眼液形式的药物中的用途，所述药物用于治疗视网膜、视神经和外侧膝状体的神经变性疾病，以在 疾病的早期恢复正常视力。
【文档编号】A61K9/00GK103501763SQ201280016729
【公开日】2014年1月8日 申请日期:2012年4月5日 优先权日:2011年4月8日
【发明者】L·多梅尼西, M·桑索, L·吉瓦尼尼 申请人:赫姆法拉匈牙利有限责任公司