多肽的制作方法
【专利摘要】本发明涉及包含其为普兰林肽类似物的氨基酸序列的多肽、包含这些多肽的药物组合物以及用作药物的这些多肽。
【专利说明】多肽
发明领域
[0001]本发明涉及包含其为SEQ ID No:2(普兰林肽)类似物的氨基酸序列的多肽、包含这些多肽的药物组合物以及用作药物的这些多肽。
[0002]发明背景
[0003]大量人类遭受糖尿病和肥胖，并且数量在增长。糖尿病是利用葡萄糖的能力部分或完全丧失的代谢病症。
[0004]大量治疗方案靶向过量的血糖，而其他方案则主要集中在体重减轻。用于降低血糖的最有效抗糖尿病剂是胰岛素和其类似物。早已知道，当传统的胰岛素用于治疗糖尿病时，其伴随有体重增加。每天不得不皮下注射胰岛素多达数次。
[0005]2型糖尿病通常在早期阶段通过饮食和锻炼进行治疗。随着状况发展，添加各种口服抗糖尿病剂。注射的药剂例如GLP-1类似物也可在该阶段使用。通常这些药剂在具有能够释放胰岛素和胰岛淀粉样多肽的功能性β-细胞的患者中最有效。
[0006]人胰岛淀粉样多肽(SEQ ID No:1)是37个氨基酸长的多肽，其具有难以用作药物的物理化学性质。具体而言，在体外和/或离体它具有原纤维生成(即，形成原纤维)的倾向，并且由于沉淀而变得无效。此外，胰岛淀粉样多肽难以配制，因为它化学不稳定并且在生理pH下沉淀。因此，它在酸性溶液中配制。
[0007]人胰岛淀粉样多肽与两个不同的受体复合物结合。这两个复合物包含降钙素受体和受体活性修饰蛋白RAMPl或RAMP3。由降钙素受体和胰岛淀粉样多肽受体之间的亲密关系，可预期胰岛淀粉样多肽受体激动剂与降钙素受体的一定的交叉反应性。作为实例，普兰林肽对降钙素受体具有一定的亲和力，但对胰岛淀粉样受体更有效(14倍)。
[0008]降钙素受体存在于全身的许多组织中，并且认为其与骨代谢的调节有关。目前鲑鱼降钙素以商品名Miacalcic?销售。该产品用于对抗高钙血症、骨质疏松症(包括更年期后骨质疏松症和糖皮质激素相关的骨质疏松症)、变形性骨炎(ostitis derforman)(佩吉特病)，并且每天一次通过注射给予或经鼻给予。降钙素与骨膜、肾和中枢神经系统(CNS)的特定受体结合。鲑鱼降钙素的血浆半寿期是约45分钟。
[0009]对降钙素受体具有活性的多肽可用于治疗高钙血症、骨质疏松症、佩吉特病、肥胖或肥胖相关疾病，以及用于预防肥胖相关疾病。用目前使用的降钙素制剂进行治疗的缺点是，由于鲑鱼降钙素的血浆半寿期短，药物必须一天给予数次，并且必须在临近进餐前给予。
[0010]对降钙素受体和胰岛淀粉样受体两者具有双活性的多肽可能是有利的。
[0011]普兰林妝(SEQID No:2)是由 Amylin Phrmaceuticals 以Sym丨in?上市的药物产品，其作为胰岛素的附加物用于治疗糖尿病。普兰林肽是胰岛淀粉样多肽受体激动剂。它对降钙素受体具有较低的活性(约1/14)。
[0012] 普兰林肽的化学结构如下显示，并且也显示于图1中。
[0013]
【权利要求】
1.包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列为SEQID No: 2的类似物，其中 所述类似物包含第14位的谷氨酸残基； 其中所述类似物的氨基酸序列编号与SEQ ID No: 2的氨基酸序列编号一致；和条件是所述多肽不是N-α -(19-羧基十九烷酰基)-Glu-Glu-Arg-[Glul，Glul4,Hisl7, Glu31]_普兰林肽；和 任选所述多肽具有与其氨基酸残基中的至少一个连接的至少一个取代基。
2.权利要求1的多肽，其中所述类似物包含第17位的残基，所述残基独立选自组氨酸、精氨酸、赖氨酸和缬氨酸中的任何一个；优选组氨酸和精氨酸；更优选精氨酸。
3.权利要求1和2中任一项的多肽，其中所述类似物包含第37位的残基，所述残基独立选自脯氨酸和酪氨酸中的任何一个；优选脯氨酸。
4.前述权利要求中任一项的多肽，其中所述类似物包含第35位的残基，所述残基独立选自组氨酸、精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺中的任一个；优选组氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸；更优选组氨酸和天冬酰胺；更优选天冬酰胺。
5.前述权利要求中任一项的多肽，其中所述类似物包含其为谷氨酸的第14位氨基酸残基、其为精氨酸的第17位残基和其为脯氨酸的第37位残基。
6.权利要求1的多肽，包含其为式⑴的SEQID No: 2类似物的氨基酸序列: Xaa1-Cys-Xaa3-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Glu-Phe-Leu-Xaa17-Xaal8-Ser-Ser-Xaa21-Xaa22-Phe-Gly-Pro-Xaa26-Leu-Pro-Pro-Thr-Xaa31-Val-Gly-Ser-Xaa35-Thr_Xaa37 ； 式(I) (SEQ ID No:3) 其中 Xaa1 是缺失的或独立选自 Ala、Cys、Glu、Gly、His、Arg、Ser 和 Lys ； Xaa3 独立选自 Gly、His、Arg、Ser 和 Asn ； Xaa17 独立选自 His、Arg、Lys 和 Val ； Xaa18 独立选自 Arg、Lys 和 His ； Xaa21 独立选自 Ala、Lys、Gin、Ser 和 Asn ； Xaa22 独立选自 Glu、Gin、Ser、Thr 和 Asn ； Xaa26 独立选自 Pro、Arg 和 Ile ；` Xaa31 独立选自 Serλ Glu、Asp 和 Asn ； Xaa35 独立选自 His、Arg、Lys、Asp 和 Glu ； Xaa37独立选自Pro和Tyr ; 并且其中C-末端可任选被衍生化。
7.前述权利要求中任一项的多肽，其中至少一个取代基与所述多肽的至少一个氨基酸残基连接。
8.前述权利要求中任一项的多肽，其中所述取代基选自表1(较早显示)所示的取代基中的任何一个。
9.前述权利要求中任一项的多肽，其中取代基与N-末端氨基酸残基的α-氨基连接，或与Lys残基连接。
10.前述权利要求中任一项的多肽，其选自表9所不多肽中的任何一个。
11.前述权利要求中任一项的多肽，其中所述多肽为:^0-[(幻-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-[Glul4，Argl7，Pro37]-普兰林肽[实施例53]。
12.前述权利要求中任一项的多肽，其用作药物。
13.前述权利要求中任一项的多肽，其用于治疗或预防高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量降低、I型糖尿病、肥胖、高血压、X综合征、血脂障碍、认知障碍、动脉硬化、心肌梗塞、冠心病和其他心血管病症、中风、炎性肠综合征、消化不良和胃溃疡，和/或用于减少食物摄入、减少β-细胞凋亡、增加β-细胞功能和β-细胞质量和/或用于恢复β-细胞的葡萄糖敏感性，高钙血症、骨质疏松症和变形性骨炎。
14.药物组合物，包含前述权利要求中任一项的多肽和药学上可接受的赋形剂。
15.用于制备权利要求14的药物组合物的方法，包括将前述权利要求中任一项的多肽与至少一种药学上可接受的 赋形剂混合。
【文档编号】A61K47/48GK103596973SQ201280028644
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2012年6月8日 优先权日:2011年6月10日
【发明者】L.舍弗, T.克鲁塞, H.托格森 申请人:诺沃—诺迪斯克有限公司