治疗和预防糖尿病及其眼并发症的药物组合物及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种治疗和预防糖尿病及其眼并发症的药物组合物及其应用，该组合物由以下重量份的组分制成：炒槐米1-5重量份、黄芩1-5重量份、盐知母1-5重量份、陈皮1-5重量份。该药物组合物可通过醇提或水提方法制备得到。上述药物组合物对于治疗和预防糖尿病及其眼并发症具有显著性效果。
【专利说明】治疗和预防糖尿病及其眼并发症的药物组合物及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于中药【技术领域】，具体涉及一种治疗和预防糖尿病及其眼并发症的药物组合物及其应用。
【背景技术】
[0002]全世界每20个成人中就有一人为糖尿病患者,我国糖尿病患者3980万人,位居世界第2，且发病率不断提高。
[0003]糖尿病致死及致残的主要原因并非高血糖本身，而是其并发症。其中眼部并发症已成为成人致盲的首要原因。病程10年以上的糖尿病患者眼部并发症发病率高达60%以上。
[0004]目前西药降糖药物作用途径单一，长期使用降糖效果下降但无法同时兼治并发症；糖尿病患者眼部并发症手术治疗具有一定风险；目前治疗并发症药物如羟苯磺酸钙、和血明目片无显著降糖效果。所以治疗和预防糖尿病及其眼并发症的药物的该类药物研发具有实际意义
[0005]中药复方具有多组分、多靶点的特点，开发在降血糖的同时治疗糖尿病眼并发症的复方具有可能性和空间。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供一种能有效治疗和预防糖尿病及其眼并发症的药物组合物。
[0007]本发明的另一目的是提供上`述药物组合物的制备方法。
[0008]本发明的目的是通过以下方式实现的:
[0009]一种能有效治疗和预防糖尿病及其眼并发症的药物组合物，该组合物由以下重量份的组分制成:
[0010]炒槐米1-5份、黄芩1-5份、盐知母1-5份、陈皮1-5份。
[0011]该组合物优选由以下重量份的组分制成:
[0012]炒槐米1-3份、黄岑1-3份、盐知母1-3份、陈皮1-3份。
[0013]该组合物进一步优选由以下重量份的组分制成:
[0014]炒槐米1份、黄岑2份、盐知母3份、陈皮1份；
[0015]炒槐米2份、黄岑3份、盐知母1份、陈皮1份；
[0016]炒槐米3份、黄岑1份、盐知母2份、陈皮1份；
[0017]炒槐米1份、黄岑2份、盐知母3份、陈皮2份；
[0018]炒槐米2份、黄岑3份、盐知母1份、陈皮2份；
[0019]炒槐米3份、黄岑1份、盐知母2份、陈皮2份；
[0020]炒槐米1份、黄岑2份、盐知母3份、陈皮3份；
[0021]炒槐米2份、黄岑3份、盐知母1份、陈皮3份；
[0022]炒槐米3份、黄岑1份、盐知母2份、陈皮3份；[0023]炒槐米1份、黄芩1份、盐知母1份、陈皮1份；
[0024]炒槐米1份、黄芩1份、盐知母1份、陈皮2份；
[0025]炒槐米1份、黄芩1份、盐知母1份、陈皮3份；
[0026]炒槐米2份、黄芩2份、盐知母2份、陈皮1份；
[0027]炒槐米2份、黄芩2份、盐知母2份、陈皮3份；
[0028]炒槐米3份、黄芩3份、盐知母3份、陈皮2份；
[0029]炒槐米3份、黄岑3份、盐知母3份、陈皮1份。
[0030]该组合物最优选由以下重量份的组分制成:炒槐米1份、黄芩2份、盐知母3份、陈皮1份。
[0031]所述的组合 物与药学上可接受的载体制成制剂。所述的制剂可以为口服液、丸剂、片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸剂或注射剂。
[0032]上述组合物可通过醇提方法制备得到，具体的制备方法包括以下步骤:称取炒槐米，黄芩，盐知母和陈皮，加药材总重8-12倍量浓度为10%-90%的乙醇加热回流提取1-3次，每次提取1-3小时，过滤，合并滤液，浓缩。优选采用的乙醇的质量浓度为60%-70%。
[0033]上述组合物也可以通过水提方法制备得到，具体的制备方法包括以下步骤:称取炒槐米，黄芩，盐知母和陈皮，加药材总重8-12倍量水，加热提取1-3次，每次提取0.5-1小时,过滤，合并滤液,浓缩。
[0034]本发明药物组合物可在制备治疗或预防糖尿病及其眼并发症的药物中的应用。所述的糖尿病引起的眼并发症为视网膜病变或白内障。
[0035]本发明使用的槐米为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾。功能凉血止血，清肝泻火。炒槐米为用文火微炒而入药，减缓苦寒之性，能增强凉血止血的功效。盐知母为取知母片置锅中用文火微炒，喷淋盐水，炒干取出，放凉。(每知母片100斤，用盐2斤8两加适量开水化开澄清)。主治早泄。舌红，苔薄，脉细而数者。陈皮，常剥成数瓣，基部相连，有的呈不规则的片状，厚l_4mm。味苦、辛、温，理气健脾，燥湿化痰。黄芩(Scutellariabaicalensis Georgi ),本名“岑”,别名山茶根、土金茶根，因草色黄而有俗名“黄岑”。为唇形科植物，以根入药，味苦、性寒，能清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎，有清热燥湿，凉血安胎，解毒功效。发明人综合上述原料药材的优势，结合现代新药研究手段，研制出能有效治疗和预防糖尿病及其眼并发症的药物组合物，该药物组合物还具有使用安全、起效快的特点。
[0036]与现有技术比较本发明的有益效果:本发明具有显著的降低血糖及治疗糖尿病视网膜病变和白内障的作用；与阳性对照药二甲双胍、羟苯磺酸钙及和血明目片相比总体药效具有优效性；该组方同时具有组方创新性和活性创新性；其降糖机理与增加胰岛素分泌量和增加胰岛素敏感性有关；其治疗糖尿病视网膜病变和白内障病变的机理与抗氧化、抑制山梨醇通路、PKC通路及AGEs通路有关。
[0037]以下通过具体试验例对上述效果进行进一步说明:
[0038]试验例1.HepG2细胞胰岛素抵抗模型实验
[0039]治疗和预防糖尿病及其眼并发症的药物组合物由炒槐米、黄芩、盐知母、陈皮4味药物组成。四种药物可以在1-5:1-5:1-5:1-5的重量比例范围内任意组合，现列出药物组合物的比例关系和序号供体外抑制α糖苷酶实验、胰岛素增敏实验、促进胰岛素分泌实验和修复高微血管内皮损伤实验以及糖尿病大鼠模型实验中具体使用。
[0040]组方I组:炒槐米:黄芩:盐知母:陈皮=1:2:3:1[0041 ] 组方2组:炒槐米:黄芩:盐知母:陈皮=2:3:1:1
[0042]组方3组:炒槐米:黄芩:盐知母:陈皮=3:1:2:1
[0043]组方4组:炒槐米:黄芩:盐知母:陈皮=1:2:3:2
[0044]组方5组:炒槐米:黄芩:盐知母:陈皮=2:3:1:2
[0045]组方6组:炒槐米:黄芩:盐知母:陈皮=3:1:2:2
[0046]组方7组:炒槐米:黄芩:盐知母:陈皮=1:2:3:3
[0047]组方8组:炒槐米:黄芩:盐知母:陈皮=2:3:1:3
[0048]组方9组:炒槐米:黄芩:盐知母:陈皮=3:1:2:3
[0049]组方10组:炒槐米:黄芩:盐知母:陈皮=1:1:1:1
[0050]组方11组:炒槐米:黄芩:盐知母:陈皮=1:1:1:2
[0051]组方12组:炒槐米:黄芩:盐知母:陈皮=1:1:1:3
[0052]组方13组:炒槐米:黄芩:盐知母:陈皮=2:2:2:1
[0053]组方14组:炒槐米:黄`芩:盐知母:陈皮=2:2:2:3
[0054]组方15组:炒槐米:黄芩:盐知母:陈皮=3:3:3:2
[0055]组方16组:炒槐米:黄芩:盐知母:陈皮=3:3:3:1
[0056]1.实验材料:
[0057]细胞:人肝癌细胞(HepG2，FROM ATCC，中国药科大学国家新药筛选中心)。
[0058]试药:高糖DMEM培养基(Gibco，批号:914292);低糖DMEM培养基(Gibco，批号:914292);阿卡波糖片(拜耳医药保健有限公司，批号:117893);格列本脲(天津太平洋制药有限公司，批号:120108) ;二甲双胍(北京京丰制药有限公司，批号:120915);羟苯磺酸钙(西安利君制药有限公司，批号:1202023);和血明目片(西安碑林药业股份有限公司，201205009)。
[0059]2.实验方法
[0060]将IfepG2细胞按8X IO4浓度接种于96孔板上，每孔200 μ L，造模组使用浓度为10_6mol/L胰岛素诱导液诱导24h后，更换胰岛素浓度为10_9mol/L培养液继续孵育12h，测定各组细胞的葡萄糖消耗量。
[0061]2.lHepG2细胞培养及接板
[0062]HepG2细胞接种于细胞培养瓶中，每瓶加入约12mL含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基，置于37°C含有5%C02的培养箱中培养，约每3天一次0.25%胰蛋白酶-0.01%EDTA溶液消化传代，在细胞状态较好时胰酶消化后接板。
[0063]2.2药液的配制
[0064]2.2.1组方样品液I (2.5mg生药/ml)配制:
[0065]组方I药物的提取:按1:2:3:1的比例，称取炒槐米lg，黄芩2g，盐知母3g，陈皮lg，置于250mL圆底烧瓶中，加药材总重量10倍量质量浓度为70%的乙醇溶液，浸泡Ih后，85°C回流提取lh，16层纱布过滤，得滤液。同法提取3次，合并3次滤液，70°C减压回收至无醇味，转移至蒸发皿中置于70°C水浴锅上蒸至近干后60°C减压干燥，得该组方样品的干膏粉末3.4949g，得率49.93%。[0066]组方待测样品液I (2.5mg生药/ml)配制:称取组方样品0.0012g于2mlEP管中，加2ml低糖DMEM培养液涡旋溶解，于超净台中过0.22 μ m滤膜除菌，得浓度为2.5mg生药/ml的母液。
[0067]2.2.2组方样品液2-16(2.5mg生药/ml)配制:分别按试验例I项下的规定比例，取组方2-16组的各组药材，然后按“组方I样品液(2.5mg生药/ml)配制”方法，分别配制组方2-16样品液(2.5mg生药/ml)。
[0068]2.2.3组方样品液17 (2.5mg生药/ml)配制:
[0069]组方17药物的提取:按组方I的药材1:2:3:1的比例，称取炒槐米lg，黄芩2g，盐知母3g，陈皮lg，置于250mL圆底烧瓶中，加药材总重量10倍量水，浸泡Ih后，水浴提取Ih, 16层纱布过滤，得滤液。同法提取3次，合并3次滤液，80°C水浴锅上蒸至近干后60°C减压干燥，得该组方样品的干骨粉末3.57g,得率51%。
[0070]组方样品液17 (2.5mg生药/ml)配制:称取组方样品0.0013g于2mlEP管中，加2ml低糖DMEM培养液涡旋溶解，于超净台中过0.22 μ m滤膜除菌，得浓度为2.5mg生药/ml的母液。
[0071]2.3!fepG2细胞分组、造模及给药
[0072]!fepG2细胞生长至80~90%融合时，倒掉培养基，用PBS清洗2遍；将细胞以0.25%的胰蛋白酶消化约40s，倒出胰酶，加入含10%血清的培养基终止消化，倒掉培养基，加入新的含10%胎牛血清的培养基，轻轻吹打细胞至均匀，将细胞稀释至8 X IO4个/mL，接种于96孔板中，每孔接种200 μ L，周围每孔加入200 μ LD-Hank's溶液。将96孔板置于5%C02、37°C恒温培养箱中培养，待细胞生长至80-90%融合时，吸出培养液，分组如下，每组6个复孔，各孔加入如下培养基、诱导`液及药液后继续培养:空白组:200 μ L高糖DMEM ;模型组:180 μ L高糖DMEM和20 μ Ll(T5mol/L胰岛素诱导液；样品组:160 μ L高糖DMEM，20 μ L诱导液、20 μ L0.025mg/ml格列本脲溶液、20 μ L436 μ g/mL轻苯磺酸韩溶液、20 μ L2.5mg/ml和血明目片样品液、20μ L400y g/ml 二甲双胍样品液、20 μ L400 μ g/mL阿卡波糖样品液及各20 μ L组方样品液1-17。
[0073]2.4细胞培养液中葡萄糖含量测定
[0074]诱导培养16_20h后，将含药培养液取出，每孔加入新鲜的含10_9mol/L胰岛素并含1%FBS的低糖培养基200 μ L，培养12h后从各孔吸取20 μ I培养液于1.5mLEP管中，加入1000 μ L的葡萄糖浓度测定工作液，充分混匀，置于37°C水浴15min。显色后，在波长492nm处，测定各样品的吸光值，计算培养前后培养基中葡萄糖的含量差值即为各组葡萄糖消耗量。实验结果如表所示。
[0075]表1.不同药物及组方样品液1-17组对!fepG2细胞胰岛素敏感性的影响(X ± SD, n=6)
[0076]
【权利要求】
1.一种治疗和预防糖尿病及其眼并发症的药物组合物，其特征在于该组合物由以下重量份的组分制成: 炒槐米1-5份、黄芩1-5份、盐知母1-5份、陈皮1-5份。
2.根据权利要求1所述的治疗和预防糖尿病及其眼并发症的药物组合物，其特征在于该组合物由以下重量份的组分制成: 炒槐米1_3份、黄岑1-3份、盐知母1_3份、陈皮1-3份。
3.根据权利要求1所述的治疗和预防糖尿病及其眼并发症的药物组合物，其特征在于该组合物由以下重量份的组分制成: 炒槐米1份、黄芩2份、盐知母3份、陈皮1份； 炒槐米2份、黄芩3份、盐知母1份、陈皮1份； 炒槐米3份、黄芩1份、盐知母2份、陈皮1份； 炒槐米1份、黄芩2份、盐知母3份、陈皮2份； 炒槐米2份、黄芩3份、盐知母1份、陈皮2份； 炒槐米3份、黄芩1份、盐知母2份、陈皮2份； 炒槐米1份、黄芩2份、盐知母3份、陈皮3份； 炒槐米2份、黄芩3份、盐知母1份、陈皮3份； 炒槐米3份、黄芩1份、盐知母2份、陈皮3份； 炒槐米1份、黄岑1份、盐知母1份、陈皮1份； 炒槐米1份、黄岑1份、盐知母1份、陈皮2份； 炒槐米1份、黄岑1份、盐知母1份、陈皮3份； 炒槐米2份、黄芩2份、盐知母2份、陈皮1份； 炒槐米2份、黄芩2份、盐知母2份、陈皮3份； 炒槐米3份、黄芩3份、盐知母3份、陈皮2份； 炒槐米3份、黄芩3份、盐知母3份、陈皮1份。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该组合物由以下重量份的组分制成:炒槐米1份、黄岑2份、盐知母3份、陈皮1份。
5.根据权利要求1、2、3或4所述的药物组合物，其特征在于所述的组合物与药学上可接受的载体制成制剂。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于所述的制剂为口服液、丸剂、片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸剂或注射剂。
7.—种权利要求1、2、3或4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤:称取炒槐米，黄芩，盐知母和陈皮，加药材总重8-12倍量浓度为10%-90%的乙醇加热回流提取1-3次，每次提取1-3小时，过滤，合并滤液，浓缩。
8.—种权利要求1、2、3或4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤:称取炒槐米，黄芩，盐知母和陈皮，加药材总重8-12倍量水，加热提取1-3次，每次提取0.5-1小时，过滤，合并滤液，浓缩。
9.权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备治疗或预防糖尿病及其眼并发症的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于所述的糖尿病引起的眼并发症为视网膜病变或 白内障。
【文档编号】A61K36/8964GK103599340SQ201310411108
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年9月10日 优先权日:2013年9月10日
【发明者】杨中林 申请人:杨中林