一种高含量枣环磷酸腺苷提取物及其制备方法
【专利摘要】本发明提供了一种高含量枣环磷酸腺苷提取物及其制备方法，所述提取物中环磷酸腺苷的浓度为每100g大于15mg，采用枣的固体或半固体原料，经高压差连续式低温提取器提取，提取液浓缩后，真空干燥，粉碎得枣的粗提物；采用超临界萃取技术萃取粗提物，得到枣环磷酸腺苷提取物；所述枣环磷酸腺苷提取物抗缺氧，抗疲劳，改善生活质量方面效果突出，其制备方法具有以下明显优点：（1）提取转移率高；（2）生产效率高；（3）质量可控性高；（4）操作可控程度高；（5）资源综合利用率高；（6）综合运行成本低；（7）自动化程度高；（8）环境污染低。
【专利说明】一种高含量枣环磷酸腺苷提取物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物有效成分的提取和富集生产领域，尤其是一种高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法。
【背景技术】
[0002]环憐酸腺苷(cyclicademodsine monophosphate,简称 cAMP)是一种蛋白激酶制活剂，广泛存在于生物体的组织与细胞内。其受神经内分泌系统的控制，作为肽类激素、儿茶酚胺和前列腺素等激素的第二信使发挥生物效应。基础医学与临床医学研究证明，cAMP可以通过促进脑细胞代谢、修复衰老和疲劳脑细胞，阻止脑细胞衰老，从而改善睡眠与记忆力；对机体淋巴细胞转化、抗体的形成与释放、细胞免疫等生理功能有重要的调节作用，从而增强免疫力、选择性抑制机体免疫反应，改善过敏性皮炎、麻疹、哮喘等免疫功能；抑制细胞增殖、促进细胞分化，起到抗肿瘤的作用；通过营养心肌、正性肌力、舒张血管等途径改善心血管功能；调节神经递质合成，促进激素分泌，维持正常的人体生理活动。
[0003]1991年，刘孟军等借助蛋白结合法对14种园艺植物的cAMP含量进行了测定，发现大枣中cAMP的含量最高，其成熟果肉中cAMP的含量为一般动植物材料的数千至数万倍，范围在60-800 μ g/g，其中，被誉为“中华金丝小枣第一县”的无棣县盛产的金丝小枣中cAMP的含量较高；韩利文等人报道，山东沂蒙山大雪枣中cAMP与金丝小枣含量相当。
[0004]目前，环磷酸腺苷制剂的制备方法主要包括化学合成法、微生物发酵法和传统提取工艺合并柱层析纯化。其中，化学合成法例如申艳红等(2003)以腺苷为原料，三氯氧磷为磷酰化试剂，用磷酸三乙酯作溶剂，低温下生成腺苷的5’位二氯磷酸酯，将此中间体与反应体系分离，融入适当的溶剂，于搅拌下慢慢加入到Κ0Η的水和乙腈溶液中，强碱环化得到3’，5’ -环磷酸腺苷，从乙醇和水中重结晶后纯度可达到98.5%，总收率58% ；微生物发酵法例如日本研究者(Kok·ai Tokyyo Koho，1997)采用基因重组的手段获得了菌种Escherichiacoli K_ll,可发酵生产cAMP,米用摇床在28°C培养14h,培养基为葡萄糖0.5%, KH2P041.4%, (NH4) 2S040.2%, MgS04.7H20 0.02%,蛋白胨 0.4%,酵母粉 0.02%,培养液中cAMP的浓度为3.9%mg/150mL ；CN 100425620C公开了一种从枣中提取环磷酸腺苷的工艺，采用浸泡-超声提取红枣，得到澄清枣汁，枣汁通过阴离子交换柱，甲酸水溶液洗脱，氨水溶液调节pH值，再过阴离子交换柱，收集的洗脱液通过层析柱(硅胶型，或者大孔树脂型，或者聚酰胺型)，再用水或乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩后加入无水乙醇结晶，得到高纯度环磷酸腺苷粉。
[0005]然而，上述化学合成法所用的试剂有一定毒性，污染环境；且技术复杂，价格昂贵，难以实现大规模生产；由于合成过程中的副产物原因，适用范围很小，主要用于心绞痛、心肌梗死、心肌炎及心源性休克等心血管疾病的治疗，使用过量会有毒副作用。柱层析法在分离过程中使用了一些刺激性的试剂，对层析柱填料的安全性要求也很高。微生物发酵法由于受到菌种限制且难以分离，使用起来也有一定的局限性。常用的提取方法采用的设备大部分是单元批次式，难以形成连续化生产的规模，影响提取过程标准化进程。[0006]可见，针对现有技术中存在的溶剂消耗量大、周期长、自动化水平低，化学合成过程中副产物多等技术问题，寻求一种新的环磷酸腺苷的生产工艺具有非常重要的生产实践意义。
【发明内容】
[0007]本发明所要解决的技术问题在于提供一种高含量枣环磷酸腺苷提取物。
[0008]本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法。
[0009]为解决上述技术问题，本发明的技术方案是:
[0010]一种高含量枣环磷酸腺苷提取物，所述提取物中环磷酸腺苷的浓度为每15mg/100g以上，环磷酸腺苷自原料的转利率达90%以上，该提取物是由下述方法得到的:采用枣的固体或半固体原料，经高压差连续式低温提取器提取，提取液浓缩后，真空干燥，粉碎得枣的粗提物；采用超临界萃取技术萃取粗提物，得到枣环磷酸腺苷提取物。
[0011]一种高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，采用枣的固体或半固体原料，经高压差连续式低温提取器提取，提取液浓缩后，真空干燥，粉碎得枣的粗提物；采用超临界萃取技术萃取粗提物，得到高含量枣环磷酸腺苷提取物。
[0012]优选的，上述高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，具体步骤如下:
[0013](1)放置物料:选取含水量在5-30%的枣为原料，粉碎原料，使粒径为180-850 μ m(80-24 目)；
[0014](2)抽真空:在反应系统温度-10-0°C条件下，在高压差连续式低温提取器内形成真空，真空度保持在-100—20pa，加入水或5-70% (v/v)乙醇水溶液，保持5_30min，其中，所述原料与水或5-70% (v/v)乙醇水溶液的重量比为1:6-20 ；
[0015](3)减真空:通入净化压缩空气，使高压差连续式低温提取器内的压力升至OMpa，保持 Ι-lOmin ；
[0016](4)加压:继续通入压缩空气，使高压差连续式低温提取器内的压力达到8-12Mpa，保持 l-20min ；
[0017](5)减压:停止加压，抽真空，使高压差连续式低温提取器中的压力降至OMpa ；
[0018](6)循环提取:将步骤(2)- (5)进行循环，循环10次；
[0019](7)分离:通过过滤、离心，使固液分离，收集提取液；
[0020](8)干燥:将步骤(7)所得提取液浓缩，真空干燥，粉碎过20-80目筛，得粗提物粉末；
[0021](9)超临界萃取:以5-99% (v/v)乙醇作夹带剂与粗提物粉末均匀混合，夹带比为
8-15% (此处，夹带比指夹带剂与粗提物粉末的体积质量比，ml/g)，平衡10-30min后，进行动态萃取，在萃取釜压力15-60Mpa，萃取温度35_60°C，萃取时间0.5-5小时，分离釜压力5-30Mpa，分离釜温度10-50°C，分离时间0.5-5小时，同一流程中分离釜压力始终小于萃取釜压力，二氧化碳流量10-100L/h的条件下，减压分离，得到枣环磷酸腺苷提取物。
[0022]优选的，上述高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，所述步骤(1)中粉碎原料后，环磷酸腺苷的含量为0.01-0.08%。
[0023]优选的，上述高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，所述步骤(1)中选取含水量在5-15%的枣为原料。
[0024]优选的，上述高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，所述步骤(1)中选取含水量在10%的枣为原料，粉碎原料，使粒径为250 μ m (65目)。
[0025]优选的，上述高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，所述步骤(1)中枣为金丝小枣(河北沧州)或大雪枣(山东沂蒙山区)。
[0026]优选的，上述高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，所述步骤(2)抽真空的真空度保持在_70pa，加入50% (v/v)乙醇水溶液，保持20min，其中，所述原料与50% (v/v)乙醇水溶液的重量比为1:10。
[0027]优选的，上述高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，所述步骤(2)中反应系统温度-10-0°c，是通过高压差连续式低温提取器外周冷凝循环系统中的冷却水实现的。
[0028]优选的，上述高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，所述冷却水为95% (v/v)乙醇。
[0029]优选的，上述高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，所述步骤(4)加压的压力达到 llMpa，保持 15min。
[0030]优选的，上述高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，所述步骤(7)中提取液为固液分离后经400目的滤膜过滤至澄清的离心液。
[0031]优选的，上述高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，所述步骤(9)中以90% (v/v)乙醇作夹带剂与粗提物粉末均匀混合，夹带比为15%，平衡30min后，进行动态萃取，在萃取釜压力40Mpa，萃取温度37°C，萃取时间5小时，分离釜压力6Mpa，分离釜温度30°C，分离时间2.5小时，同一流程中分离釜压力始终小于萃取釜压力，二氧化碳流量20L/h的条件下，减压分离，得到枣环磷酸腺苷提取`物。
[0032]优选的，上述高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，所得到的环磷酸腺苷可进一步经传统制剂工艺加工生产得到胶囊剂、口服液、露剂、颗粒剂、冲剂、片剂等相关剂型的
女口
广叩ο
[0033]本发明的有益效果是:
[0034]本发明所述高含量枣环磷酸腺苷提取物，抗缺氧，抗疲劳，改善生活质量方面效果突出，该高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，将原料枣进行低温干燥处理，总灰分不超过2.0%，利用同批药材提取液富集环磷酸腺苷，采用高压差低温连续提取技术，通过瞬时的真空加压，将枣中组织细胞进行破裂，使胞内相关成分与溶媒充分接触、直接溶解，从而达到高效提取的效果，再通过超临界二氧化碳萃取技术分离得到高收率、高纯度的环磷酸腺苷(cAMP)，采用特定浓度的乙醇作夹带剂，选择条件获得以高含量的环磷酸腺苷活性成分，其浓度在15mg/g以上，是食品或药品的优质原料。
[0035]与现有提取技术相比，本发明所述高含量枣环磷酸腺苷提取物的制备方法具有以下明显优点:
[0036](1)提取转移率高；
[0037](2)生产效率高；
[0038](3)质量可控性高；
[0039](4)操作可控程度高；
[0040](5)资源综合利用率高:溶媒用量大幅减少，提取液中环磷酸腺苷含量高，后期浓缩成本降低；
[0041](6)综合运行成本低；
[0042](7)自动化程度高；
[0043](8)环境污染低。
【专利附图】
【附图说明】
[0044]图1是环磷酸腺苷标准品高效液相色谱图；
[0045]图2是实施例1所得高含量枣环磷酸腺苷提取物的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0046]下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。
[0047]实施例1
[0048]一种高含量枣环磷酸腺苷提取物，其具体制备步骤如下:
[0049](1)放置物料:将含水量10%的河北沧州金丝小枣10kg，粉碎过65目筛，使粒径250 μ m，置于高压差连续式低温提取器中；
[0050](2)抽真空:通过高压差连续式低温提取器外周冷凝循环系统中的冷却水(95%(v/v )乙醇)使反应系统温度_7 V条件下，在高压差连续式低温提取器内形成真空，真空度保持在_70pa，恒压后，加入50% (v/v)乙醇水溶液，保持20min，其中，所述原料与50% (v/v)乙醇水溶液的重量比为1:10 ;
[0051](3)减真空:缓慢通入净化的压缩空气，使高压差连续式低温提取器内压力升至OMpa,时间约为3min ；
[0052](4)加压:继续通入压缩空气，使高压差连续式低温提取器内的压力达llMpa，保持 15min ；
[0053]( 5 )减压:停止加压，打开放气阀，抽真空，使高压差连续式低温提取器内的压力降至 OMpa ；
[0054](6)循环提取:继续步骤(2)- (5)，循环10次；
[0055](7)分离:经过滤、离心，将固液分离，离心液经400目的滤膜过滤至澄清，收集提取液；
[0056](8)干燥:将步骤(7)所得提取液浓缩，真空干燥，粉碎过65目筛，得枣的粗提物粉末；
[0057](9)超临界萃取:以90%(v/v)乙醇作夹带剂与粗提物粉末均匀混合，夹带比为15%(此处，夹带比指夹带剂与粗提物粉末的体积质量比，ml/g)，平衡30min后，进行动态萃取，在萃取釜压力40Mpa，萃取温度37°C，萃取时间5小时，分离釜压力6Mpa，分离釜温度30°C，分离时间2.5小时，同一流程中分离釜压力始终小于萃取釜压力，二氧化碳流量20L/h的条件下，减压浓缩、干燥，得到枣环磷酸腺苷提取物，对枣环磷酸腺苷提取物进行高效液相色谱法检测，其中，色谱仪:由P200 II高压恒流泵、UV200 II紫外可变波长检测器及Echr0m98色谱工作站等部分组成；样品处理:准确量取10ml用蒸馏水定容于50ml容量瓶中，摇匀，离心,0.45 μ m滤膜过滤，即得；色谱柱:Hydersir BDS C18 ;流动相:20mol/LKH2P04-甲醇(90:10);柱温:25V ;检测波长:254nm;7流速:0.6mL/min ;进样量:10yLo如图1和图2所示，其中环磷酸腺苷含量为15mg/100g的提取物。
[0058]实施例2[0059]一种高含量枣环磷酸腺苷提取物，其具体制备步骤如下:
[0060](I)放置物料:选取含水量在5%的大雪枣(山东沂蒙山区)为原料，粉碎原料，使粒径为 180 μ m (80 目)；
[0061](2)抽真空:在反应系统温度0°C条件下，在高压差连续式低温提取器内形成真空，真空度保持在-lOOpa，加入水溶液，保持30min，其中，所述原料与水溶液的重量比为1:6 ；
[0062](3)减真空:通入净化压缩空气，使高压差连续式低温提取器内的压力升至OMpa，保持IOmin ；
[0063](4)加压:继续通入压缩空气，使高压差连续式低温提取器内的压力达到12Mpa，保持Imin ；
[0064](5)减压:停止加压，抽真空，使高压差连续式低温提取器中的压力降至OMpa ；
[0065](6)循环提取:将步骤(2)- (5)进行循环，循环10次；
[0066](7)分离:通过过滤、离心，使固液分离，收集提取液；
[0067](8)干燥:将步骤(7)所得提取液浓缩，真空干燥，粉碎过80目筛，得粗提物粉末；
[0068](9)超临界萃取:以99% (v/v)乙醇作夹带剂与粗提物粉末均匀混合，夹带比为8% (此处，夹带比指夹带剂与粗提物粉末的体积质量比，ml/g)，平衡30min后，进行动态萃取，在萃取釜压力60Mpa，萃取温度35°C，萃取时间0.5小时，分离釜压力30Mpa，分离釜温度10°C，分离时间0.5小时，同一流程中分离釜压力始终小于萃取釜压力，二氧化碳流量IOL/h的条件下，减压分离，得到环磷酸腺苷含量为10mg/100g的提取物。
[0069]实施例3
[0070]一种高含量枣环磷酸腺苷提取物，其具体制备步骤如下:
[0071](I)放置物料:选取含水量在30%的金丝小枣(河北沧州)为原料，粉碎原料，使粒径为 850 μ m (24 目);
[0072](2)抽真空:在反应系统温度-10°C条件下，在高压差连续式低温提取器内形成真空，真空度保持在_20pa，加入5% (v/v)乙醇水溶液，保持5min，其中，所述原料与5% (v/v)乙醇水溶液的重量比为1:20 ;
[0073](3)减真空:通入净化压缩空气，使高压差连续式低温提取器内的压力升至OMpa，保持Imin ；
[0074](4)加压:继续通入压缩空气，使高压差连续式低温提取器内的压力达到8Mpa，保持 20min ；
[0075](5)减压:停止加压，抽真空，使高压差连续式低温提取器中的压力降至OMpa ；
[0076](6)循环提取:将步骤(2)- (5)进行循环，循环10次；
[0077](7)分离:经过滤、离心，将固液分离，离心液经400目的滤膜过滤至澄清，收集提取液；
[0078](8)干燥:将步骤(7)所得提取液浓缩，真空干燥，粉碎过20目筛，得粗提物粉末；
[0079](9)超临界萃取:以5% (v/v)乙醇作夹带剂与粗提物粉末均匀混合，夹带比为15%(此处，夹带比指夹带剂与粗提物粉末的体积质量比，ml/g)，平衡IOmin后，进行动态萃取，在萃取釜压力15Mpa，萃取温度60°C，萃取时间5小时，分离釜压力5Mpa，分离釜温度50°C，分离时间5小时，同一流程中分离釜压力始终小于萃取釜压力，二氧化碳流量100L/h的条件下，减压分离，得到环磷酸腺苷含量为9.5mg/100g的提取物。
[0080]实施例4
[0081]一种高含量枣环磷酸腺苷提取物，其具体制备步骤如下:
[0082](I)放置物料:选取含水量在15%的金丝小枣为原料，粉碎原料，过65目筛；
[0083](2)抽真空:在反应系统温度_5°C条件下，在高压差连续式低温提取器内形成真空，真空度保持在_50pa，加入70%(v/v)乙醇水溶液，保持20min，其中，所述原料与70%(v/V)乙醇水溶液的重量比为1:8 ；
[0084](3)减真空:通入净化压缩空气，使高压差连续式低温提取器内的压力升至OMpa，保持5min ；
[0085](4)加压:继续通入压缩空气，使高压差连续式低温提取器内的压力达到lOMpa，保持IOmin ；
[0086](5)减压:停止加压，抽真空，使高压差连续式低温提取器中的压力降至OMpa ；
[0087](6)循环提取:将步骤(2)- (5)进行循环，循环10次；
[0088](7)分离:经过滤、离心，将固液分离，离心液经400目的滤膜过滤至澄清，收集提取液；
[0089](8)干燥:将步骤(7)所得提取液浓缩，真空干燥，粉碎过40目筛，得粗提物粉末；
[0090](9)超临界萃取:以70% (v/v)乙醇作夹带剂与粗提物粉末均匀混合，夹带比为12% (此处，夹带比指夹带剂与粗提物粉末的体积质量比，ml/g)，平衡25min后，进行动态萃取，在萃取釜压力40Mpa，萃取温度45°C，萃取时间4小时，分离釜压力25Mpa，分离釜温度40°C，分离时间4小时，同一流程中分离釜压力始终小于萃取釜压力，二氧化碳流量90L/h的条件下，减压分离，得到环磷酸腺苷含量为13mg/100g的提取物。
[0091]实施例5
[0092]一种高含量枣环磷酸腺苷提取物，其具体制备步骤如下:
[0093]( I)放置物料:选取含水量在20%的金丝小枣为原料，粉碎原料，过40目筛；
[0094](2)抽真空:在反应系统温度_8°C条件下，在高压差连续式低温提取器内形成真空，真空度保持在_60pa，加入70%(v/v)乙醇水溶液，保持15min，其中，所述原料与70%(v/V)乙醇水溶液的重量比为1:15 ;
[0095](3)减真空:通入净化压缩空气，使高压差连续式低温提取器内的压力升至OMpa，保持5min ；
[0096](4)加压:继续通入压缩空气，使高压差连续式低温提取器内的压力达到12Mpa，保持5min ；
[0097](5)减压:停止加压，抽真空，使高压差连续式低温提取器中的压力降至OMpa ；
[0098](6)循环提取:将步骤(2)- (5)进行循环，循环10次；
[0099](7)分离:经过滤、离心，将固液分离，离心液经400目的滤膜过滤至澄清，收集提取液；
[0100](8)干燥:将步骤(7)所得提取液浓缩，真空干燥，粉碎过65目筛，得粗提物粉末；
[0101](9)超临界萃取:以90%(v/v)乙醇作夹带剂与粗提物粉末均匀混合，夹带比为13%(此处，夹带比指夹带剂与粗提物粉末的体积质量比，ml/g)，平衡20min后，进行动态萃取，在萃取釜压力50Mpa，萃取温度40°C，萃取时间2.5小时，分离釜压力15Mpa，分离釜温度20°C，分离时间2.5小时，同一流程中分离釜压力始终小于萃取釜压力，二氧化碳流量30L/h的条件下，减压分离，得到环磷酸腺苷含量为11.5mg/100g的提取物。
[0102]上述实施例中所得高含量枣环磷酸腺苷提取物可用于制备液体饮料，例如，取2g实施例1中所得高含量枣环磷酸腺苷提取物，溶解在4L纯水中，无菌灌封，每瓶10mL。
[0103]以实施例1所述高含量枣环磷酸腺苷提取物进行如下试验:
[0104]通过对比试验前后血氧饱和度、血红蛋白含量、血乳酸含量、血尿素氮含量的变化，对本发明所述高含量枣环磷酸腺苷提取物的抗缺氧、抗疲劳功效进行评价。
[0105]采用随机双盲对照试验设计，将120例符合纳入标准/排除标准的志愿受试者按照1:1:1的比例进行分配，将120人随机分成高剂量组、低剂量组、空白对照组三组。
[0106]观察周期为40天，时间窗为±7天，详细过程参见表1临床试验流程表。
[0107]表1临床试验流程表
【权利要求】
1.一种高含量枣环磷酸腺苷提取物，其特征在于:所述提取物中环磷酸腺苷的浓度为每100g大于15mg，该提取物是由下述方法得到的:采用枣的固体或半固体原料，经高压差连续式低温提取器提取，提取液浓缩后，真空干燥，粉碎得枣的粗提物；采用超临界萃取技术萃取粗提物，得到枣环磷酸腺苷提取物。
2.权利要求1所述的枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，其特征在于:采用枣的固体或半固体原料，经高压差连续式低温提取器提取，提取液浓缩后，真空干燥，粉碎得枣的粗提物；采用超临界萃取技术萃取粗提物，得到枣环磷酸腺苷提取物。
3.根据权利要求2所述的枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，其特征在于:具体步骤如下:(1)放置物料:选取含水量在5-30%的枣为原料，粉碎原料，使粒径为180-850μ m ；(2)抽真空:在反应系统温度-10-0°C条件下，使高压差连续式低温提取器内形成真空，真空度保持在-100—20pa，加入水或5-70% (v/v)乙醇水溶液，保持5_30min，其中，所述原料与水或5-70% (v/v)乙醇水溶液的重量比为1:6-20 ；(3)减真空:通入净化压缩空气，使高压差连续式低温提取器内的压力升至OMpa，保持Ι-lOmin ；(4)加压:继续通入压缩空气，使高压差连续式低温提取器内的压力达到8-12Mpa，保持 l-20min ；(5)减压:停止加压，抽真空，使高压差连续式低温提取器中的压力降至OMpa；(6)循环提取:将步骤(2)- (5)进行循环，循环10次；(7)分离:通过过滤、离心，使固液分`离，收集提取液；(8)干燥:将步骤(7)所得提取液浓缩，真空干燥，粉碎过20-80目筛，得粗提物粉末；(9)超临界萃取:以5-99%(v/v)乙醇作夹带剂与粗提物粉末均匀混合，夹带比为8-15%,平衡10_30min后,进行动态萃取,在萃取爸压力15_60Mpa,萃取温度35_60°C,萃取时间0.5-5小时，分离釜压力5-30Mpa，分离釜温度10_50°C，分离时间0.5-5小时，同一流程中分离釜压力始终小于萃取釜压力，二氧化碳流量10-100L/h的条件下，减压分离，得到枣环磷酸腺苷提取物。
4.根据权利要求3所述的枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，其特征在于:所述步骤(1)中选取含水量在5-15%的枣为原料。
5.根据权利要求3或4所述的枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，其特征在于:所述步骤(1)中选取含水量在10%的枣为原料，粉碎原料，使粒径为250 μ m。
6.根据权利要求3所述的枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，其特征在于:所述步骤(2)抽真空的真空度保持在_70pa，加入50% (v/v)乙醇水溶液，保持20min，其中，所述原料与50% (v/v)乙醇水溶液的重量比为10:1 ;所述步骤(2)中反应系统温度-10-0°C，是通过高压差连续式低温提取器外周冷凝循环系统中的冷却水实现的。
7.根据权利要求6所述的枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，其特征在于:所述冷却水为95% (v/v)乙醇。
8.根据权利要求3所述的枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，其特征在于:所述步骤(4)加压的压力达到llMpa,保持15min。
9.根据权利要求3所述的枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，其特征在于:所述步骤(7)中提取液为固液分离后经400目的滤膜过滤至澄清的离心液。
10.根据权利要求3所述的枣环磷酸腺苷提取物的制备方法，其特征在于:所述步骤(9)中以90% (v/v)乙醇作夹带剂与粗提物粉末均匀混合，夹带比为15%，平衡30min后，进行动态萃取，在萃取釜压力40Mpa，萃取温度37°C，萃取时间5小时，分离釜压力6Mpa，分离釜温度30°C，分离时间2.5小时，同一流程中分离釜压力始终小于萃取釜压力，二氧化碳流量20L/h的条件下，减压 分离，得到枣环磷酸腺苷提取物。
【文档编号】A61K31/7076GK103623080SQ201310443550
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2013年9月25日 优先权日:2013年9月25日
【发明者】吴乐斌, 周甄鸿, 胡晨旭, 刘红彦, 姜佳 申请人:中恩（天津）医药科技有限公司