用于在抑制或预防肿瘤生长中使用的骨桥蛋白变体和包含这类骨桥蛋白变体的组合物的制作方法

文档序号:1251922阅读:265来源:国知局
用于在抑制或预防肿瘤生长中使用的骨桥蛋白变体和包含这类骨桥蛋白变体的组合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及包括骨桥蛋白变体的药用组合物和营养补充剂,以及这类组合物和补充剂用于治疗或预防肿瘤生成型癌症的医学用途。
【专利说明】用于在抑制或预防肿瘤生长中使用的骨桥蛋白变体和包含这类骨桥蛋白变体的组合物发明领域
[0001]本发明涉及包括骨桥蛋白变体的药用组合物和营养补充剂,以及这类OPN变体用于治疗或预防肿瘤生成型癌症的医学用途。
[0002]发明背景
[0003]骨桥蛋白(OPN)是最初分离自矿化骨的胶原细胞外基质的一种分泌的黏着糖蛋白(弗兰岑(Franzen) 1985)。OPN由多种不同的细胞类型表达,这些细胞类型包括成骨细胞、动脉平滑肌细胞、白细胞、几种类型的上皮细胞、以及不同谱系的转化细胞(丹哈特(Denhardt) 1995)。因此,已经在许多组织中检测到0ΡΝ,这些组织包括肾、胎盘、内耳的分泌上皮细胞和神经节、以及血管系统的平滑肌(巴特勒(Butler) 1996)。OPN还存在于许多体液例如血浆、尿、胆汁和乳中,并且它在许多转化细胞中显示升高表达(森杰(Senger) 1988)。这种蛋白质是高度酸性的,有大概25 %的氨基酸是天冬氨酸盐/天冬氨酸以及谷氨酸盐/谷氨酸,并且OPN具有相当大数量的磷酰化氨基酸(索伦森(Sorensen)1994)。
[0004]发明概述
[0005]诸位发明人已经出人意料地发现口服给予的骨桥蛋白变体抑制并且可能甚至预防癌肿瘤的生长。这种效果是完全没有预期到的。首先,从来没有记录过给予OPN具有与治疗癌症相关的有益效果,并且其次,非常出人意料的是口服给予的蛋白质和肽在肠胃系统外具有医学效果。
[0006]因此,本发明的一个方面涉及用于在治疗或预防涉及至少一种癌肿瘤的癌症中使用的一种OPN变体。
[0007]例如本发明的一个方面涉及用于在治疗或预防涉及至少一种癌肿瘤的癌症中使用的一种OPN变体,其中所述OPN变体包括相对于SEQ ID N0.1或SEQ ID N0.2具有至少80%序列一致性的活性OPN分子、和/或OPN分子活性片段,所述片段相对于SEQ ID N0.1的17-163位的序列或相对于SEQ ID N0.2的17-170位的序列具有至少80%序列一致性。
[0008]在本发明的背景中,术语“涉及一种癌肿瘤的癌症”涉及癌症疾病,其中至少一种癌肿瘤在患者体内或体外形成。该至少一种癌肿瘤可以是该癌症的原发性癌肿瘤或后续转移。
[0009]本发明的一个另外的方面涉及一种治疗或预防癌症的方法,该方法包括:向患有癌症的受试者、或向处于患癌症风险的受试者给予对治疗或预防所述癌症有效的量的一种OPN变体,并且其中所述癌症涉及至少一种癌肿瘤。
[0010]本发明的另一个方面涉及一种药用组合物,该药用组合物包括:
[0011]-一种OPN变体,以及
[0012]-一种药学上可接受的载体。
[0013]本发明的一个另外的方面涉及一种营养补充剂,该营养补充剂包括
[0014]- 营养有效量的一种OPN变体,以及
[0015]-一种或多种选自下组的组分,该组由碳水化合物来源、脂质来源、以及蛋白质来源组成。
[0016]此处提供的一些方面涉及方法,该方法包括向具有肿瘤细胞团的受试者给予对于抑制肿瘤细胞生长或复制有效的量的OPN变体。
[0017]在某些实施例中,该OPN变体是以大约0.05mg/ml至大约lg/ml的浓度给予的。在其他实施例中,该OPN变体是以大约0.05mg/kg体重至大约5g/kg的一个量给予。
[0018]在具体实施例中,该OPN变体是黏膜给予的。在其他实施例中,该OPN变体是口服、舌下、经颊、或经鼻给予的。
[0019]在一些实施例中,该肿瘤细胞可以是一种皮下肿瘤细胞,并且在前述实施例中任一项中,该肿瘤细胞可存在于胸部、宫颈、卵巢、前列腺、肺、结肠、直肠、胰、胃、肾、或甲状腺中。
[0020]在某些实施例中,该OPN变体分离自牛乳。该OPN变体可以是例如牛乳0ΡΝ。
[0021 ] 在具体实施例中,该OPN变体是重组0ΡΝ。
[0022]在一些实施例中,该OPN变体是以经过纯化的OPN变体来源提供。在某些实施例中,提供该OPN变体的经过纯化的来源是至少大约95%纯的。
[0023]此处提供的其他方面针对包括该OPN变体的药用组合物,优选地处于对于抑制肿瘤细胞生长或复制有效的量的OPN变体,以及一种药学上可接受的载体。
[0024]在某些实施例中,该OPN变体在该药用组合物中的量是大约0.05mg/ml至大约Ig/ml ο
[0025]在具体实施例中,该药用组合物被配制用于黏膜给药。该药用组合物可以例如被配制用于口服给药、舌下给药、颊给药、或鼻给药。
[0026]在一些实施例中,该药学上可接受的载体选自下组,该组由以下各项组成:乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、糖溶液、山梨糖醇、缓冲剂、盐水、以及水。
[0027]在某些实施例中,该药用组合物是固体、液体、或乳液。
[0028]在具体实施例中,该药用组合物是作为片剂或喷雾给予的。
[0029]在前述实施例中任一项中,该药用组合物可包括一种掩味剂。
[0030]在前述实施例中任一项中,该药用组合物可包括一种或多种抗癌靶向治疗剂或化疗剂。
[0031]在前述实施例中任一项中,该药用组合物可包括一种或多种免疫抑制剂或免疫刺激剂。
[0032]此处提供的其他方面针对包括该OPN变体的营养补充剂,优选地处于对于抑制肿瘤细胞生长或复制有效的量的OPN变体。
[0033]在一些实施例中,该补充剂是液体或粉剂。
[0034]在某些实施例中,该补充剂包括一种或多种水果、一种或多种蔬菜、酸牛乳、乳、冰淇淋、或其组合。
[0035]在前述实施例中任一项中,该补充剂可被以下各项增强:蛋白质、维生素、矿物质、抗氧化剂、益生元(preb1tics)、益生菌、或其组合。
[0036]在前述实施例中任一项中,该补充剂可以不含乳糖和/或不含谷蛋白。
[0037]在某些实施例中,该补充剂是有机的。
[0038]在一些实施例中,该补充剂是思慕雪(smoothie)或汁,而在其他实施例中,该补充剂是乳。
[0039]将结合以下的附图和详细说明描述本发明的这些以及其他方面。
[0040]附图简要说明
[0041]图1A显示小鼠中的肿瘤体积(cm3,+/_SEM),这些小鼠从第O天开始接受了不同浓度的OPN制剂的口服剂量。
[0042]图1B显示小鼠中的肿瘤体积(cm3,+/_SEM),这些小鼠从第5天开始接受了不同浓度的OPN制剂的口服剂量。
[0043]图2A-C显示了在第15、17、以及19天所有组中的肿瘤尺寸的比较;表明了显著差巳升。
[0044]图3显示了对照和喂养OPN小鼠(饮用水中0.3mg/ml)的平均肿瘤尺寸,三个独立试验的合并的结果。N = 30 (Omg/ml OPN制剂)或32 (0.3mg/ml OPN制剂)。
[0045]本发明的详细说明
[0046]如所述的, 本发明的一个方面涉及用于在治疗或预防涉及至少一种癌肿瘤的癌症中使用的一种OPN变体。
[0047]在本发明的一些优选实施例中,该OPN变体包括或甚至由以下各项组成:相对于SEQ ID N0.1或SEQ ID N0.2具有至少80%序列一致性的活性OPN分子、和/或OPN分子活性片段,所述片段相对于SEQ ID N0.1的17-163位的序列或相对于SEQ ID N0.2的17-170位的序列具有至少80%序列一致性。
[0048]在本发明的背景中,术语“骨桥蛋白变体”或“0ΡΝ变体”涉及天然OPN (例如可以在哺乳动物乳汁中发现)以及人工0ΡΝ(相对于天然OPN的序列包含少量氨基酸序列变异)。该OPN变体可以例如通过从OPN的天然来源例如哺乳动物乳汁,优选地牛乳纯化而制备,或它可以通过发酵或合成制备。术语“骨桥蛋白变体”或“0ΡΝ变体”涉及一种组合物(例如一种药用或营养补充剂)的组分,它们是OPN分子和例如通过水解或截断OPN分子而衍生自OPN分子的肽。
[0049]在本发明的背景中,术语“骨桥蛋白分子”或“0ΡΝ分子”涉及具有给定氨基酸序列的一种OPN分子的群体。这样一个群体可包含该OPN分子的几种磷-亚型和糖-亚型。
[0050]另外,该OPN变体可包含一种第二活性OPN分子,以及甚至进一步的活性OPN分子。
[0051]如将被理解的,该OPN变体是一种药学上有活性的OPN变体并包含一种或多种药学上有活性的OPN分子和/或OPN分子的一种或多种药学上有活性的片段。在本发明的背景中,OPN变体、活性OPN分子、或OPN分子的片段,如果能够降低癌肿瘤在哺乳动物受试者中的生长,就被视为“药学上有活性的”或“有活性的”。OPN变体、或个体OPN分子或OPN分子的片段的药学活性可以例如使用实例I中概述的程序进行测试。
[0052]在本发明的一些优选实施例中,该OPN分子是相对于SEQ ID N0.1 (牛OPN ;UniProtKB/Swiss-Prot条目P31096)具有至少80%序列一致性的一种肽。例如该活性OPN分子可以是相对于SEQ ID N0.1具有至少90%序列一致性的一种肽。优选地,该活性OPN分子是相对于SEQ ID N0.1具有至少95%序列一致性的一种肽。甚至更优选地,该活性OPN分子可以是例如相对于SEQ ID N0.1具有至少98%序列一致性的一种肽。该活性OPN分子可以例如具有SEQ ID N0.1的氨基酸序列。
[0053]在本发明的背景中,术语“序列一致性”涉及在两个氨基酸序列之间或在两个核酸序列之间(优选地是等长的)进行的一致性程度的定量测量。如果待比较的两个序列不是等长的,必须将它们对齐以最佳地拟合。序列一致性可以被计算为
[0054](Nref-Ndif) *100)/(Nref),
[0055]其中Ndif是对齐时这两个序列中不一致的残基的总数,并且其中NMf是参考序列的残基的数目。因此,DNA序列AGTCAGTC与序列AATCAATC(Ndif = 2并且NMf = 8)将具有75%的序列一致性。空位算作特定一个(多个)残基的不一致,即DNA序列AGTGTC与DNA序列AGTCAGTC(Ndif = 2并且Nref = 8)将具有75%的序列一致性。可以例如使用合适的BLAST-程序,例如由国家生物技术信息中心(Nat1nal Center for B1technologyInformat1n) (NCBI), USA提供的BLASTp-算法计算序列一致性。
[0056]在本发明的一些优选实施例中,该活性OPN分子是相对于SEQ ID N0.2 (人类OPN ;UniProtKB/Swi ss-Prot条目P10451)具有至少80%序列一致性的一种肽。例如该活性OPN分子可以是相对于SEQ ID N0.2具有至少90%序列一致性的一种肽。优选地,该活性OPN分子是相对于SEQ ID N0.2具有至少95%序列一致性的一种肽。甚至更优选地,该活性OPN分子可以是相对于SEQ ID N0.2具有至少98%序列一致性的一种肽。
[0057]在本发明的其他优选实施例中,该活性OPN分子是人类OPN (SEQ ID N0.2)。
[0058]可替代地,或另外地,该OPN变体可包含OPN分子活性片段。
[0059]在本发明的背景中,术语“骨桥蛋白分子的活性片段”或“0ΡΝ分子活性片段”涉及OPN分子的活性片段的群体,所述片段具有给定氨基酸序列。这样一个群体也可包含该OPN分子活性片段的几种磷-亚型和糖-亚型。该“0ΡΝ分子活性片段”优选地是天然OPN分子长η-端片段(例如可以在哺乳动物乳汁中发现)以及人工OPN分子长η-端片段(相对于天然OPN分子长η-端片段的序列包含少量氨基酸序列变异)。OPN分子活性片段可以例如通过从OPN片段的天然来源例如哺乳动物乳汁,优选地牛乳纯化而制备,或它可以通过发酵或合成制备。
[0060]因此,在本发明的一些优选实施例中,该OPN变体包含活性OPN分子的一个第一群体和OPN分子活性片段的一个第二群体。另外,这些群体可包含该活性OPN分子和该OPN分子活性片段的几种磷-亚型和糖-亚型。
[0061]在本发明的一些优选实施例中,该OPN分子活性片段是相对于SEQ ID N0.1的17-163 位(牛 OPN 的 17-163 位;UniProtKB/Swiss_Prot 条目 Ρ31096)的序列具有至少 80%序列一致性的一种肽。例如该OPN分子活性片段可以是相对于SEQ ID N0.1的17-163位的序列具有至少90%序列一致性的一种肽。优选地,该OPN分子活性片段是相对于SEQ IDN0.1的17-163位的序列具有至少95%序列一致性的一种肽。甚至更优选地,该OPN分子活性片段可以是相对于SEQ ID N0.1的17-163位的序列具有至少98%序列一致性的一种肽。
[0062]在本发明的一些优选实施例中,该OPN分子活性片段是相对于SEQ ID N0.2的17-170 位(人类的 17-170 位;UniProtKB/Swiss-Prot 条目 P10451)的序列具有至少 80%序列一致性的一种肽。例如该OPN分子活性片段可以是相对于SEQ ID N0.2的17-170位的序列具有至少90%序列一致性的一种肽。优选地,该OPN分子活性片段是相对于SEQ IDN0.2的17-170位的序列具有至少95%序列一致性的一种肽。甚至更优选地,该OPN分子活性片段可以是相对于SEQ ID N0.2的17-170位的序列具有至少98%序列一致性的一种肽。
[0063]在本发明的一些优选实施例中,该OPN变体是天然0ΡΝ,即天然存在于哺乳动物,例如于哺乳动物乳汁中的一种OPN变体。
[0064]在本发明的一些实施例中,该OPN变体包括相对于该OPN变体的总重量的至少10% (w/w)的OPN分子活性片段总量。该OPN变体可以例如包括相对于该OPN变体的总重量的至少15% (w/w)的OPN分子活性片段总量。可替代地,该OPN变体可以包括相对于该OPN变体的总重量的至少30% (w/w)的OPN分子活性片段总量。该OPN变体可以例如包括相对于该OPN变体的总重量的至少50% (w/w)的OPN分子活性片段总量。
[0065]甚至更高含量的活性片段可以是所希望的,因此,在本发明的一些实施例中,该OPN变体包括相对于该OPN变体的总重量的至少60% (w/w)的OPN分子活性片段总量。该OPN变体可以例如包括相对于该OPN变体的总重量的至少70% (w/w)的OPN分子活性片段总量。可替代地,该OPN变体可以包括相对于该OPN变体的总重量的至少80% (w/w)的OPN分子活性片段总量。该OPN变体可以例如包括相对于该OPN变体的总重量的至少90% (w/w)的OPN分子活性片段总量。例如,该OPN变体可以包括相对于该OPN变体的总重量的至少95% (w/w)的O PN分子活性片段总量。
[0066]在本发明的一些实施例中,该OPN变体包括相对于该OPN变体的总重量的10 % -90 % (w/w)范围中的活性OPN分子总量,以及相对于该OPN变体的总重量的10% -90% (w/w)范围中的OPN分子活性片段总量。
[0067]在本发明的一些实施例中,该OPN变体包括相对于该OPN变体的总重量的10 % -40 % (w/w)范围中的总活性OPN分子总量,以及相对于该OPN变体的总重量的60% -90% (w/w)范围中的OPN分子活性片段总量。
[0068]例如,该OPN变体可包括相对于该OPN变体的总重量的15% -35% (w/w)范围中的活性OPN分子总量,以及相对于该OPN变体的总重量的75% -85% (w/w)范围中的OPN分子活性片段总量。
[0069]在本发明的一些实施例中,该OPN变体包括相对于该OPN变体的总重量的至少10% (w/w)的活性OPN分子总量。
[0070]该OPN变体可以例如包括相对于该OPN变体的总重量的至少15 % (w/w)的活性OPN分子总量。可替代地,该OPN变体可以包括相对于该OPN变体的总重量的至少30% (w/w)的活性OPN分子总量。该OPN变体可以例如包括相对于该OPN变体的总重量的至少50%(w/w)的活性OPN分子总量。
[0071]甚至更高含量的活性片段可以是所希望的,因此,在本发明的一些实施例中,该OPN变体包括相对于该OPN变体的总重量的至少60% (w/w)的活性OPN分子总量。该OPN变体可以例如包括相对于该OPN变体的总重量的至少70% (w/w)的活性OPN分子总量。可替代地,该OPN变体可以包括相对于该OPN变体的总重量的至少80% (w/w)的活性OPN分子总量。该OPN变体可以例如包括相对于该OPN变体的总重量的至少90% (w/w)的活性OPN分子总量。例如,该OPN变体可以包括相对于该OPN变体的总重量的至少95% (w/w)的活性OPN分子总量。
[0072]在本发明的一些实施例中,该OPN变体分离自牛乳。
[0073]在本发明的一些优选实施例中,该OPN变体是牛0ΡΝ。牛OPN可以例如分离自牛乳,在这种情况下,它一般是磷酰化的和糖基化的。使用来自牛乳的以去磷酰化和/或去糖基化形式的OPN也是可能的。
[0074]牛乳OPN包含牛全长OPN (SEQ ID N0.1)以及截断的OPN亚型(具有SEQ ID N0.1的17-163位序列的一种肽)。
[0075]因此,在本发明的一些优选实施例中,该OPN变体包括或甚至由以下各项组成:相对于SEQ ID N0.1具有至少80%序列一致性的活性OPN分子、和OPN分子活性片段,所述片段相对于SEQ ID N0.1的17-163位的序列具有至少80%序列一致性。
[0076]例如,该OPN变体可包括或甚至由以下各项组成:相对于SEQ ID N0.1具有至少90%序列一致性的活性OPN分子、和OPN分子活性片段,所述片段相对于SEQ ID N0.1的17-163位的序列具有至少90%序列一致性。可替代地,该OPN变体可包括或甚至由以下各项组成:相对于SEQ ID N0.1具有至少95%序列一致性的活性OPN分子、和OPN分子活性片段,所述片段相对于SEQ ID N0.1的17-163位的序列具有至少95%序列一致性。例如,OPN变体可包括或甚至由以下各项组成:具有SEQ ID N0.1的序列的活性OPN分子、和具有SEQ ID N0.1的17-163位序列的OPN分子活性片段。
[0077]在本发明的一些实施例中,该OPN变体可包括或甚至由以下各项组成:相对于SEQID N0.2具有至少80%序列一致性的活性OPN分子、和/或相对于SEQ ID N0.2的17-170位的序列具有至少80%序列一致性的OPN分子活性片段。
[0078]例如,该OPN变体可包括或甚至由以下各项组成:相对于SEQ ID N0.2具有至少90%序列一致性的活性OPN分子、和OPN分子活性片段,所述片段相对于SEQ ID N0.2的17-170位的序列具有至少90%序列一致性。可替代地,该OPN变体可包括或甚至由以下各项组成:相对于SEQ ID N0.2具有至少95%序列一致性的活性OPN分子、和OPN分子活性片段,所述片段相对于SEQ ID N0.2的17-170位的序列具有至少95%序列一致性。例如,OPN变体可包括或甚至由以下各项组成:具有SEQ ID N0.2的序列的活性OPN分子、和具有SEQ ID N0.2的17-170位序列的OPN分子活性片段。
[0079]一种癌肿瘤包括几种肿瘤细胞(赘生性细胞),这些细胞特征是不正常的细胞生长或复制。在一些例子中,不正常的细胞生长(例如局部区域的细胞)导致肿瘤细胞团(赘生物,实质性病变)的形成。不正常的细胞生长是相对于不形成肿瘤细胞团的细胞生长。不正常的细胞可表现出与正常细胞相比不正常的(例如增加的)分裂速率。在一些实施例中,肿瘤细胞是恶化前的或恶性的。恶性肿瘤细胞可被称作癌症细胞,并且具有转移或传播到相邻组织或体内其他位置、并在那里生长为新的肿瘤的能力。
[0080]特别优选地是,至少一种癌肿瘤具有升高水平的0ΡΝ。
[0081]因此,在本发明的一些优选实施例中,该OPN变体用于在治疗或预防涉及至少一种癌肿瘤的癌症中使用,该癌肿瘤具有升高水平的0ΡΝ。
[0082]在本发明另外的优选实施例中,该肿瘤能够在具有该肿瘤的受试者的血浆中诱导升高水平的OPN。
[0083]在某些实施例中,该肿瘤细胞是上皮起源。上皮细胞以一层或多层存在,它们覆盖身体的整个表面,并且衬里于身体的除了血管、淋巴管、和心脏内部构造(它们由内皮衬里),以及胸腔和腹腔(它们由间皮衬里)之外的大部分空心结构。
[0084]上皮肿瘤包括良性和恶化前的上皮肿瘤,例如乳腺纤维腺瘤以及结肠腺瘤,以及恶性的上皮肿瘤。恶性的上皮肿瘤包括原发性肿瘤(也被称作癌(carcinoma))以及继发性肿瘤(也被称作上皮起源的转移)。癌包括腺泡癌、腺泡状癌(acinouscarcinoma)、肺泡腺癌(也叫腺样癌、腺肌上皮瘤、筛状癌和圆柱瘤)、腺癌(carcinomaadenomatosum)、腺癌(adenocarcinoma)、肾上腺皮质癌、肺泡癌、肺泡细胞癌(也称为细支气管癌、腺泡细胞肿瘤和肺腺瘤)、基底细胞癌(basal cell carcinoma)、基底细胞癌(carcinoma basocellulare)(也称为基底细胞上皮癌、基底样细胞瘤、以及毛母质癌)、基底细胞样癌、基底鳞状细胞癌、乳腺癌、细支气管肺泡癌、细支气管癌、支气管癌、脑样癌(cerebriform carcinoma)、胆管细胞癌(也称为胆管瘤和胆管癌)、绒毛膜癌、胶质性癌(colloid carcinoma)、粉刺癌、子宫体癌、筛状癌、销甲状癌(carcinoma en cuirasse)、皮肤癌(carcinoma cutaneum)、圆柱癌、圆柱细胞癌、导管癌、硬癌(carcinoma durum)、胚胎性癌、髓样癌(enc印haloid carcinoma)、眼球上癌、表皮样癌、腺样上皮细胞癌、溃瘍原癌(carcinoma exulcere)、纤维癌(carcinoma fibrosum)、胶样癌(gelatiniformcarcinoma)、胶状癌(gelatinous carcinoma)、巨大细胞癌(giant cell carcinoma)、巨细胞癌、腺状癌(glandular carcinoma)、颗粒细胞癌、毛母质癌、血样癌、肝细胞癌(也称为肝细胞瘤、恶性肝肿瘤和肝癌)、许特尔细胞癌(Hurthle cell carcinoma)、透明癌(hyaline carcinoma)、肾细胞癌、幼稚型胚胎性癌、原位癌、表皮内癌、上皮内癌、克龙派切尔癌(Krompecher's carcinoma)、库切兹凯细胞癌(Kulchitzky-cell carcinoma)、豆状癌(lenticular carcinoma)、豆状癌(carcinoma lenticulare)、脂肪瘤癌、淋巴上皮癌、乳腺炎性癌、髓样癌(carcinoma medullare)、髓样癌(medullary carcinoma)、黑色素癌(carcinoma melanodes)、黑色素鱗癌(melanotic carcinoma)、粘液癌(mucinouscarcinoma)、粘液癌(carcinoma muciparum)、粘液细胞癌(carcinoma mucocellulare)、粘液表皮样癌、粘液癌(carcinoma mucosum)、黏液腺癌(mucous carcinoma)、粘液瘤样癌(carcinoma myxomatodes)、鼻咽癌、黑色素癌(carcinoma nigrum)、燕麦细胞癌、骨化性癌、类骨质癌、卵巢癌、乳头状癌、门静脉周癌、浸润前期癌(preinvasive carcinoma)、前列腺癌、肾的肾细胞癌(又称肾的腺癌和hypernephoroid carcinoma)、储备细胞癌、肉瘤样癌(carcinoma sarcomatodes)、scheinderian carcinoma、硬癌(scirrhous carcinoma)、阴囊癌(carcinoma scroti)、印戒细胞癌、单纯癌、小细胞癌、马铃薯状癌(solanoidcarcinoma)、球形细胞癌、梭形细胞癌、海绵样癌(carcinoma spong1sum)、鳞状癌、鳞状细胞癌、绳捆癌(string carcinoma)、血管扩张性癌(carcinoma telangiectaticum)、毛细管扩张性癌(carcinoma telangiectodes)、移行细胞癌、结节性皮癌(carcinomatuberosum)、结节性皮癌(tuberous carcinoma)、抚状癌和绒毛癌(carcinoma vilosum)。
[0085]在本发明的一些优选实施例中,该癌肿瘤是纤维肉瘤。
[0086]在其他实施例中,该肿瘤细胞是间充质起源的,例如形成肉瘤的肿瘤细胞。肉瘤是稀见的发生于骨和软组织的间充质赘生物。不同类型的肉瘤包括脂肪肉瘤(包括黏液状脂肪肉瘤和多形脂肪肉瘤)、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性末梢神经鞘肿瘤(也称作恶性神经鞘瘤、神经纤维肉瘤、或神经原性肉瘤)、尤因肿瘤(Ewing’s tumor)(包括骨的尤因肉瘤、骨外[非骨]尤因肉瘤、以及原始神经外胚层肿瘤[PNET])、滑膜肉瘤、血管肉瘤(ang1sarcomas)、血管肉瘤(hemang1sarcomas)、淋巴管肉瘤、卡波西肉瘤(Kaposi’ssarcoma)、血管内皮瘤、纤维肉瘤、硬纤维肿瘤(也称作侵袭性纤维瘤)、隆凸性皮肤纤维肉瘤(DFSP)、恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、血管外皮细胞瘤、恶性间叶瘤、软组织腺泡状肉瘤、上皮样肉瘤、透明细胞肉瘤、促结缔组织增生性小细胞瘤、胃肠道间质瘤(GIST)(也称作GI间质肉瘤)、骨肉瘤(也称作骨原性肉瘤)_骨骼和骨外的、以及软骨肉瘤。
[0087]在本发明的一些优选实施例中,该癌肿瘤是腺癌或乳腺癌。
[0088]在一些实施例中,这些肿瘤细胞是黑素细胞起源的。黑色素瘤是从皮肤和其他器官的黑素细胞系统发生的肿瘤。黑色素瘤的实例包括恶性雀斑样痣黑色素瘤、浅表扩散性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、以及肢端雀斑样黑色素瘤。
[0089]在仍其他实施例中,这些肿瘤细胞包括在以下各项中发现的肿瘤细胞:胆道癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、上皮内赘生物(包括博文氏病(Bowen’s disease)和佩吉特氏病(Paget’ s disease))、肝癌症、口腔癌(包括鳞状细胞癌)、肉瘤(包括纤维肉瘤和骨肉瘤)、皮肤癌(包括黑色素瘤)、卡波西肉瘤、睾丸癌(包括胚组织肿瘤(精原细胞瘤、非-精原细胞瘤(畸胎瘤、绒毛膜癌))、间质肿瘤和生殖细胞肿瘤、甲状腺癌(包括甲状腺腺癌和髓质瘤)、以及肾癌(包括腺癌和维尔姆斯肿瘤(Wilms’ tumor))。
[0090]在具体实施例中,这些肿瘤细胞可起源于骨、肌肉或结缔组织。这些肿瘤细胞可在骨和结缔组织的原发性肿瘤(例如肉瘤)中发现。
[0091]在其他实施例中,这些肿瘤细胞可以是转移性的。在一些实施例中,这些转移性肿瘤是上皮起源的。癌可转移至骨(如乳腺癌中观察到的)和肝(如有时在结肠癌情况下)。此处提供的方法针对抑制转移性肿瘤的生长或复制而不考虑转移位点和/或原发性肿瘤位点。
[0092]该OPN变体可以例如包括OPN分子。在本发明的一些优选实施例中,该OPN变体可以包含OPN分子或甚至由其组成。
[0093]该OPN变体、或个体活性OPN分子或OPN分子活性片段可分离自这类化合物的天然来源。可替代地,该OPN变体可通过发酵或通过化学合成制备。
[0094]在某些实施例中,该OPN变体分离自乳,并且在具体实施例中该乳是牛乳。在其他实施例中,该OPN变体分离自其他家养的产乳哺乳动物,包括山羊、绵羊、水牛、美洲驼和骆驼。关于从乳中分离OPN变体的方法参见例如美国专利号7,259,243,通过引用将其全部披露结合在此。
[0095]在一些实施例中,将OPN变体的来源针对该OPN变体进行纯化。在一些实施例中,OPN变体的来源是至少大约50%至大约60%、至少大约60%至大约70%、或至少大约70%至大约80%纯的。在一些实施例中,它是至少大约80%至大约90%纯的,而在其他实施例中,OPN变体的来源是至少大约90%至大约95%纯的,或更多。在某些实施例中,OPN变体的纯化来源是至少大约95%纯的,例如95%、96%、97%、98%、99%、或99.5%纯的,或更多。
[0096]在特定实施例中,该OPN变体的纯化来源是纯化的牛OPN制品,例如像LacprodanOPiN- 10? (阿尔拉食品配料(Aria Foods Ingredients),维比(Viby),丹麦)(也参见美国专利号7, 259,243)。Lacprodan OPN-1 O?包括大概22% (w/w)的全长牛乳OPN以及大概65% (w/w)的牛乳OPN亚型(全长OPN的截断版)。
[0097]在其他实施例中,该OPN变体是重组蛋白质或肽。
[0098]该OPN变体可以按几种方式给药。
[0099]在本发明的一些优选实施例中,该治疗或预防是通过口服给药。口服给药可以例如包括舌下给药和/或颊给药。可替代地,或另外地,口服给药可包括,该OPN变体进入胃肠系统。
[0100]可替代地,该OPN变体可以通过胃肠外,例如通过注射或输注给药。因此,在本发明的一些优选实施例中,该治疗或预防可以例如是通过静脉内(IV)给予该OPN变体。在本发明的其他优选实施例中,该治疗或预防可以例如通过肌内或皮下给药,例如肌内或皮下注射。在本发明的其他优选实施例中,该治疗或预防可以例如通过腹膜内给药,例如腹膜内注射。
[0101]在本发明的另外的实施例中,该治疗或预防可以例如通过鼻给药。
[0102]在本发明的一些实施例中,该治疗或预防是用于抑制和/或降低肿瘤细胞生长或复制。例如该治疗或预防可用于预防肿瘤细胞复制。该治疗或预防可以例如用于预防肿瘤细胞生长。
[0103]在本发明的一些优选实施例中,此处提供的医学用途和方法针对抑制和/或降低肿瘤细胞的生长或复制而不考虑它们的起源位点。
[0104]该治疗或预防还可用于抑制和/或降低癌肿瘤生长。
[0105]在本发明的一些优选实施例中,该治疗是用于预防癌肿瘤生长。例如该治疗可用于预防癌肿瘤的癌细胞的生长和/或复制。
[0106]在本发明的一些实施例中,该治疗或预防是用于减少患有涉及至少一种癌肿瘤的癌症的受试者的体内转移风险。例如,该治疗或预防可用于预防患有涉及至少一种癌肿瘤的癌症的受试者的体内转移。
[0107]该治疗或预防可以例如预防肿瘤细胞生长或复制。
[0108]在本发明的一些优选实施例中,待治疗的受试者是人类受试者。
[0109]在本发明的一些优选实施例中,待治疗的受试者患有涉及至少一种癌肿瘤的癌症,该癌肿瘤具有升高水平的0ΡΝ。
[0110]在本发明的背景中,如果癌肿瘤中的OPN的水平是至少I纳克/微克蛋白质,则该癌肿瘤具有升高水平的0ΡΝ。癌肿瘤中的OPN的水平是根据实例3确定的。在本发明的一些实施例中,如果癌肿瘤中的OPN的水平是至少5纳克/微克蛋白质,则该癌肿瘤被视为具有升高水平的0ΡΝ。例如,如果癌肿瘤中的OPN的水平是至少10纳克/微克蛋白质,则该癌肿瘤可被视为具有升高水平的0ΡΝ。在本发明的其他实施例中,如果癌肿瘤中的OPN的水平是至少20纳克/微克蛋白质,则该癌肿瘤被视为具有升高水平的0ΡΝ。例如,如果癌肿瘤中的OPN的水平是至少50纳克/微克蛋白质,则该癌肿瘤可被视为具有升高水平的0ΡΝ。
[0111]可替代地,癌肿瘤中的OPN的升高水平可通过如针对人类肿瘤样品描述的必要的免疫组织化学确定(塔克(Tuck) 1998)。将4-6微米段的福尔马林固定的石蜡包埋的肿瘤组织再水化并通过在0.01M柠檬酸钠(pH6.0)中煮12分钟使其经受抗原修复。在5%山羊血清中阻断之后,根据生产商指示稀释抗骨桥蛋白抗体(R&D#AF808或圣克鲁兹生物技术(Santa Cruz B1technologies)mAK2Al)并与这些组织片段孵育I小时。使用载体ABC亿利达(Elite)试剂盒执行第二抗体孵育和检测,该试剂盒包括生物素酰化的抗山羊抗体和抗生物素蛋白-生物素复合物(载体目录号#PK-6105);通过用二氨基联苯胺(DAB,包含在试剂盒中)进行染色达成检测。染色的程度和强度是用显微镜确定并根据描述于(塔克(Tuck) 1998)中的半定量系统分级。具有大于4的得分的肿瘤样品将被视为具有升高水平的 OPN。
[0112]在本发明的其他优选实施例中,具有该癌肿瘤的受试者在衍生自其血液的血浆中具有升高浓度的0ΡΝ。
[0113]在本发明的背景中,如果OPN的血浆浓度是至少80纳克/mL,则该受试者在其血浆中具有升高浓度的0ΡΝ。衍生自受试者血液的血浆中的OPN的浓度是根据实例4确定的。在本发明的一些实施例中,如果OPN的血浆浓度是至少100纳克/mL,则该受试者在其血浆中具有升高浓度的0ΡΝ。例如,如果OPN的血浆浓度是至少120纳克/mL,则受试者在其血浆中可具有升高浓度的0ΡΝ。在本发明的其他实施例中,如果OPN的血浆浓度是至少140纳克/mL,则该受试者在其血浆中具有升高浓度的0ΡΝ。例如,如果OPN的血浆浓度是至少180纳克/mL,则受试者在其血浆中可具有升高浓度的0ΡΝ。
[0114]应注意,在该癌肿瘤或在血浆中测量的OPN是由该受试者产生的0ΡΝ,并且它不需要与该OPN变体相同。
[0115]在本发明的一些优选实施例中,给予或待给予该OPN变体的受试者对发展涉及至少一种癌肿瘤的癌症具有增加的风险。
[0116]在本发明的背景中,如果受试者发展癌肿瘤的终生风险比针对来自已匹配性别、年龄和种族的普通人群的人所计算的高至少20%,则该受试者被视对发展涉及至少一种癌肿瘤的癌症具有增加的风险。
[0117]增加风险的一个实例是具有患有乳腺癌的一级亲属的一名55岁的女性:该女性发展乳腺癌的终身风险比普通群体高36% (参见例如www.cancer, gov/bcrisktool/处的乳腺癌风险评估工具(the Breast Cancer Risk Assessment Tool),该工具是由美国国家癌症研究所(NCI)设计的一个交互工具)。
[0118]增加的风险可由遗传或环境情况或由该受试者的生活方式引起。
[0119]在本发明的一些实施例中,该增加的风险是由环境情况引起。该受试者可以例如已暴露于显著量的放射性辐射或显著量的致癌物质。
[0120]在本发明的其他实施例中,该增加的风险是由该受试者的生活方式引起。该受试者可以例如是一个吸烟者或前吸烟者。
[0121 ] 在本发明的仍其他实施例中,该增加的风险是由来自该受试者的亲代的继承引起。该受试者可以例如具有至少一位患有乳腺癌、肺癌、卵巢癌或结肠癌的一级亲属,例如母亲、父亲、姐妹或兄弟。
[0122]具有发展癌症的增加的风险的受试者可以例如具有与发展涉及至少一种癌肿瘤的癌症的增加的风险相关的一个遗传谱。
[0123]在本发明的背景中,术语“遗传谱”涉及该受试者从其亲代继承的基因或涉及由环境情况引起的基因突变。
[0124]在本发明的一些实施例中,该遗传谱包括至少一个与发展涉及至少一种癌肿瘤的癌症的增加的风险相关的遗传的基因。这类基因的一个实例是BRCAl基因或BRCA2基因。参见例如纳尔逊(Nelson) 2005。
[0125]在本发明的背景中,如果遗传谱的携带者发展该癌症的终生风险比非携带者高至少20%,则该遗传谱被视与发展涉及至少一种癌肿瘤的癌症的增加的风险相关。
[0126]在本发明的一些优选实施例中,还用另一种类型的抗癌治疗对治疗的或待治疗的受试者进行治疗。这样的其他种类的抗癌治疗的实例是例如化疗、化学预防、靶向治疗、骨髓移植、放疗、外科手术、或其组合。
[0127]在本发明的一些优选实施例中,该OPN变体是以治疗的受试者的大约0.05mg/kg体重至大约5g/kg体重范围中的每日剂量给药。
[0128]如果将该OPN变体给予(例如口服)该受试者,在受试者体内的肿瘤细胞生长速率以及因此的肿瘤细胞团的总尺寸可被降低并且在某些实施例中统计学上显著降低。由于受试者接受有效量的该OPN变体而导致的肿瘤细胞生长的抑制是相对于在该受试者接受该OPN变体之前相同肿瘤的肿瘤细胞生长速率,或相对于未暴露于有效量的该OPN变体的受试者体内可比较的肿瘤(在细胞团的初始尺寸和细胞类型上可比较)的肿瘤细胞生长。肿瘤细胞生长可指细胞分裂或复制的速率,或该肿瘤细胞团的总尺寸(例如体积或周长)。测量肿瘤细胞团的方法在本领域中是熟知的。例如,参见特美克(Tomayko) 1989,通过引用结合在此。
[0129]在本发明的背景中,癌肿瘤的尺寸是指该肿瘤的体积。癌肿瘤的生长速率是指该肿瘤每个时间单位的体积增长。癌肿瘤的体积可通过常规成像技术例如MRI扫描仪或超声成像确定。
[0130]在某些实施例中,相对于未暴露于治疗有效量的该OPN变体的相似肿瘤的生长速率或尺寸,肿瘤细胞团的生长速率或尺寸可被降低至少大约5%至大约10%。在其他实施例中,该肿瘤细胞团可被降低至少大约10%至大约15%、至少大约15%至大约20%、至少大约20%至大约25%、至少大约25%至大约30%、至少大约30%至大约35%、至少大约35%至大约40%、至少大约40%至大约45%、至少大约45%至大约50%、至少大约50%至大约55%、至少大约55%至大约60%、至少大约60%至大约65%、至少大约65%至大约70%、至少大约70%至大约75%、至少大约75%至大约80%、至少大约80%至大约85%、或至少大约85%至大约90%、或更多。在又其他实施例中,该肿瘤细胞团被降低至少大约50%。在具体实施例中,该肿瘤细胞团被降低至少大约75%。
[0131]可替代地,相对于未暴露于治疗有效量的该OPN变体的相似肿瘤的生长速率或尺寸,肿瘤细胞团的生长速率可被降低大约5%至大约100%。例如肿瘤细胞团的生长速率可被降低大约20%至大约95%。优选地,肿瘤细胞团的生长速率被降低大约40%至大约100%。甚至更优选地,肿瘤细胞团的生长速率被降低大约60%至大约100%。
[0132] 可以按对抑制肿瘤细胞的生长或复制有效的量将如此处所述的该OPN变体给予受试者。在某些实施例中,该OPN变体可以按大约0.05mg/ml至大约lmg/ml的浓度给予。在一些实施例中,它可以按大约0.05mg/ml至大约0.lmg/ml、大约0.lmg/ml至大约0.15mg/ml、大约 0.15mg/ml 至大约 0.2mg/ml、大约 0.25mg/ml 至大约 0.3mg/ml、大约 0.3mg/ml至大约 0.35mg/ml、大约 0.35mg/ml 至大约 0.4mg/ml、大约 0.4mg/ml 至大约 0.45mg/ml、大约 0.45mg/ml 至大约 0.5mg/ml、大约 0.55mg/ml 至大约 0.6mg/ml、大约 0.6mg/ml 至大约 0.65mg/ml、大约 0.65mg/ml 至大约 0.7mg/ml、大约 0.7mg/ml 至大约 0.75mg/ml、大约 0.75mg/ml 至大约 0.8mg/ml、大约 0.85mg/ml 至大约 0.9mg/ml、大约 0.9mg/ml 至大约0.95mg/ml、或大约0.95mg/ml至大约lmg/ml的浓度给予。在一个实施例中,该OPN变体可以按0.03mg/ml的浓度给予。在另一个实施例中,该OPN变体可以按0.12mg/ml的浓度给予。在又另一个实施例中,该OPN变体可以按0.3mg/ml的浓度给予。
[0133]在具体实施例中,该OPN变体可以按大约lmg/ml至大约0.lg/ml的浓度给予。在一些实施例中,它可以按大约lmg/ml至大约5mg/ml、大约5mg/ml至大约10mg/ml、大约I Omg/ml至大约15mg/ml、大约15mg/ml至大约20mg/ml、大约20mg/ml至大约25mg/ml、大约25mg/ml至大约30mg/ml、大约30mg/ml至大约35mg/ml、大约35mg/ml至大约40mg/ml、大约40mg/ml至大约45mg/ml、大约45mg/ml至大约50mg/ml、大约50mg/ml至大约55mg/ml、大约55mg/ml 至大约 60mg/ml、大约 60mg/ml 至大约 65mg/ml、大约 65mg/ml 至大约 70mg/ml、大约 70mg/ml 至大约 75mg/ml、大约 75mg/ml 至大约 80mg/ml、大约 80mg/ml 至大约 85mg/ml、大约85mg/ml至大约90mg/ml、大约90mg/ml至大约95mg/ml、或大约95mg/ml至大约0.lg/ml的浓度给予。
[0134]在一些实施例中,该OPN变体可以按大约0.lg/ml至大约lg/ml的浓度给予。在其他实施例中,它可以按大约0.lg/ml至大约0.15g/ml、大约0.15g/ml至大约0.2g/ml、大约 0.2g/ml 至大约 0.25g/ml、大约 0.25g/ml 至大约 0.3g/ml、大约 0.3g/ml 至大约 0.35g/ml、大约0.35g/ml至大约0.4g/ml、大约0.4g/ml至大约0.45g/ml、大约0.45g/ml至大约0.5g/ml、大约 0.5g/ml 至大约 0.55g/ml、大约 0.55g/ml 至大约 0.6g/ml、大约 0.6g/ml 至大约 0.65g/ml、大约 0.65g/ml 至大约 0.7g/ml、大约 0.7g/ml 至大约 0.75g/ml、大约 0.75g/ml至大约0.8g/ml、大约0.8g/ml至大约0.85g/ml、大约0.85g/ml至大约0.9g/ml、大约0.9g/ml至大约0.95g/ml、或大约0.95g/ml至大约lg/ml的浓度给予。
[0135]在某些实施例中,该OPN变体可以按大约0.05mg/kg体重至大约lmg/kg体重的每日剂量给予。在本发明的背景中,在该OPN变体的每日剂量背景中提到的单位“mg/kg”或“ g/kg”涉及以mg或g OPN变体/kg待治疗的受试者的体重计的每日量。
[0136]在一些实施例中,它可以按大约0.05mg/kg至大约0.lmg/kg、大约0.lmg/kg至大约 0.15mg/kg、大约 0.15mg/kg 至大约 0.2mg/kg、大约 0.25mg/kg 至大约 0.3mg/kg、大约 0.3mg/kg 至大约 0.35mg/kg、大约 0.35mg/kg 至大约 0.4mg/kg、大约 0.4mg/kg 至大约 0.45mg/kg、大约 0.45mg/kg 至大约 0.5mg/kg、大约 0.55mg/kg 至大约 0.6mg/kg、大约 0.6mg/kg 至大约 0.65mg/kg、大约 0.65mg/kg 至大约 0.7mg/kg、大约 0.7mg/kg 至大约 0.75mg/kg、大约 0.75mg/kg 至大约 0.8mg/kg、大约 0.85mg/kg 至大约 0.9mg/kg、大约0.9mg/kg至大约0.95mg/kg、或大约0.95mg/kg至大约lmg/kg的每日剂量给予。
[0137]在其他实施例中,该OPN变体可以按大约lmg/kg至大约0.lg/kg体重的每日剂量给予。在其他另外的实施例中,它可以按大约lmg/kg至大约5mg/kg、大约5mg/kg至大约 10mg/kg、大约 10mg/kg 至大约 15mg/kg、大约 15mg/kg 至大约 20mg/kg、大约 20mg/kg toabout25mg/kg、大约 25mg/kg 至大约 30mg/kg、大约 30mg/kg 至大约 35mg/kg、大约 35mg/kg至大约40mg/kg、大约40mg/kg至大约45mg/kg、大约45mg/kg至大约50mg/kg、大约50mg/kg至大约55mg/kg、大约55mg/kg至大约60mg/kg、大约60mg/kg至大约65mg/kg、大约65mg/kg至大约70mg/kg、大约70mg/kg至大约75mg/kg、大约75mg/kg至大约80mg/kg、大约80mg/kg至大约85mg/kg、大约85mg/kg至大约90mg/kg、大约90mg/kg至大约95mg/kg、或大约95mg/kg至大约0.lg/kg的每日剂量给予。
[0138]在本发明的一些实施例中,该OPN变体可以按大约0.lg/kg至大约lg/kg体重的每日剂量给予。在某些实施例中,它可以按大约0.lg/kg至大约0.15g/kg、大约0.15g/kg至大约0.2g/kg、大约0.2g/kg至大约0.25g/kg、大约0.25g/kg至大约0.3g/kg、大约0.3g/kg至大约0.35g/kg、大约0.35g/kg至大约0.4g/kg、大约0.4g/kg至大约0.45g/kg、大约0.45g/kg 至大约 0.5g/kg、大约 0.5g/kg 至大约 0.55g/kg、大约 0.55g/kg 至大约 0.6g/kg、大约0.6g/kg至大约0.65g/kg、大约0.65g/kg至大约0.7g/kg、大约0.7g/kg至大约0.75g/kg、大约0.75g/kg至大约0.8g/kg、大约0.8g/kg至大约0.85g/kg、大约0.85g/kg至大约0.9g/kg、大约0.9g/kg至大约0.95g/kg、或大约0.95g/kg至大约lg/kg的每日剂量给予。
[0139]在具体实施例中,该OPN变体可以按大约lg/kg至大约5g/kg体重的每日剂量给予。在一些实施例中,它可以按大约lg/kg至大约1.5g/kg、大约1.5g/kg至大约2g/kg、大约2g/kg至大约2.5g/kg、大约2.5g/kg至大约3g/kg、大约3g/kg至大约3.5g/kg、大约
3.5g/kg至大约4g/kg、大约4g/kg至大约4.5g/kg、大约4.5g/kg至大约5g/kg的每日剂量给予。
[0140]在某些实施例中,该OPN变体是以大约0.05mg/kg至5g/kg范围中的每日剂量给予的。例如,该OPN变体可以按大约lmg/kg至0.5g/kg范围中的每日剂量给予。可替代地,该OPN变体可以按大约0.005g/kg至0.2g/kg范围中的每日剂量给予。该OPN变体可以例如按大约0.01g/kg至0.lg/kg范围中的每日剂量给予。
[0141]在其他实施例中,该OPN变体是以大约lmg/kg体重至300mg/kg体重范围中的每日剂量给予的。例如,该OPN变体可以按大约5mg/kg体重至250mg/kg体重范围中的每日剂量给予。可替代地, 该OPN变体可以按大约10mg/kg体重至200mg/kg体重范围中的每日剂量给予。该OPN变体可以例如按大约30mg/kg体重至150mg/kg体重范围中的每日剂量给予。
[0142]本发明的又一个方面涉及一种OPN变体(包括一种OPN变体或甚至由其组成)在制造一种用于治疗或预防涉及至少一种癌肿瘤的癌症的药剂中的用途。
[0143]本发明的又一个方面涉及一种治疗或预防癌症的方法,该方法包括:向患有癌症的受试者、或向处于患癌症风险的受试者给予对治疗或预防所述癌症有效的量的一种OPN变体(包括一种OPN变体或甚至由其组成),并且其中所述癌症涉及至少一种癌肿瘤。
[0144]在本发明的一些优选实施例中,该方法包括:向患有该癌症的受试者、或向处于患癌症风险的受试者给予对抑制肿瘤细胞生长或复制有效的量的一种OPN变体(包括一种OPN变体或甚至由其组成)。
[0145]治疗的方法可以例如是一种减少患有涉及至少一种癌肿瘤(例如一种具有升高水平的OPN的癌肿瘤)的癌症的受试者的体内转移风险或预防转移的方法,该方法包括:向该受试者给予对减少转移风险或甚至预防转移有效的量的一种OPN变体。
[0146]本发明的一个方面涉及通过向受试者给予对于抑制肿瘤细胞生长或复制有效的量的该OPN变体、或一种包括该OPN变体的药用组合物而抑制肿瘤细胞在该受试者体内生长或复制的方法。这样的有效量在此处可以指治疗有效量。
[0147]如此处使用的术语“有效量”或“治疗有效量”指直接给予该受试者或包括在药用组合物或营养补充剂内的OPN变体的量是足够引起提到的效果(例如抑制肿瘤生长和/或抑制肿瘤细胞在该受试者体内生长或复制)的量。该有效量可通过本领域内普通技术人员例如执业医师经验性地确定。当例如确定对抑制肿瘤生长和/或肿瘤细胞生长或复制有效的该OPN变体的量时,可以要考虑因素例如受试者的年龄、身高和体重。
[0148]本发明的另一个方面涉及一种药用组合物,该药用组合物包括:
[0149]-一种OPN变体,以及
[0150]-一种药学上可接受的载体。
[0151]该OPN变体优选地以药学上有效量存在。
[0152]在本发明的一些优选实施例中,该药用组合物包括在0.01%-90% (w/w)范围中的量的该OPN变体。例如,该药用组合物可包括在0.1 %-80% (w/w)范围中的量的该OPN变体。可替代地,该药用组合物可包括在I %-70% (w/w)范围中的量的该OPN变体。
[0153]在本发明的一些实施例中,该药用组合物包括在5%-60% (w/w)范围中的量的该OPN变体。例如,该药用组合物可包括在10%-50% (w/w)范围中的量的该OPN变体。可替代地,该药用组合物可包括在0.1% -20% (w/w)范围中的量的该OPN变体。
[0154]除了该OPN变体之外,该药用组合物还可包括一种或多种另外的治疗剂。该一种或多种另外的治疗剂优选地是一种抗癌剂。
[0155]靶向治疗剂的实例包括小分子,例如甲磺酸伊马替尼(GLEEVEC?,也称作STl-571)、吉非替尼(IRESSA?,也称作ZD1839)、埃罗替尼(Tarceva? )、硼替佐米(VELCADE? )、Bcl-2抑制剂(例如甲磺酸奥巴克拉(obatoclax)、ABT-263、以及棉酹)、PARP抑制剂(例如iniparib、奥拉帕尼)、两面神激酶抑制剂(Janus kinaseinhibitor)、PI3K抑制剂、阿帕替尼(一种选择性VEGF受体2抑制剂)、以及沙利霉素。靶向治疗剂的实例还包括单克隆抗体,例如利妥昔单抗(销售为MABTHERA?或RITUXAN? )、群司珠单抗(HERCEPTIN? )、西妥昔单抗(ERBITUX? )、贝伐单抗(AVASTATIN? )。实例还包括抗体-药物偶联物。
[0156]化疗剂的实例包括烷化剂(例如顺钼、卡钼、奥沙利钼、氮芥、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、依弗酰胺)、抗代谢药(例如嘌呤(例如硫唑嘌呤、巯基嘌呤)以及嘧啶)、植物碱和萜类化合物(例如长春花碱,例如长春新碱、长春质碱、长春瑞宾、以及长春地辛,鬼白毒素,以及紫杉烷)、拓扑异构酶抑制剂(例如伊立替康、拓扑替康、安η丫唳、依托泊苷、磷酸依托泊苷、以及替尼泊苷)、以及细胞毒素抑制剂(例如放线菌素例如放线菌素D,蒽环类例如阿霉素(L01DB01)、柔红霉素(L01DB02)、戊柔比星、伊达比星、表柔比星(L01DB03)、以及其他细胞毒素抗生素例如博来霉素(L01DC01)、普卡霉素(L01DC02)、以及丝裂霉素(L01DC03))。
[0157]有用的治疗剂的另一个实例是一种整合蛋白阻滞剂,例如ανβ3整合蛋白阻滞剂,例如西仑吉肽。
[0158]免疫抑制剂的实例包括糖皮质激素类、细胞抑制剂(例如烷化剂和抗代谢物,例如叶酸类似物(例如甲氨蝶呤)、嘌呤类似物(例如硫唑嘌呤、巯基嘌呤)、嘧啶类似物、以及蛋白质合成抑制剂)、抗体(例如多克隆和单克隆)、作用于免疫亲和素的药物(例如环孢素、他克莫司、西罗莫司)、以及其他药物(包括干扰素类、阿片类、TNF结合蛋白、霉酚酸酯、以及小生物剂(例如芬戈莫德、多球壳菌素))。
[0159]此处所述的其他方面包括药用组合物,该药用组合物包括该OPN变体和一种药学上可接受的载体,适合于给予人类或其他动物的一种或多种兼容固体或液体填充剂、或一种或多种稀释剂或成胶囊剂。为了被认为适合于给予治疗中的受试者,载体(或其他试剂)应该是足够纯的和足够低毒的。载体可以是惰性的或可具有其本身的药学上有利的特性。在与该OPN变体的组合中使用的载体的量可以足够改善该OPN变体(例如递送至细胞的OPN变体或由细胞摄取的OPN变体)的递送和效力,并且可通过本领域内普通技术人员经验性地确定。
[0160]另外的载体或可包括在此处所述的药用组合物内的其他(无活性的)试剂的实例包括糖,例如乳糖、葡萄糖和蔗糖;淀粉,例如玉米淀粉和马铃薯淀粉;纤维素及其衍生物,例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素;粉状黄蓍胶;明胶;滑石;固体润滑剂,例如硬脂酸和硬脂酸镁;硫酸钙;植物油,例如花生酱、棉花籽油和玉米油;多元醇,例如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇;海藻酸;乳化剂,例如TWEEN?;润湿剂、例如十二烷基硫酸钠;染料;调节剂;制丸剂;稳定剂;抗氧化剂;防腐剂;无热原水;等张生理溶液,葡萄糖溶液和磷酸盐缓冲溶液;甜味剂,例如甘油、丙二醇、山梨糖醇、蔗糖);调节剂;调味剂;色素;防腐剂,例如甲基-或η-丙基-对羟基苯甲酸盐、山梨酸、苯甲酸甲脂、苯甲酸盐。
[0161]可向该药用组合物添加不会显著影响本发明的化合物的活性的任选的活性剂。这类活性剂包括抗癌靶向治疗剂和化疗剂,以及免疫抑制剂或免疫刺激剂。
[0162]在某些实施例中,包含该OPN变体的药用组合物被配制用于黏膜给药和/或口服给药。可以按包含常规的无毒的药学上可接受的载体、佐剂和介质的标准剂型口服、舌下、或经颊给予这些组合物。术语“ 口服”或“口服地”可囊括“舌下”或“舌下地”或“颊”或“经颊”。
[0163]特别用于黏膜给药和/或口服给药的药学上可接受的载体在本领域内是熟知的,并且包括一种或多种糖、淀粉、纤维素及其衍生物、麦芽、明胶、滑石、硫酸钙、植物油、合成油、多元醇、海藻酸、磷酸盐缓冲溶液、乳化剂、等张生理溶液、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、糖溶液、山梨糖醇以及水。这类组合物还可包含镇痛剂。
[0164]适合于口服给药的形式包括片剂或颗粒剂、硬或软胶囊、软锭剂、锭剂、水或油中悬浮液、乳剂、可分散性粉剂或颗粒剂、或糖浆剂或者酏剂。可根据本领域中已知的用于制备这类组合物的任意方法制备配制用于口服给药的药用组合物。
[0165]片剂典型地包含常规的药学上兼容的助剂,例如惰性稀释剂,例如碳酸钙、碳酸钠、甘露醇、乳糖和纤维素;粘合剂,例如淀粉、明胶和蔗糖;分散剂,例如淀粉、海藻酸和交联羧甲基纤维素;润滑剂,例如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石。助流剂例如二氧化硅可被用于改善粉剂组合物的流动性特征。针对外观,可添加染料例如FD&C染料。甜味剂和调节剂例如阿斯巴甜、糖精、薄荷醇、薄荷和水果香精是对于咀嚼片剂有用的佐剂。胶囊(包括持续释放和延迟释放制剂)典型地包含一种或多种上述固体稀释剂。载体组分的选择通常取决于次级因素,例如口味、价格和贮存稳定性。
[0166]片剂或胶囊形式的药用组合物也可以使用常规方法、典型地用一种pH依赖性涂料进行涂覆。这类剂型典型地包含一种或多种来自以下各项中的组分:邻苯二甲酸乙酸纤维素、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、乙基纤维素、尤特奇(Eudragit)涂料、腊和虫胶以及其他材料。
[0167]包含该OPN变体的用于口服给药的制剂可被配制为硬的明胶胶囊,其中该OPN变体与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙和高岭土)混合,或处于软的明胶胶囊的形式,其中该OPN变体与水或油介质(例如花生酱、液体石蜡或橄榄油)混合。
[0168]水性悬浮液可包括OPN变体,该OPN变体处于与适合于获得水性悬浮液的赋形剂的混合物中。这些赋形剂可以是助悬剂,例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄芪胶和阿拉伯树胶;分散剂或润湿剂;天然存在的磷脂例如卵磷脂,或环氧烷烃与脂肪酸的缩合产物例如硬脂酸聚氧乙烯酯,或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物例如与十七烷乙烯氧基十六烷醇,或环氧乙烷与产生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物例如取代的聚氧乙烯山梨糖醇,或环氧乙烷与产生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物例如取代的聚氧乙烯脱水山梨糖醇。水性悬浮液还可包含一些防腐剂,例如乙基-或η-丙基-P-羟基苯甲酸盐。
[0169]可以通过将该OPN变体悬浮于植物油,例如花生酱、橄榄油、芝麻油以及椰子油;或矿物油,如液体石蜡中来制备油悬浮液。油悬浮液可包含增稠剂,例如蜂蜡、固体石蜡或十六烷醇。可以添加一些甜味剂(例如上面提到的)和调节剂以获得令人愉悦的口服制剂。这些组合物可以通过添加抗氧化剂,如抗坏血酸来保存。
[0170]当该OPN变体展示出不足的溶解度时,可以使用增溶方法。这类方法是本领域中普通技术人员已知的,并包括使用共溶剂例如二甲亚砜(DMSO)、使用表面活性剂例如TWEEN?、或溶解于碳酸氢钠水性溶液中以及其他方法。
[0171]在此所述的药用组合物也可以处于水包油乳剂形式。油相可以表示植物油例如橄榄油或花生酱,或矿物油例如液态石蜡,或其混合物。合适的乳化剂可以是天然存在的树胶,例如阿拉伯树胶或黄芪胶;天然存在的磷脂,例如大豆卵磷脂,以及产生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯,例如脱水山梨糖醇单油酸酯,以及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物,例如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯。
[0172]适合于制备水性悬浮液的分散粉剂以及颗粒剂包括与一种分散剂或润湿剂、助悬剂以及一种或多种防腐剂混合的OPN变体。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂包括已经在以上示例的试剂。
[0173]在一个实施例中,该OPN变体或包括该OPN变体的药用组合物可以按鼻剂型(例如鼻喷雾)给药。这类组合物典型地包含一种或多种填充剂,例如蔗糖、山梨糖醇和甘露醇,以及粘合剂,例如阿拉伯树胶、微晶纤维素、羧甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素。也可以结合以上所述的助流剂、润滑剂、甜味剂、染料、抗氧化剂和调节剂。
[0174]用于吸入的药用组合物可以以一种溶液、悬浮液或乳剂配制,可以将其以干粉剂的形式或以气雾剂的形式使用常规推进剂(例如二氯二氟甲烷和三氯氟甲烷)给药。
[0175]在本发明的一些优选实施例中,该药用组合物被配制用于口服给药、舌下给药、颊给药、或鼻给药。
[0176]在本发明的其他实施例中,该药用组合物被配制用于静脉给药,例如用于注射。
[0177]在本发明的一些实施例中,该药用组合物处于这样一种剂型,针对成年受试者其包含90%-110% (w/w)的每日剂量。在本发明的其他实施例中,该药用组合物处于这样一种剂型,针对成年受试者其包含45%-55% (w/w)的每日剂量。在本发明的另外的实施例中,该药用组合物处于这样一种剂型,针对成年受试者其包含28%-38% (w/w)的每日剂量。
[0178]在本发明的一些实施例中,该药用组合物处于一种剂型,该剂型包括在0.1mg-1Og/剂型的范围中的量的该OPN变体。例如该口服剂型可包含在Img-1g/剂型的范围中的量的该OPN变体。可替代地,该口服剂型可包含在10mg-800mg/剂型的范围中的量的该OPN变体。该口服剂型可包含例如在25mg-500mg/剂型的范围中的量的该OPN变体。
[0179]本发明的又一个方面涉及一种营养补充剂,该营养补充剂包括
[0180]-营养有效量的一种OPN变体,以及
[0181]-一种或多种选自下组的组分,该组由碳水化合物来源、脂质来源、以及蛋白质来源组成。
[0182]在本发明的一些优选实施例中,该营养补充剂包括在0.01%-90% (w/w)范围中的量的该OPN变体。例如,该营养补充剂可包括在0.1-80% (w/w)范围中的量的该OPN变体。可替代地,该营养补充剂可包括在I %-70% (w/w)范围中的量的该OPN变体。
[0183]在本发明的一些实施例中,该营养补充剂包括在5% -60% (w/w)范围中的量的该OPN变体。例如,该营养补充剂可包括在10-50% (w/w)范围中的量的该OPN变体。可替代地,该营养补充剂可包括在0.1 %-20% (w/w)范围中的量的该OPN变体。
[0184]在本发明的其他实施例中,该营养补充剂包括在0.001%-5% (w/w)范围中的量的该OPN变体。例如,该营养补充剂可包括在0.005-2% (w/w)范围中的量的该OPN变体。可替代地,该营养补充剂可包括在0.01%-1% (w/w)范围中的量的该OPN变体。该营养补充剂可以例如包括在0.05% -0.5% (w/w)范围中的量的该OPN变体。
[0185]包括该OPN变体的营养补充剂可以液体或粉末状形式被预封装(例如罐装或瓶装液体饮品)。在一些实施例中,将该粉末状形式添加到一种食物或饮料中以提供另外的营养素。在某些实施例中,可与例如水果、蔬菜、酸牛乳、乳、和/或冰淇淋配制该营养饮料。在一些实施例中,将该营养补充剂共混为思慕雪(smoothie)稠度。在具体实施例中,可用例如蛋白质、维生素、矿物质、抗氧化剂、益生菌和/或益生元增强该营养饮料。在某些实施例中,该营养饮料不含乳糖和/或不含谷蛋白。在一些实施例中,该营养补充剂是有机的。儿童营养饮料的实例包括PEDIASURE?、
PEDIASMART?、以及仅针对儿童的RESOURCE?。成人营养饮料的实例包牯ENSURE?、BOOST?、NESTLE? CARNAT1N? INSTANT
BREAKFAST?、 GLUCERNA?、 GLYTROL?、NUTREN?、以及
PEPTAMEN?。营养补充剂还包括乳,豆乳和牛乳(例如全脂、半脱脂或低脂、脱脂或无月旨(例如克莱文戴尔(Cravendale))、不含乳糖(例如LACTOFREE'? ))。
[0186]包括在此处所述的营养补充剂内的该OPN变体的量可以与上述针对包含该OPN变体的药用组合物的那些量相同或相似,但也可以是更低或更高的量。在具体实施例中,该OPN变体在该营养补充剂中的量是大约0.05mg/ml至大约lg/ml。在一些实施例中,该受试者可以是哺乳动物。在一些实施例中,该受试者可以是鼠、犬、猫、羊(ovine)、牛、猪、或马,而在其他实施例中,该受试者是人。
[0187]本发明在它的应用上并不限于在以下说明中所提出的或附图中所展示的结构和部件安排的细节。本发明可以有其他的实施方案,并且能够以不同的方式被实施或进行。另外,在此所用的措辞和术语是用于描述目的,并且不应视为限制性的。此处使用“包括”、“包含”或“具有”、“含”、“涉及”及其变体是指囊括此后列出的术语及其等效物连同另外的术语。
[0188]通过引用将每个前述专利、专利申请和参考文献结合在此,特别针对在此引用的教导。
[0189]因此已经说明了本发明的至少一个实施例的几方面,要理解本领域的技术人员容易想到多种改变、修饰和改善。这类改变、修饰和改善旨在成为本披露的部分,并且旨在处于本发明的精神和范围内。因此,前述说明和附图仅通过举例的方式。
[0190]实例
[0191]实例1:向129B6F1荷瘤小鼠口服给予骨桥蛋白
[0192]将牛OPN制品(Lacprodan OPN-1O '<阿尔拉食品配料,维比(Viby),丹)溶解于去离子水中,过滤,并从接种肿瘤细胞的那天(第O天)或五天之后(第5天)开始,以0.03,0.12、或0.3mg/ml的最终浓度给予129B6F1荷瘤小鼠。最初将这些小鼠用5xl04无支原体275-3-2鼠ras-转化的成纤维细胞接种(参见吴(Wu) 2000)。通过测径器测量肿瘤尺寸并监测直至这些肿瘤达到这些动物的体重的20 %,此时将这些小鼠处死,并采集组织/血浆样品。使用单向ANOVA以邦费罗尼(Bonferroni)事后检验计算统计显著性。
[0193]在第9天初次检测肿瘤。从第19天开始,一些肿瘤已经长得如此之大以至于这些小鼠必须被处死。在第25天终止该试验。图1A显示在肿瘤注射时给予该OPN制剂对高达17天的肿瘤的尺寸没有显著影响。然而,当在肿瘤细胞注射之后五天发起给予该OPN制剂时,分别在15和17天,在0.12mg/ml和0.3mg/ml组中该肿瘤的尺寸统计学上显著地降低(图1b)。图2显示了在第15、17、以及19天所有组中的肿瘤尺寸的比较;表明了显著差异。图3显示了对照和喂养OPN小鼠的平均肿瘤尺寸,三个独立试验的合并的结果。N =30 (Omg/ml OPN 制剂)或 32 (0.3mg/ml OPN 制剂)。
[0194]这些结果清楚地显示口服给予的牛OPN制剂可抑制癌肿瘤的生长速率并且甚至可能预防肿瘤生长。给予这些小鼠的大约1.5mg的量的蛋白质没有显著改变它们的总蛋白质摄取,这一处理对小鼠重量也没有任何影响。因此,我们推断,这一处理对肿瘤或减慢该肿瘤生长的相关的宿主细胞具有特定的影响。剂量试验表明使用的最高的OPN制剂的剂量
0.3mg/ml是最有效的,并且甚至更高的剂量可对肿瘤生长具有更大的影响。
[0195]实例2: 口服给予的OPN对乳腺癌小鼠模型中的原发性肿瘤生长和转移的影响
[0196]4T1细胞是经转化的小鼠乳腺上皮细胞(艾斯拉克森(Aslakson) 1992),这些细胞在原位注射到该小鼠乳腺之后形成转移性肿瘤(莱勒卡切斯(Lelekakis) 1999)。该自发性转移形成-原发于肺,尽管可涉及其他组织-是这些细胞的关键特征,比直接注射转移模型更准确可靠地反映人类癌症中的转移发展。因此,这些细胞被广泛用作针对人类侵入性乳腺癌的模型。4T1细胞也表达高水平的OPN(米(Mi) 2004),这是最大肿瘤生长所需要的。
[0197]A.小鼠肿瘤发展。4T1细胞从ATCC获得。在最初试验中,OPN的表达将得到确认,并且将针对支原体测试细胞,并且如果需要则进行补救。当处于指数增长时收获细胞,洗涤,并将IxlO5细胞注射到36同系的Balb/c小鼠的乳腺脂肪垫中。将这些小鼠随机分为三组,从注射肿瘤细胞五天之后开始,使其中两组接受在饮用水中0.3mg/ml OPN制剂。这些4T1细胞快速形成肿瘤:预期在7-10天之后检测到肿瘤,而最大肿瘤体积在25-30天达至|J。当任一乳腺肿瘤达到体重的20%时或如果检测到任何病理学(n= 12/组)时,将对照小鼠和一组喂养OPN的小鼠进行处死。如我们预期的,如果在喂养OPN的动物中该原发性肿瘤的生长受到抑制,则维持第二组的喂养OPN的小鼠直至它们的肿瘤达到体重的20%。在处死时,执行尸体剖检并记录转移的位点。采集血液、肿瘤、肺、以及其他转移组织。
[0198]B.小鼠组织的分析。将原发性肿瘤针对低温贮藏、甲醛固定和生物化学分析分为三个交叉部分。为了确定转移负荷对肺进行固定,该转移负荷是通过对表面结节进行计数并且通过几个肺切片的组织学检验评估的。在已经受口服给予OPN的小鼠和对照小鼠之间对每一小鼠的表面转移的数目进行比较作为主要结果。如果在原发性肿瘤生长速率中看到差异,则通过CD31和vWF染色评估不同肿瘤中的血管密度和管形态学,并且淋巴管密度是通过LYVE-1染色。如果时间允许,对VEGF信号的方面进行分析:通过蛋白质印迹评估不同VEGF亚型的表达、VEGF受体的表达以及这些受体的磷酸化水平以测试以下假设:口服给予OPN引起VEGF信号改变。这些分析将在原发性肿瘤和转移性病变中进行。
[0199]C.预期结果。我们的假设和先前数据表明口服给予OPN变体会抑制用4Τ1细胞注射的小鼠中的原发性乳腺肿瘤的生长。如果是这种情况,并且喂养OPN小鼠中相应的转移负荷更低,则另外一组喂养OPN的小鼠将被包括,其中允许肿瘤生长至与对照肿瘤相同的尺寸(当处死它们时),并确定转移负荷。如果与对照相比,在这些动物中看到更低数目的转移,我们将推断口服给予OPN对转移具有直接影响。我们期望口服给予OPN变体可导致血管尺寸增加,伴随着VEGF信号通路的活性的增加。
[0200]实例3:肿瘤中OPN水平的确定
[0201]这个实例说明了如何确定肿瘤中OPN的水平。
[0202]样品制各:
[0203]获得讨论中的肿瘤的样品,并随后快速冷冻并匀浆化(在蛋白酶抑制剂(罗氏应用科学(Roche Applied Science)目录号05892791001)的存在下,在细胞裂解缓冲液(细胞信号技术公司(Cell Signaling Technologies),目录号9803)中大约50mg肿瘤样品/0.25ml缓冲液)。在1.8ml埃彭道夫Gppendorf)管中使用塑料研杵在冰上执行匀浆化,持续30秒至I分钟。
[0204]总蛋白质的确定:
[0205]使用二喹啉甲酸(BCA)测定试剂盒(皮尔斯生物技术(Pierce B1technology)目录号23227)确定该肿瘤提取物的蛋白质浓度。
[0206]OPN水平的确定:
[0207]通过ELISA使用针对重组OPN产生的抗体确定该组织提取物的OPN水平,该重组OPN对于取血样的受试者是天然的。
[0208]在人类受试者的情况下,应使用针对人血清OPN的单克隆抗体。根据生产商说明可以例如使用测定设计试剂盒(Assay Designs Kit)(恩佐生命科学(Enzo LifeSciences),目录号AD1-900-142)。用处于从2_32ng/ml的不同浓度的纯化重组人OPN的对照样品校准该测定。
[0209]在鼠受试者的情况下,应使用针对鼠血清OPN的单克隆抗体。根据生产商说明可以例如使用小鼠骨桥蛋白ELISA Duoset试剂盒(R&D系统公司(R&D Systems),目录号DY441)。用处于从31-1000pg/ml的不同浓度的纯化重组鼠血清OPN的对照样品校准该测定。
[0210]所得的OPN在该肿瘤中的水平表示为纳克OPN/微克该肿瘤样品中的总蛋白质.
[0211]实例4 =OPN在血浆中浓度的确定
[0212]这个实例说明了如何确定OPN在血浆中的浓度。
[0213]样品制各:
[0214]血浆是在1.8mg Na-EDTA/mL血液的存在下从采集自该受试者的血液制备的。
[0215]OPN浓度的确定:
[0216]通过ELISA使用针对重组OPN产生的单克隆抗体确定OPN浓度,该重组OPN对于取血样的受试者是天然的。
[0217]在人类受试者的情况下,应使用针对人血清OPN的单克隆抗体。根据生产商说明可以例如使用测定设计试剂盒(Assay Designs Kit)(恩佐生命科学(Enzo LifeSciences),目录号AD1-900-142)。正常人类血浆中的OPN水平是从14_45ng/ml变化。用处于从2-32ng/ml的不同浓度的纯化重组人OPN的对照样品校准该测定。
[0218]在鼠受试者的情况下,应使用针对鼠血清OPN的单克隆抗体。根据生产商说明可以例如使用小鼠骨桥蛋白ELISA Duoset试剂盒(R&D系统公司(R&D Systems),目录号DY441)。用处于从31-1000pg/ml的不同浓度的纯化重组鼠血清OPN的对照样品校准该测定。
[0219]所得的OPN在该血浆中的水平表示为纳克OPN/ml血浆。
[0220]参考文献
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【权利要求】
1.用于在治疗或预防涉及至少一种癌肿瘤的癌症中使用的一种OPN变体, 其中所述OPN变体包括相对于SEQ ID N0.1或SEQ ID N0.2具有至少80%的序列一致性的活性OPN分子、和/或OPN分子活性片段,所述片段相对于SEQ ID N0.1的17-163位的序列或相对于SEQ ID N0.2的17-170位的序列具有至少80%的序列一致性。
2.根据权利要求1所述的OPN变体,其中该癌肿瘤具有升高水平的0ΡΝ。
3.根据权利要求1或2所述的OPN变体,其中该治疗或预防是通过口服给药。
4.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,其中该治疗或预防是通过肠胃外给药,例如像通过静脉内或腹膜内给药。
5.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,用于抑制肿瘤细胞生长或复制。
6.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,用于抑制肿瘤生长。
7.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,用于预防肿瘤细胞生长或复制。
8.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,用于预防肿瘤生长。
9.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,用于减少患有涉及至少一种癌肿瘤的癌症的受试者的体内转移风险。
10.根据以上 权利要求中任一项所述的OPN变体,用于预防患有涉及至少一种癌肿瘤的癌症的受试者的体内转移。
11.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,其中待治疗的受试者患有涉及至少一种癌肿瘤的癌症,该癌肿瘤具有升高水平的0ΡΝ。
12.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,其中具有癌肿瘤的受试者在其血浆中具有升高浓度的0ΡΝ。
13.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,其中给予该OPN变体的受试者对发展涉及至少一种癌肿瘤的癌症具有增加的风险。
14.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,其中该OPN变体是以治疗的受试者的大约0.05mg/kg体重至大约5g/kg体重范围中的每日剂量给药。
15.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,包括相对于该OPN变体的总重量的至少10% (w/w)的OPN分子活性片段总量。
16.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,包括相对于该OPN变体的总重量的10% -90% (w/w)范围中的活性OPN分子总量,以及相对于该OPN变体的总重量的10% -90% (w/w)范围中的OPN分子活性片段总量。
17.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,包括相对于该OPN变体的总重量的10% -40% (w/w)范围中的活性OPN分子总量,以及相对于该OPN变体的总重量的60% -90% (w/w)范围中的OPN分子活性片段总量。
18.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,包括相对于该OPN变体的总重量的至少10% (w/w)的活性OPN分子总量。
19.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,其中该OPN变体是从牛乳中分离。
20.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,其中所述OPN变体是相对于SEQIDN0.1具有至少80%序列一致性的活性OPN分子、和/或相对于SEQ ID N0.1的17-163位的序列具有至少80%序列一致性的OPN分子活性片段。
21.根据以上权利要求中任一项所述的OPN变体,其中所述OPN变体是相对于SEQIDN0.2具有至少80%序列一致性的活性OPN分子、和/或相对于SEQ ID N0.2的17-170位的序列具有至少80%序列一致性的OPN分子活性片段。
22.—种治疗或预防癌症的方法,该方法包括:向患有癌症的受试者、或向处于患癌症风险的受试者给予对治疗或预防所述癌症有效的量的一种OPN变体,并且其中所述癌症涉及至少一种癌肿瘤, 所述OPN变体包括相对于SEQ ID N0.1或SEQ ID N0.2具有至少80%序列一致性的活性OPN分子、和/或OPN分子活性片段,所述片段相对于SEQ ID N0.1的17-163位的序列或相对于SEQ ID N0.2的17-170位的序列具有至少80%序列一致性。
23.根据权利要求22所述的治疗或预防癌症的方法,该方法包括:向患有该癌症的受试者、或向处于患该癌症风险的受试者给予对抑制肿瘤细胞生长或复制有效的量的一种OPN变体,其中所述OPN变体包括相对于SEQID N0.1或SEQ ID N0.2具有至少80%序列一致性的活性OPN分子、和/或OPN分子活性片段,所述片段相对于SEQ ID N0.1的17-163位的序列或相对于SEQ ID N0.2的17-170位的序列具有至少80%序列一致性。. 23.一种减少患有涉及至少一种癌肿瘤的癌症的受试者的体内转移风险或预防转移的方法,该方法包括:向该受试者给予对减少转移风险或预防转移有效的量的一种OPN变体, 其中所述OPN变体包括相对于SEQ ID N0.1或SEQ ID N0.2具有至少80%序列一致性的活性OPN分子、和/或OPN分子活性片段,所述片段相对于SEQ ID N0.1的17-163位的序列或相对于SEQ ID N0.2的17-170位的序列具有至少80%序列一致性。
24.—种药 用 组 合物,包括: -一种OPN变体,该变体包括相对于SEQ ID N0.1或SEQ ID N0.2具有至少80%序列一致性的活性OPN分子、和/或OPN分子活性片段,所述片段相对于SEQ ID N0.1的17-163位的序列或相对于SEQ ID N0.2的17-170位的序列具有至少80%序列一致性,以及-一种药学上可接受的载体。
25.根据权利要求24所述的药用组合物,包括0.01%-90% (w/w)范围中的量的OPN变体。
26.根据权利要求24或25所述的药用组合物,进一步包括一种或多种另外的治疗剂。
27.根据权利要求26所述的药用组合物,其中该一种或多种另外的治疗剂包括抗癌剂。
28.根据权利要求24-27中任一项所述的药用组合物,其中该药用组合物被配制用于口服给药、舌下给药、颊给药、鼻给药、或静脉给药。
29.—种营养补充剂,包括 -营养有效量的一种OPN变体,该OPN变体包括相对于SEQ ID N0.1或SEQ ID N0.2具有至少80%序列一致性的活性OPN分子、和/或OPN分子活性片段,所述片段相对于SEQID N0.1的17-163位的序列或相对于SEQ ID N0.2的17-170位的序列具有至少80%序列一致性,以及 -一种或多种选自下组的组分,该组由碳水化合物来源、脂质来源、以及蛋白质来源组成。
【文档编号】A61P35/00GK104080472SQ201280068303
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2012年12月7日 优先权日:2011年12月7日
【发明者】苏珊·R·里特林, 彼得·朗堡·魏谢, 安雅·塞丽娜 申请人:阿拉食品公司, 福塞斯儿童口腔医院(以福塞斯研究所名义营业)
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