红血球浓厚液用添加剂以及医疗用容器的制造方法
【专利摘要】红血球浓厚液用添加剂的特征在于，在红血球保存液中添加防溶血剂和表面活性剂，表面活性剂的HLB值为13以上，并且，其分子结构中的亲水部分的氧化亚乙基数为20以上。另外，医疗用容器的特征在于，在容器本体的内部填充有前述红血球浓厚液用添加剂。
【专利说明】红血球浓厚液用添加剂以及医疗用容器
[0001]本申请是申请号为2011800108010 (国际申请号为PCT/JP2011/053209)的原申请的分案申请，该原申请的申请日为2011年2月16日，发明名称为“红血球浓厚液用添加剂以及医疗用容器”。
【技术领域】
[0002]本发明涉及为了长期间保存红血球浓厚液而使用的红血球浓厚液用添加剂和医疗用容器。
【背景技术】
[0003]若长期间保存全血或红血球浓厚液(CRC)等，则全血或CRC中红血球膜被破坏、血红蛋白游离到外界而产生所谓的溶血。并且，最近得知，作为用于形成医疗用容器的氯乙烯树脂的塑化剂而广泛使用的邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)具有能够抑制溶血的作用。因此，通过使由DEHP塑化的氯乙烯树脂形成的医疗用容器在收纳红血球保存液的同时收纳全血或CRC并混合，使DEHP溶出至全血或CRC中，从而抑制溶血而谋求提高红血球保存性。然而，DEHP具有破坏血小板等的作用，另外，可能具有生殖毒性，因此使用DEHP作为红血球浓厚液用添加剂，在生理学的安全性方面不优选。
[0004]为了解决这种问题，专利文献1、2中提出了如下方法:为了防止血小板的破坏导致的损失，使形成用于保存(贮藏)血液的医疗用容器的树脂中含有维生素E。
[0005]现有技术文献
[0006]专利文献
[0007]专利文献1:日本特表平05-500319号公报
[0008]专利文献2:日本特公平06-34820号公报
【发明内容】
_9] 发明要解决的问题
[0010]然而，在专利文献1、2所提出的方法中，虽然在抑制血小板的损失方面可获得充分的效果，但在红血球保存性方面无法获得充分的效果。即，维生素E与DEHP相比，溶血抑制效果低，红血球保存性并不能说优异。
[0011]因此，本发明是为了解决这样的问题而进行的，其目的在于提供一种溶血抑制效果高、红血球保存性优异的红血球浓厚液用添加剂和医疗用容器。
_2] 用于解决问题的方案
[0013]为了解决前述课题，本发明的红血球浓厚液用添加剂的特征在于，其为在红血球保存液中添加了防溶血剂、表面活性剂的红血球浓厚液用添加剂，前述表面活性剂的HLB值(hydrophile - lypophile balance,亲水亲油平衡值)为13以上,并且,前述表面活性剂的分子结构中的亲水部分的氧化亚乙基数为20以上。
[0014]根据前述方案，通过在红血球保存液中添加防溶血剂和表面活性剂两者，从而防溶血剂和表面活性剂的溶血抑制作用协同地发挥作用。即，防溶血剂具有包覆红血球膜的外表面的作用，因此，能够抑制红血球膜的破坏。另外，表面活性剂具有帮助防溶血剂在红血球保存液中均匀地分散、以及帮助防溶血剂对红血球膜的包覆的作用。另外，通过使表面活性剂具有规定的HLB值，并且，表面活性剂的亲水部分具有规定数量的氧化亚乙基，从而即使表面活性剂单独也能够抑制红血球膜的破坏。
[0015]本发明的红血球浓厚液用添加剂优选如下:前述表面活性剂的分子结构中的亲水部分由聚氧乙烯失水山梨醇构成，前述红血球保存液为含有甘露醇、葡萄糖、腺嘌呤、磷酸盐、柠檬酸盐和氯化钠的混合溶液。
[0016]另外，红血球浓厚液用添加剂优选如下:前述表面活性剂的分子结构中的亲水部分由聚氧乙烯失水山梨醇构成，前述红血球保存液为含有甘露醇、葡萄糖、腺嘌呤和氯化钠的混合溶液。
[0017]另外，红血球浓厚液用添加剂优选如下:前述表面活性剂的分子结构中的亲水部分由聚氧乙烯失水山梨醇构成，前述红血球保存液为含有山梨醇、葡萄糖、腺嘌呤、鸟苷、磷酸盐和氯化钠的混合溶液。
[0018]另外，红血球浓厚液用添加剂优选如下:前述表面活性剂的分子结构中的亲水部分由聚氧乙烯构成，前述红血球保存液为含有甘露醇、葡萄糖、腺嘌呤、磷酸盐、柠檬酸和氯化钠的混合溶液。
[0019]另外，红血球浓厚液用添加剂优选如下:前述表面活性剂的分子结构中的亲水部分由聚氧乙烯构成，前述 红血球保存液为含有山梨醇、葡萄糖、腺嘌呤、鸟苷、磷酸盐和氯化钠的混合溶液。
[0020]根据前述五种形态的方案，通过由规定结构的表面活性剂和规定组成的红血球保存液构成，从而表面活性剂和红血球保存液协同地发挥作用，能够进一步抑制红血球膜的破坏。
[0021]本发明的红血球浓厚液用添加剂的特征在于，前述防溶血剂为维生素E。另外，本发明的红血球浓厚液用添加剂的特征在于，前述维生素E为醋酸酯衍生物。
[0022]根据前述方案，通过使防溶血剂为维生素E，特别是维生素E的醋酸酯衍生物，从而能够利用维生素E的抗氧化作用和与红血球膜的脂质的亲和作用等进一步抑制红血球膜的破坏。
[0023]本发明的医疗用容器的特征在于，在容器本体的内部填充有前述红血球浓厚液用添加剂。
[0024]根据前述方案，通过在容器本体的内部填充前述红血球浓厚液用添加剂，从而容器本体的内部所收纳的全血或CRC的红血球膜的破坏受到抑制。
[0025]发明的效果
[0026]根据本发明的红血球浓厚液用添加剂和医疗用容器，能够获得与使用以往的由DEHP塑化的氯乙烯树脂形成的医疗用容器时同等以上的溶血抑制效果，红血球保存性优
巳
【专利附图】
【附图说明】
[0027]图1为表示使用各种表面活性剂时迷你袋试验(mini bag test)中血衆中游离Hb量的变化的图表。
[0028]图2为表示使用各种表面活性剂时迷你袋试验中血浆中游离Hb量的变化的图表。
[0029]图3为表示使用各种表面活性剂时迷你袋试验中血浆中游离Hb量的变化的图表。
[0030]图4为表示使用 各种表面活性剂时迷你袋试验中血浆中游离Hb量的变化的图表。
[0031]图5为表示改变防溶血剂与表面活性剂的浓度比例时，迷你袋试验中血浆中游离Hb量的图表。
[0032]图6为表示本发明的医疗用容器的结构的模式图。
[0033]附图标记说明
[0034]100血液袋系统
[0035]103采血袋
[0036]105血液保存袋
[0037]106血液保存袋
[0038]107药液填充袋(医疗用容器)
[0039]110血液处理过滤器
【具体实施方式】
[0040]对本发明的红血球浓厚液用添加剂的实施方式进行说明。
[0041]红血球浓厚液用添加剂(以下，根据需要称为添加剂)是在红血球保存液中添加防溶血剂和表面活性剂而得到的，表面活性剂具有规定的分子结构。通过使添加剂为这样的构成，从而与以往的DEHP(由DEHP塑化的氯乙烯树脂形成的医疗用容器)相比，能够进一步抑制红血球膜的破坏(溶血)。另外，相对于IOOmL红血球浓厚液，添加剂的添加量为40~60mL，即，相对于IOOmL采血量，添加剂的添加量为20~30mL。以下，对各方案进行说明。
[0042](防溶血剂)
[0043]防溶血剂通过抗氧化作用和与红血球膜的脂质的亲和作用等来防止红血球膜的破坏，具体而言，优选选自由维生素E、或7-十四碳烯、8-十八碳烯、9-二十碳烯以及角鲨烯所组成组中的不饱和链式烃化合物。另外，维生素E有α-生育酚、生育酚、Y-生育酚、S -生育酚等生育酚类，α -生育三烯酚、β -生育三烯酚、Y -生育三烯酚、S -生育三烯酚等生育三烯酚类等，但优选α-生育酚。另外，维生素E可以为这些生育酚或生育三烯酚的酯衍生物，优选醋酸酯衍生物，具体而言优选醋酸生育酚。
[0044]就防溶血剂而言，在红血球制剂中的浓度优选为25~100ppm(参照图5)，因此，与表面活性剂同时添加时，添加剂中的防溶血剂的浓度优选为75~300ppm。浓度不足75ppm时，变得难以抑制红血球膜的破坏。具体而言，溶血抑制率易降低，换言之，血浆中Hb量变得易增大。另外，浓度超过300ppm时，红血球膜的破坏抑制效果见不到显著的提高，同时易导致费用上升。
[0045](表面活性剂)
[0046]表面活性剂有助于防溶血剂在红血球保存液中均匀分散、以及有助于防溶血剂包覆红血球膜的作用，同时即使单独也能够抑制红血球膜的破坏。因此，表面活性剂的HLB值为13以上，优选为13~20，并且，其分子结构中的亲水部分的氧化亚乙基数(E0数)为20以上，优选为20~40。另外，表面活性剂优选其分子结构的亲水部分由聚氧乙烯(PEO)构成的第I形态，或由聚氧乙烯失水山梨醇(ΡΕ0失水山梨醇)构成的第2形态。
[0047]HLB值不足13时，表面活性剂不分散于添加剂中，因此无法抑制红血球膜的破坏。另外，EO数不足20时，表面活性剂的亲水部分的分子量低，因此无法抑制红血球膜的破坏。另外，HLB值超过20时，或者，EO数超过40时，红血球膜的破坏抑制见不到显著的提高，同时易导致费用增加。需要说明的是，HLB值利用格里芬法测定，由HLB值=(20X亲水部分的式量的总和)/(表面活性剂的分子量)计算。
[0048]作为第I形态的表面活性剂，例如可列举出聚氧乙烯油基醚(emUlgen(注册商标)430)、聚氧乙烯月桂基醚(emulgenl30K)等(参照表1)。
[0049]作为第2形态的表面活性剂，例如可列举出聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯(Tween (注册商标)80、聚氧乙烯失水山梨醇单硬脂酸酯(Tween60)、聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(Tween20)等(参照表1)。
[0050]就表面活性剂而言，在红血球制剂中的浓度优选为100~300ppm(参照图5)，与防溶血剂同时添加时，添加剂中的表面活性剂的浓度优选为300~900ppm。浓度不足300ppm时，变得难以抑制红血球膜的破坏。具体而言，溶血抑制率易降低，换言之，血浆中Hb量变得易增大。另外，浓度超过900ppm时，变得难以抑制红血球膜的破坏，同时易导致费用增加。
[0051](红血球保存液)
[0052]红血球保存液 使用为了长期保存红血球浓厚液而使用的以往公知的保存液。作为红血球保存液，可列举出ACD液、CPD液、MAP液、SAGM液、0PTIS0L (注册商标)(AS-5)、ADSOL (AS-1)、Nutricel (AS-3)、PAGG-S, SAGP-maltose 等。特别优选 MAP 液、SAGM 液或PAGG-S。这里，MAP液是指含有甘露醇、葡萄糖、腺嘌呤、磷酸盐、柠檬酸盐和氯化钠的混合溶液。另外，SAGM液是指含有甘露醇、葡萄糖、腺嘌呤和氯化钠的混合溶液。进而，PAGG-S是指含有山梨醇、葡萄糖、腺嘌呤、鸟苷、磷酸盐和氯化钠的混合溶液。
[0053]需要说明的是，相对于IOOmL红血球浓厚液，红血球保存液的添加量为40~60mL，SP，相对于IOOmL采血量，红血球保存液的添加量为20~30mL。添加量不足下限值时，变得难以抑制红血球膜的破坏。另外，添加量超过上限值时，红血球膜的破坏抑制见不到显著的提高，同时易导致费用增加。
[0054]接着，对本发明的医疗用容器进行说明。
[0055]医疗用容器的特征在于，在容器本体的内部填充有红血球浓厚液用添加剂。而且，容器本体是将由聚烯烃、氯乙烯树脂等形成的2张树脂片的边缘部分熔接制成容器状而得到的。另外，本发明的医疗用容器如图6所示的那样，相当于血液袋系统100的药液填充袋
107。
[0056]血液袋系统100具备:用于填充介由顶端具有采血针102的采血管IOla从供血者(捐血者)采取的血液的采血袋103、用于从由采血袋103介由管IOlb输送的血液(全血)中分离规定的血液成分(白血球和血小板)的血液处理过滤器110、用于介由管IOlc回收通过血液处理过滤器110而除去了规定的血液成分的血液的血液保存袋105、介由管101d、IOle和分支管104输送在该血液保存袋105内离心分离的血液成分(血浆)的血液保存袋106、填充了前述红血球浓厚液用添加剂的药液填充袋107，介由管IOlfUOld和分支管104从药液填充袋107中将红血球浓厚液用添加剂输送到血液保存袋105，添加至血液保存袋105内的血液成分(红血球浓厚液)中。
[0057]需要说明的是，采血袋103、血液保存袋105、106和药液填充袋107例如为100~600mL左右的容量。
[0058]另外，采血袋103、血液保存袋105、106和药液填充袋107的上部侧形成有排出口
108。另外，采血袋103、血液保存袋105、106和药液填充袋107上贴附有用于显示其填充的血液成分的标签109。另外，管IOlb~IOlf中根据需要设置有未图示的流路密封构件。流路密封构件是指以阻断(密封)管内的流路的状态设置，通过断裂而使流路开通的构件。
[0059]实施例1
[0060]实施以下的迷你袋试验来评价添加剂的红血球保存性。
[0061]<迷你袋试验>
[0062]在IOOmL红血球保存液(MAP液)中同时添加选自表1所示的表面活性剂的7种表面活性剂90mg和防溶血剂(维生素E:醋酸生育酚)15mg，作为表2所示的N0.1~3、8~11的添加剂。另外，还添加使用了聚乙二醇(分子量1000)作为表面活性剂的替代物的物质，作为表2所示的N0.12的添加剂。进而，不使用表面活性剂，仅添加防溶血剂(维生素E)，作为表2所示的N0.13的添加剂。之后，混合各添加剂20mL和红血球浓厚液40mL作为红血球制剂，在利用偏苯三酸三(2-乙基己酯)(TOTM)塑化的氯乙烯树脂(PVC)制的迷你袋内在保持4°C的状态下保存5周。此时的红血球制剂中的防溶血剂的浓度为50ppm，表面活性剂的浓度为300ppm。进而，将未添加添加剂的红血球制剂在利用邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)塑化的PVC制的迷你袋内同样地保存。
[0063]对保存如、保存2周后、保存4周后以及保存5周后的红血球制剂利用以下的LCV法测定血浆中游离Hb量，按照以下的评价基准评价红血球保存性。将其结果示于图1、表2。
[0064](LCV 法)
[0065]血浆中游离Hb(血红蛋白)量按照以下的步骤测定。
[0066](I)将 20mg Leuco Crystal Violet 溶解于 75mL 丙酮中后，添加醋酸 20mL、R0 水25mL并搅拌混合，将其作为显色试剂使用。
[0067](2)向lmL30质量％的双氧水中添加RO水30mL并混合，将其作为显色底物溶液使用。
[0068](3)红血球制剂的保存结束后，将红血球制剂离心，采取上清液，将其作为血浆中游离血红蛋白量的测定对象物。另外,将血红蛋白标准液(alfresa-pharma制Hemocon-N)用RO水稀释，同时调制2~300mg/dL浓度的标准曲线制作用血红蛋白标准液(标准曲线样品)。
[0069](4)向试管中添加6mL显色试剂、25 μ L测定对象物和标准曲线样品并充分搅拌。
[0070](5)进而，添加ImL显色底物溶液并搅拌后，在37°C的水流式恒温槽中孵育20分钟。
[0071](6)孵育完成后，使用分光光度计(U-3010，日立制作所)测定590nm的吸光度，由同时测定的标准曲线样品的值计算血红蛋白浓度，作为血浆中游离血红蛋白量。
[0072](红血球保存性的评价基准)[0073]将保存5周后的血浆中游离Hb量与在DEHP塑化PVC制的迷你袋中保存时的血浆中游离Hb量相比，较少的情况评价为红血球保存性良好(〇)，较多的情况评价为红血球保存性不良(X)。
[0074]另外，在IOOmL红血球保存液(MAP液)中同时添加选自表1所示的表面活性剂的4种表面活性剂60mg和防溶血剂(维生素E:醋酸生育酚)15mg，作为表2所示的N0.4~7的添加剂。之后，将各添加剂20mL和红血球浓厚液40mL混合作为红血球制剂，在利用偏苯三酸三(2-乙基己酯)(TOTM)塑化的氯乙烯树脂(PVC)制的迷你袋内在保持4°C的状态下保存5周。此时的红血球制剂中的防溶血剂的浓度为50ppm，表面活性剂的浓度为200ppm。进而，将未添加添加剂的红血球制剂在利用邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)塑化的PVC制的迷你袋内同样地保存。与前述同样地，测定红血球制剂的血浆中游离Hb量，评价红血球保存性。将其结果示于图2、表2。
[0075]实施例2
[0076]实施以下的迷你袋试验评价添加剂的红血球保存性。
[0077]<迷你袋试验>
[0078]在IOOmL红血球保存液(SAGM液)中同时添加选自表1所示的表面活性剂的3种表面活性剂60mg和防溶血剂(维生素E:醋酸生育酚)15mg，作为表2所示的N0.1、4、9的添加剂。之后，将各添加剂20mL和红血球浓厚液40mL混合作为红血球制剂，在利用偏苯三酸三(2-乙基己酯)(TOTM)塑化的氯乙烯树脂(PVC)制的迷你袋内在保持4°C的状态下保存5周。此时的红血球制剂中的防溶血剂的浓度为50ppm，表面活性剂的浓度为200ppm。进而，将未添加添加剂的红血球制剂在利用邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)塑化的PVC制的迷你袋内同样地保存。与前述的实施例1同样地，测定红血球制剂的血浆中游离Hb量，评价红血球保存性。将其结果`示于图3、表2。
[0079]实施例3
[0080]实施以下的迷你袋试验评价添加剂的红血球保存性。
[0081]<迷你袋试验>
[0082]在IOOmL红血球保存液(PAGG-S)中同时添加选自表1所示的表面活性剂的3种表面活性剂60mg和防溶血剂(维生素E:醋酸生育酚)15mg，作为表2所示的N0.1、4、9的添加剂。之后，将各添加剂20mL和红血球浓厚液40mL混合作为红血球制剂，在利用偏苯三酸三(2-乙基己酯)(TOTM)塑化的氯乙烯树脂(PVC)制的迷你袋内在保持4°C的状态下保存5周。此时的红血球制剂中的防溶血剂的浓度为50ppm，表面活性剂的浓度为200ppm。进而，将未添加添加剂的红血球制剂在利用邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)塑化的PVC制的迷你袋内同样地保存。与前述的实施例1同样地，测定红血球制剂的血浆中游离Hb量，评价红血球保存性。将其结果示于图4、表2。
[0083][表 I]
【权利要求】
1.一种红血球浓厚液用添加剂，其特征在于，其为在红血球保存液中添加了维生素E、表面活性剂的红血球浓厚液用添加剂， 所述表面活性剂的HLB值为13以上，并且，所述表面活性剂的分子结构中的亲水部分的氧化亚乙基数为20以上， 所述表面活性剂的分子结构中的亲水部分由聚氧乙烯失水山梨醇构成， 所述红血球保存液为含有甘露醇、葡萄糖、腺嘌呤、磷酸盐、柠檬酸盐和氯化钠的混合溶液。
2.—种红血球浓厚液用添加剂，其特征在于，其为在红血球保存液中添加了维生素E、表面活性剂的红血球浓厚液用添加剂， 所述表面活性剂的HLB值为13以上，并且，所述表面活性剂的分子结构中的亲水部分的氧化亚乙基数为20以上， 所述表面活性剂的分子结构中的亲水部分由聚氧乙烯失水山梨醇构成， 所述红血球保存液为含有甘露醇、葡萄糖、腺嘌呤和氯化钠的混合溶液。
3.—种红血球浓厚液用添加剂，其特征在于，其为在红血球保存液中添加了维生素E、表面活性剂的红血球浓厚液用添加剂， 所述表面活性剂的HLB值为13以上，并且，所述表面活性剂的分子结构中的亲水部分的氧化亚乙基数为20以上，` 所述表面活性剂的分子结构中的亲水部分由聚氧乙烯失水山梨醇构成， 所述红血球保存液为含有山梨醇、葡萄糖、腺嘌呤、鸟苷、磷酸盐和氯化钠的混合溶液。
4.根据权利要求1所述的红血球浓厚液用添加剂，其特征在于，所述维生素E为维生素E的醋酸酯衍生物。
5.一种医疗用容器，其特征在于，在容器本体的内部填充有权利要求1至4中任一项所述的红血球浓厚液用添加剂。
【文档编号】A61J1/10GK103548811SQ201310430592
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2011年2月16日 优先权日:2010年2月23日
【发明者】武田典彦 申请人:泰尔茂株式会社