专利名称：一种单核细胞抗体在治疗炎症相关抑郁症中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及医学领域，具体涉及Ly6c单克隆抗体在治疗中枢炎症诱导的抑郁症方面的应用。
背景技术：
抑郁症是一种情绪心理障碍综合症，其病因复杂，已经成为全球第四大疾病，造成了严重的社会和经济负担。目前临床上抑郁症的一线治疗药物主要为选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(selective serotonin reuptake inhibitors, SSRIs)。新一代的 SSRIs 有着较好的安全性和耐受性，然而也存在着起效慢以及对部分人群无效的缺点。临床上对许多重度抑郁症患者仍缺乏有效的药物治疗策略，这也对深入研究抑郁症的发病机理及开发新型的治疗药物提出了迫切的需求。近年来，免疫失调在抑郁症发生、发展中的作用日益受到关注。临床上，抑郁症常常与其它多种炎症性疾病共存，如肿瘤、结肠炎、心血管疾病、HIV感染、脑外伤、脑膜炎等。同时，动物模型及临床病人中均可观察到机体中枢和血液中炎症反应的明显激活，并且药物治疗及生活方式干预的效果往往与炎症反应的程度密切相关。由此可见，调控炎症/免疫反应是预防和治疗抑郁症的有效途径。Ly6chi单核细胞又称为促炎性单核细胞，是一种参与炎症/免疫调节的单核细胞亚群。研究表明，Ly6chi单核细胞在感染、肿瘤及自身免疫性疾病中均发挥着重要的作用。干预Ly6chi单核细胞活化或趋化环节有可能成为治疗炎症性疾病的有效途径。
发明内容
本发明的目的是提供一种炎症性抑郁症治疗的新途径，即可通过Ly6c抗体来选择性干预Ly6chi单核细胞 介导的神经炎症反应从而达到改善抑郁样行为的药效。首先我们证实了在侧脑室注射脂多糖(LPS)诱导的小鼠抑郁模型中，Ly6chi单核细胞可以从血液测向中枢炎症部分趋化浸润，然后，我们通过特异性地富集血液中的Ly6chi单核细胞证实其可以加重抑郁样行为；最后，我们通过腹腔注射Ly6c抗体特异性地干预Ly6chi单核细胞的活性，从行为学指标来证明Ly6c抗体在治疗炎症相关抑郁症治疗方面的新用途。
图1:侧脑室注射LPS诱导小鼠抑郁样行为。A，小鼠强迫游泳实验中的不动时间；B，小鼠的糖水偏好指数。**，存在显著性差异。图2 =FITC标记的Ly6chi单核细胞向中枢浸润。图3:选择性富集Ly6chi单核细胞加重抑郁样行为。A，血液中Ly6chi单核细胞的流式细胞术分析；B，小鼠强迫游泳实验中的不动时间。图4:Ly6c抗体可以改善小鼠抑郁样行为。
具体实施例方式实施例1.神经炎症诱导的小鼠抑郁症模型的建立及行为学分析实验材料:C57BL/6小鼠，SPF级别，购自军事医学科学院实验动物有限公司。实验方法:1.侧脑室LPS注射:小鼠腹腔注射戊巴比妥(50mg/kg)麻醉后，小心并正确固定于小鼠立体定位仪上。头部皮肤消毒后，小心暴露出颉骨，以前卤点(bregma)为零点定位，按小鼠脑立体定位坐标(L:1.0mm,P:0.5mm,DV:2.5mm)找到侧脑室的头骨表面位置。模型组动物于侧脑室注射LPS (3 μ g/3 μ L生理盐水)诱发急性脑部炎症，对照组于侧脑室注射等体积生理盐水。注射结束后原位停留3 4分钟后将微量注射器针端缓慢移出，防止有液体溢出。实验过程中应注意观察小鼠的体温，保持手术器械和操作步骤的清洁，防止感染。2.强迫游泳实验:将小鼠小心放入高30cm，直径24cm的玻璃烧杯(杯中水深约12cm)中的水面，水温25±4°C。采用摄像机录像记录小鼠的活动状态，实验过程持续6分钟。实验过后，由两个实验人员在 单盲情况下进行不动时间的计算，其不动状态的评判标准为小鼠停止挣扎或显漂浮状态，四肢不动状态或仅有很小的四肢运动使头部悬浮于水面。不动时间定义为后4分钟的不动时间。不同小鼠间应将烧杯中换入新水。3.糖水偏好实验:小鼠单笼饲养，自由摄食，预适应糖水(I %蔗糖)或正常饮水(分别置于IOOmL水瓶中左右放置)2天。侧脑室给予LPS造模后，单独饲养，观察并记录24h内小鼠对于糖水和正常水的分别摄入量。糖水偏好指数=糖水消耗量/(糖水消耗量+正常饮水消耗量)X 100%实施例2.Ly6chi单核细胞特异性的FITC标记实验材料:FITC-微球(FITC-dyed(YG),2.5 % [wt/vol])购于美国 Polyscience公司，clodronate脂质体购于美国FormuMax公司。实验方法:C57BL/6小鼠尾静脉注射200 μ L clodronate脂质体，20hr后尾静脉注射250 μ LFITC-微球，通过细胞吞噬作用将Ly6chi单核细胞选择性标记。24hr后进行侧脑室LPS注射诱导抑郁症模型。实施例3.Ly6chi单核细胞的中枢浸润分析实验材料:流式相关抗体均购自美国biolegend公司，Percoll淋巴细胞分离液购自GE公司，流式细胞仪为BD FACSCalibur，流式细胞数据采用Flowjo软件分析。实验方法:1.脑部单核细胞的分离:小鼠深度麻醉后，经升主动快速灌注冰PBS (4°C )灌注200mL左右移除血液，直到肝脏发白，完成灌注。小心分离并取出脑组织，转移至玻璃匀浆器中。每个脑组织加入6mL冰PBS进行匀浆，匀浆液与100% Percoll溶液制成含30% Percoll的细胞悬液(IOmL),小心滴加于2mL70% Percoll溶液上，800g, 18°C条件下离心30min后小心吸出30%与70% Percoll界面间的浑浊带即为淋巴细胞群落。用PBS洗涤两次后制成100 μ L细胞悬液进行流式抗体染色实验。2.流式细胞术:向细胞悬液中加入ant1-⑶16/32抗体，冰浴避光孵育15min后加入流式抗体:ant1-Ly6c-PE，anti_CDllb_APC，冰浴避光孵育30min后用冰PBS洗涤3次，1%多聚甲醛固定后上机检测。实施例4.Ly6chi单核细胞的选择性富集
实验材料:clodronate脂质体购于美国FormuMax公司。试验方法:C57BL/6小鼠尾静脉注射200 μ L clodronate脂质体，72hr后血液中Ly6chi单核细胞可得到富集。实施例5.Ly6chi单核细胞的选择性抑制实验材料:Anti_Ly6c抗体(LEAFPurified antinouseLy-6C)购自 Biolegend公司。试验方法:C57BL/6小鼠腹腔注射100 μ gAnti_Ly6c抗体，可以特异性地耗竭Ly6chi单核细胞 。
权利要求
1.Ly6c抗体在炎症性抑郁症治疗中的应用。
2.Ly6c抗体在炎症性抑郁症治疗中的应用，其涉及到Ly6chi单核细胞在炎症性抑郁症中的病理作用以及采用Ly 6c单克隆抗体可以改善抑郁症的新用途。
全文摘要
本发明涉及医学领域，具体涉及Ly6c单克隆抗体在治疗中枢炎症诱导的抑郁症方面的应用。神经炎症诱导的小鼠抑郁症模型中，血液中的Ly6chi单核细胞可以向中枢神经系统浸润，提示其参与中枢炎症反应。对血液中的Ly6chi单核细胞特异性地富集可以明显加重抑郁样行为。同时，给予Ly6c抗体来特异性地抑制Ly6chi单核细胞的功能可以显著地改善抑郁样行为。以上结果表明，Ly6chi单核细胞在炎症相关抑郁症中的重要作用以及Ly6c抗体在治疗炎症相关抑郁症方面的新应用。
文档编号A61P29/00GK103110945SQ20131006731
公开日2013年5月22日 申请日期2013年3月4日 优先权日2013年3月4日
发明者王广基, 郑啸, 谢昊, 郝海平, 梁艳, 戴琛, 谢林 申请人:中国药科大学