奈莫司他的制药用途
【专利摘要】本发明提供奈莫司他在制备用于治疗脊髓损伤的药物中的用途。本发明将奈莫司他应用于脊髓损伤的治疗干预，试验表明奈莫司他能够降低细胞的凋亡，促进神经元的存活，抑制胶质瘢痕的形成，并显著提高治疗后动物的BBB评分。与目前临床上应用的药物甲强龙相比，给药窗口更宽，治疗效果更加持久，远期效果更好。
【专利说明】奈莫司他的制药用途
【技术领域】
[0001]本发明属于医药领域，具体涉及奈莫司他在制备脊髓损伤的药物中的用途。
【背景技术】
[0002]奈莫司他(nafamostat)为人工合成的丝氨酸蛋白水解酶抑制剂,具有抗凝、抗纤维蛋白溶酶和抗血小板聚集的作用，其对胰蛋白酶、激肽释放酶(血管舒缓素)、血纤维蛋白溶酶、纤维蛋白酶以及补体系统经典途径的CL-r、CL-s等胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶具有很强的选择性抑制作用。奈莫司他可以抑制炎症介质IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1 β及NOS的产生，目前临床上主要用于急性胰腺炎的治疗。而关于奈莫司他对于除胰腺之外的器官的炎症反应的抑制作用还有待于进一步研究。
[0003]由各类事故引发的急性脊髓损伤(Spinal cord injury, SCI)的发生率近年来逐年增高，已成为骨科临床的常见病。对其发病机制的研究表明，脊髓损伤主要是由两种机制引起:原发性损伤(损害、出血等)和继发性损伤(炎性反应、缺血再灌注、细胞因子等)。原发性损伤被动地发生在损伤后短时间内(一般认为4小时内)，且产生的神经损害是不可逆的，而脊髓继发性损伤是一种细胞和分子水平的主动调节过程，具有可逆性且可被调控。脊髓损伤后，脊髓组织周围可以招募一系列免疫活性细胞，包括中性粒细胞、激活的巨噬细胞等，这些细胞可以产生许多前炎症趋化因子/细胞因子，如TNFa、IL-1 β、蛋白激酶(类胰蛋白酶、基质金属蛋白酶和弹性蛋白酶等)以及由中性粒细胞氧化爆发反应产生的自由基，从而加重了脊髓的损伤。急性期剧烈的炎性反应导致大量的细胞凋亡，最终导致局部空洞的产生。在慢性期，由于胶质细胞的迁移增殖修复空洞缺损而最终形成胶质瘢痕。胶质瘢痕阻碍了再生轴突向远端的延伸，最终严重影响远期的功能恢复。
【发明内容】
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[0004]针对上述问题，本发明的主要目的在于提供一种奈莫司他在制备用于治疗脊髓损伤的药物中的用途。本发明将奈莫司他应用于脊髓损伤的治疗干预，以抑制脊髓损伤局部剧烈的酶促炎性反应，减轻脊髓的继发性损伤，从而促进损伤后的功能恢复。
[0005]为达到上述目的，本发明提供一种奈莫司他在制备用于治疗脊髓损伤的药物中的用途。
[0006]进一步地，所述奈莫司他用于制备治疗急性脊髓损伤的药物。
[0007]进一步地,所述奈莫司他的给药剂量为成人0.2mg/kg体重。
[0008]进一步地，所述药物包含奈莫司他和药学上可接受的辅料。
[0009]进一步地，所述药物为适于静脉全身给药的药物剂型。
[0010]进一步地,所述药物为冻干粉或针剂。
[0011]进一步地，所述药物的给药时间范围为脊髓损伤后8小时至24小时内。
[0012]进一步地，所述药物的给药时间范围为脊髓损伤后8小时内。
[0013]进一步地，所述脊髓损伤为由(例如车祸或坠落等外伤所致的)脊柱骨折或脱位引起的急性脊髓损伤。
[0014]进一步地，所述脊髓损伤的症状包括感觉过敏或丧失、肌力降低或瘫痪、或大小便自主控制障碍。
[0015]本发明通过对脊髓损伤造模动物的试验治疗，发现奈莫司他能够降低细胞的凋亡，促进神经元的存活，抑制胶质瘢痕的形成，并显著提高治疗后动物的BBB评分，表明奈莫司他对于脊髓损伤后的运动功能恢复具有显著的促进作用。
[0016]本发明将奈莫司他作为一种蛋白酶抑制剂治疗脊髓损伤，与目前临床上用于治疗脊髓损伤的常用药物甲强龙相比，给药窗口更宽，治疗效果更加持久，远期效果更好。
【专利附图】
【附图说明】
[0017]以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中:
[0018]图1示出了采用BBB评分法分析损伤后8小时给药的大鼠治疗后运动功能的恢复情况；
[0019]图2示出了采用TUNEL染色观察损伤后8小时给药的大鼠损伤局部的细胞凋亡情况；
[0020]图3示出了采用NF200染色观察损伤后8小时给药的大鼠损伤局部神经元的数量;
[0021]图4显示了采用GFAP染色观察损伤后8小时给药的大鼠损伤局部慢性期胶质瘢痕的形成情况；
`[0022]图5示出了采用NF200染色观察不同时间给药的大鼠脊髓内神经元的数量；
[0023]图6示出了采用GFAP染色观察不同时间给药的大鼠损伤局部慢性期胶质瘢痕的形成情况；
[0024]图7示出了采用不同浓度奈莫司他治疗大鼠的BBB评分。
[0025]其中图1-7中，*表示与对照组相比较,差异具有统计学意义，p<0.05 表示与对照组相比较，差异具有统计学意义，p〈0.001 ;#表示与相同给药时间的甲强龙治疗组相比较，差异具有统计学意义，P〈0.05 ;##表示与相同给药时间的甲强龙治疗组相比较，差异具有统计学意义，P〈0.001。
【具体实施方式】
[0026]以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
[0027]下述实施例中的试验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
[0028]本发明应用大鼠的脊髓损伤模型研究奈莫司他对脊髓损伤的治疗作用，并将奈莫司他的治疗效果与甲基强的松龙(甲强龙)进行比较，甲强龙作为目前临床上治疗脊髓损伤的标准药物，其疗效已得到了广泛认可。
[0029]实施例1奈莫司他对脊髓损伤的治疗试验
[0030]采用8周龄雌性Wistar大鼠，应用纽约大学(NYU)标准脊髓损伤打击器(ImpactorModel II)在大鼠胸10节段打击脊髓，构建脊髓损伤的动物模型。损伤后8小时，将奈莫司他以10mg/kg的剂量腹腔注射给药,而将甲强龙以30mg/kg的剂量尾静脉注射给药,每天一次持续至损伤后2周；同时采用生理盐水作为对照。应用BBB评分、TUNEL、NF-200和GFAP染色观察治疗后试验动物的功能恢复、损伤后细胞凋亡、神经元存活数量以及胶质瘢痕的大小。[0031]图1-4示出了上述试验中损伤后8小时给药时，奈莫司他治疗组与甲强龙治疗组及生理盐水照组的治疗效果比较。其中，图1示出了采用BBB评分法分析损伤后8小时给药的大鼠治疗后运动功能的恢复情况，从图1看出，奈莫司他治疗组的BBB评分显著高于甲强龙组与对照组，表明采用奈莫司他治疗可以显著促进大鼠损伤后的功能恢复。图2示出了采用TUNEL染色观察损伤后8小时给药的大鼠损伤局部的细胞凋亡情况，从图2看出，奈莫司他治疗组的大鼠的细胞凋亡数量显著低于对照组的大鼠的细胞凋亡数量，表明奈莫司他在损伤后对局部组织细胞具有保护作用。图3示出了采用NF200染色观察损伤后8小时给药的大鼠损伤局部神经元的数量，从图3看出，奈莫司他治疗组的大鼠的神经元数量显著高于对照组的大鼠的神经元数量，表明奈莫司他可在损伤后保护神经元的存活，促进神经元的再生修复。图4显示了采用GFAP染色观察损伤后8小时给药的大鼠损伤局部慢性期胶质瘢痕的形成情况，从图4看出，奈莫司他治疗组的大鼠的GFAP表达水平显著低于对照组的大鼠的GFAP表达水平，表明奈莫司他可以抑制慢性期胶质瘢痕的形成，促进损伤后的组织修复与功能恢复。
[0032]上述试验结果表明，与对照组相比，奈莫司他显著降低了损伤后急性期细胞的坏死及凋亡，促进了神经元的存活与修复；远期则缩小了胶质瘢痕的范围、促进了大鼠损伤后的功能恢复。由此表明，奈莫司他对脊髓损伤具有确定的疗效。
[0033]实施例2不同时间给药时奈莫司他与甲强龙的治疗效果对比
[0034]本实施例通过不同时间给药时奈莫司他与甲强龙的疗效对比，确定奈莫司他对于脊髓损伤临床治疗方案的有效性。
[0035]将8周龄雌性Wistar大鼠分为三组(每组30只)，应用纽约大学(NYU)标准脊髓损伤打击器(Impactor Model II)在大鼠胸10节段打击脊髓，选取打击后即刻(O小时)、3小时、8小时、24小时4个给药时间,对3组动物分别进行生理盐水、甲强龙和奈莫司他治疗并持续2周，观察大鼠的恢复情况。
[0036]图5-6示出了损伤后不同时间给药时奈莫司他治疗组与甲强龙治疗组及生理盐水对照组的治疗效果的比较。其中图5示出了采用NF200染色观察不同时间给药的奈莫司他治疗组与甲强龙治疗组及生理盐水对照组的大鼠脊髓内神经元数量的差异，从图5看出，在大鼠损伤后8小时给药时，奈莫司他治疗组大鼠的神经元数量显著高于甲强龙治疗组大鼠的神经元数量，而甲强龙治疗在早期疗效较明显，但随着给药时间的推迟其效果显著下降；图6示出了采用GFAP染色观察不同时间给药的大鼠损伤局部慢性期胶质瘢痕的形成情况。从图6看出，在大鼠损伤后8小时给药时，奈莫司他治疗组对胶质瘢痕的抑制作用最显著，且其对胶质瘢痕的抑制效果显著高于甲强龙组。综上，损伤后8小时给药能够更好地发挥奈莫司他对脊髓损伤的治疗效果。
[0037]综上，甲强龙在损伤早期的治疗效果较显著，但其疗效随给药时间的推迟而降低，给药窗口较窄，远期效果有限；而奈莫司他的治疗效果更加持久，给药窗口期更宽，远期疗效显著。[0038]实施例3奈莫司他给药剂量试验
[0039]为确定奈莫司他的最佳给药剂量,设计梯度浓度奈莫司他(lmg/kg、3mg/kg、10mg/kg、30mg/kg及100mg/kg)对脊髓损伤大鼠进行治疗，以单纯PBS注射组作为对照。图7示出了采用不同浓度奈莫司他治疗大鼠的BBB评分，从图7看出，随着给药浓度的升高，BBB评分同步升高，采用10mg/kg、30mg/kg及100mg/kg给药时BBB评分较高,考虑到10mg/kg、30mg/kg及100mg/kg三组的BBB评分差异无统计学意义,将10mg/kg作为动物实验的应用剂量。
[0040]综合以上研究结果，对于脊髓损伤的病人，依据通常动物(大鼠)与人50:1的剂量换算关系，以0.2mg/kg作为成人的奈莫司他给药剂量。优选地，临床上在脊髓损伤后24小时之内，特别是8小时内，应用0.2mg/kg奈莫司他进行静脉给药治疗是有效的。
[0041]以上对本发明【具体实施方式】的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出 各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
【权利要求】
1.奈莫司他在制备用于治疗脊髓损伤的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述脊髓损伤为急性脊髓损伤。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述奈莫司他的给药剂量为成人0.2mg/kg 体重。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物包含奈莫司他和药学上可接受的辅料。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物为适于静脉全身给药的药物剂型。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述药物为冻干粉或针剂。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物的给药时间范围为脊髓损伤后8小时至24小时内。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述药物的给药时间范围为脊髓损伤后8小时内。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的用途，其特征在于，所述脊髓损伤 为由脊柱骨折或脱位引起的急性脊髓损伤。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述脊髓损伤的症状包括感觉过敏或丧失、肌力降低或瘫痪、或大小便自主控制障碍。
【文档编号】A61P25/00GK103479612SQ201310377653
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2013年8月27日 优先权日:2013年8月27日
【发明者】冯世庆, 周新福, 刘燊, 安鲁凡, 吴秋丽, 史宏宇 申请人:冯世庆